專利名稱：小鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化骨髓細(xì)胞建立細(xì)胞系的方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種建立小鼠永生化細(xì)胞系的方法及其應(yīng)用，特別涉及一種通過小鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化骨髓細(xì)胞建立細(xì)胞系的方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
Abl是一類可誘導(dǎo)淋巴癌/白血病的重要癌基因，包括v-Abl、BCR-Abl、Tel-Abl ·。v_Abl iAbelson H 白(AbeIson murine leukemia virus, A-MuLV) ^ 癌基因。已有研究表明，A-MuLV主要誘導(dǎo)鼠淋巴細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，從而引發(fā)小鼠急性淋巴瘤的 /^t。 BCR_Abl Ι 入(chromosomal translocation) ^ BCR (breakpoint cluster region)與c_Abl的C端融合造成的，是誘發(fā)人類慢性髓性白血病(chronic myelogenous leukemia，CML)最關(guān)鍵的癌基因。盡管進(jìn)行了多年研究，但是對Abl癌基因誘導(dǎo)細(xì)胞癌變的作用機(jī)制仍不完全清楚。對于Abl癌基因的研究，常用的方法為體外細(xì)胞過表達(dá)Abl，研究Abl相互作用因子、Abl與其他基因的相互調(diào)控。雖然有學(xué)者利用雙順反子反轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)研究 Abl和其他基因的相互調(diào)節(jié)，也有應(yīng)用小鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化小鼠細(xì)胞的報道，但是應(yīng)用小鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的經(jīng)典方法非常繁瑣、成功率低、而且感染的細(xì)胞很難形成可以永久傳代的永生化細(xì)胞系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠細(xì)胞系的構(gòu)建方法。本發(fā)明所提供的表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系的方法， 包括如下步驟用Abelson鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化離體的小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞，得到表達(dá) Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系；所述Abelson鼠白血病病毒致癌基因編碼序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)。序列表中的序列2是由981個氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì)。序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)的編碼基因具體可為序列表序列1所示的DNA分子。序列表中的序列1由3781個核苷酸組成，其編碼序列是第205-3150位。其中，所述轉(zhuǎn)化中所用的Abelson鼠白血病病毒具體可為體外包裝得到的病毒。所述體外包裝具體可包括如下步驟將表達(dá)序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體和囊膜蛋白質(zhì)粒PCL-VSV-G共轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系(如 Platinum-A-Amphotropic逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系)，得到包裝病毒。所述表達(dá)序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體是將所述 Abelson鼠白血病病毒致癌基因插入pLNCX得到的表達(dá)所述Abelson鼠白血病病毒致癌基因的重組表達(dá)載體。
上述方法構(gòu)建得到的表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系具體可為小鼠淋巴細(xì)胞系BC44，其保藏號為CGMCC No. 4910。上述細(xì)胞系可作為表達(dá)序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的一種細(xì)胞模型。上述細(xì)胞系和細(xì)胞模型可用于篩選抑制所述細(xì)胞系中的序列表中序列2所示蛋白質(zhì)表達(dá)的物質(zhì)。本發(fā)明的另一個目的是提供一種鑒定序列表中序列2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑的方法。