專利名稱：：中間體的對映選擇性酶還原的方法中間體的對映選擇性酶還原的方法本發(fā)明涉及在輔因子的存在下應(yīng)用氧化還原酶將通式I酮化合物分別對映選擇性(enantioselective)酶還原為式II(R，S-醇)和III(S，S-醇)化合物的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中，R可以表示氨基官能的任何保護(hù)基團(tuán)(叔丁氧羰基、芐氧羰基、9-芴甲氧羰基)且X=-Cl、-CN、-0H、Br、F，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>優(yōu)選的式I化合物含有丁氧羰基或芐氧羰基作為氨基保護(hù)基團(tuán)并且在X的位置是氯原子。通式II和III的手性醇是用于治療HIV的蛋白酶抑制劑的生產(chǎn)中重要的中間體。此類蛋白酶抑制劑例如是利托那韋(Ritonavir)、安潑那韋(Amprenavir)、福沙那韋(Fosamprenavir)、Atazanavir或Darunavir0例如可通過式I相應(yīng)酮化合物的對映選擇性還原分別獲得式II(R，S-醇)和III(S，S-醇)中間體，其中所述的對映選擇性還原在當(dāng)前的生產(chǎn)方法中通過化學(xué)方法進(jìn)行。在做這些時，化學(xué)催化還原具有這樣的缺陷一方面，其可能由于惡劣的反應(yīng)條件而產(chǎn)生副產(chǎn)品，另一方面，分別產(chǎn)生不符合要求的對映體和非對映體過量，并且只有費很大的努力才能在技術(shù)上可行。因此，對映體富集形式的式II(R，S-醇)中間體比式III(S，S-醇)更難以化學(xué)獲得。由于這一原因，在相當(dāng)一些時間，已努力開發(fā)允許所述中間體對映選擇性還原的生物催化方法。生物催化方法通常在溫和的條件下操作，由于這一原因，可預(yù)期它們能夠還原式I的酮化合物而不會形成其它的副產(chǎn)品。然而，到目前為止，還沒有可能發(fā)現(xiàn)可利用來用分離的酶進(jìn)行酶還原的合適生物催化劑。據(jù)我們所知，僅存在很少的這樣的出版物，即在所述出版物中描述了在全細(xì)胞方法中應(yīng)用紅球菌屬(Rhodococcus)或鏈霉菌屬(Str印tomyces)菌株的式I酮的反應(yīng)(TetrahedronAsymmetry14(2003)3105-3109,TetrahedronAsymmetry8(1997)p.2547)。然而，該反應(yīng)因此分別只能用野生型菌株全細(xì)胞和溶胞產(chǎn)物才發(fā)生，并且因此已只在遠(yuǎn)低于2%的非常低的濃度下進(jìn)行，并且沒有輔酶的再生。目前為止，還沒有可在工業(yè)規(guī)模上可應(yīng)用的酶還原方法，并且參與該反應(yīng)的酶也還既未被分離也未被鑒定。本發(fā)明的目的是提供能以高產(chǎn)量經(jīng)濟(jì)地分別產(chǎn)生對映體純的對映體富集的通式II和III中間體，并且具有高對映體純度而無任何副產(chǎn)品的方法。根據(jù)本發(fā)明，通過最初提到的方法類型完成所述目的，其特征在于用于生產(chǎn)式II化合物(R，S-醇)的氧化還原酶a)包含根據(jù)SEQIDNO=USEQIDNo2、SEQIDNo3或SEQIDNo4的氨基酸序列，b)包含這樣的氨基酸序列，其中至少60%的所述氨基酸與氨基酸序列SEQIDN0USEQIDNo2或SEQIDNo3、SEQIDNo4的那些相同，或c)包含這樣的氨基酸序列，其中至少70%的所述氨基酸與氨基酸序列SEQIDN0USEQIDNo2或SEQIDNo3、SEQIDNo4的那些相同，或d)由核酸序列SEQIDNO16,SEQIDNo17,SEQIDNo18,SEQIDNo19編碼，或e)由在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO16,SEQIDNo17,SEQIDNo18,SEQIDNo19雜交的核酸序列編碼，f)具有220至260個氨基酸的長度，并且包含一個或若干個選自序列SEQIDNO31至SEQIDNO51的部分序列，并且優(yōu)先將式I化合物還原為式II化合物。