專利名稱：一株硝基還原假單胞菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于環(huán)境微生物領(lǐng)域，具體涉及一株硝基還原假單胞菌及其在生物 降解喹啉或其衍生物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
喹啉(又稱氮雜萘)是含氮雜環(huán)化合物的典型代表，又是大量復(fù)雜含氮雜 環(huán)化合物的基本結(jié)構(gòu)單元。喹啉及其衍生物廣泛存在于天然產(chǎn)物如煤焦油、礦 物油、雜酚油、化石燃料和植物堿中，同時還是焦化廢水、橡膠廢水、制藥廢 水等多種工業(yè)廢水中重要的難降解有機污染成分。由于這類化合物水溶性較強， 已成為土壤和地下水中常見的污染物，在固體垃圾掩埋場、煉鋼廠和化石燃料 加工廠附近污染尤其嚴重。大量研究證明，喹啉及其衍生物對動物和人體具有 毒性、致癌和致突變等危害性，已給生態(tài)環(huán)境和人類健康造成了潛在威脅。如 何降低和控制環(huán)境中含氮雜環(huán)化合物的含量正成為社會關(guān)注和科學(xué)研究的熱 點。由于自然界中喹啉類含氮雜環(huán)化合物光解速度緩慢，很多研究者將目光投 向生物降解，并進行了大量研究，利用微生物降解是有效消除喹啉污染的新途 徑。
自然界中存在許多特殊的具有降解有機污染物的微生物資源，研究這些微 生物的降解功能對效降低環(huán)境中有毒有害物質(zhì)具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用價
值。1976年Grant等發(fā)現(xiàn)莫拉氏菌(Moraxe〃a sp.)可以降解喹啉(Grant DJW等， M'cra&os, 1976, 15(61-62): 177-89)，隨后研究人員相繼發(fā)現(xiàn)了許多其他可以降 解喹啉的微生物，如皮氏伯克霍爾德氏菌(^^狄o/^n'a^c^m'/)、食酸叢毛單胞 菌(C"o附a附owas "c/cfovora"s)、辜丸銅叢毛單胞菌(Go附a附o""51 ferfostero"0、發(fā)酵字L木干菌(Z^cto6ac/〃MS々rme" M附)、纟錄膿桿菌(尸s^wcfowowcw oren/gi"osfl)、月兌硫菌 (i /2Cwfococc附sp.)、熒光j叚單胞菌(尸se"(iowo"a5^/7womscera1)、惡臭假單胞菌 (/^Mt/tW7o"os/^/(ia)、 紅球菌(i /zocfococcws sp.)、 芽抱桿菌(5ac〃/w sp.)等細
菌和白腐菌等真菌。這些微生物多數(shù)是通過富集培養(yǎng)，然后以喹啉為唯一碳氮 源分離而得。
目前國內(nèi)外有許多應(yīng)用微生物活體降解喹啉的報道，但可以降解喹啉的最 大濃度普遍偏低。如崔明超報道了一株睪丸酮叢毛單胞菌(Co附"mow^ festo^eram')，可以完全降解250mg/L喹啉濃度的廢水(崔明超等，環(huán)境科學(xué)學(xué) 報，2004,24(1): 171-173)。朱順妮分離到的一株紅球菌(i^o出coccM sp.) QL2 的最佳喹啉降解濃度為150mg/L (朱順妮等，環(huán)境科學(xué)，2008， 29(2): 488-493)。 少數(shù)革蘭氏陽性菌對喹啉降解能力較強，如發(fā)酵乳酸桿菌a"ctok^7/w sp.) Q5可以在72h內(nèi)降解掉72.6%的初始濃度500mg/L的喹啉， 一株芽孢桿菌 (Bad〃M sp.) Q5對800mg/L喹啉降解率達到60%,極限濃度為1000mg/L (房 苗苗等，石油學(xué)報，2007， 23(5): 111-116)，但降解率不足20%。目前報道的假單 胞菌降解喹啉能力一般較低，洪新分離到的一株假單胞菌(戶M^fomo"wsp.) 