本發(fā)明所提供的鑒定序列表中序列2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑的方法，包括如下步驟在上述細(xì)胞系的培養(yǎng)體系中加入待篩選物質(zhì)，如果待篩選物質(zhì)能抑制上述細(xì)胞系中所述序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的活性，所述待篩選物質(zhì)為候選的序列表中序列2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑；如果待篩選物質(zhì)不能抑制上述細(xì)胞系中所述序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的活性，所述待篩選物質(zhì)為非候選的序列表中序列2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑。實驗證明，本發(fā)明方法構(gòu)建的表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系，傳代了一百三十多次，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，沒有出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，v-Abl蛋白的表達(dá)情況也非常穩(wěn)定，從而形成了可以永久傳代的永生化細(xì)胞系。這一方法的建立，不僅為建立小鼠淋巴細(xì)胞系提供技術(shù)支持，而且為研究Abl癌基因調(diào)控的信號網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)及其分子機(jī)制和建立Abl癌基因小鼠腫瘤模型提供了一種理想的細(xì)胞模型，也為篩選Abl癌基因誘發(fā)腫瘤的抗癌藥物提供了理想的細(xì)胞模型。保藏說明參據(jù)的生物材料BC44建議的分類命名小鼠淋巴細(xì)胞系保藏日期2011年6月1日保藏中心登記入冊編號CGMCC No. 4910保藏機(jī)構(gòu)中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏機(jī)構(gòu)簡稱CGMCC地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號


圖1為小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910的照片。圖2為Western blot檢測小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910中v-Abl蛋白的表達(dá)。左側(cè)泳道為正常小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞，右側(cè)泳道為小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No.4910。圖3為小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910的致瘤實驗。左側(cè)為對照小鼠，右側(cè)為小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910的致瘤小鼠。圖4為Imatinib對小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910中v-Abl下游蛋白表達(dá)的抑制。上面的圖片為eIF4B 抗體(Cell Signaling Technology，Cat#3592)的 Westernblot檢測v-Abl下游蛋白表達(dá)的結(jié)果；下面的圖片為actin抗體(Sigma，A2066) W^festern blot檢測結(jié)果。
具體實施例方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、表達(dá)Abelson鼠白血病病毒的致癌基因的永生化小鼠淋巴細(xì)胞系的建 、,一、Abelson鼠白血病病毒(Α-MuLV)的獲得1、A-MuLV 的包裝(1)攜帶Abelson鼠白血病病毒的致癌基因ν-Abl的質(zhì)粒pLNCX-v-Abl構(gòu)建根據(jù)Genbank (AF0338U)報道的v_Abl基因的核苷酸序列設(shè)計引物，上游和下游引物均帶有HindIII的酶切位點。利用BLAST確定序列特異性，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。PCR擴(kuò)增得到序列表中序列1所示的v-Abl基因，HindIII酶切處理， 與經(jīng)過HindIII單酶切的pLNCX載體(Clontech，Cat. No. 631503)質(zhì)粒連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽性克隆，提取質(zhì)粒，酶切鑒定后送交上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行DNA序列測定，鑒定正確后用于下述實驗。結(jié)構(gòu)正確的質(zhì)粒名稱是pLNCX-v-Abl。 pLNCX-v-Abl中的v-Abl基因編碼序列表中序列2所示的蛋白。(2)包裝應(yīng)用 Platinum-A Retroviral Packaging Cell Line, Amphotropic 細(xì)胞系(美國Cell Biolabs公司，北京西美杰科技有限公司代理，商品目錄號RV-102)包裝病毒。該包裝細(xì)胞系培養(yǎng)于DMEM(Gibco，Cat. NO. 12800-017)培養(yǎng)基，完全培養(yǎng)基中添加終濃度 100units/mL 青霉素、100units/mL 鏈霉素和 10%胎牛血清(Gibco，Cat. NO. 16000044)，置于37°C，飽和濕度，5% CO2濃度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。