nalvtgasrgig(31)nalvtggsrgig(32),gysvt(33),gynvt(34),gygitl(35),gygvt(51)vlaklp(36),vkaklp(37)fkgaplpa(38)，frgaplpa(39)，lkgaplpa(40)，spialtk(41)，spvaltk(42)，sqialtq(43)，avysask(44)，avysatk(45)，gvysatk(46)，pikgwi(47),piegwi(48),piggwi(49)andpisgwi(50),此外，通過最初提到的方法類型完成所述目的，其特征在于用于生產(chǎn)式III化合物(S，S-醇)的氧化還原酶a)包含根據(jù)SEQIDNO:5、SEQIDNo6、SEQIDNo7、SEQIDNo8、SEQIDNo9、SEQIDNo10、SEQIDNo11、SEQIDNo12、SEQIDNo13、SEQIDNo14、SEQIDNo15的氨基酸序列；b)包含這樣的氨基酸序列，其中至少60%的所述氨基酸與根據(jù)SEQIDNO5、SEQIDNo6、SEQIDNo7、SEQIDNo8、SEQIDNo9、SEQIDNo10、SEQIDNo11、SEQIDNo12、SEQIDNo13、SEQIDNo14、SEQIDNo15的氨基酸序列的那些相同，或c)由核酸序列SEQIDNO20、SEQIDNo21、SEQIDNo22、SEQIDNo23、SEQIDNo24、SEQIDNo25、SEQIDNo26、SEQIDNo27、SEQIDNo28、SEQIDNo29或SEQIDNo30編碼，或d)由在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO20、SEQIDNo21,SEQIDNo22、SEQIDNo23、SEQIDNo24、SEQIDNo25、SEQIDNo26、SEQIDNo27、SEQIDNo28、SEQIDNo29或SEQIDNo30雜交的核酸序列編碼，e)具有220至260個氨基酸的長度，并且包含一個或若干個選自序列SEQIDNO31至SEQIDNO66的部分序列，并且優(yōu)先將式I化合物還原為式III化合物。nalvtgasrgig(31)nalvtggsrgig(32),gysvt(33),gynvt(34),gygitl(35),gygvt(51)vlaklp(36)，vkaklp(37)fkgaplpa(38)，frgaplpa(39)，lkgaplpa(40)，fkaaplpa(52)，fkgsplpa(53)spialtk(41)，spvaltk(42)，sqialtq(43)，avysask(44)，avysatk(45)，gvysatk(46)，pikgwi(47),piegwi(48),piggwi(49)andpisgwi(50),gigrat(54),gigrasa(55),gigret(56),nnagig(57)，nnagieg(58)，irvvaiapg(59)，irvnaiapg(60)，irvnaicpg(61)，irvvgiapg(62)，peqiagav(63)，peaianav(64)，peevanav(65)，peaianav(66)。將式I化合物優(yōu)先還原為式II化合物的多肽應(yīng)被理解為這樣的多肽，即其中在最佳的反應(yīng)條件下可達(dá)到的R，S-醇的最大對映體過量總計至少50%。最佳反應(yīng)條件由此被理解為這樣的多肽反應(yīng)條件，即在該條件下，多肽產(chǎn)生R，S-醇的最大對映體過量。已發(fā)現(xiàn)包含氨基酸序列SEQIDNO=USEQIDNo2,SEQIDNO:3禾口SEQIDNo4的多肽顯示出氧化還原活性，并且可用于將式I化合物優(yōu)先還原為式II化合物(R，s-化合物)?？蛇_(dá)到的R，S-的醇的對映體過量總計>50%，優(yōu)選>80%，并且尤其優(yōu)選>95%。當(dāng)應(yīng)用SEQIDNO:1時，達(dá)到的對映體過量例如可達(dá)到最高>99%的R，S-化合物(式II)。類似地，已發(fā)現(xiàn)包含氨基酸序列SEQIDNO:5至SEQIDNo15的多肽顯示出氧化還原活性，并且可用于將式I化合物優(yōu)先還原為式III化合物(S，S-化合物)?？蛇_(dá)到的R，S-醇的對映體過量總計>80%，優(yōu)選>90%，并且尤其優(yōu)選>95%。