最大喹啉降解濃度僅為140mg/L(洪新等，遼寧石油化工大學(xué)學(xué)報，2005,25(2): 32-35)，超過該濃度菌體生長受到抑制。柏耀輝報道過一株可以同時去除吡啶 和喹啉的假單胞菌(i^e"domo"as sp.) BC001 (柏耀輝等，北京大學(xué)學(xué)報(自 然科學(xué)版)，2007,2(3): 1-7)，但該菌對吡啶的去除屬于生物吸附，即不能利用 吡啶為碳氮源生長而進行代謝轉(zhuǎn)化，對喹啉去除包括生物吸附和生物降解，可 以降解初始濃度500mg/L喹啉的廢水。在實際污染現(xiàn)場，喹啉濃度或者較高， 或者與其他污染源同時存在，加大了生物技術(shù)處理的難度。因此篩選能降解高 濃度喹啉的微生物菌種，對豐富微生物資源，改善生態(tài)環(huán)境具有深遠的現(xiàn)實意
4義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一株硝基還原假單胞菌及其應(yīng)用。
本發(fā)明所提供的硝基還原假單胞菌為硝基還原假單胞菌(i^e"ctomo"w "/加涵c卿)CQ1 CGMCCNo.3159。
所述硝基還原假單胞菌(尸化t^o/woww "/^w^/wcera) CQ1，已于2009年7 月2日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為 CGMCC，保藏號為CGMCCNo.3159。 、
本發(fā)明的硝基還原假單胞菌(i^ewcfo附o"a; ""ra^a^cera) CQ1來源于北京 燕山石化公司污水處理系統(tǒng)中的氧化塘污水，經(jīng)過富集、分離和純化得到，是 廢水處理系統(tǒng)中的優(yōu)勢菌株，能處理含喹啉或其衍生物濃度較高的廢水，有較 好的應(yīng)用前景。
本發(fā)明所述硝基還原假單胞菌(尸sew必附o"as"/^w^/wce附)CQ1的特征 1)、形態(tài)學(xué)特征
該菌在無機鹽固體培養(yǎng)基中菌落呈白色暈狀，邊緣參差不齊，在無機鹽液 體培養(yǎng)基中為黃色懸濁液。革蘭氏染色為陰性桿菌，極生鞭毛，多數(shù)菌株鞭毛 在兩根以上可運動，菌體桿狀，大小為0.6~1 ^imxl.5 2(im (見圖1)。
所述無機鹽液體培養(yǎng)基的配制為Na2HP04 6.0g 、 KH2P04 3.0g、 NaCl 0.5g， 去離子水定容至1L后滅菌；配制1M MgS(V7H20和1M CaCl2兩種溶液，滅 菌；在無菌條件下，取lMMgSO(7H20和1MCaCl2兩種溶液加入上述滅菌的 鹽溶液中，使其終濃度為0.001mol/L。
所述無機鹽固體培養(yǎng)基的配制為Na2HP04 6.0g 、 KH2P04 3.0g、 NaCl 0.5g， 瓊脂粉12g，去離子水定容至1L后滅菌；配制1M MgS04'7H20和1M CaCl2兩種溶液，滅菌；在無菌條件下，取1MMgSCV7H20和1MCaCl2兩種溶液加 入上述滅菌的鹽溶液中，使其終濃度為0.001mol/L，然后倒平板。
2) 、 CQ1菌株的16S rDNA鑒定
PCR擴增硝基還原假單胞菌(尸ww(iomo"ay m'^w^/wcmy) CQ1菌株16S rDNA約1.5 kb，測序結(jié)果具有序列表中SEQ ID No.l的核苷酸序列，將CQ1 菌的16S rDNA片段在GenBank中進行同源性比對，該菌與i^e^owo"o m rom/wcem (EF107515)同源性最高，達到99%。使用MEGA4軟件，利用鄰 位互換算法(CNI)搜索最小進化樹(ME樹)，由K2P模型產(chǎn)生ME樹(見圖2)。
3) 、生理生化特征
CQ1菌為專性好氧菌，呼吸型代謝；有可擴散的熒光，氧化酶陽性，不水 解明膠和淀粉，不產(chǎn)硫化氫，精氨酸雙水解反應(yīng)陽性，可以將硝酸鹽還原成亞 硝酸鹽，尿酶反應(yīng)、賴氨酸脫羧酶反應(yīng)陽性；能夠利用葡萄糖、蔗糖、阿拉伯 糖、已二酸、檸檬酸、羥基-L-脯氨酸等碳源，不能利用丙二酸、甲酸芐酯、L-絲氨酸、犬尿胺酸、馬尿酸、乙酰胺和氨基苯，與模式菌P ""rare血cera DSM 14399相比，本發(fā)明的菌株還能利用甘露醇、山梨醇、肌醇、鼠李糖；4"C以下 和4rC以上不生長，最適生長溫度3(TC，最適pH為7.5。