于IOcm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)至70-80%匯合時，按照Lipofectamineanvitrogen)轉(zhuǎn)染試劑說明書，將攜帶小鼠白血病病毒癌基因 v-Abl 的質(zhì)粒 pLNCX-v-Abl 和囊膜蛋白質(zhì)粒 pCL-VSV-G(System Biosciences 公司，Cat. #s ⑶500B-1-⑶523A-1產(chǎn)品中包含該質(zhì)粒)共轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞系，48_%h后收集細(xì)胞上清。2、病毒的收集及濃縮吸取每兩個30cm培養(yǎng)皿的細(xì)胞上清至50ml離心管(此時在原培養(yǎng)皿中分別加入20ml新鮮的預(yù)熱的完全培養(yǎng)基)，離心，吸取病毒上清，0. 45 μ m濾器過濾，然后加入 PEG8000 (終濃度5% )和NaCl (終濃度0. 15M)，充分顛倒混勻后，4°C孵育過夜，然后離心， 小心棄去上清，病毒沉淀用無菌PBS溶解，-80°C保存待用。同時用IOml新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，在原培養(yǎng)皿中各自加入5ml細(xì)胞懸液，置細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，此后每隔對-3他，收集一次病毒上清，重復(fù)5-6次，濃縮后，-80°C保存待用。3、病毒滴度的測定采用RT反應(yīng)的方法進(jìn)行病毒滴度的測定，實驗步驟如下(1) “hot” 液和 “cold” 液的制備Hot.6μ 1 oligo dT(lmg/ml)
6 μ 1 2mM dTTP12 μ 1 poly rA(lmg/ml)(Amersham 27-4110-01)48 μ 1 0. 5M DTTCold 600 μ 1 IM Tris (pH 8. 3)9. 19ml dH20150 μ 1 5M NaCl600 μ 1 10% NP40( 96孔板中，每孔加入5μ1病毒上清，1 2和1 4梯度稀釋，設(shè)置完全培養(yǎng)基為陰性對照；(3)混合 hot 液和 cold 液Iml cold 液72 μ 1 hot 液2 μ 1 MnCl2 (0. 5Μ)(4)加入1 μ 1 32P dTTP至混合液中；(5)每孔加入20 μ 1混合液，室溫，靜置25min ；(6)轉(zhuǎn)膜，將樣品轉(zhuǎn)移至 DEAE 膜(VWR Whatman DE81 anion exchanger)；(7)洗膜，2xSSC,洗 2 次，每次 IOmin ；(8)干燥，顯影5h或過夜。結(jié)果表明步驟2收集的病毒液的滴度為10000-100000CFU/ml。二、小鼠骨髓細(xì)胞的轉(zhuǎn)化1、小鼠骨髓細(xì)胞的分離(1) 二氧化碳窒息處死Balb/C小鼠，于70%乙醇中浸泡5min，固定于解剖操作臺中，剪開下肢皮膚，鈍性分離肌肉，分離雙側(cè)股骨、脛骨，置于潔凈的IOcm培養(yǎng)皿中，皿中預(yù)先置入RPMI 1640完全培養(yǎng)基(10%胎牛血清，100units/mL青霉素、100units/mL鏈霉素， 50 μ M巰基乙醇)，用Iml注射器沖出骨髓，沖洗3-4次； (2)轉(zhuǎn)移至15ml無菌離心管中，離心，棄上清，用5ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，然后緩慢加入到含有5ml Histopaque 1077(sigma)的15ml無菌離心管中，離心lOmin，離心結(jié)束后，淋巴細(xì)胞位于分界面處，紅細(xì)胞位于離心管底部；(3)收集單核細(xì)胞，完全培養(yǎng)基洗3次；(4)棄上清，加入約IOmlPBS,混勻后，經(jīng)40 μ m篩網(wǎng)濾過至另一潔凈15ml離心管中，離心；(5)棄上清，重懸細(xì)胞，計數(shù)，以適當(dāng)體積的PBS重懸細(xì)胞，得到小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞。2、小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞的感染采用懸浮離心感染(spin infection)的方法感染小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞。細(xì)胞計數(shù)，用病毒液重懸小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞(1-4 χ 106/1.5-2ml病毒液，病毒液的滴度為 50000CFU/ml)，加入 Polybrene (sigma，H9268)，終濃度為 8 μ g/ml ；懸浮離心感染，32 °C， 2000rpm (Thermo centrifuge 400R, Rotor 8177)，離心 2_3h。