當(dāng)應(yīng)用SEQIDN05、SEQIDNO:6、SEQIDNO9或SEQIDNO12時，達(dá)到的對映體過量可達(dá)到最高>99%的R，S-化合物(式II)。許多所提到的氧化還原酶諸如例如SEQIDNo1、3、4、5、6、7和15還具有其它的優(yōu)點，即它們能夠通過還原仲醇再生在還原過程中形成的氧化的輔因子。因此，所述氧化還原酶特別的經(jīng)濟(jì)優(yōu)點還在于，與現(xiàn)有技術(shù)方法相反，不需要其它的酶用于輔因子再生。編碼包含SEQIDNO:5的多肽的DNA序列SEQIDNO20例如可從生物RubrobacterxylanophilusDSM9941的基因組獲得。編碼包含SEQIDNO6的多肽的DNA序列SEQIDNO21例如可從生物GeobacillusthermodenitrificansDSM465白勺編碼包含SEQIDNO7的多肽的DNA序列SEQIDNO22例如可從生物橙色綠屈撓菌(Chloroflexusaurantiacus)DSM635的基因組獲得。分別編碼包含SEQIDNO8或SEQIDNO9的多肽的DNA序列SEQIDNO23或DNA序列SEQIDNO:24例如可從生物木蘭假絲酵母(Candidamagnoliae)DSMZ70638獲得。編碼包含SEQIDNO11的多肽的DNA序列SEQIDNO:26例如可從生物木蘭假絲酵母(Candidamagnoliae)DSMZ70639獲得。編碼包含SEQIDNO1的多肽的DNA序列SEQIDNO16例如可從生物木蘭假絲酵母(Candidamagnoliae)CBS6396獲得。此夕卜，SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:12、SEQIDNO13、SEQIDN0:14和SEQIDNO15的氧化還原酶例如可從菌株木蘭假絲酵母(Candidamagnoliae)CBS5659、CBS7318、CBS2798、JCM9448，CandidageocharesMUCL29832，假絲酵母屬物種MUCL40660，CandidagropengiesseriMUCL29836通過同源篩選獲得。因此，本發(fā)明涉及將式I的酮化合物分別還原為通式II和III的化合物的方法，其特征在于明顯過量地形成式II或III化合物之一，其應(yīng)用包含氨基酸序列SEQIDN01至SEQIDNO15之一的多肽，或包含與氨基酸序列SEQIDNO:1至SEQIDN0:15之一至少50%相同的氨基酸序列的多肽，即可通過替換、插入、缺失或添加至少一個氨基酸來源于序列SEQIDNO:1至SEQIDNO15的多肽，或應(yīng)用由核酸序列SEQIDN0:16至SEQIDNO:30之一編碼的多肽，或由在嚴(yán)格條件下與序列SEQIDN0:16至SEQIDNO:30之一雜交的核酸序列編碼的多肽。例如在嚴(yán)格條件下與SEQIDN0:16雜交的核酸序列被理解為可通過菌落雜交法、噬菌斑雜交方法、DNA印跡雜交法或類似方法，應(yīng)用SEQIDNO16作為DNA探針鑒定的多核苷酸。為這一目的，在60°C在0.7-1MNaCl溶液中使固定在濾器上的多核苷酸例如與SEQIDN0:16雜交。如例如在MolecularCloning,ALaboratoryManual,SecondEdition(ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)或類似出版物上描述的那樣進(jìn)行雜交。隨后，用0.1至2-倍SSC溶液在65°C洗滌濾器，其中1-倍SSC溶液被理解為由150mMNaCl和15mM檸檬酸鈉組成的混合物。此外，本發(fā)明涉及氨基酸序列SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDN0:4、SEQIDNO=IUSEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14禾口SEQIDNO:15的多肽，以及與氨基酸序列SEQIDNO=USEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:14禾口SEQIDNO:15之一至少55%，優(yōu)選65%-75%，尤其優(yōu)選超過75%相同的多肽，即涉及可通過替換、插入、缺失、或添加至少一個氨基酸來源于序列SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO11、SEQIDN0:12、SEQIDN0:13、SEQIDN0:14禾口SEQIDNO:15的多肽。