表lCQ1生理生化試驗結(jié)果
生理生化試驗結(jié)果生理生化試驗結(jié)果
可擴散的熒光+阿拉伯糖+
氧化酶+山梨醇+
淀粉酶-鼠李糖+
精氨酸雙水解酶+肌醇+
H2S產(chǎn)生-乙醇酸—
明膠水解-丙二酸—
脲酶+己二酸+
P-半乳糖苷酶-檸檬酸+
賴氨酸脫羧酶+甲酸芐酯—
鳥氨酶脫羧+L-絲氨酸—
反硝化反應(yīng)+羥基-L-脯氨酸+蔗糖產(chǎn)果聚糖 - 犬尿胺酸 _
碳源利用
葡萄糖
蔗糖 甘露醇
4) 抗生素抗性特征
本發(fā)明菌株CQ1對硫酸卡那霉素、四環(huán)素和慶大霉素敏感。
5) 質(zhì)粒特征
該菌不攜帶質(zhì)粒，可以用作構(gòu)建具有多種降解能力的基因工程菌。 參照《Bergey，s Manual of Deteriminative Bacteriology》第9版和《常見細菌 系統(tǒng)鑒定手冊》假單胞菌屬特征，結(jié)合其形態(tài)特征和16S rDNA基因序列相似性， 將CQ1菌鑒定為石肖基還原1^單胞菌i^ewcfomo"as m'/rore^/ce似。
本發(fā)明所述硝基還原假單胞菌在好氧條件下可以利用喹啉或其衍生物作為 唯一碳氮源。該菌可在LB培養(yǎng)基中生長，也可在含有喹啉濃度為100-700mg/L 的無機鹽培養(yǎng)基中培養(yǎng)，生長溫度為28-32。C， pH7-9，最適生長溫度為3(TC， 最適pH為7.5。
上述硝基還原假單胞菌CQ1的應(yīng)用是指該菌在生物降解喹啉或其衍生物 中的應(yīng)用。
所述生物降解喹啉或其衍生物為降解污水中的喹啉或其衍生物，具體方法 為將硝基還原假單胞菌(尸化Wowowasm^wec/Mcem) CQl CGMCC No.3159接 種于含有喹啉或其衍生物的污水中，在28-32。C條件下培養(yǎng)36-72h。 所述污水中喹啉或其衍生物濃度不超過700mg/L。
所述硝基還原假單胞菌(i^eMc/owo"osmYrwe甴ce"s) CQl CGMCCNo.3159 接種量為lxl07-lxl08cfu/mL。
本發(fā)明的有益效果本發(fā)明菌株硝基還原假單胞菌(AewAmo"w
7
酸胺苯
尿?；?br> 馬乙JL亂
+ + +m'frwe^cera) CQl CGMCC No.3159可降解喹啉或其衍生物的濃度達到 700mg/L，處理72h后，降解率達到100%，能較好滿足工業(yè)生產(chǎn)中喹啉處理濃 度高，時間短等要求。此夕卜，本發(fā)明菌株CQ1對硫酸卡那霉素、四環(huán)素和慶大 霉素敏感，在實際使用中不會向土著菌傳遞這些耐藥因子，保證使用的安全性。 該菌不攜帶質(zhì)粒，可以用作構(gòu)建具有多種降解能力的基因工程菌。在好氧條件 下可以利用喹啉為唯一碳氮源。本發(fā)明豐富了微生物資源，為生物降解高濃度 喹啉或其衍生物提供了優(yōu)良菌種，對改善生態(tài)環(huán)境具有深遠的現(xiàn)實意義。


圖1為CQ1菌電鏡掃描照片；
圖2為CQ1菌株及其近緣屬種的聚類分析樹狀圖3為CQ1菌株在多種初始喹啉濃度下的降解曲線；
圖4為CQ1菌株在700mg/L喹啉濃度的無機鹽培養(yǎng)液中生長和降解情況。
具體實施例方式
本發(fā)明實施例中培養(yǎng)基配制均采用常規(guī)方法配制。實施例中涉及的分子生 物學(xué)操作如未注明具體試驗條件和方法，均參照SambrookJ等主編，科學(xué)出版
社，2002，分子克隆實驗指南(第三版)。
以下實施例中使用的培養(yǎng)基的配制
1L富集培養(yǎng)基的配制胰蛋白胨5.0g，葡萄糖1.5g，酵母粉2.5g， NaCl 5.0 g，去離子水定容至1L， HC1或NaOH調(diào)節(jié)pH至7.2。
