專利名稱：用胎盤(pán)細(xì)胞群治療骨缺損的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了分離的胎盤(pán)細(xì)胞，例如胎盤(pán)灌洗液，貼壁的和非貼壁的胎盤(pán)干細(xì)胞，胎盤(pán)干細(xì)胞群，包含該干細(xì)胞的組合物，獲取該干細(xì)胞的方法，配制包含該干細(xì)胞的組合物的方法，和用該干細(xì)胞和組合物治療骨缺損的方法。
2.
背景技術(shù)：
人類干細(xì)胞是能夠產(chǎn)生多種成熟的人體細(xì)胞系的全能或多潛能前體細(xì)胞。有證據(jù)表明，干細(xì)胞可以用來(lái)再生許多(如果不是所有)組織，并恢復(fù)生理學(xué)和解剖學(xué)功能。許多不同類型的哺乳動(dòng)物干細(xì)胞已經(jīng)得到表征。例如，參見(jiàn)Caplan等人，美國(guó)專利號(hào)5，486，359(人間充質(zhì)干細(xì)胞)；Boyse等人，美國(guó)專利號(hào)5，004，681 (胎兒和新生兒的造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞)；Boyse等人，U.S.5, 192, 553 (同前)；Beltrami等人,Cell114(6):763-766(2003)(心臟干細(xì)胞);Forbes 等人，J.Pathol.197(4):510-518(2002)(肝干細(xì)胞)。臍血和取自臍帶血的總有核細(xì)胞已被用于移植，以部分或全部恢復(fù)經(jīng)歷了消融療法的患者的造血功能。3.發(fā)明概述本發(fā)明提供了分離的胎盤(pán)細(xì)胞，例如胎盤(pán)灌洗液，貼壁的和非貼壁的胎盤(pán)干細(xì)胞，胎盤(pán)干細(xì)胞群，包含該細(xì)胞的組合物，獲得該胎盤(pán)細(xì)胞的方法，配制該組合物的方法，和用這些細(xì)胞治療骨缺損的方法。本發(fā)明提供了分 離的干細(xì)胞和包含這種干細(xì)胞的細(xì)胞群，其中該干細(xì)胞存在于胎盤(pán)組織(例如羊膜、絨毛膜、胎盤(pán)小葉、臍帶等)并可從中分離，它們?cè)谛迯?fù)骨缺陷中有用。胎盤(pán)干細(xì)胞表現(xiàn)出干細(xì)胞的一個(gè)或多個(gè)特征(例如表現(xiàn)出與干細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)記，在培養(yǎng)中以未分化狀態(tài)復(fù)制至少10-20次，分化成代表三個(gè)胚層的成體細(xì)胞等)，并能貼壁到組織培養(yǎng)基質(zhì)(例如組織培養(yǎng)塑料，如組織培養(yǎng)皿或多孔板的表面)上。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述分離的干細(xì)胞是⑶34+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶44-的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是CD34+和CD44—的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)酶消化從人胎盤(pán)組織分離。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)灌洗從人胎盤(pán)中分離。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，該分離的干細(xì)胞有利于在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成礦化基質(zhì)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的非貼壁胎盤(pán)細(xì)胞的群。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括CD34+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括CD44—干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括干細(xì)胞，其中至少有大約70%的所述細(xì)胞是⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括干細(xì)胞，其中至少有大約90%的所述細(xì)胞是CD34+和CD44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少一次。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少5次。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少10次。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少20次。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，該細(xì)胞群在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成或有利于形成礦化基質(zhì)。在另一方面，本發(fā)明提供了分離的⑶34+和⑶44_胎盤(pán)干細(xì)胞的群。在某些實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少約70%的該干細(xì)胞是⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，至少約90%的該干細(xì)胞是⑶34+和⑶44_的干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少一次。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少5次。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少10次。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群已經(jīng)被傳代至少20次。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，該細(xì)胞群在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成或有利于形成礦化基質(zhì)。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的⑶200+或HLA-G+胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是CD200+和HLA-G+的。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述 干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述干細(xì)胞有利于在包括胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在各種實(shí)施方案中，至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少在90%、或至少約95%或以上的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38-或⑶45-的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+的。在其他具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如，傳代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38_、CD45—和HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述干細(xì)胞有利于在包括該干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在各種實(shí)施方案中，至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少在90%、或至少約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞為⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞。在所述細(xì)胞群的另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的。在其他具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如，傳代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下在培養(yǎng)中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。本發(fā)明還提供了⑶200+和0CT-4+的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是CD73+和CD105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述干細(xì)胞有利于在包括胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括⑶200+、0CT-4+胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在各種實(shí)施方案中，至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少 約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、或至少約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞為⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD 105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在其他具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)被傳代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下的培養(yǎng)時(shí)形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供分離的⑶73+和⑶105+胎盤(pán)干細(xì)胞，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、0038_或0045_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT4+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT4+、⑶34_、⑶38—和⑶45—的。本發(fā)明進(jìn)一步提供了包括⑶73+、⑶105+胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群，其中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在各種實(shí)施方案中，至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、或至少約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞為CD73+、CD105+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在其他具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)被傳代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本發(fā)明還提供了分離的⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0034_、0038_或0045_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+的。在另一更具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34-、CD38-、CD45_、0CT-4+和CD200+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)有利于在包括胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。本發(fā)明還提供了⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的群。在具體實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是貼壁的。在各種實(shí)施方案中，至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、或至少約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞為⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—和⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+的。在另一更具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)被傳代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成擬胚體。本發(fā)明還提供了分離的0CT-4+胎盤(pán)干細(xì)胞，在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、CD38-和 CD45-的。本發(fā)明還提供了包括0CT-4+胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群，其中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在各種實(shí)施方案中，至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、或至少約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞為0CT-4+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—或CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如，被傳代至少一次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本發(fā)明 進(jìn)一步提供了本文所述的貼壁或非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞的分離群，該細(xì)胞群根據(jù)如下方法生成，該方法包括:灌洗已經(jīng)排出了臍血并已經(jīng)灌洗了的哺乳動(dòng)物胎盤(pán)以除去殘余血；用灌洗液灌洗所述胎盤(pán)；和收集所述灌洗液，其中灌洗后的所述灌洗液包括包含胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群；和從所述細(xì)胞群中分離多種所述胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，該灌洗液流過(guò)臍靜脈和臍動(dòng)脈，然后在其從胎盤(pán)流出后收集。在另一具體實(shí)施方案中，所述灌洗液通過(guò)臍靜脈，而從臍動(dòng)脈收集，或通過(guò)臍動(dòng)脈，而從臍靜脈收集。本發(fā)明進(jìn)一步提供了分離的胎盤(pán)干細(xì)胞或分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的群，如本文所述，其根據(jù)如下方法生成，該方法包括:用組織裂解酶消化胎盤(pán)組織以獲得包括胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群，并從所述胎盤(pán)細(xì)胞的殘余物中分離多種胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)組織是整個(gè)胎盤(pán)、羊膜、絨毛膜、羊膜和絨毛膜的組合，或上述任意幾項(xiàng)的組合。在其他具體實(shí)施方案中，該組織裂解酶是胰蛋白酶或膠原蛋白酶。在更具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞相對(duì)于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞以可檢測(cè)的更高水平表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因?yàn)?ACTG2、ADARB1、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ1078U GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 / 或ZC3H12A，并且其中所述骨髓來(lái)源的干細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行過(guò)多次培養(yǎng)傳代，其次數(shù)相當(dāng)于所述胎盤(pán)干細(xì)胞的傳代次數(shù)。在更具體的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞相對(duì)于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞以可檢測(cè)的更高水平表達(dá) ACTG2、ADARBl、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、Cl lorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2, RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLCl2A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A。