此外，本發(fā)明還涉及由核酸序列SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO26,SEQIDNO27,SEQIDNO28,SEQIDNO29或SEQIDNO:30編碼，或由在嚴(yán)格條件下與序列SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:26、SEQIDNO:27、SEQIDNO:28、SEQIDNO29或SEQIDNO30之一雜交的核酸序列編碼的多肽。在根據(jù)本發(fā)明的方法中，包含序列SEQIDNO1至SEQIDNO15的多肽和可來源于所述多肽的多肽分別可以以完全純化的狀態(tài)、部分純化的狀態(tài)或作為含有多肽SEQIDNO1至SEQIDNO15之一的細(xì)胞使用。由此可以以天然、透化的或裂解狀態(tài)提供使用的細(xì)胞。優(yōu)選地，使包含序列SEQIDNO:1至SEQIDNO15的多肽和可來源于其的衍生物分別在合適的宿主生物中過表達(dá)，所述宿主生物諸如例如大腸桿菌(Escherichiacoli)，并且將重組多肽用于還原通式I的羥基酮。根據(jù)本發(fā)明的酶還原在溫和的條件下進(jìn)行，因此可很大地避免不穩(wěn)定的式I化合物的降解以及由此不期望的副產(chǎn)品的形成。取決于所使用的多肽，根據(jù)本發(fā)明的方法具有最高達(dá)99%的式II化合物(R，S-化合物)的對映體純度，然而至少50%的R，S-化合物。對于式III化合物(S，S_化合物)，取決于所使用的多肽，根據(jù)本發(fā)明的方法具有最高達(dá)99%的式III化合物(S，S-化合物)的對映體純度，然而至少80%的R，S-化合物。本發(fā)明優(yōu)選的實施方案的特征在于在該方法中使用的輔因子被共底物持續(xù)地還原。優(yōu)選地，應(yīng)用NAD(P)H作為輔因子，其中在還原中形成的NAD(P)通過共底物還原回NAD(P)H0在根據(jù)本發(fā)明的方法中，優(yōu)選持續(xù)地再生通過氧化還原酶/脫氫酶形成的氧化的輔因子NAD或NADP。根據(jù)本發(fā)明所有方法的優(yōu)選實施方案，通過醇的氧化再生氧化的輔因子NAD或NADP。優(yōu)選應(yīng)用諸如2-丙醇、2-丁醇、2-戊醇、3-戊醇、4-甲基_2_戊醇、2_庚醇、2_辛醇或環(huán)己醇的仲醇作為共底物。根據(jù)特別優(yōu)選的實施方案，將2-丙醇或4-甲基-2-戊醇用于輔酶再生。用于再生的共底物的量可以是總體積的5至95%體積。優(yōu)選地，將通式RxRyCHOH的仲醇用于輔因子再生，其中Rx和Ry獨立地是氫、支鏈或非支鏈C1-C8-烷基并且Cg彡3。根據(jù)本發(fā)明方法其它優(yōu)選的實施方案，添加其它的氧化還原酶/脫氫酶用于輔因子再生。在其它優(yōu)選的實施方案中，可還添加其它的醇脫氫酶用于輔因子的再生。合適的NADH-依賴性醇脫氫酶例如可從面包酵母，從近平滑假絲酵母(Candidaparapsilosis(CPCR))(US5,523,223禾口US5,763，236，EnzymeMicrob.Technol.,1993,15(11)950-8),Pichiacapsulata(DE10327454.4)，從紅串紅球菌(Rhodococcuserythropolis(RECR))(US5,523,223)、Norcardiafusca(Biosci.Biotechnol.Biochem.，63(10)，1999，第1721-1729頁；Appl.Microbiol.Biotechnol，.2003,62(4)380-6；Epub2003，4月26日)或從赤紅球菌(Rhodococcusruber)(J.Org.Chem.，2003，68(2)402-6)獲得。用于這些醇脫氫酶的合適的共底物例如是已經(jīng)提到的仲醇，諸如2-丙醇(異丙醇)、2-丁醇、2-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-辛醇或環(huán)己醇。