所述無機鹽液體培養(yǎng)基的配制為Na2HP04 6.0g 、 KH2P04 3.0g、 NaCl 0.5g， 去離子水定容至1L后滅菌；配制1M MgS04'7H20和1M CaCb兩種溶液，滅 菌；在無菌條件下，取1MMgS(V7H20和1MCaCl2兩種溶液加入上述滅菌的 鹽溶液中，使其終濃度為0.001mol/L。所述無機鹽固體培養(yǎng)基的配制為Na2HP04 6.0g 、 KH2P04 3.0g、 NaCl 0.5g， 瓊脂粉12g,去離子水定容至1L后滅菌；配制1M MgSOWH20和1M CaCl2 兩種溶液，滅菌；在無菌條件下，取1MMgSCV7H20和1MCaCl2兩種溶液加 入上述滅菌的鹽溶液中，使其終濃度為0.001mol/L，然后倒平板。
1L常用LB液體培養(yǎng)基的配制:在950 ml去離子水中加入胰化蛋白胨10g、 酵母提取物5g、 NaC110g，搖動容器直至溶質(zhì)溶解。用NaOH或HCl調(diào)pH至 7.2，用去離子水定容至1L，高壓滅菌20min。
1L常用固體LB培養(yǎng)基的配制在上述常用液體LB培養(yǎng)基中再加入12g 瓊脂，其他同常用液體LB培養(yǎng)基的配制，高壓滅菌后倒平板。
實施例l:硝基還原假單胞菌(尸5e油附o腦"z.旨e血固s) CQ1的分離及純化 將取自北京燕山石化公司廢水處理系統(tǒng)中的氧化塘廢水lOmL，接種到含 200mg/L喹啉的lOOmL富集培養(yǎng)基搖瓶中，于30°C 、 160 rpm搖床震蕩培養(yǎng)5 d。 以此搖瓶中的培養(yǎng)菌液作為菌種，轉(zhuǎn)接至含同樣濃度喹啉的新鮮富集培養(yǎng)液中， 接種量為5mL，再次馴化培養(yǎng)5d，共轉(zhuǎn)接3次。將最后一次培養(yǎng)的菌液5mL 接種到lOOmL含喹啉500mg/L的無機鹽液體培養(yǎng)基中，在同樣條件下培養(yǎng)， 每5 d轉(zhuǎn)接1次，轉(zhuǎn)接3次。將最后一次培養(yǎng)菌液用富集培養(yǎng)液梯度稀釋成10x 和100x菌液，分別涂布在以喹啉為唯一碳、氮源的500mg/L喹啉的無機鹽固體 培養(yǎng)基上，3(TC在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d。挑取長勢較好的單菌落，接入LB固體培 養(yǎng)基上。在3(TC下培養(yǎng)72h，將LB固體培養(yǎng)基上的單菌落接種于含500mg/L 喹啉的無機鹽固體培養(yǎng)基上，反復(fù)劃線純化，以不添加喹啉的作對照。挑取能 夠在無機鹽固體培養(yǎng)基上健康生長的細菌菌落，其中有一菌落表現(xiàn)較好，定名 為CQ1菌株。實施例2:硝基還原假單胞菌(i^ewdomoww w^wedwce附)CQ1的16S rDNA
鑒定
以CTAB法提取CQ1菌的基因組DNA為模板，采用擴增細菌16S rDNA全長的保守引物27F和1495R(Lane DJ, Wiley, Chichester, 1991, 115-175)，擴增CQ1菌株16S rDNA約1.5 kb。
27F: 5 ，-GAG AGT TTG ATC CTG GCT CAG-3 ， ( SEQ ID No.2)1495R: 5，-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3， (SEQIDNo.3)
PCR反應(yīng)組分為
10xPCR buffer 5 pi
dNTP (2.5 mM) 5 ^
引物27F (10|iM) 2^1
引物1495R(10nM) 2pl
gDNA (O.l嗎) 1 pi
PfiiTaq (5U/nL) 0.5 pi
ddH20 34.5 pi
總體積 50 ^