在更具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的群，其中所述干細(xì)胞群相對(duì)于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞群以可檢測(cè)的更高水平表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因?yàn)?ACTG2、ADARBU AMIG02、ATRS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD`、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和/或ZC3H12A，并且其中所述骨髓來(lái)源的干細(xì)胞的群已經(jīng)進(jìn)行過(guò)多次培養(yǎng)傳代，其次數(shù)相當(dāng)于所述胎盤(pán)干細(xì)胞的傳代次數(shù)，其中所述骨髓來(lái)源的干細(xì)胞的群具有與所述分離的干細(xì)胞的群相當(dāng)?shù)募?xì)胞數(shù)。在更具體的實(shí)施方案中，所述分離的干細(xì)胞的群相對(duì)于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞群以可檢測(cè)的更高水平表達(dá)ACTG2、ADARB1、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMU IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A。本發(fā)明還提供了包含一種或多種所述胎盤(pán)細(xì)胞，例如本發(fā)明所提供的胎盤(pán)灌洗液、胎盤(pán)灌洗細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中所述細(xì)胞已從胎盤(pán)分離。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述包含胎盤(pán)細(xì)胞的組合物可用于修復(fù)骨缺損。因此，本發(fā)明提供了包含胎盤(pán)灌洗液，或從胎盤(pán)灌洗液中分離的細(xì)胞，例如來(lái)自胎盤(pán)灌洗液的總有核細(xì)胞的組合物。在一方面，本發(fā)明提供了包含胎盤(pán)灌洗液或胎盤(pán)灌洗細(xì)胞，例如來(lái)自胎盤(pán)灌洗液的總有核細(xì)胞的組合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是分離的非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34+和⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已通過(guò)酶消化從人胎盤(pán)中分離。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已通過(guò)灌洗從人胎盤(pán)分離。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述細(xì)胞有利于在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成礦化基質(zhì)。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是分離的⑶34+和⑶44—干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已通過(guò)酶消化從人胎盤(pán)中分離。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已通過(guò)灌洗從人胎盤(pán)分離。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述細(xì)胞有利于在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成礦化基質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含本發(fā)明所提供的分離的干細(xì)胞和誘導(dǎo)該干細(xì)胞分化成成骨細(xì)胞的化合物。在某些實(shí)施方案中，該組合物包含本發(fā)明所提供的分離的干細(xì)胞或分離的干細(xì)胞的群，和誘導(dǎo)所述干細(xì)胞群中的多種干細(xì)胞分化成成骨細(xì)胞的化合物。在某些實(shí)施方案中， 這種化合物是地塞米松或抗壞血酸。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是CD200+和HLA-G+的。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+、⑶200+和HLA-G+的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是CD73+、CD105+和CD200+的。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45-和HLA-G+的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是CD200+和0CT-4+的。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—或CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、CD38' CD45' CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含分離的⑶73+和⑶105+胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中，在允許擬胚體形成的條件下，所述干細(xì)胞有利于在包括所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是 OCT-4+、CD200+、CD34' CD38-和 CD45-的。在又一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含分離的⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+、CD200+、CD34' CD38-和 CD45-的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含分離的0CT-4+胎盤(pán)干細(xì)胞的組合物，其中，在允許擬胚體形成的條件下，所述干細(xì)胞有利于在包括所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+、CD105+、CD200+、CD34-、CD38-和CD45-的。本發(fā)明還提供了包含胎盤(pán)干細(xì)胞群的組合物，該干細(xì)胞相對(duì)于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞群以可檢測(cè)的更高水平表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因選自:ACTG2、ADARB1、AMIG02、ATRS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMU IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKU PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A，并且其中所述骨髓來(lái)源的干細(xì)胞的群已經(jīng)進(jìn)行過(guò)多次培養(yǎng)傳代，其次數(shù)相當(dāng)于所述胎盤(pán)干細(xì)胞的傳代次數(shù)。在上述組合物更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞相對(duì)于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞群以可檢測(cè)的更高水平表達(dá) ACTG2、ADARBl、AMIG02、ATRS-l、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，其中所述干細(xì)胞群與所述骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞群具有相同的細(xì)胞數(shù)。在另一具體實(shí)施方案中，任何上述組合物均包含基質(zhì)。在更具體的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)是三維支架。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括膠原蛋白、明膠、層連蛋白、纖連蛋白、果膠、鳥(niǎo)氨酸或玻連蛋白。在另一更具體的實(shí)施方案中，該基質(zhì)是羊膜或源自羊膜的生物材料。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括細(xì)胞外膜蛋白。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括合成化合物。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括生物活性化合物。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述生物活性化合物是生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、抗體或小于5000道爾頓的有機(jī)分子。在某些實(shí)施方案中，該基體是合成的可降解聚合物，例如，聚乳酸和聚羥基 乙酸。在某些實(shí)施方案中，該基質(zhì)是可植入的支架底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物選自:β -磷酸三鈣底物、β -磷酸三鈣-膠原蛋白底物、膠原蛋白底物、磷酸鈣底物、礦化人胎盤(pán)膠原蛋白底物、透明質(zhì)酸底物以及陶瓷底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是β-磷酸三鈣底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是β-磷酸三鈣-膠原蛋白蛋白底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是膠原蛋白底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是磷酸鈣底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是礦化人胎盤(pán)膠原蛋白底物。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了包含由以上任何干細(xì)胞或以上任何干細(xì)胞群調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基的組合物。在具體實(shí)施方案中，任何這樣的組合物包含不是來(lái)自胎盤(pán)的干細(xì)胞。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是間充質(zhì)干細(xì)胞。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是骨髓來(lái)源的干細(xì)胞。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是造血祖細(xì)胞。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是體細(xì)胞干細(xì)胞。在另一更具體的實(shí)施方案中，所述體細(xì)胞干細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞、胰腺干細(xì)胞、內(nèi)皮干細(xì)胞、心臟干細(xì)胞或肌肉干細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供了包含由本發(fā)明所提供的胎盤(pán)干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基的組合物。在某些實(shí)施方案中，該組合物包含由細(xì)胞群，如本發(fā)明提供的干細(xì)胞群調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇不貼壁到底物的細(xì)胞，并將所述細(xì)胞與其他細(xì)胞分離以形成細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括選擇表達(dá)⑶34而不表達(dá)CD44的細(xì)胞，并增加例如與其他細(xì)胞分離的所述細(xì)胞的濃度，從而形成細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了生成細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)不貼壁到底物，(b)表達(dá)CD34而不表達(dá)CD44，和(c)當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)有利于在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成礦化基質(zhì)；和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群·。在某些實(shí)施方案中，所述底物包括纖連蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括選擇表達(dá)⑶9、⑶29、⑶54、⑶90、⑶166或上述的組合的的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括選擇表達(dá)⑶31、⑶34、⑶117、⑶133、⑶200或上述的組合的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，用抗體進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，用磁性小珠進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，用熒光激活細(xì)胞分類術(shù)進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，擴(kuò)增所述細(xì)胞群。在另一方面，本發(fā)明提供了非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞的群，其中，所述細(xì)胞已經(jīng)被冷藏，且所述細(xì)胞群被裝在容器中。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞被冷藏，且其中所述群被裝在容器中，和其中所述干細(xì)胞在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成礦化基質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，所述容器是適于靜脈內(nèi)輸液的袋。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5X107個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括IXlO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X 101°個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)5次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)10次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)15次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)20次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)在所述容器內(nèi)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群被裝在0.9%NaCl溶液中。在另一方面，本發(fā)明提供了能礦化基質(zhì)的成骨細(xì)胞的生成方法，該方法包括在所述干細(xì)胞分化成成骨細(xì)胞的條件下，培養(yǎng)本發(fā)明所提供的多種干細(xì)胞或多種干細(xì)胞群，所述培養(yǎng)時(shí)間為足以使所述成骨細(xì)胞產(chǎn)生或有利于產(chǎn)生可檢測(cè)量的富含鈣和/或磷的礦化基質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，所述成骨細(xì)胞生成骨。在又一方面，本發(fā)明提供了制備基質(zhì)的方法，該方法包括將本發(fā)明所提供的干細(xì)胞群與可植入的支架底物組合。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是非貼壁的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34+和⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少大約70%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，至少大約90%的所述干細(xì)胞為⑶34+和0044_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括IXlO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO10個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)被傳代至少、大約或不超過(guò)5次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞 已經(jīng)被傳代至少、大約或不超過(guò)10次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)被傳代至少、大約或不超過(guò)15次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)被傳代至少、大約或不超過(guò)20次。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，所述可植入的支架底物選自磷酸三鈣底物、磷酸三鈣-膠原蛋白底物、膠原蛋白底物、磷酸鈣底物、礦化人胎盤(pán)膠原蛋白底物、透明質(zhì)酸底物以及陶瓷底物。在某些實(shí)施方案中，所述該可植入的支架底物是磷酸三鈣底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是磷酸三鈣-膠原蛋白底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是膠原蛋白底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是磷酸鈣底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是礦化人胎盤(pán)膠原蛋白底物。