3、表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的永生化小鼠淋巴細(xì)胞系的建立和鑒定懸浮感染離心結(jié)束后，收集細(xì)胞，于“U”型底96孔板中在37°C，5.0% CO2中培養(yǎng)感染細(xì)胞(100 μ 1/孔)，培養(yǎng)基為RPMI 1640完全培養(yǎng)基(Gibco, Cat. 31800-022) (20% 胎牛血清，100units/mL青霉素、100units/mL鏈霉素，50 μ M巰基乙醇)。每隔5天，每孔補(bǔ)加50 μ 1完全培養(yǎng)基，以維持細(xì)胞的生長所需，2周以后，顯微鏡觀察，挑取細(xì)胞長勢較好的 ？L重新用“U”型底96孔板中培養(yǎng)，去除貼壁細(xì)胞，純化A-MuLV感染的細(xì)胞。隨后，以1 2 漸增的方式(96孔板-48孔板孔板-12孔板-6孔板-IOcm培養(yǎng)皿)擴(kuò)大培養(yǎng)，最終獲得細(xì)胞狀態(tài)較好、生長態(tài)勢良好、可穩(wěn)定培養(yǎng)、連續(xù)傳代的A-MuLV轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞系(見圖1)。獲得了兩株細(xì)胞系(命名為BC44，NS2)，按照如下方法已經(jīng)培養(yǎng)了約600天，傳了一百三十多次。細(xì)胞生長狀態(tài)良好，沒有出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。其中細(xì)胞系的傳代方法如下 將細(xì)胞于上述RPMI 1640完全培養(yǎng)基在37°C，5. 0% CO2中培養(yǎng)，每3-5天傳代。其中小鼠淋巴細(xì)胞系BC44已于2011年6月1日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址是北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，保藏中心登記入冊編號CGMCC No. 4910。 圖1為傳代600天的小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910的照片。表明該小鼠淋巴細(xì)胞系可以永久傳代，是永生化細(xì)胞系。這些結(jié)果表明，應(yīng)用小鼠白血病病毒感染小鼠骨髓來源的淋巴細(xì)胞，通過篩選可以形成能永久傳代的永生化細(xì)胞系。這一方法的建立，為小鼠淋巴細(xì)胞的建系提供了有用技術(shù)，也為研究Abl癌基因和白血病病毒致癌機(jī)理、以及抗癌藥物的篩選提供了一種理想的細(xì)胞模型。4、表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的永生化小鼠淋巴細(xì)胞系的v_Abl蛋白表達(dá)檢測通過Western blot檢測傳代600天的小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910和小鼠淋巴細(xì)胞系NS2中v-Abl蛋白的表達(dá)情況。收集細(xì)胞系BC44和NS2細(xì)胞，用細(xì)胞裂解液提取細(xì)胞總蛋白，蛋白經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳、轉(zhuǎn)膜、依次加入抗v-Abl抗體(抗體名稱abl_c2 抗體，ALBI0CHEN產(chǎn)品，Cat. NO. OP19)和二抗后，ECL顯色。結(jié)果表明與正常小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞相比，小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910和小鼠淋巴細(xì)胞系NS2在v-Abl蛋白分子量處有一明顯的目的條帶，表明小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910和小鼠淋巴細(xì)胞系NS2成功表達(dá)v-Abl蛋白(圖2)。5、表達(dá)Abelson鼠白血病病毒的致癌基因的永生化小鼠淋巴細(xì)胞系的致瘤實驗取裸鼠(Balb/C背景)，雌性，3_5周齡，SPF級，30只，體重為14_16g，隨機(jī)分為3 組，10只/組。對照組的10只小鼠每只分別經(jīng)皮下注射Balb/C正常小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞，細(xì)胞系BC44組的10只小鼠每只分別經(jīng)皮下注射小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910細(xì)胞， 細(xì)胞系NS2組的10只小鼠每只分別經(jīng)皮下注射小鼠淋巴細(xì)胞系NS2細(xì)胞。這三組的每只小鼠的注射細(xì)胞數(shù)量均為1*107個細(xì)胞。在注射后第12天拍照并觀察腫瘤。成瘤的判斷 接種后裸鼠出現(xiàn)腹圍增加明顯，腹部觸及瘤體，活動減少，消瘦等癥狀即判斷為成瘤。結(jié)果表明對照組的10只小鼠均未成瘤，細(xì)胞系NS2組的10只小鼠和細(xì)胞系BC44組的10只小鼠成瘤明顯(圖幻。細(xì)胞系BC44組的10只小鼠的瘤重為3. 5士0. 5g。6、用表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的永生化小鼠淋巴細(xì)胞系篩選治療白血病的藥物 將臨床中BCR-ABL陽性白血病患者治療藥物Imatinib加入RPMI 1640培養(yǎng)基 (0. 5%胎牛血清，1001111^8/1^青霉素、1001111^8/1^鏈霉素，5(^11巰基乙醇)中，使其終濃度為1(^11，接入小鼠淋巴細(xì)胞系肌4猶6110 No. 4910，進(jìn)行培養(yǎng)。同時設(shè)不加Imatinib的對照。分別于接種后5、10、15和20小時，按照步驟4的方法用eIF4B抗體(Cell Signaling Technology, Cat#3592)檢測v-Abl下游蛋白eIF4B的表達(dá)情況，同時以actin蛋白的表達(dá)情況作為內(nèi)參。結(jié)果表明，與不加Imatinib的對照相比，小鼠淋巴細(xì)胞系BC44CGMCC No. 4910中v-Abl下游蛋白的表達(dá)明顯受到抑制，20小時時已檢測不到v_Abl下游蛋白 eIF4B的表達(dá)(圖4)，表明Abl激酶活性被完全抑制而導(dǎo)致其下游蛋白的表達(dá)受到抑制。由此可以看出該細(xì)胞系的建立為進(jìn)行有效的慢性髓性白血病藥物篩選提供了很好的細(xì)胞模型。