PCR擴增反應(yīng)條件為94t:變性5 min; 94匸變性40 s， 53"C復(fù)性40s， 72°C延伸lmin，循環(huán)數(shù)為35; 72。C充分延伸10min。 PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收純化后連接到T載體上克隆，經(jīng)藍白篩選后提取質(zhì)粒測序，測序公司為上海生工，測序結(jié)果表明具有序列表中SEQIDNo.l的核苷酸序列。
將CQl菌的16SrDNA片段在GenBank中進行同源性比對，發(fā)現(xiàn)該菌與i^ew^w7omw m'^wWwcem (Genbank登錄號EF107515)同源性最高，達到99%。用DNAMAN (Version 6)對序列進行比對及對齊操作。使用MEGA 4軟件通過Kimura2-Earameter(K2P)模型計算距離矩陣。使用MEGA4軟件，利用鄰位互換算法(CNI)搜索最小進化樹(ME樹)，由K2P模型產(chǎn)生ME樹(見圖2)，并進行IOOO次重復(fù)的自展檢驗。
參照《Bergey，s Manual of Deteriminative Bacteriology》第9版和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》假單胞菌屬特征，結(jié)合其形態(tài)特征和16S rDNA基因序列相似性，將CQ1菌鑒定為石肖基還原假單胞菌尸sewcfo附o"os "〖^we(^Mcera。實施例3:硝基還原假單胞菌CQ1對喹啉的降解效果檢測
取純化后的菌株，接種于LB培養(yǎng)液中，培養(yǎng)至OD6oo-0.6，按1:500(V : V)接種量接種于100ml、 pH7.5的無機鹽液體培養(yǎng)基，其中喹啉含量分別為200mg/L、 300mg/L、 400mg/L、 500mg/L、 600mg/L、 700mg/L和800mg/L。在30°C、 170rpm搖床培養(yǎng)，每隔6h取出3 ml測定006()()值。然后將菌液12000rpm離心10min，取上清進行高壓液相色譜分析(HPLC)。每處理重復(fù)3個。
1) 、喹啉濃度測定色譜柱采用安捷倫ZORBAXSB-C18色譜柱(250 x4.6 mm,5(xm); VWD UV-Vis Detector;流動相為V甲醇V水=4 : 1，流速為1 mL/min;檢測波長為275nm，進樣體積為10pL，滯留時間7.5min。
2) 、 CQ1生長曲線測定上海尤尼柯2102型紫外可見分光光度計測定波長為600nm的光密度值。
CQ1菌株對不同初始喹啉濃度的降解情況，見圖3; CQ1菌株在700mg/L喹啉濃度的無機鹽培養(yǎng)液中生長和降解情況見圖4。
實驗結(jié)果表明，降解初期，CQ1生長緩慢，主要由于其從營養(yǎng)豐富的LB培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入以喹啉為唯一碳氮源的無機鹽培養(yǎng)基，需要一定的適應(yīng)時間，此為微生物生長的停滯時間，根據(jù)喹啉的初始濃度不同，低濃度喹啉(200-500mg/L)中的菌生長停滯期大約需要6-24h，高濃度喹啉(500-700mg/L)時間較長，約60h。之后經(jīng)過6-12h進入對數(shù)生長期，該期的喹啉降解量隨生長速率增加而顯
11著提高，殘留喹啉量有時甚至呈直線下降。200-500mg/L的初始喹啉濃度42h內(nèi)可以完全降解完，高濃度的喹啉也可以在72h內(nèi)降解完全，表現(xiàn)出較好的降解能力。對800mg/L喹啉降解能力較弱，84h內(nèi)降解率僅為16.6%。實施例4:硝基還原假單胞菌(尸"W(iomow"smYra7^/"cms) CQ1的抗性檢測