在又一方面，本發(fā)明提供了配制可注射組合物的方法，該方法包括將胎盤(pán)干細(xì)胞群與可注射的透明質(zhì)酸或膠原蛋白組合。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是非貼壁的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34+和⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少大約70% 的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，至少大約90%的所述干細(xì)胞 為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些其他實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞是貼壁的。在某些具體 實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞是⑶200+和HLA-G+的XD73+、⑶105+和⑶200+的KD200+和 0CT-4+的KD73+、⑶105+和HLA-G+的KD73+和⑶105+的，且當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚 體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚 體；或者0CT-4+的且當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包 括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體；或其任意組合。在某些非貼壁胎盤(pán) 干細(xì)胞更具體的實(shí)施方案中，所述分離的⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+ 和 CD105+ 的；所述分離的 CD73+、CD105+ 和 CD200+ 干細(xì)胞是 CD34' CD38' CD45-和 HLA-G+ 的；所述分離的 CD200+、0CT-4+ 干細(xì)胞是 CD34'CD38'CD45'CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的；如 權(quán)利要求1所述的分離的干細(xì)胞，其中所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞是⑶34_、⑶45_、 0CT-4+和⑶200+的；有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的所述分離的⑶73+和⑶105+干細(xì)胞是 0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的；和/或所述0CT-4+的且有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的 分離的干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38-和⑶45—的。在某些實(shí)施方案中，所述 胎盤(pán)細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含可注射透明質(zhì)酸。在某些實(shí) 施方案中，所述組合物包含可注射膠原蛋白。本發(fā)明還提供了包含非貼壁干細(xì)胞和可注射 透明質(zhì)酸或可注射膠原蛋白的組合物。在另一方面，本發(fā)明提供了治療個(gè)體骨缺損的方法，該方法包括向有此需要的個(gè) 體給予包含本發(fā)明所提供的干細(xì)胞群的可植入或可注射組合物，從而治療該個(gè)體的骨缺 損。在某些實(shí)施方案中，所述骨缺損是與癌癥有關(guān)的溶骨性損傷、骨折、或脊柱如需要融合 的脊柱。在某些實(shí)施方案中，所述溶骨性損傷與多發(fā)性骨髓瘤、骨癌或轉(zhuǎn)移性癌有關(guān)。在某 些實(shí)施方案中，所述骨折是非聯(lián)合性骨折。在某些實(shí)施方案中，將包含非貼壁干細(xì)胞群的可 植入組合物給予所述個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可植入組合物通過(guò)外科手術(shù)植入，如植入到 骨缺損部位。在某些實(shí)施方案中，將包含非貼壁干細(xì)胞群的可注射組合物給予所述個(gè)體。在 某些實(shí)施方案中，可注射組合物通過(guò)外科手術(shù)給予到骨缺損區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，將可 注射組合物系統(tǒng)性給藥。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是非貼壁的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是 ⑶34+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是 ⑶34+和⑶44—的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某 些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì) 胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、 ⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少大約70%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44—干細(xì) 胞。在某些實(shí)施方案中，至少大約90%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些其他 實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞是貼壁的。在某些具體實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞是CD200+ 和 HLA-G+ 的；CD73+、CD105+ 和 CD200+ 的;CD200+ 和 0CT-4+ 的；CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的； CD73+和CD105+的，且當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包 括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體；或者0CT-4+的且當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群 在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體；或其任意組合。在某些非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞更具體的實(shí)施方案中，所述分離的CD200+、HLA-G+干細(xì)胞是 CD34'CD38'CD45'CD73+和 CD105+ 的；所述分離的 CD73+、CD105+和CD200+干細(xì)胞是CD34' CD38' CD45—和HLA-G+的；所述分離的CD200+、0CT-4+干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—、⑶45—、⑶73+、⑶105+和HLA-G+的；如權(quán)利要求1所述的分離的干細(xì)胞，其中所述CD73+、CD105+和HLA-G+干細(xì)胞是CD34'CD45'OCT_4+和CD200+的；有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的所述分離的⑶73+和⑶105+干細(xì)胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38—和⑶45—的；和/或所述0CT-4+的且有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的分離的干細(xì)胞是⑶73+Q、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。在另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了生成細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其a)貼壁到底物，和b)表達(dá)CD34而不表達(dá)CD44，和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，該方法還包括從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，生成細(xì)胞群的該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)貼壁到底物，(b)表達(dá)CD34而不表達(dá)CD44，和(c)當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，有利于在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成礦化基質(zhì)；和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，所述底物包括纖連蛋白。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了生成細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其a)不貼壁到底物，和b)表達(dá)CD34而不表達(dá)CD44，和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在某些 實(shí)施方案中，生成細(xì)胞群的該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)不貼壁到底物，(b)表達(dá)CD34而不表達(dá)CD44，和(c)當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，有利于在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成礦化基質(zhì)；和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞形成細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，所述底物包括纖連蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括選擇表達(dá)至少以下之一的細(xì)胞:⑶9、⑶29、⑶54、⑶90、⑶166或以上的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，所述方法包括選擇表達(dá)至少以下之一的細(xì)胞:⑶31、⑶34、⑶117、⑶133、⑶200或以上的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，用抗體進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，用磁性小珠進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，用熒光激活細(xì)胞分類法進(jìn)行所述選擇。在某些實(shí)施方案中，擴(kuò)增所述細(xì)胞群。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_的，其中所述細(xì)胞被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中，和其中所述干細(xì)胞在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成礦化基質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，所述容器是適于靜脈內(nèi)輸液的袋。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括IXlO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5X108個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IOltl個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)5次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)10次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)15次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)20次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)在所述容器內(nèi)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群被裝在0.9%NaCl溶液中。在另一方面，本發(fā)明提供了生成成骨細(xì)胞的方法，該方法包括在所述干細(xì)胞分化成成骨細(xì)胞的條件下，培養(yǎng)多種胎盤(pán)干細(xì)胞或多種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的群，所述培養(yǎng)時(shí)間為足以使所述成骨細(xì)胞產(chǎn)生或有利于產(chǎn)生可檢測(cè)量的礦化基質(zhì)。在又一方面，本發(fā)明提供制備基質(zhì)的方法，該方法包括將胎盤(pán)干細(xì)胞群與可植入的支架底物組合，其中所述干細(xì)胞是CD34+和CD44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少大約70%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，至少大約90%的所述干細(xì)胞為CD34+和0044_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在具體實(shí)施方案中，所述貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞是⑶200+和HLA-G+的<D73+、⑶105+和⑶200+的KD200+和0CT-4+的KD73+、⑶105+和HLA-G+的KD73+和⑶105+的，且當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體；或者0CT-4+的且當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體；或其任意組合。在某些非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞更具體的實(shí)施方案中，所述分離的⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和 CD105+ 的；所述分離的 CD73+、CD105+ 和 CD200+ 干細(xì)胞是 CD34' CD38' CD45-和 HLA-G+的；所述分離的 CD200+、0CT-4+ 干細(xì)胞是 CD34'CD38'CD45'CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ 的；如權(quán)利要求1所述的分離的干細(xì)胞，其中所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞是⑶34_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的；有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的所述分離的⑶73+和⑶105+干細(xì)胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的；和/或所述0CT-4+的且有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的分離的干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38-和⑶45—的。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO7所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包·括5 X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IOltl個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)5次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)10次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)15次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)20次。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，上述可植入的支架底物選自磷酸三鈣底物、磷酸三鈣-膠原蛋白底物、膠原蛋白底物、磷酸鈣底物、礦化人胎盤(pán)膠原蛋白底物和透明質(zhì)酸底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是磷酸三鈣底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是磷酸三鈣-膠原蛋白底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是膠原蛋白底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是磷酸鈣底物。在某些實(shí)施方案中，該可植入的支架底物是礦化人胎盤(pán)膠原蛋白底物和/或支架。在又一方面，本發(fā)明提供了配制可注射組合物的方法，該方法包括將胎盤(pán)干細(xì)胞群與可注射的透明質(zhì)酸或膠原蛋白組合，其中所述干細(xì)胞是CD34+和CD44_的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少大約70%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，至少大約90%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是貼壁的。