權(quán)利要求
1.表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系的構(gòu)建方法，包括如下步驟用Abelson鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化離體的小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞，得到表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系；所述Abelson鼠白血病病毒致癌基因編碼序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述轉(zhuǎn)化中所用的Abelson鼠白血病病毒是體外包裝得到的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述體外包裝包括如下步驟將表達(dá)序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體和囊膜蛋白質(zhì)粒pCL-VSV-G共轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系，得到包裝病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于表達(dá)序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體是將所述Abelson鼠白血病病毒致癌基因插入pLNCX得到的表達(dá)所述 Abelson鼠白血病病毒致癌基因的重組表達(dá)載體。
5.權(quán)利要求1-4中任一所述方法構(gòu)建得到的表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的細(xì)胞系，其特征在于所述表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系為小鼠淋巴細(xì)胞系BC44，其保藏號為CGMCC No. 4910。
7.表達(dá)序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的細(xì)胞模型，它是權(quán)利要求5或6所述的細(xì)胞系。
8.權(quán)利要求5或6所述的細(xì)胞系在篩選抑制所述細(xì)胞系中的序列表中序列2所示蛋白質(zhì)表達(dá)的物質(zhì)中的應(yīng)用。
9.一種鑒定序列表中序列2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑的方法，包括如下步驟在權(quán)利要求5或6所述的細(xì)胞系的培養(yǎng)體系中加入待篩選物質(zhì)，如果待篩選物質(zhì)能抑制權(quán)利要求5 或6所述的細(xì)胞系中所述序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的活性，所述待篩選物質(zhì)為候選的序列表中序列2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑；如果待篩選物質(zhì)不能抑制權(quán)利要求5或6所述的細(xì)胞系中所述序列表中序列2所示蛋白質(zhì)的活性，所述待篩選物質(zhì)為非候選的序列表中序列 2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑。
10.權(quán)利要求9所述的方法在篩選序列表中序列2所示蛋白質(zhì)活性抑制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了小鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化骨髓細(xì)胞建立細(xì)胞系的方法及其應(yīng)用。該構(gòu)建方法，包括如下步驟用Abelson鼠白血病病毒轉(zhuǎn)化離體的小鼠骨髓來源淋巴細(xì)胞，得到表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系；所述Abelson鼠白血病病毒致癌基因編碼序列表中序列2所示的蛋白質(zhì)。該方法構(gòu)建的表達(dá)Abelson鼠白血病病毒致癌基因的小鼠淋巴細(xì)胞系，傳代一百三十次，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，沒有出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，v-Abl蛋白的表達(dá)情況也非常穩(wěn)定，從而形成了可以永久傳代的永生化細(xì)胞系。
文檔編號C12N15/86GK102229960SQ20111014880
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月3日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月3日
發(fā)明者楊建嶺, 郭桂杰, 陳吉龍, 陳玉海 申請人:中國科學(xué)院微生物研究所