將純化后的該菌分別接種于含50mg/L濃度的氨芐青霉素、硫酸卡那霉素、氯霉素、四環(huán)素、利福平和慶大霉素抗生素的LB固體培養(yǎng)基中，3(TC溫箱中靜置培養(yǎng)5d，觀察菌體是否在培養(yǎng)基上生長。結(jié)果表明，該菌對對硫酸卡那霉素、慶大霉素和四環(huán)素均無抗性，在實際使用過程中不會向環(huán)境傳遞這些耐藥因子，保證了生態(tài)安全性。
實施例5:硝基還原假單胞菌(/^ew^wo"osmYra/^/wce/M) CQ1的質(zhì)粒檢測用改進的堿裂解法提取CQ1的質(zhì)粒，具體方法如下
1、 將純化后的CQ1接種于LB液體培養(yǎng)基中，在30。C、 170rpm條件下培養(yǎng)至對數(shù)生長期；
2、 取1 mL菌液裝于離心管中，4X:條件下12000 r/min離心1 min收集菌體；
3、 加入250pL的Pl溶液，振蕩懸浮沉淀；
4、 加入250 pL的P2溶液，輕輕混勻，顛倒幾次至溶液澄清、黏稠；
5、 加入250 ^L的P3溶液，顛倒混勻(可稍微劇烈)至出現(xiàn)白色絮狀物，4aC條件下12000 r/min離心10 min;
6、 將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管，加0.6倍體積的異丙醇，輕輕混勻，12000 r/min離心15 min;
7、 去上清，力G 1 mL無水乙醇，輕混，12000 r/min離心5 min;
8、 去上清，無菌風(fēng)吹干，加20pLTE溶液溶解沉淀；
9、 瓊脂糖凝膠電泳分析。所用試劑
Buffer Pl:在800 mL Milli-Q中加入6.06 g Tris base, 3.72 g EDTA.2H20,用HCl調(diào)節(jié)pH至8.0，定容至1升，滅菌后4。C保存。
Buffer P2:在800 mLMilli-Q中加入8.0 gNaOH， 10.0 g SDS，定容至1升，不
滅菌常溫保存。
Buffer P3:: 500 mL Milli-Q中加入294.5 g乙酸鉀，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至5.5，定容至1升，不滅菌4"C保存。
質(zhì)粒檢測結(jié)果表明，該菌不攜帶質(zhì)粒，有利于外源質(zhì)粒進行水平基因轉(zhuǎn)移，避免了質(zhì)粒的不相容性，是構(gòu)建具備多種降解能力的基因工程菌的良好材料。
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gcctaggaat ctgcctggta gtgggggaca acgtttcgaa aggaacgcta ataccgcata 120
cgtcctacgg gagaaagcag gggaccttcg ggccttgcgc tatcagatga gcctaggtcg 180
gattagctag ttggtggggt aaaggcctac caaggcgacg atccgtaact ggtctgagag 240
gatgatcagt cacactggaa ctgagacacg gtccagactc ctacgggagg cagcagtggg 300
gaatattgga caatgggcga aagcctgatc cagccatgcc gcgtgtgtga agaaggtctt 3 60
cggattgtaa agcactttaa gttgggagga agggcagtaa gttaatacct tgctgttttg 420
acgttaccaa cagaataagc accggctaac ttcgtgccag cagccgcggt aatacgaagg 480
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atgtgaaatc cccgggctca acctgggaac tgcatccata actgcctgac tagagtacgg 60 0
tagagggtgg tggaatttcc tgtgtagcgg tgaaatgcgt agatatagga aggaacacca 660