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含可注射的透明質(zhì)酸。在某些實(shí)施方案中，所述組合物包含可注射的膠原蛋白。本發(fā)明還提供了包含非貼壁干細(xì)胞群和可注射的透明質(zhì)酸或膠原蛋白的組合物。在又一方面，本發(fā)明還提供了治療個(gè)體骨缺損的方法，其包括向有此需要的個(gè)體給予包含干細(xì)胞群的可植入或可注射組合物，其中所述干細(xì)胞是CD34+和CD44—的，從而治療個(gè)體的骨缺損。在某些實(shí)施方案中，所述骨缺損是(a)與癌癥有關(guān)的溶骨性損傷，(b)骨折，或(c)需要融合的脊柱。在某些實(shí)施方案中，所述溶骨性損傷與多發(fā)性骨髓瘤、骨癌或轉(zhuǎn)移性癌有關(guān)。在某些實(shí)施方案中，所述骨折是非聯(lián)合性骨折。在某些實(shí)施方案中，將包含非貼壁干細(xì)胞群的可植入組合物給予所述個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可植入組合物通過(guò)外科手術(shù)植入。在某些實(shí)施方案中，將包含非貼壁干細(xì)胞群的可注射組合物給予所述個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可注射組合物通過(guò)外科手術(shù)給予到骨缺損區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，將可注射組合物系統(tǒng)性給藥。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少大約70%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，至少大約90%的所述干細(xì)胞為⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已被擴(kuò)增。在又一方面，本發(fā)明還提供了 治療個(gè)體骨缺損的方法，該方法包括向有此需要的個(gè)體給予包含干細(xì)胞群的可植入或可注射組合物，其中，所述干細(xì)胞是CD34-的，從而治療個(gè)體的骨缺損。在某些實(shí)施方案中，所述骨缺損是(a)與癌癥有關(guān)的溶骨性損傷，(b)骨折，或(C)需要融合的脊柱。在某些實(shí)施方案中，所述溶骨性損傷與多發(fā)性骨髓瘤、骨癌或轉(zhuǎn)移性癌有關(guān)。在某些實(shí)施方案中，所述骨折是非聯(lián)合性骨折。在某些實(shí)施方案中，將包含貼壁干細(xì)胞群的可植入組合物給予所述個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可植入組合物通過(guò)外科手術(shù)植入。在某些實(shí)施方案中，將包含貼壁干細(xì)胞群的可注射組合物給予所述個(gè)體。在某些實(shí)施方案中，可注射組合物通過(guò)外科手術(shù)給予到骨缺損區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，將可注射組合物系統(tǒng)性給藥。在非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞的更具體的實(shí)施方案中，所述分離的CD200+、HLA-G+干細(xì)胞是 CD34' CD38' CD45' CD73.和 CD105.的；所述分離的 CD73+、CD105.和 CD200.干細(xì)胞是CD34' CD38' CD45-和 HLA-G+ 的；所述分離的 CD200+、0CT-4+ 干細(xì)胞是 CD34' CD38' CD45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的；如權(quán)利要求1所述的分離的干細(xì)胞，其中所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞是⑶34_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的；有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的所述分離的CD73.和CD105.干細(xì)胞是OCT-4+、CD34' CD38-和CD45-的；和/或所述0CT-4+的且有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體形成的分離的干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38—和⑶45_的。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO6個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO7個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO8個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括IXlO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括5 X IO9個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括I X 101°個(gè)所述干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)5次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)10次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)15次。在某些實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞傳代不超過(guò)20次。在某些實(shí)施 方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)哺乳動(dòng)物胎盤(pán)來(lái)源的干細(xì)胞群的方法。在一實(shí)施方案中，例如，本發(fā)明提供了生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其a)貼壁到底物，和b)表達(dá)CD200和HLA-G ;和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)貼壁到底物，和(b)表達(dá)⑶73、⑶105和⑶200 ;和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)貼壁到底物，和(b)表達(dá)CD200和0CT-4 ;和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)貼壁到底物，(b)表達(dá)CD73和CD105，和(c)當(dāng)在允許擬胚體形成的條件下與胎盤(pán)細(xì)胞群一起培養(yǎng)時(shí)，有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體的形成；從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)貼壁到底物，和(b)表達(dá)CD73、CD105和HLA-G ;和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇如下細(xì)胞，其(a)貼壁到底物，(b)表達(dá)0CT-4，和(c)當(dāng)在允許擬胚體形成的條件下與胎盤(pán)細(xì)胞群一起培養(yǎng)時(shí)，有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體的形成；和從其他細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在以上任何方法的具體實(shí)施方案中，所述底物包括纖連蛋白。在另一具體實(shí)施方案中，該方法包括選擇表達(dá)ABC-p的細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，該方法包括選擇表現(xiàn)出間充質(zhì)干細(xì)胞特有的至少一種特征的細(xì)胞。在更具體的實(shí)施方案中，所述間充質(zhì)干細(xì)胞特有的特征是表達(dá)⑶29、表達(dá)⑶44、表達(dá)⑶90、或者以上組合。在所述方法的另一具體實(shí)施方案中，用抗體進(jìn)行所述選擇。在另一更具體的實(shí)施方案中，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行所述選擇。在另一具體實(shí)施方案中，用磁性小珠進(jìn)行所述選擇。在另一具體實(shí)施方案中，用熒光激活細(xì)胞分類法進(jìn)行所述選擇。在以上方法的另一具體實(shí)施方案中，擴(kuò)增所述細(xì)胞群。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)細(xì)胞系的方法，該方法包括用編碼生長(zhǎng)-啟動(dòng)蛋白質(zhì)的DNA序列轉(zhuǎn)化干細(xì)胞；和將所述干細(xì)胞暴露在促進(jìn)所述生長(zhǎng)-啟動(dòng)蛋白質(zhì)生成的條件下。在具體實(shí)施方案中，所述生長(zhǎng)-啟動(dòng)蛋白質(zhì)是v-myc、N-myc、c-myc、p53、SV40大T抗原、多瘤病毒大T抗原、Ela腺病毒或人乳頭狀瘤病毒E7蛋白。在更具體的實(shí)施方案中，所述DNA序列是可調(diào)節(jié)的。在更具體的實(shí)施方案中，所述DNA序列可被四環(huán)素調(diào)節(jié)。在另一具體實(shí)施方案中，所述生長(zhǎng)-啟動(dòng)蛋白質(zhì)具有可調(diào)節(jié)活性。在另一具體的實(shí)施方案中，所述生長(zhǎng)-啟動(dòng)蛋白質(zhì)是溫度敏感型突變體。
本發(fā)明還提供了冷藏的干細(xì)胞群。例如，本發(fā)明提供了 CD200+和HLA-G+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞已經(jīng)被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中。本發(fā)明還提供了 CD73+、CD105+、CD200+干細(xì)胞群，其中所述干細(xì)胞已經(jīng)被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中。本發(fā)明還提供了⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞群，其中所述干細(xì)胞已經(jīng)被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中。本發(fā)明還提供了 CD73+、CD105+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞已經(jīng)被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中，和其中當(dāng)所述干細(xì)胞在允許擬胚體形成的條件下與胎盤(pán)干細(xì)胞群一起培養(yǎng)時(shí)，有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體的形成。本發(fā)明還提供了⑶73+、⑶105+、HLA-G+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞已經(jīng)被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中。本發(fā)明還提供了 0CT-4+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞已經(jīng)被冷藏，且其中所述細(xì)胞群被裝在容器中，和當(dāng)所述干細(xì)胞在允許擬胚體形成的條件下與胎盤(pán)干細(xì)胞群一起培養(yǎng)時(shí)，有利于一個(gè)或多個(gè)擬胚體的形成。在任何上述的冷藏細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述容器是袋。在各種具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群包括大約、至少或最多I X IO6個(gè)所述干細(xì)胞、5 X IO6個(gè)所述干細(xì)胞、I X IO7個(gè)所述干細(xì)胞、5 X IO7個(gè)所述干細(xì)胞、I X IO8個(gè)所述干細(xì)胞、5 X IO8個(gè)所述干細(xì)胞、I X IO9個(gè)所述干細(xì)胞、5X109個(gè)所述干細(xì)胞、或IXlOici個(gè)所述干細(xì)胞。在任何上述冷藏細(xì)胞群的其他具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)傳代大約、至少或不超過(guò)5次，不超過(guò)10次，不超過(guò)15次，或不超過(guò)20次。在任何上述冷藏細(xì)胞群的另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞在所述容器中已經(jīng)被擴(kuò)增。本發(fā)明還包括制備礦化膠原蛋白基質(zhì)的方法，該方法包括礦化膠原蛋白并將該礦化的膠原蛋白基質(zhì)進(jìn)行交聯(lián)。在某些實(shí)施方案中，所述膠原蛋白是胎盤(pán)膠原蛋白。在某些實(shí)施方案中，所述膠原蛋白用磷酸鈣進(jìn)行礦化。在某些實(shí)施方案中，所述膠原蛋白用丁二醇二縮水甘油醚進(jìn)行交聯(lián)。在某些實(shí)施方案中，在礦化反應(yīng)中磷酸鈣與膠原蛋白的比例為5: 95,10: 90,15: 85,20: 80,25: 75,30: 70,35: 65,40: 60,45: 55,50: 50、55: 45,60: 40,65: 35,70: 30,75: 25,80: 20,85: 15,90: 10 或 95: 5。3.1.定義

如本文所用的術(shù)語(yǔ)“SH2”是指結(jié)合標(biāo)記⑶105上的抗原決定部位的抗體。因此，稱作SH2+的細(xì)胞是CD105+的。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“SH3”和“SH4”是指結(jié)合標(biāo)記⑶73上的抗原決定部位的抗體。因此，稱作SH3+和/或SH4+的細(xì)胞是⑶73+的。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“分離的干細(xì)胞”是指基本上與該干細(xì)胞所來(lái)源的組織如胎盤(pán)的其他非干細(xì)胞分離的干細(xì)胞。如果從所述干細(xì)胞中除去，例如在收集和/或培養(yǎng)該干細(xì)胞時(shí)除去了至少大約50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的與該干細(xì)胞天然相關(guān)的非干細(xì)胞，則該干細(xì)胞是“分離的”。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“分離的細(xì)胞的群”是指基本上與該細(xì)胞群所來(lái)源的組織如胎盤(pán)的其他細(xì)胞分離的細(xì)胞的群。如果從所述干細(xì)胞中除去，例如在收集和/或培養(yǎng)該干細(xì)胞時(shí)除去了至少大約50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的與所述細(xì)胞群或來(lái)源于該細(xì)胞群的細(xì)胞天然相關(guān)的細(xì)胞，則該干細(xì)胞是“分離的”。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)干細(xì)胞”是指來(lái)源于哺乳動(dòng)物胎盤(pán)的干細(xì)胞或祖細(xì)胞，不考慮其形態(tài)、細(xì)胞表面標(biāo)記或原代培養(yǎng)后的傳代次數(shù)。然而，如本文所用的術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)干細(xì)胞”并不指滋養(yǎng)母細(xì)胞。如果細(xì)胞具有干細(xì)胞的至少一個(gè)特點(diǎn)，則該細(xì)胞被認(rèn)為是“干細(xì)胞”，該特點(diǎn)例如與一種或多種干細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)記或基因表達(dá)圖譜；在培養(yǎng)中復(fù)制至少10-40次的能力，分化成三種胚層細(xì)胞的能力；缺少成體(即已分化)細(xì)胞的特征等等。術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)干細(xì)胞”和“胎盤(pán)來(lái)源的干細(xì)胞”可互換使用。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)灌洗液”是指已經(jīng)流過(guò)胎盤(pán)如人胎盤(pán)的至少一部分如脈管系統(tǒng)的灌洗液，其包含在灌洗液流過(guò)胎盤(pán)的過(guò)程中所收集的多種細(xì)胞。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)灌洗細(xì)胞”是指有核細(xì)胞，如從或可從胎盤(pán)灌洗液中分離的總有核細(xì)胞。如本文所用，當(dāng)某個(gè)具體標(biāo)記是可檢測(cè)的，則干細(xì)胞對(duì)于該具體標(biāo)記來(lái)說(shuō)為“陽(yáng)性的”。例如，胎盤(pán)干細(xì)胞是例如CD73陽(yáng)性的，因?yàn)镃D73在胎盤(pán)干細(xì)胞上以可檢測(cè)的大于背景(與如同型對(duì)照相比)的量而可檢測(cè)。當(dāng)標(biāo)記存在于所述細(xì)胞或被所述細(xì)胞表達(dá)且可用于將該細(xì)胞與至少另外一種細(xì)胞類型區(qū)別開(kāi)或可用于選擇或分離該細(xì)胞時(shí)，該細(xì)胞對(duì)于該標(biāo)記來(lái)說(shuō)是陽(yáng)性的。如本文所用，“成骨細(xì)胞”是能夠沉積骨的主要成分羥磷灰石或能夠分化成能沉積輕磷灰石的細(xì)胞的細(xì)胞。具體地，“成骨細(xì)胞”預(yù)期包括通常稱作成骨細(xì)胞或骨細(xì)胞的細(xì)胞。如本文所用，“基質(zhì)”是指三維底物，其特征為具有分散在整個(gè)底物中的空隙。所述空隙適于在基質(zhì)內(nèi)例如生長(zhǎng)細(xì)胞，如干細(xì)胞，胎盤(pán)來(lái)源的貼壁干細(xì)胞和/或成骨細(xì)胞。示例性基質(zhì)包括但不限于磷酸三鈣底物、磷酸三鈣-膠原蛋白底物、膠原蛋白底物、磷酸鈣底物、礦化人胎盤(pán)膠原蛋白底物、透明質(zhì)酸底物以及陶瓷底物。優(yōu)選地，該基質(zhì)被基質(zhì)空隙中存在的成骨細(xì)胞礦化。
4.