用于NADPH再生的合適的仲醇脫氫酶例如是上面描述并且分離自乳桿菌(Lactobacillale)目生物的那些，所述生物例如高加索酸奶乳桿菌(Lactobacilluskefir)(US5,200,335)、短乳桿菌(Lactobacillusbrevis)(DE19610984Al;ActaCrystallogr.D.Biol.Crystallogr.2000Dec；56Pt12:1696-8)、稍小乳桿菌(Lactobacillusminor)(DE10119274)、肉色明串珠菌(Leuconostoccarnosum)(A1261/2005，Kl.C12N)，或如所描述的那樣，來自Thermoanerobiumbrockii、Thermoanerobiumethanolicus或拜氏梭菌(Clostridiumbeijerinckii)白勺些。然而，原則上其它酶系統(tǒng)也可用于輔因子再生。例如，可應(yīng)用NAD-或NADP-依賴性甲酸脫氫酶實現(xiàn)輔因子再生(Tishkov等，J.Biotechnol.Bioeng.[1999]64，187-193，Pilot-scaleproductionandisolationofrecombinantNADandNADPspecificformatedehydrogenase)。甲酸脫氫酶的合適共底物例如是甲酸鹽，諸如甲酸銨、甲酸鈉或甲酸鈣。在根據(jù)本發(fā)明的方法中，反應(yīng)批次中使用的通式I化合物的量優(yōu)選為基于總體積的10g/l至500g/l，優(yōu)選25g/l至300g/l，特別優(yōu)選50g/l至200g/l。進(jìn)行酶還原的反應(yīng)混合物中水性部分優(yōu)選含有緩沖劑，例如，磷酸鉀、tris/HCl或三乙醇胺緩沖劑，其具有5-10的pH值，優(yōu)選6-9的pH值。此外，該緩沖劑可以含有用于穩(wěn)定或活化酶的離子，例如諸如，鋅離子或鎂離子。當(dāng)實施根據(jù)本發(fā)明的方法時，溫度合適地是約10°C至70°C，優(yōu)選20°C至45°C。在根據(jù)本發(fā)明的方法的其它優(yōu)選實施方案中，在有機(jī)溶劑的存在下進(jìn)行酶反應(yīng)，其中所述的有機(jī)溶劑不與水混溶或僅以非常小的程度與水混溶。所述溶劑例如是對稱的或非對稱的二(Ci-Q)烷基醚、直鏈或支鏈烷或環(huán)烷或不溶于水的仲醇，其同時作為共底物。優(yōu)選的有機(jī)溶劑是二乙醚、叔丁基甲基醚、二異丙基醚、二丁基醚、乙酸丁酯、庚烷、己烷、2-辛醇、2-庚醇、4-甲基-2-戊醇和環(huán)己醇。在這種情況下，該溶劑又可同時作為用于輔因子再生的共底物。如果分別使用不溶于水的溶劑和共底物，反應(yīng)批次由水相和有機(jī)相組成。根據(jù)其溶解度，通式化合物分布在有機(jī)相和水相之間。一般而言，基于總反應(yīng)體積，有機(jī)相具有5至95%的比例，優(yōu)選10至90%。優(yōu)選機(jī)械地混合物兩個液態(tài)相，因此在它們之間產(chǎn)生大的表面面積。在這一實施方案中，例如，在酶還原期間形成的NAD(P)也可被諸如上面描述的共底物還原回NAD(P)H。在水相中輔因子(特別是NADH或NADPH)的濃度分別一般為0.OOlmM至10mM，特別是0.OlmM至ImM。在根據(jù)本發(fā)明的方法中達(dá)到的TTN(總轉(zhuǎn)化數(shù)=還原的式I化合物mol/所使用的輔因子mol)通常為102至105，然而優(yōu)選為彡103。在根據(jù)本發(fā)明的方法中，還可使用氧化還原酶/脫氫酶的穩(wěn)定劑。合適的穩(wěn)定劑例如是甘油、山梨醇、1，4-DL-二硫蘇糖醇(DTT)或二甲基亞砜(DMS0)。根據(jù)本發(fā)明的方法例如在由玻璃或金屬制成的封閉反應(yīng)容器中進(jìn)行。為這一目的，將成分單個地轉(zhuǎn)移至該反應(yīng)容器中，并且在例如氮氣或空氣氣氛中攪拌。根據(jù)本發(fā)明另一可能的實施方案，可持續(xù)地移除氧化的共底物(例如丙酮)和/或可持續(xù)地新添加共底物(例如，2-丙醇)，以使得反應(yīng)平衡偏向反應(yīng)產(chǎn)物。