專利名稱：一種抑制海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及海產(chǎn)品，特別是生長(zhǎng)在近海岸的海水、海河交界處的魚(yú)類、蝦類、貝類等保鮮技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
副溶血性弧菌(KiArio parahaemolyticus,以下簡(jiǎn)稱吻)屬于弧菌科弧菌屬，是一種革蘭氏陰性嗜鹽細(xì)菌，主要分布在近海岸的海水、海河交界處的魚(yú)類、蝦類、貝類等海產(chǎn)品中。江蘇地區(qū)2008年和2009年食源性致病菌監(jiān)測(cè)研究數(shù)據(jù)顯示Vp檢出率分別為15. 9%和7. 8%，居于首位，生食水產(chǎn)品導(dǎo)致食源性疾病的風(fēng)險(xiǎn)較高。因此，控制在海產(chǎn)品中吻的帶菌量，建立科學(xué)的減菌和殺菌方法至關(guān)重要。目前對(duì)于VP的控制手段主要有流水凈化、溫度處理、高壓處理、輻射等，但是這些方法都不能經(jīng)濟(jì)安全有效地抑制水產(chǎn)品中吻。有研究發(fā)現(xiàn)有機(jī)酸食品添加劑能有效抑制吻，但是在抑制過(guò)程中食品的風(fēng)味發(fā)生了改變。2000年，Andrews等人提出低溫巴氏殺菌(48-500C，5min)可使貝類中Vp (I. 2 X 105MPN/g)降低到不能檢測(cè)水平(<3MPN/g)，但是這種處理可能會(huì)導(dǎo)致貝類風(fēng)味發(fā)生變化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提出一種能有效控制海產(chǎn)品中副溶血性弧菌帶菌量，又能最大限度地保證海產(chǎn)品鮮度的抑制海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的方法。本發(fā)明將新鮮海產(chǎn)品浸泡于pH值為4. 5 5. 5的檸檬酸溶液中，于50°C 60°C環(huán)境溫度下處理5s 25s。本發(fā)明采用有機(jī)酸和溫度處理對(duì)于Vp的聯(lián)合作用，在該條件下，副溶血性弧菌死亡率為97. 36%，在三文魚(yú)上驗(yàn)證為97. 07%,并該條件處理前后魚(yú)肌動(dòng)球蛋白的Ca2+-ATPase活性沒(méi)有顯著差異，保持了海產(chǎn)品內(nèi)容物及原有新鮮海產(chǎn)品的風(fēng)味，對(duì)于生產(chǎn)、銷售、運(yùn)輸過(guò)程中Vp的控制具有重要作用。本發(fā)明的優(yōu)選條件是所述檸檬酸溶液的pH值為4. 96、環(huán)境溫度為55. 5°C、處理時(shí)間為25s。副溶血性弧菌死亡率為97. 36%，還可從某種程度上保證魚(yú)蛋白的活性。


圖I為水浴溫度與Vp死亡率的線性關(guān)系圖。圖2為檸檬酸溶液的pH值與Vp死亡率的線性關(guān)系圖。圖3為水浴處理時(shí)間與Vp死亡率的線性關(guān)系圖。圖4為吻的死亡率與檸檬酸溶液的pH值及水浴時(shí)間T兩個(gè)因素的函數(shù)關(guān)系圖。圖5為圖4的等高線圖。
圖6為在三文魚(yú)模型上，不同處理?xiàng)l件與Vp死亡率的比較表圖。圖7為不同處理?xiàng)l件與Ca2+-ATPase活性的比較表圖。
具體實(shí)施例方式I、材料與 方法
I. I菌株與試劑
Vp標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC33847和ATCC17802購(gòu)自中國(guó)微生物菌種資源庫(kù)。LBS液體培養(yǎng)基、高離子強(qiáng)度鹽溶液(O. IM KCl+ O. OlM NaCO3+ O. 04M NaHCO3)、50mM CaCl2,4M KCl 均由本實(shí)驗(yàn)室自制，其它試劑均為分析純。I. 2 方法
I.2. I菌懸液制備
挑取ATCC33847、ATCC17802的TCBS典型單菌落至LBS培養(yǎng)液，37°C，180r/min,過(guò)夜振蕩培養(yǎng)。分別吸取10μ1過(guò)夜培養(yǎng)物至新鮮LBS培養(yǎng)液，370C，180r/min,振蕩培養(yǎng)4 5小時(shí)，測(cè)六種菌株的OD6tltl值，并調(diào)至O. 8左右。均勻混合ATCC33847、ATCC17802這兩種菌株，制成混合菌懸液備用。1.2.2^死亡率測(cè)定