圖1:來(lái)自灌洗液(A)、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板⑶或臍帶(E)的胎盤(pán)干細(xì)胞的存活力。X軸上的數(shù)字表示得到干細(xì)胞的胎盤(pán)。

圖2:通過(guò)FACS Cal ibur測(cè)得的來(lái)自灌洗液(A)、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板(D)或臍帶(E)的HLA ABC7⑶45_/⑶347⑶133+細(xì)胞的百分比。X軸上的數(shù)字表示得到干細(xì)胞的胎盤(pán)。圖3:通過(guò)FACS Aria測(cè)得的來(lái)自灌洗液㈧、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板⑶或臍帶(E)的HLA ABC7⑶45_/⑶347⑶133+細(xì)胞百分比。X軸上的數(shù)字表示得到干細(xì)胞的胎盤(pán)。圖4:從胎盤(pán)灌洗液得到的干細(xì)胞中的HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 表達(dá)。圖5:從羊膜得到的干細(xì)胞中的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 表達(dá)。圖6:從絨毛膜得到的干細(xì)胞中的HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 表達(dá)。圖7:從羊膜-絨毛膜板得到的干細(xì)胞中的HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、CD90、CD105、CD117、CD200 表達(dá)。圖8:從臍帶得到的干細(xì)胞中的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 表達(dá)。
圖9:從灌洗液㈧、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板⑶或臍帶(E)得到的干細(xì)胞中的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 表達(dá)的平均表達(dá)。圖10:本研究中使用的羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚纖維母細(xì)胞(NHDF)細(xì)胞系的培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)程。所有培養(yǎng)均使用相同的接種和傳代密度進(jìn)行生長(zhǎng)和增殖。圓圈表示培養(yǎng)用于RNA分離。在即將老化之前收集后期培養(yǎng)。在38-倍增時(shí)收集兩個(gè)UC培養(yǎng)(UC-38)，以對(duì)比胰蛋白酶作用對(duì)基因表達(dá)的效果。所有其他培養(yǎng)在RNA分離之前在其培養(yǎng)瓶中直接水解。圖11:羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚纖維母細(xì)胞(DF)中8215個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)水平的線圖。X軸上與每個(gè)細(xì)胞系名稱相連的數(shù)字是指該細(xì)胞系在評(píng)估基因表達(dá)水平之前的培養(yǎng)天數(shù)。圖表由GeneSpring軟件分析的RNA表達(dá)數(shù)據(jù)生成。AC-03用作選擇條件。圖12:羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚纖維母細(xì)胞(DF)在AC-03中顯示基因過(guò)量表達(dá)> 6倍的所有基因系列的子集。X軸上與每個(gè)細(xì)胞系名稱相連的數(shù)字是指該細(xì)胞系在評(píng)估基因表達(dá)水平之前的培養(yǎng)天數(shù)。圖表由GeneSpring軟件分析的RNA表達(dá)數(shù)據(jù)生成。AC-03用作選擇條件。圖13:羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚纖維母細(xì)胞(DF)中通過(guò)倍數(shù)變化過(guò)濾發(fā)現(xiàn)的胎盤(pán)干細(xì)胞特異性或臍帶干細(xì)胞特異性基因。X軸上與每個(gè)細(xì)胞系名稱相連的數(shù)字是指該細(xì)胞系在評(píng)估基因表達(dá)水平之前的培養(yǎng)天數(shù)。圖表由GeneSpring軟件分析的RNA表達(dá)數(shù)據(jù)生成。AC-03用作選擇條件。圖14:在兩種不同的培養(yǎng)基配方中培養(yǎng)的胎盤(pán)干細(xì)胞(圖14A)和間充質(zhì)干細(xì)胞(圖14B)的堿性磷酸酶活性。

圖15:在兩種不同的培養(yǎng)基配方中培養(yǎng)的胎盤(pán)干細(xì)胞(圖15A)的礦化。圖16:在OS培養(yǎng)基而不是Anthro IB培養(yǎng)基中誘導(dǎo)的胎盤(pán)干細(xì)胞產(chǎn)生的礦物質(zhì)沉積。圖17:在兩種不同的支架上生長(zhǎng)的胎盤(pán)干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞的生長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)程。圖18:在β -磷酸三鈣底物上，OS培養(yǎng)基和Anthro IB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的胎盤(pán)干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞的電子掃描顯微照相(20Χ)。圖19:在β -磷酸三鈣底物上，OS培養(yǎng)基和Anthro IB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的胎盤(pán)干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞電子掃描顯微照相(5000Χ)。圖20:間充質(zhì)干細(xì)胞和從人灌洗胎盤(pán)細(xì)胞獲得的干細(xì)胞的茜素紅染色，其顯示在OS培養(yǎng)基而不是DMEM中培養(yǎng)后發(fā)生鈣礦化圖21:在磷酸三鈣底物存在的條件下，在OS培養(yǎng)基中培養(yǎng)10天后的間充質(zhì)干細(xì)胞和干細(xì)胞的AP活性。圖22:電子顯微照片，其顯示了膠原原纖維(Α行)和礦化膠原原纖維(B行)。圖23:示意圖，其顯示了交聯(lián)的礦化膠原蛋白的最終礦物質(zhì)/膠原比例與所輸入的礦物質(zhì)/膠原蛋白比例接近。圖24:移植后3周的頭蓋骨缺損的組織切片。在胎盤(pán)干細(xì)胞-HEAL0S 外植體中可看到在缺損內(nèi)有大量骨沉積。
圖25A-25C:移植后7周的頭蓋骨缺損的X射線分析。圖25A:箭頭所指為陽(yáng)性對(duì)照外植體BMP-2+HEAL0S 。圖25B:箭頭所指為顯示出骨沉積的胎盤(pán)干細(xì)胞+HEAL0S 外植體。圖25C:單獨(dú)的陰性對(duì)照HEAL0S 和無(wú)外植體的頭蓋骨缺損。圖26:通過(guò)光密度分析法進(jìn)行骨形成定量。增加的灰度(Y軸)表示增加的骨密度/沉積。X軸:治療等級(jí)。
5.
具體實(shí)施例方式5.1.胎盤(pán)干細(xì)胞和胎盤(pán)干細(xì)胞群胎盤(pán)干細(xì)胞是可從胎盤(pán)或其部分中獲得的干細(xì)胞，其貼壁到組織培養(yǎng)的底物并能分化為非胎盤(pán)細(xì)胞型。胎盤(pán)干細(xì)胞可以來(lái)源于胎兒，也可以來(lái)源于母體(也就是說(shuō)，可以具有母親或胎兒的基因型)。胎盤(pán)干細(xì)胞群或包括胎盤(pán)干細(xì)胞的細(xì)胞群可包括完全來(lái)源于胎兒或母體的胎盤(pán)干細(xì)胞，也可包括來(lái)源于胎兒和母體的混合胎盤(pán)干細(xì)胞。胎盤(pán)干細(xì)胞和包括胎盤(pán)干細(xì)胞的細(xì)胞群可通過(guò)在下文討論的形態(tài)、標(biāo)記和培養(yǎng)特征進(jìn)行識(shí)別和挑選。5.1.1.物理學(xué)和形態(tài)學(xué)特征本發(fā)明提供的非貼壁的CD34+干細(xì)胞在原代培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)時(shí)，通常不貼壁到組織培養(yǎng)底物。培養(yǎng)中的非貼壁干細(xì)胞通常呈現(xiàn)圓形，與從骨髓或外周血得到的CD34+干細(xì)胞類似。本發(fā)明提供的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞在原代培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)時(shí)，貼壁到組織培養(yǎng)底物，例如組織培養(yǎng)容器表面 (例如組織培養(yǎng)塑料)。培養(yǎng)中的胎盤(pán)干細(xì)胞通常認(rèn)為呈成纖維細(xì)胞樣星狀外觀，并具有許多從中央細(xì)胞體延伸出的細(xì)胞質(zhì)突起。然而，所述胎盤(pán)干細(xì)胞從形態(tài)學(xué)上與相同條件下培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞不同，因?yàn)樵撎ケP(pán)干細(xì)胞比成纖維細(xì)胞具有更多的這種突起。胎盤(pán)干細(xì)從胞形態(tài)學(xué)上也與造血干細(xì)胞不同，培養(yǎng)中的造血干細(xì)胞通常認(rèn)為是更圓的或鵝卵石形形態(tài)。5.1.2.細(xì)胞表面、分子和基因標(biāo)記非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞:在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，所述分離的干細(xì)胞是CD34+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶44—的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶34+和⑶44—的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)灌洗，或通過(guò)物理或生物化學(xué)裂解如酶消化胎盤(pán)組織從人胎盤(pán)中分離。在某些實(shí)施方案中，該分離的干細(xì)胞已經(jīng)通過(guò)灌洗從人胎盤(pán)中分離。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許礦化基質(zhì)形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，該分離的干細(xì)胞有利于在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成礦化基質(zhì)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供分離的非貼壁胎盤(pán)細(xì)胞的群。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括CD34+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括CD44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括干細(xì)胞，其中至少有大約70%的所述細(xì)胞是CD34+和CD44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，該細(xì)胞群包括干細(xì)胞，其中至少有大約90%的所述細(xì)胞是⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供了分離的⑶34+和⑶44_胎盤(pán)干細(xì)胞的群。在某些實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+或⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是⑶9+、⑶54+、⑶90+和⑶166+的。在某些實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+或⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，干細(xì)胞是⑶31+、⑶117+、⑶133+和⑶200+的。在某些實(shí)施方案中，至少約70%的該干細(xì)胞是⑶34+和⑶44_干細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，至少約90%的該干細(xì)胞是⑶34+和⑶44-的干細(xì)胞。貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞:本發(fā)明提供的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞和胎盤(pán)干細(xì)胞群表達(dá)多種可用來(lái)識(shí)別和/或分離所述干細(xì)胞或包括所述干細(xì)胞的細(xì)胞群的標(biāo)記。本發(fā)明提供的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞和干細(xì)胞群(即兩個(gè)或兩個(gè)以上的胎盤(pán)干細(xì)胞)包括直接從胎盤(pán)或其任何部分(例如羊膜、絨毛膜、胎盤(pán)小葉、臍帶等)獲得的干細(xì)胞和含有干細(xì)胞的細(xì)胞群。胎盤(pán)干細(xì)胞群還包括培養(yǎng)中的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞群(即兩個(gè)或兩個(gè)以上)，以及容器如袋中的細(xì)胞群。然而，胎盤(pán)干細(xì)胞不是滋養(yǎng)母細(xì)胞。本發(fā)明提供的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞通常表達(dá)標(biāo)記⑶73、⑶105、⑶200、HLA-G和/或0CT-4,而不表達(dá)CD34、CD38或CD45。