專利名稱：薩能羊早期胚胎性別鑒定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，屬于胚胎工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
人們對哺乳動物性別的決定及控制進(jìn)行了長期的研究和探索，并由理論逐步走向了實踐應(yīng)用。性別鑒定對于哺乳動物發(fā)育生物學(xué)，生殖生物學(xué)，進(jìn)化生物學(xué)，遺傳學(xué)和瀕危物種的保存是相當(dāng)重要的。目前研究顯示哺乳動物性別控制主要體現(xiàn)在對牛的性別鑒定上，在羊上報道的相對較少，而且是以體內(nèi)生產(chǎn)性控胚胎為主，體內(nèi)生產(chǎn)性控胚胎主要是通過應(yīng)用流式細(xì)胞儀對精子進(jìn)行分離和分子生物學(xué)方法-PCR擴(kuò)增法來生產(chǎn)性控胚胎。從目前X、Y精子分離技術(shù)的發(fā)展來看，雖然使用流式細(xì)胞分類儀已成功分離了 X、Y精子，但其成本高，分離效率低，一時還很難在生產(chǎn)中應(yīng)用推廣。但PCR法還存在著準(zhǔn)確性不高、方法不夠成熟，取樣過程造成胚胎損傷，使妊娠率和產(chǎn)羔率下降等問題，因此進(jìn)行早期性別鑒定就顯得非常重要。采用分子生物學(xué)方法對薩能羊進(jìn)行性別鑒定，對其他哺乳動物的胚胎性別鑒定提供可靠的依據(jù)，對人類和動物尤其是家畜的育種和生產(chǎn)有著深遠(yuǎn)的意義。國內(nèi)外進(jìn)行胚胎性別鑒定的研究已經(jīng)有很多報道，運(yùn)用的分子生物學(xué)方法有很多種，如常規(guī)PCR方法、巢式PCR方法、復(fù)合PCR方法等，但運(yùn)用HOT-Mart PCR方法還鮮有報道。發(fā)明人將本發(fā)明的方法在數(shù)據(jù)庫進(jìn)行搜尋比較，未發(fā)現(xiàn)有相同的方法進(jìn)行早期胚胎性別鑒定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種鑒定結(jié)果好，靈敏度和準(zhǔn)確性高的薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法。本發(fā)明用HOT-Mart PCR方法對薩能奶山羊早期胚胎性別進(jìn)行鑒定，具體步驟如下a.用手術(shù)法對供體羊進(jìn)行沖胚，獲取胚胎；b.取6 7d的A、B級桑椹胚和早期囊胚，進(jìn)行冷凍或直接在實驗室對其進(jìn)行顯微取樣鑒定；c.用吸取法對b.步驟得到的桑椹胚和早期囊胚進(jìn)行顯微取樣，對胚胎取不同的細(xì)胞數(shù)，將取樣細(xì)胞放入PCR反應(yīng)管中，準(zhǔn)備進(jìn)行DNA的提取及鑒定；取樣后的胚胎進(jìn)行發(fā)育潛能培養(yǎng)實驗；d. PCR引物設(shè)計及模板DNA的制備根據(jù)GeneBank收錄的綿羊的基因序列，依據(jù)綿羊Y染色體特異重復(fù)序列(Z3(^65) 設(shè)計兩對引物，同時根據(jù)綿羊的編碼肌形成蛋白(myogenin)基因(DQ453M8)設(shè)計兩套對照引物，其基因序列和引物序列如下綿羊Y染色體特異重復(fù)序列(Z3(^65)
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綿羊SRY基因和myogenin基因的引物序列
權(quán)利要求
1. 一種薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，其特征在于該方法用HOT-Mart PCR方法對薩能羊早期胚胎性別進(jìn)行鑒定，具體步驟如下a.用手術(shù)法對供體羊進(jìn)行沖胚，獲取胚胎；b.取6 7d的A、B級桑椹胚和早期囊胚，進(jìn)行冷凍或直接在實驗室對其進(jìn)行顯微取樣鑒定；c.用吸取法對b.步驟得到的桑椹胚和早期囊胚進(jìn)行顯微取樣，對胚胎取不同的細(xì)胞數(shù)，將取樣細(xì)胞放入PCR反應(yīng)管中，準(zhǔn)備進(jìn)行DNA的提取及鑒定；取樣后的胚胎進(jìn)行發(fā)育潛能培養(yǎng)實驗；d.PCR引物設(shè)計及模板DNA的制備根據(jù)GeneBank收錄的綿羊的基因序列，依據(jù)綿羊Y染色體特異重復(fù)序列(Z3(^65)設(shè)計兩對引物，同時根據(jù)綿羊的編碼肌形成蛋白(myogenin)基因(DQ453M8)設(shè)計兩套對照引物，其引物序列為
全文摘要
本發(fā)明提供一種薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，屬于胚胎工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的薩能羊早期胚胎性別鑒定的方法，用HOT-Start PCR方法對薩能奶山羊早期胚胎性別進(jìn)行鑒定，具體步驟包括胚胎的獲取、胚胎的質(zhì)量鑒定、胚胎的顯微取樣、DNA提取、設(shè)計引物，利用PCR方法擴(kuò)增，及電泳檢測鑒定。本發(fā)明的方法具有實用性強(qiáng)、操作方便、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，且也能為其他家畜提供見解。
文檔編號C12Q1/68GK102304582SQ20111025667
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月1日
發(fā)明者蘇雷, 賈銀海 申請人:云南中科胚胎工程生物技術(shù)有限公司