在其它實施方案中，在反應(yīng)過程中逐漸地添加根據(jù)SEQIDN0:1至SEQIDNol5的氧化還原酶和/或共底物。在反應(yīng)完成后，處理反應(yīng)混合物。為這一目的，例如任選地將水相從有機(jī)相中分離，并且過濾含有產(chǎn)物的有機(jī)相。任選地，還可萃取水相并如有機(jī)相那樣進(jìn)一步處理。隨即從有機(jī)相中蒸發(fā)溶劑，并且作為粗產(chǎn)物獲得通式II或III的產(chǎn)物。然后可進(jìn)一步純化粗產(chǎn)物，或?qū)⑵渲苯佑糜诮Y(jié)果產(chǎn)物的合成。11以下通過實施例的方式進(jìn)一步闡明本發(fā)明。實施例1克降并提供來自RubrobacterxylanophilusDSM9941的氧化還原酶(SEQIDNo51A)RubrobacterxylanophilusDSM9941的培養(yǎng)在細(xì)菌搖床上以140rpm在50°C(pH7.2)的以下培養(yǎng)基中培養(yǎng)RubrobacterxylanophilusDSM9941細(xì)胞0·1%酵母提取物、0.1%胰蛋白胨、0.004%CaSO4X2Η20、0.02%MgCl2X6Η20、0·01%氨三乙酸、IOOml磷酸鹽緩沖液[5.44g/lKH2PO4,43g/lNa2HPO4X12Η20]、500μ1/10.OlM檸檬酸鐵、500μ1/1微量元素[500μ1/1H2SO4,2.28g/lMnSO4XH20、500mg/1ZnSO4X7H20、500mgH3B03、25mg/lCuS04x5H20、25mg/lNa2MoO4X2H20、45mg/lCoCl2X6H20]。在培養(yǎng)的第6天，通過離心從培養(yǎng)基中分離細(xì)胞，并且儲存在_80°C。B)編碼選擇性氧化還原酶的基因的擴(kuò)增根據(jù)描述于Manniatis&Sambrook的“MolecularCloning”中所描述的方法提取基因組DNA。將得到的核酸用作聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的模板，所述PCR包含來源于NCBI數(shù)據(jù)庫中46106817號下公開的基因序列的特異性引物。為了完成這些，在引物的5’端位置分別提供了用于核酸內(nèi)切酶NdeI和HindIII或SphI的限制性位點(SEQIDNO:67、SEQIDNO68,SEQIDNO:69)，用于隨后克隆至表達(dá)載體中。在PCR緩沖液[IOmMTris-HCl(pH8.0)；50mMKCl；IOmMMgSO4；ImMdNTP混合液；在每種情況下20pMol引物和2.5UPlatinumPfxDNA聚合酶(Invitrogen)]中，用500ng基因組DNA，并在以下溫度循環(huán)中進(jìn)行擴(kuò)增循環(huán)194°C，2min循環(huán)2X30:94°C，15秒，54°C，30秒，68°C，60秒，循環(huán)3:68°C，7min4°C,①在1%瓊脂糖凝膠上純化后，將所得到的具有約750bp大小的PCR產(chǎn)物分別在核酸內(nèi)切酶NdeI和HindIII或SphI和HindIII的幫助下進(jìn)行限制性切割，并且分別連接至pET21a載體(Novagen)或pQE70載體(Qiagen)的骨架中，其中所述的骨架已用相同的核酸內(nèi)切酶處理過。在將2μ1連接批次轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Top10Γ細(xì)胞(Invitrogen)中后，通過分別用核酸內(nèi)切酶NdeI和HindIII或SphI和HindIII進(jìn)行限制性分析的方式測試氨芐青霉素耐性集落的質(zhì)粒DNA中具有750bp大小的插入片段的存在。將制備自所述片段為陽性的克隆的質(zhì)粒進(jìn)行序列分析，并隨后分別轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21Star(Invitrogen)和大腸桿菌RB791(geneticstock,Yale)中。C)在大腸桿菌細(xì)胞中高效表達(dá)多肽SEQIDNO5為在大腸桿菌細(xì)胞中高效表達(dá)多肽SEQIDNO:5，在PCR反應(yīng)中應(yīng)用編碼DNASEQIDNO:70作為模板，用于克隆至表達(dá)載體中。