胎盤(pán)干細(xì)胞也表達(dá)HLA-ABC(MHC-l)和HLA-DR。這些標(biāo)記可用于識(shí)別胎盤(pán)干細(xì)胞，并將胎盤(pán)干細(xì)胞與其他類型的干細(xì)胞區(qū)別開(kāi)來(lái)。因?yàn)樗鎏ケP(pán)干細(xì)胞能表達(dá)CD73和CD105，因此它們可有間充質(zhì)干細(xì)胞樣特征。然而，因?yàn)樗鎏ケP(pán)干細(xì)胞可表達(dá)CD200和HLA-G，胎兒特異性標(biāo)記，因此它們可與既不表達(dá)CD200也不表達(dá)HLA-G的間充質(zhì)干細(xì)胞，如骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞區(qū)別開(kāi)來(lái)。同樣地，因?yàn)椴槐磉_(dá)CD34、CD38和/或CD45，因此將所述胎盤(pán)干細(xì)胞鑒定為非造血干細(xì)胞。然而，胎盤(pán)干細(xì)胞的某些亞類可表達(dá)例如CD34，其仍被認(rèn)為是本發(fā)明所提供的胎盤(pán)干細(xì)胞。因此，在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的⑶200+或HLA-G+貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是CD200+和HLA-G+的。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45-的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述CD200+或HLA-G+干細(xì)胞在允許擬胚體形成的條件下有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，該方法包括選擇CD200或HLA-G胎盤(pán)細(xì)胞，因而所述細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇CD200+和HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中,所述選擇包括也選擇⑶73+和⑶105+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括還選擇⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括也選擇⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和CD105+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇在允許擬胚體形成的條件下還有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體的胎盤(pán)細(xì)胞。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包括分離的⑶200+、HLA-G+胎盤(pán)干細(xì)胞的分離細(xì)胞群。在具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群是胎盤(pán)細(xì)胞群。在另一具體實(shí)施方案中，該細(xì)胞群是分離的⑶200+、HLA-G+胎盤(pán)干細(xì)胞群。在各種實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞為⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞。優(yōu)選地，至少大約70%的所述細(xì)胞為⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞。更優(yōu)選地，至少大約90%、95%、或99%的所述細(xì)胞為CD200+、HLA-G+干細(xì)胞。在所述分離細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還是⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還是⑶34_、⑶38_或⑶45-的。在一更具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+的。在另一實(shí)施方案中，所述分離細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇胎盤(pán)細(xì)胞群,其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細(xì)胞是⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶73+和⑶105+的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34—、⑶38—或⑶45—的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和CD105+的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇還包括選擇在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)擬胚體的胎盤(pán)干細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的⑶73+、⑶105+和⑶200+干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述分離的干細(xì)胞是分離的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、0038_和CD45_的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述分離的CD73+、CD105+和CD200+干細(xì)胞有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中 ，本發(fā)明提供了從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，該方法包括選擇⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盤(pán)細(xì)胞，因而所述細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_、⑶45_和!11^-6+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶73+、⑶105+和⑶200+的干細(xì)胞，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括⑶73+、⑶105+和⑶200+干細(xì)胞的分離細(xì)胞群。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群是分離的⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盤(pán)干細(xì)胞的群。在各種實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞為CD73+、⑶105+和⑶200+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，在所述細(xì)胞群中至少大約70%的所述細(xì)胞為⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，在所述細(xì)胞群中至少大約90%、95%或99%的所述細(xì)胞為CD73+、CD105+、CD200+干細(xì)胞。在所述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、0038_和CD45_的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇胎盤(pán)細(xì)胞群，其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+和⑶200+干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是HLA-G+的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_或⑶45—的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38—和⑶45—的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇還包括選擇在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)擬胚體的胎盤(pán)細(xì)胞群。本發(fā)明還提供分離的⑶200+和0CT-4+干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+的。在具體實(shí)施方案中，該干細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，該干細(xì)胞有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，該方法包括選擇CD200+或0CT-4+胎盤(pán)細(xì)胞，因而所述細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+、⑶105+和HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇在所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)還有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體的胎盤(pán)干細(xì)胞。本發(fā)明還提供了包括⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞的分離細(xì)胞群。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群為CD200+、0CT-4+干細(xì)胞群。在各種實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞為⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，至少大約70%的所述細(xì)胞為所述⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，至少大約90%、95%或99%的所述細(xì)胞為所述CD200+、0CT-4+干細(xì)胞。在所述分離細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為CD34_、0038_和CD45_的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生一個(gè)或多個(gè)擬胚體。

在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇胎盤(pán)細(xì)胞群，其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%，至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細(xì)胞是⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶73+和CD 105+的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是CD34_、CD38_和CD45_的干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的干細(xì)胞。本發(fā)明還提供了分離的⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—、CD45—、0CT-4+和CD200+的。在另一具體實(shí)施方案中，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述干細(xì)胞有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，該方法包括選擇⑶73+、⑶105+和HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞，因而所述細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是0CT-4+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶200+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和CD200+的胎盤(pán)細(xì) 胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)還有利于在包括所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體的胎盤(pán)細(xì)胞。本發(fā)明還提供了包括⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞的分離細(xì)胞群。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群為CD73+、CD105+和HLA-G+干細(xì)胞群。在各種實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞為⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，至少大約70%的所述細(xì)胞為所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+的。在另一實(shí)施方案中，至少大約90%、95%或99%的所述細(xì)胞為所述⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_*CD45_的。