gtggcgaagg cgaccacctg gactgatact gacactgagg tgcgaaagcg tggggagcaa 720
acaggattag ataccctggt agtccacgcc gtaaacgatg tcgactagcc gttgggatcc 7 80
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900
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1080
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tcgactgcgt gaagtcggaa tcgctagtaa tcgtgaatca gaatgtcacg gtgaatacgt13 20
tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca ccatgggagt gggttgctcc agaagtagct 1380
agtctaaccg caagggg
1397
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 擴增CQl 16S rDNA的上游引物
<400> 2
gagagtttga tcctggctca g
21
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 擴增CQl 16S rDNA的下游弓I物
<400> 3
ctacggctac cttgttacga
20
1權(quán)利要求
1、硝基還原假單胞菌(Pseudomonas nitroreducens)CQ1 CGMCC No.3159。
2、 權(quán)利要求l所述硝基還原假單胞菌的應(yīng)用，其特征在于，所述硝基還原假單 胞菌在生物降解喹啉或其衍生物中的應(yīng)用。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述生物降解喹啉或其衍生物為 降解污水中的喹啉或其衍生物，具體方法為將硝基還原假單胞菌(i^e^fowo"wCQl CGMCC No.3159接種于含有喹啉或其衍生物的污水中，在 28-32。C條件下培養(yǎng)36-72h，其中，所述硝基還原假單胞菌CQ1的接種量為 lxl07-lxl08cfu/mL。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述污水中喹啉或其衍生物濃度 不超過700mg/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了屬于環(huán)境微生物領(lǐng)域的一株硝基還原假單胞菌及其應(yīng)用。本發(fā)明的一株硝基還原假單胞菌(Pseudomonas nitroreducens)CQ1來源于北京燕山石化公司污水處理系統(tǒng)中的氧化塘污水中，經(jīng)過富集、分離和純化而得到，該菌已于2009年7月2日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCC，保藏號為CGMCC No.3159。本發(fā)明還公開了該菌在生物降解喹啉或其衍生物中的應(yīng)用。本發(fā)明的菌株可降解喹啉或其衍生物的濃度達到700mg/L，處理72h后，降解率達到100％。此外，本發(fā)明菌株CQ1對硫酸卡那霉素、四環(huán)素和慶大霉素敏感，且不攜帶質(zhì)粒。
文檔編號C12N1/20GK101643716SQ20091008915
公開日2010年2月10日 申請日期2009年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月31日
發(fā)明者薇 張 申請人:華北電力大學(xué)