在第一個的區(qū)域，這一DNA序列在153個堿基與之前已知的DNA序列(SEQIDNO20)不同。這一修飾是保守的并且不會導(dǎo)致氨基酸序列中的改變。在PCR緩沖液[IOmMTris-HCl(pH8.0)；50mMKCl；IOmMMgSO4；ImMdNTP混合液；在每種情況下20pMol引物(SEQIDNO:71、SEQIDNO68)和2.5UPlatinumPfxDNA聚合酶(Invitrogen)]中，用50ngDNASEQIDNO:70作為模版，并在以下溫度循環(huán)中進(jìn)行擴(kuò)增循環(huán)194°C，2min循環(huán)2X30:94°C，40秒，56°C，30秒，68°C，60秒，循環(huán)3:68°C，7min4°C,①在瓊脂糖凝膠上純化后，在核酸內(nèi)切酶NdeI和HindIII的幫助下將所得到的具有約750bp大小的PCR產(chǎn)物連接至pET21a載體(Novagen)的骨架中，其中所述的骨架已用相同的核酸內(nèi)切酶處理過。在將2μ1連接批次轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Top10Γ細(xì)胞(Invitrogen)中后，通過用核酸內(nèi)切酶NdeI和HindIII進(jìn)行限制性分析的方式測試氨芐青霉素耐性集落的質(zhì)粒DNA中具有750bp大小的插入片段的存在。將制備自所述片段為陽性的克隆的質(zhì)粒進(jìn)行序列分析，并隨后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21Star(Invitrogen)中。D.)制備來自RubrobacterxylanophilusDSM9941的氧化還原酶在含有氨芐青霉素(50yg/ml)的培養(yǎng)基(1%胰蛋白胨、0.5%酵母提取物、1%NaCl)中分別培養(yǎng)已用表達(dá)構(gòu)建物轉(zhuǎn)化的大腸桿菌菌株BL21Star(Invitrogen，Karlsruhe，德國)和RB791(大腸桿菌geneticstock，Yale，USA)，直到達(dá)到在550nm處測量的0.5的光密度。通過以0.ImM的濃度添加異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)。在25°C和220rpm誘導(dǎo)16小時后，收集細(xì)胞并在_20°C保存。對于酶回收，將30g細(xì)胞懸浮于150ml三乙醇胺緩沖液(100mM，pH=7，2mMMgCl2,10%甘油)，并且應(yīng)用高壓勻化器破壞。隨后，將酶溶液與150ml甘油混合并儲存在-20°c。將這樣獲得的酶溶液用于化合物I的還原(實施例3)。與在實施例2中提到的方法類似，還可提供氧化還原酶SEQIDNO6和SEQIDNO7。實施例2通過分子篩選克隆并提供來自木蘭假絲酵母(CandidamaRnoliae)的氧化還原酶(SEQIDNo1)A)氧化還原酶的分子篩選將分離自木蘭假絲酵母CBS6396細(xì)胞的基因組DNA作為通過PCR分子篩選的模板。為做這些,在PCR緩沖液[16mM(MM)2SO4;67mMTris-HClρΗ8·3(在25°C)；1.5mMgCl2；0.01%Tween20；0.2mMdNTP混合物；在每種情況下30pMol引物(SEQIDNO:72、SEQIDNO73)和1.25UBioThermStar聚合酶(Genecraft)]中，用50ng分離自木蘭假絲酵母(Candidamagnoliae)CBS6396細(xì)胞的基因組DNA作為模版，并用以下循環(huán)進(jìn)行擴(kuò)增循環(huán)195°C，7min循環(huán)2X28:94°C，40秒，從63°C開始每步溫度下降0.5°C，30秒，68°C，60秒，X2094°C，40秒，53°C，40秒，70°C，60秒，循環(huán)3:70°C，7min4°C,①在瓊脂糖凝膠上對整個PCR批次進(jìn)行分級分離后，鑒定約400bp的條帶，并且通過懸突腺苷部分克隆至Topo-TA載體(Invitrogen)，用于確定DNA序列。從該篩選反應(yīng)得到的DNA條帶展示出相應(yīng)于137個氨基酸殘基的氧化還原酶片段的開放閱讀框。