在另一具體實(shí)施方案中，，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為0CT-4+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為CD200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34-、CD38-、CD45_、0CT-4+和CD200+的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了從多種胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法，該方法包括選擇其中大部分所述細(xì)胞為CD73+、CD105+和HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞群。在具體實(shí)施方案中，所述大部分細(xì)胞還是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述大部分細(xì)胞還是CD34_、CD38_和CD45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述大部分細(xì)胞還是CD200+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述大部分細(xì)胞還是CD34_、CD38' CD45' 0CT-4+ 和 CD200.的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包括分離的⑶73+和⑶105+干細(xì)胞，當(dāng)所述胎盤(pán)細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)，其有利于在包括所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_*CD45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—和CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和CD45-的。本發(fā)明還提供了包括⑶73+、⑶105+干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群，其中所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群為CD73+、CD105+胎盤(pán)干細(xì)胞的群，其中所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在各種實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%或至少大約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞為⑶73+、⑶105+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為0CT-4+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+、CD34_、⑶38_和⑶45_的。在其它具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如已經(jīng)被傳代至少一次、至少三次、至少五次、至少10次、至少15次或至少20次。本發(fā)明還提供分離的0CT-4+干細(xì)胞，其在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)有利于在包括所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群中形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為⑶34_、⑶38_或CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為CD200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為 CD73+、CD105+、CD200+、CD34' CD38-和 CD45-的。本發(fā)明還提供了包括0CT-4+干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞的群，其中所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群為胎盤(pán)干細(xì)胞群，該胎盤(pán)干細(xì)胞是0CT-4+干細(xì)胞，其中所述細(xì)胞群在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)時(shí)形成一個(gè)或多個(gè)擬胚體。在各種實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少`大約80%、至少大約90%或至少大約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞為0CT-4+干細(xì)胞。在上述細(xì)胞群的具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為CD34_、CD38_和CD45—的。在另一具體實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞為⑶200+的。在更具體的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34_、⑶38_和⑶45_的。在另一具體實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群已經(jīng)被擴(kuò)增，例如已經(jīng)被傳代至少一次、至少三次、至少五次、至少10次、至少15次或至少20次。本發(fā)明還提供了通過(guò)酶消化(參見(jiàn)第5.2.3部分)或灌洗(參見(jiàn)第5.2.4部分)而得到的胎盤(pán)干細(xì)胞。例如，本發(fā)明提供根據(jù)以下方法產(chǎn)生的胎盤(pán)干細(xì)胞的分離群，該方法包括:灌洗已經(jīng)排出了臍血并已經(jīng)灌洗了的哺乳動(dòng)物胎盤(pán)以除去殘余血；用灌洗液灌洗所述胎盤(pán)；和收集所述灌洗液，其中灌洗后的所述灌洗液包括包含胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群；和從所述細(xì)胞群中分離多種所述胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，該灌洗液流過(guò)臍靜脈和臍動(dòng)脈，然后在其從胎盤(pán)流出后收集。通過(guò)這種方法產(chǎn)生的胎盤(pán)干細(xì)胞群通常包括胎兒和母體細(xì)胞的混合。在另一具體實(shí)施方案中，所述灌洗液通過(guò)臍靜脈，而從臍動(dòng)脈收集，或通過(guò)臍動(dòng)脈，而從臍靜脈收集。通過(guò)這種方法產(chǎn)生的胎盤(pán)干細(xì)胞群通?；旧贤耆珌?lái)源于胎兒，也就是說(shuō)，如所述細(xì)部群中大于90%、95%、99%或99.5%的胎盤(pán)干細(xì)胞是來(lái)源于胎兒。在各種實(shí)施方案中，從胎盤(pán)灌洗液中獲得的細(xì)胞群所包含的胎盤(pán)干細(xì)胞占所述胎盤(pán)細(xì)部群的至少大約50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%。在另一具體實(shí)施方案中，通過(guò)灌洗收集的胎盤(pán)干細(xì)胞包括胎兒和母體細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，通過(guò)灌洗收集的胎盤(pán)干細(xì)胞至少大約50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99.5%為胎兒細(xì)胞。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包括通過(guò)灌洗收集的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的群的組合物，其中所述組合物包括至少部分用于收集所述胎盤(pán)干細(xì)胞的灌洗液。本發(fā)明還提供了本文所描述的胎盤(pán)干細(xì)胞的分離群，其根據(jù)以下方法產(chǎn)生，該方法包括:用組織裂解酶消化胎盤(pán)組織以獲得包括胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群，并從所述胎盤(pán)細(xì)胞的殘余物中分離多種胎盤(pán)干細(xì)胞?？上麄€(gè)或部分胎盤(pán)以獲得胎盤(pán)干細(xì)胞。在具體實(shí)施方案中，例如，所述胎盤(pán)組織是整個(gè)胎盤(pán)、羊膜、絨毛膜、羊膜和絨毛膜的組合，或上述任意幾項(xiàng)的組合。在其它具體實(shí)施方案中，所述組織裂解酶是胰蛋白酶或膠原蛋白酶。在各種實(shí)施方案中，從消化的胎盤(pán)中獲得的細(xì)胞群所包含的胎盤(pán)干細(xì)胞占所述胎盤(pán)細(xì)胞群的至少大約 50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或至少 99.5%?；驁D譜證實(shí)分離的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞和分離的胎盤(pán)干細(xì)胞的群可以與其他細(xì)胞如間充質(zhì)干細(xì)胞，如骨髓來(lái)源的干細(xì)胞相區(qū)分。本文所述的貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞可以基于一個(gè)或多個(gè)基因的表達(dá)與間充質(zhì)干細(xì)胞相區(qū)分，該基因的表達(dá)與骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞相比特異于胎盤(pán)干細(xì)胞或臍帶干細(xì)胞。具體地，貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞可以基于一個(gè)或多個(gè)基因的表達(dá)與間充質(zhì)干細(xì)胞相區(qū)分，該基因在胎盤(pán)干細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于在間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)(至少高2倍)，其中該一個(gè)或多個(gè)基因是ACTG2、ADARBU AMIG02、ATRS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP,MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、 VTN、ZC3H12A或以上任意組合，其中當(dāng)所述干細(xì)胞在相同條件下生長(zhǎng)時(shí)，這些基因在胎盤(pán)干細(xì)胞或臍帶干細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于在骨髓來(lái)源的干細(xì)胞中的表達(dá)。在具體實(shí)施方案中，該胎盤(pán)干細(xì)胞特異性或臍帶干細(xì)胞特異性基因是CD200。這些基因的表達(dá)水平可用于證實(shí)胎盤(pán)細(xì)胞群的身份，以鑒定細(xì)胞群包括至少多種胎盤(pán)干細(xì)胞等。身份得到確認(rèn)的胎盤(pán)干細(xì)胞群可以是克隆的，如從單個(gè)胎盤(pán)干細(xì)胞擴(kuò)增形成的胎盤(pán)干細(xì)胞群，或者混合的干細(xì)胞群，如包括從多個(gè)胎盤(pán)干細(xì)胞擴(kuò)增的單種胎盤(pán)干細(xì)胞的細(xì)胞群，或包括胎盤(pán)干細(xì)胞和至少一種其他類型的細(xì)胞的細(xì)胞群。這些基因的表達(dá)水平可用來(lái)選擇貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞群。例如，如果細(xì)胞群樣品中一個(gè)或多個(gè)這些基因的表達(dá)顯著高于同等的間質(zhì)干細(xì)胞群，則選擇這種細(xì)胞群如克隆擴(kuò)增細(xì)胞的細(xì)胞群。這種選擇可以是針對(duì)多種胎盤(pán)干細(xì)胞群、多種身份未知的細(xì)胞群等細(xì)胞群。與所述一個(gè)或多個(gè)基因在間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)照中的表達(dá)水平相比，貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞可基于一個(gè)或多個(gè)這種基因的表達(dá)水平進(jìn)行選擇。在一實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)基因在包括相當(dāng)量間充質(zhì)干細(xì)胞的樣品中的表達(dá)水平用作為對(duì)照。在另一實(shí)施方案中，在一定條件下檢測(cè)的胎盤(pán)干細(xì)胞的對(duì)照是代表所述一個(gè)或多個(gè)基因在所述條件下在間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)水平的數(shù)值。
上述貼壁或非貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞的分離群和胎盤(pán)干細(xì)胞群一般可包括大約、至少或不超過(guò)1 X IO5,5 X 1O5U X 1O6,5 X 1O6U X 1O7,5 X 1O7U X 1O8,5 X 1O8U X 10\5 X 1O9,