用無(wú)菌微量移液器分別吸取處理前后菌液勻液ΙΟΟμΙ，沿管壁緩緩注入900μ1 PBS的無(wú)菌ependof管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面)，振搖使其混合均勻，制成1:100的樣品勻液。根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。選取2個(gè) 3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3個(gè)無(wú)菌TCBS平皿，每皿ΙΟΟμΙ。選取菌落數(shù)在20 CFU 300 CFU之間的平板，分別計(jì)數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑Vp菌落，典型菌落為墨綠色。Vp死亡率計(jì)算公式如下
處理前菌落數(shù)-處理后菌落
death b = - ,100%
處理前菌落數(shù)
I.2. 3單因素試驗(yàn)
以Vp死亡率為指標(biāo)，分別對(duì)檸檬酸溶液的pH值、處理溫度、處理時(shí)間作單因素試驗(yàn)。吸取ΙΟΟμΙ 混合菌液于 I. 5ml 中，12000rpm 離心 8 min,重懸，在 45。。、50。。、55。。、60°C、65°C水浴中處理,分別于5s、25s、45s、65s、85s取樣分析細(xì)菌的死亡率。同樣分別吸取ΙΟΟμΙ混合菌液，離心沉淀，用PBS重懸，稀釋，涂板，370C，培養(yǎng)24h，計(jì)數(shù)得到處理前菌落數(shù)，其余分別用ρΗ2· 5、ρΗ3· 5、ρΗ4、ρΗ4· 5、ρΗ5的檸檬酸溶液重懸，在55°C水浴中處理15s，稀釋，涂布，37 °C，培養(yǎng)24h，計(jì)數(shù)，計(jì)算出Vp死亡率。I. 2. 4響應(yīng)面法優(yōu)化溫度、pH和時(shí)間
在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以溫度、pH、時(shí)間3個(gè)因素為自變量,Vp死亡率為響應(yīng)值,采用響應(yīng)面分析法在三因素三水平上對(duì)處理?xiàng)l件進(jìn)行優(yōu)化，以獲得最大吻死亡率。試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)如表I所示。表I響應(yīng)面分析因素與水平
權(quán)利要求
1.一種抑制海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的方法，其特征在于將新鮮海產(chǎn)品浸泡于PH值為 5 5. 5的朽1檬酸溶液中，于50°C 60°C環(huán)境溫度下處理5s 25s。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述抑制海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的方法，其特征在于所述檸檬酸溶液的PH值為4. 96、環(huán)境溫度為55. 5°C、處理時(shí)間為25s。
全文摘要
一種抑制海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的方法，涉及海產(chǎn)品的保鮮技術(shù)領(lǐng)域。將新鮮海產(chǎn)品浸泡于pH值為4.5～5.5的檸檬酸溶液中，于50℃～60℃環(huán)境溫度下處理5s～25s。本發(fā)明采用有機(jī)酸和溫度處理對(duì)于Vp的聯(lián)合作用，在該條件下，副溶血性弧菌死亡率為97.36%，在三文魚(yú)上驗(yàn)證為97.07％，并該條件處理前后魚(yú)肌動(dòng)球蛋白的Ca2+-ATPase活性沒(méi)有顯著差異，保持了海產(chǎn)品內(nèi)容物及原有新鮮海產(chǎn)品的風(fēng)味。
文檔編號(hào)A23L3/3508GK102742634SQ20121024988
公開(kāi)日2012年10月24日 申請(qǐng)日期2012年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月19日
發(fā)明者丁珊珊, 孫林, 李寶利, 楊振泉, 潘志明, 焦新安 申請(qǐng)人:揚(yáng)州大學(xué)