1X 101C1、5 X 101Q、1 X 1O11個(gè)或更多個(gè)胎盤(pán)干細(xì)胞。5.1.3.生長(zhǎng)培養(yǎng)本文所述的胎盤(pán)干細(xì)胞的生長(zhǎng)，對(duì)于任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞，在某種程度上取決于所選擇用于生長(zhǎng)的特定培養(yǎng)基。在最佳條件下，胎盤(pán)干細(xì)胞的數(shù)量通常在3-5天增加一倍。在培養(yǎng)中，本發(fā)明提供的胎盤(pán)干細(xì)胞在培養(yǎng)中貼壁到底物上，例如，組織培養(yǎng)容器的表面(例如，組織培養(yǎng)皿塑料，纖維涂層塑料等)，并形成單層。包括本發(fā)明所提供的胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的貼壁胎盤(pán)細(xì)胞的群在適當(dāng)條件下培養(yǎng)時(shí)形成擬胚體，也就是在貼壁干細(xì)胞層頂部生長(zhǎng)出三維細(xì)胞集群。擬胚體內(nèi)的細(xì)胞表達(dá)與早期干細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)記，例如0CT-4、Nanog、SSEA3和SSEA4。擬胚體內(nèi)的細(xì)胞通常不貼壁到培養(yǎng)底物上，如本發(fā)明所述的胎盤(pán)干細(xì)胞，但在培養(yǎng)中仍然會(huì)附著到貼壁細(xì)胞上。擬胚體細(xì)胞的生存依賴于貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞，因?yàn)樵跊](méi)有貼壁干細(xì)胞的情況下就不會(huì)形成擬胚體。因此，貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞有利于在包括該貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中生長(zhǎng)出一個(gè)或多個(gè)擬胚體。不受理論約束，認(rèn)為擬胚體的細(xì)胞在貼壁胎盤(pán)干細(xì)胞上生長(zhǎng)如同胚胎干細(xì)胞在飼養(yǎng)層細(xì)胞上生長(zhǎng)一樣。間充質(zhì)干細(xì)胞，如骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)中不會(huì)形成擬胚體。5.2.得到胎盤(pán)干細(xì)胞的方法5.2.1.干細(xì)胞收集組合物本發(fā)明還提供了收集和分離胎盤(pán)干細(xì)胞的方法。一般地，用生理學(xué)上可接受的溶液，如干細(xì)胞收集組合物從哺乳動(dòng)物胎盤(pán)獲得干細(xì)胞。干細(xì)胞收集組合物在2005年12月29日提交的、題為"收集胎盤(pán)干細(xì)胞和保存器官的改進(jìn)培養(yǎng)基"的相關(guān)美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/754，969中有詳細(xì)描述。所述干細(xì)胞收集組合物可包括適于收集和/或培養(yǎng)干細(xì)胞的任何生理學(xué)上可接受的溶液，例如鹽溶液(例如磷酸鹽緩沖液、Kreb’ s溶液、改良的Kreb’ s溶液、Eagle’s溶液、0.9%氯化鈉等)、培養(yǎng)基(如DMEM、H.DMEM等)等等。所述干細(xì)胞收集組合物可包括旨在保存胎盤(pán)干細(xì)胞，也就是從收集時(shí)間到培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)防止胎盤(pán)干細(xì)胞死亡或延遲胎盤(pán)干細(xì)胞死亡、減少細(xì)胞群中胎盤(pán)干細(xì)胞的死亡數(shù)量等的一種或多種成分。這些成分可以是例如細(xì)胞凋亡抑制劑(如Caspase抑制劑或JNK激酶抑制劑)、血管擴(kuò)張劑(例如硫酸鎂、抗高血壓藥物、心房利鈉肽(ANP)、促腎上腺皮質(zhì)激素、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、硝普鈉、肼屈嗪、三磷酸腺苷、腺苷、吲哚美辛或硫酸鎂、磷酸二酯酶抑制劑等)、壞死抑制劑(如2-(1Η- Π引哚-3-基)-3_戍基氨基馬來(lái)酰亞胺、批咯燒二硫代氨基甲酸鹽、或氯硝西泮)、TNF-a抑制劑和/或攜氧全氟化碳(例如過(guò)氟辛基溴化物、過(guò)氟辛基溴化物等)。所述干細(xì)胞收集組合物可以包括一種或多種組織降解酶，如金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、RNA酶或DNA酶等。這些酶包括但不限于膠原酶(如膠原酶Ι、Π、ΙΙΙ或IV，溶組織梭狀芽孢桿菌的膠原酶等)、分散酶、嗜熱菌蛋白酶、彈性蛋白酶、胰蛋白酶、LIBERASE、透明質(zhì)酸酶等。所述干細(xì)胞收集組合物可以包括殺菌或抑菌有效量的抗生素。在某些非限制性實(shí)施方案中，該抗生素是大環(huán)內(nèi)酯類抗生素(如妥布霉素)、頭孢菌素(如頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢呋辛、頭孢丙烯、頭孢克羅、頭孢克肟或頭孢羥氨芐)、克拉霉素、紅霉素、青霉素(如青霉素V)或喹諾酮類藥物(如氧氟沙星、環(huán)丙沙星或氟哌酸)、四環(huán)素、鏈霉素等。在特定的實(shí)施方案中，所述抗生素是對(duì)革蘭氏(+)和/或革蘭氏(-)細(xì)菌例如綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌等有活性的。所述干細(xì)胞收集組合物也可以包括一種或多種如下化合物:腺苷(約ImM至約50mM) ；D-葡萄糖(約20mM至約IOOmM);鎂離子(約ImM至約50mM);分子量大于20，000道爾頓的大分子，在一實(shí)施方案中，以足以維持內(nèi)皮完整性和細(xì)胞生存的量存在(例如，合成或天然產(chǎn)生的膠體，多糖如右旋糖酐或聚乙二醇，大約25g/L至約100g/L或約40g/L至60g/L);抗氧化劑(如叔丁對(duì)甲氧酚、丁基化羥基甲苯、谷胱甘肽、維生素C或維生素E，大約25μΜ至約ΙΟΟμΜ);還原劑(例如N-乙酰半胱氨酸，約0.1mM至約5mM);防止鈣進(jìn)入細(xì)胞的試劑(如維拉帕米，約2 μ M至25 μ M);硝酸甘油(例如約0.05g/L至約0.2g/L);抗凝血?jiǎng)?，在一?shí)施方案中，以足以幫助防止殘余血液凝固的量存在(如肝素或水蛭素，以約1000單位/L至約100，000單位/L的濃度存在)；或含有阿米洛利的化合物(例如阿米洛利、乙基異丙基阿米洛利、環(huán)己烷阿米洛利、二甲基阿米洛利或異丁基阿米洛利，約Ι.ΟμΜ至約5 μ Μ)。5.2.2.胎盤(pán)收集和處理一般來(lái)說(shuō)，在出生排出后立即回收人胎盤(pán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在知會(huì)同意并獲取患者的完整病史且將該病史與所述胎盤(pán)關(guān)聯(lián)后，從患者回收胎盤(pán)。優(yōu)選地，在分娩后繼續(xù)記錄病史。這種病史可用于協(xié)調(diào)胎盤(pán)或從其收集的干細(xì)胞的后續(xù)使用。例如，根據(jù)病史，人胎盤(pán)干細(xì)胞可用作與該胎盤(pán)相關(guān)聯(lián)的嬰兒，或該嬰兒的父母、兄弟姐妹或其他親屬的個(gè)性化藥物。回收胎盤(pán)干細(xì)胞之前，除去臍帶血和胎盤(pán)血。在某些實(shí)施方案中，在分娩后，回收胎盤(pán)中的臍血?？蓪?duì)胎盤(pán)進(jìn)行常 規(guī)的臍帶血回收處理。通常情況下使用針或套管，在重力的幫助下從胎盤(pán)抽血(見(jiàn)例如Anderson的美國(guó)專利號(hào)5，372，581 ；Hessel等人的美國(guó)專利號(hào)5，415，665)。該針或套管通常置于臍靜脈處，并輕輕按摩胎盤(pán)，以幫助從胎盤(pán)排出臍血。這種胳血回收可進(jìn)行商業(yè)操作，如 LifeBank USA, Cedar Knolls, N.J.，ViaCord, Cord BloodRegistry and Cryocell。優(yōu)選地,胎盤(pán)通過(guò)重力排干,而不需要其他操作，以盡量減少臍血回收期間對(duì)組織的損傷。通常情況下，胎盤(pán)會(huì)從分娩室或出生室運(yùn)送到另一位置，例如實(shí)驗(yàn)室以通過(guò)例如灌洗或組織分離回收臍血和收集干細(xì)胞。胎盤(pán)最好使用無(wú)菌熱絕緣運(yùn)輸設(shè)備運(yùn)輸(維持胎盤(pán)溫度在20-28°C之間)，例如夾緊胎盤(pán)臍帶近端，將胎盤(pán)置于無(wú)菌封口塑料袋中，然后放在絕緣容器中。在另一實(shí)施方案中，胎盤(pán)用臍帶血收集試劑盒運(yùn)輸，該臍帶血收集試劑盒基本如2005年9月19號(hào)提交的未決美國(guó)專利申請(qǐng)11/230，760中所述。優(yōu)選地，胎盤(pán)在分娩后四至二十四小時(shí)送到實(shí)驗(yàn)室。在某些實(shí)施方案中，在回收臍帶血之前夾緊臍帶近端，優(yōu)選夾緊插入到胎盤(pán)盤(pán)的4-5cm(厘米)處。在其他一些實(shí)施方案中，在回收臍血后進(jìn)一步處理胎盤(pán)前夾緊臍帶近端。在干細(xì)胞收集之前，可以將所述胎盤(pán)保存在無(wú)菌條件和室溫或5至25°C (攝氏)下。在灌洗胎盤(pán)以除去任何剩余臍帶血前，胎盤(pán)可被保存超過(guò)48小時(shí)，優(yōu)選四至二十四小時(shí)。該胎盤(pán)優(yōu)選5至25°C (攝氏)保存在抗凝血?jiǎng)┤芤褐小：线m的抗凝血?jiǎng)┤芤菏潜绢I(lǐng)域公知的。例如，可以使用肝素或華法林鈉溶液。在優(yōu)選實(shí)施方案中，該抗凝血?jiǎng)┤芤喊嗡氐娜芤?如在1:1000溶液中l(wèi)%w/w)。在收集胎盤(pán)干細(xì)胞之前，抽干血的胎盤(pán)優(yōu)選保存不超過(guò)36小時(shí)。哺乳動(dòng)物的胎盤(pán)或其部分，一旦如上所述被常規(guī)地收集和制備，可以用任何已知的方式處理，例如可以灌洗或裂解，例如用一個(gè)或多個(gè)組織裂解酶消化，以獲取干細(xì)胞。5.2.3.胎盤(pán)組織的物理裂解和酶消化在一實(shí)施方案中，干細(xì)胞從哺乳動(dòng)物胎盤(pán)通過(guò)物理裂解，如酶消化所述器官收集。例如，該胎盤(pán)或其部分可以被如碾、剪、絞、切、剁、浸等，同時(shí)與本發(fā)明所提供的干細(xì)胞收集組合物接觸，并隨后用一種或多種酶消化該組織。該胎盤(pán)或其部分也可被物理裂解，并用一種或多種酶消化，然后將得到的材料浸泡在或混合到干細(xì)胞收集組合物中。任何物理裂解方法都可以使用，只要該裂解方法使多種、優(yōu)選大多數(shù)、更優(yōu)選所述器官中的至少60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的細(xì)胞保持存活，這可通過(guò)例如臺(tái)盼藍(lán)不相容法測(cè)定。在物理裂解和/或酶消化和干細(xì)胞回收之前，可以將所述胎盤(pán)解剖成部分。例如，胎盤(pán)干細(xì)胞可從羊膜、絨毛、臍帶、胎盤(pán)小葉、或其任何組合中得到。優(yōu)選地，胎盤(pán)干細(xì)胞從包括羊膜和絨毛膜的胎盤(pán)組織獲得。通常情況下，胎盤(pán)干細(xì)胞可以通過(guò)小塊胎盤(pán)組織裂解得到，例如，約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或約1000立方毫米體積的胎盤(pán)組織塊。優(yōu)選的干細(xì)胞收集組合物包含一種或多種組織裂解酶。酶消化優(yōu)選采用酶的組合，如基質(zhì)金屬蛋白酶和中性蛋白酶的組合，例如膠原酶和分散酶的組合。在一實(shí)施方案中，胎盤(pán)組織的酶消化使用基質(zhì)金屬蛋白酶、中性蛋白酶和消化透明質(zhì)酸的粘液溶解酶的組合，如膠原·酶、分散酶和透明質(zhì)酸酶的組合，或LIBERASE(Boehringer MannheimCorp.，Indianapolis, Ind.)和透明質(zhì)酸酶的組合?？梢杂脕?lái)裂解胎盤(pán)組織的其他酶包括木瓜蛋白酶、去氧核糖核酸酶、絲氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶、或彈性蛋白酶。絲氨酸蛋白酶可被血清中的α 2微球蛋白抑制，因此用于消化的培養(yǎng)基通常不含血清。EDTA和DNA酶常用于酶消化過(guò)程中提高細(xì)胞回收的效率。消化產(chǎn)物優(yōu)選被稀釋，以避免干細(xì)胞陷入粘稠的消化物中?？梢允褂媒M織消化酶的任意組合。組織消化酶的典型濃度包括例如50_200U/mL的膠原酶I和膠原酶IV、l-10U/mL的分散酶和10_100U/mL的彈性蛋白酶。可組合使用蛋白酶，也就是說(shuō)，可以在相同消化反應(yīng)中使用兩種或兩種以上的蛋白酶，或順序使用，以釋出胎盤(pán)干細(xì)胞。例如，在一實(shí)施方案中，胎盤(pán)或其一部分首先用2mg/mL適量的膠原酶I消化30分鐘，接著用0.25%的胰蛋白酶37°C下消化10分鐘。優(yōu)選地在使用其它酶后再使用絲氨酸蛋白酶。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)向含有干細(xì)胞的干細(xì)胞收集組合物中，或者在用干細(xì)胞收集組合物分離干細(xì)胞前向解離和/或消化組織的溶液中添加螯合劑(例如，乙二醇雙(2-氨基乙醚)-N，N, N’，N’ -四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA))，以進(jìn)一步解離組織?？梢岳斫?，當(dāng)整個(gè)的胎盤(pán)或胎盤(pán)的一部分同時(shí)含有胎兒和母體細(xì)胞(例如，胎盤(pán)的一部分包含絨毛膜或絨毛小葉)時(shí)，收集的胎盤(pán)干細(xì)胞將同時(shí)包含來(lái)源于胎兒和母體的胎盤(pán)干細(xì)胞的混合物。當(dāng)胎盤(pán)的部分不含有或只含有可忽略量的母體細(xì)胞時(shí)(例如，羊膜)，收集的胎盤(pán)干細(xì)胞將幾乎只含有胎兒的胚胎干細(xì)胞。
5.2.4.胎盤(pán)灌洗胎盤(pán)干細(xì)胞也可通過(guò)灌洗哺乳動(dòng)物胎盤(pán)得到。灌洗哺乳動(dòng)物胎盤(pán)以獲得干細(xì)胞的方法在例如Hariri的美國(guó)申請(qǐng)
發(fā)明者詹姆士·W·愛(ài)丁格, 羅伯特·J·哈黎里, 王佳倫, 葉倩, 克利斯登·S·拉巴左, 馬里安·佩雷拉, 薩沙·道恩·阿布拉門(mén)遜 申請(qǐng)人:人類起源公司