B)分離(總的及mRNA)將600mg新鮮細(xì)胞重懸浮于2.5ml冰冷的LETS緩沖液中。往所述細(xì)胞懸浮液中加入5ml(約20g)在硝酸中洗滌過并用3ml苯酚(pH7.0)平衡過的玻璃珠。然后通過30秒渦旋振蕩和30秒在冰上冷凍交替處理整個批次，總共歷時10分鐘。隨后，加入5ml冰冷的LETS緩沖液，并再次劇烈地渦旋振蕩。在4°C用IlOOOg離心所述細(xì)胞懸浮液5分鐘?；厥账嗖⒂玫润w積的苯酚氯仿異戊醇(24241)提取兩次。隨后立即用氯仿抽提。在最后抽提后，通過加入1/10體積的5MLiCl2使總RNA在_20°C沉淀4h。將Img如此獲得的總RNA用于通過寡聚_dT纖維素(NEBBiolabs)富集mRNA分子。通過根據(jù)Manniatis&Sambrook的“MolecularCloning”中描述的方法，通過RACE(cDNA末端快速擴(kuò)增)完成編碼氧化還原酶的全序列的測定。編碼氧化還原酶的基因序列包括720個堿基對，并且等于239個氨基酸殘基長度。C)通過PCR合成編碼來自木蘭假絲酵母CBS6396的短鏈ADH的全長轉(zhuǎn)錄物構(gòu)建特異引物用于隨后將全長轉(zhuǎn)錄物克隆至合適的表達(dá)系統(tǒng)中。為此目的，修飾了具有NdeI識別序列的5’引物和具有HindIII識別序列的3，引物(SEQIDNO74、SEQIDNO:75)。將分離自木蘭假絲酵母CBS6396細(xì)胞的基因組DNA作為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的模板。在PCR緩沖液[IOmMTris-HCKpH8.0)；50mMKCl；IOmMMgSO4；ImMdNTP混合液；在每種情況下20pMol引物和2.5UPlatinumPfxDNA聚合酶(Invitrogen)]中，用50ng模板，并在以下溫度循環(huán)中進(jìn)行擴(kuò)增循環(huán)194°C，2min循環(huán)2X30:94°C，15秒，58°C，30秒，68°C，75秒，循環(huán)3:68°C，7min4°C,①在瓊脂糖凝膠上純化后，在核酸內(nèi)切酶NdeI和HindIII的幫助下將所得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性切割，并連接至pET21a載體(Novagen)的骨架中，其中所述的骨架已用相同的核酸內(nèi)切酶處理過。在將2μ1連接批次轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Top10Γ細(xì)胞(Invitrogen)中后，通過用核酸內(nèi)切酶NdeI和Hind進(jìn)行限制性分析的方式測試氨芐青霉素(或卡那霉素)耐性集落的質(zhì)粒DNA中具有750bp大小的插入片段的存在。測序表達(dá)構(gòu)建物PET21-MIX。來自木蘭假絲酵母編碼短鏈氧化還原酶的基因具有共720bp的開放閱讀框(SEQIDNO16)，其相應(yīng)于239個氨基酸的蛋白質(zhì)(SEQIDNO:1)。D)在大腸桿菌細(xì)胞中表達(dá)重組氧化還原酶用編碼該氧化還原酶的表達(dá)構(gòu)建物PET21-MIX分別轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌StarBL21(De3)細(xì)胞(Invitrogen)和RB791細(xì)胞(大腸桿菌geneticstock,Yale,USA)。然后在200ml含有50μg/ml氨芐青霉素或40μg/ml卡那霉素的LB培養(yǎng)基(1%胰蛋白胨、0.5%酵母提取物、NaCl)中分別培養(yǎng)用表達(dá)構(gòu)建物轉(zhuǎn)化的大腸桿菌集落，直到達(dá)到在550nm處測量的0.5的光密度。通過以0.ImM的濃度添加異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)重組蛋白的表達(dá)。在25°C和220rpm誘導(dǎo)16小時后，收集細(xì)胞并在-20°C保存。為了活性測試，使IOmg細(xì)胞與500μIlOOmMTEA緩沖液ρΗ7.OUmMMgCl2和500μ1玻璃珠混合，并應(yīng)用球磨機(jī)消化10分鐘。然后以稀釋狀態(tài)將獲得的裂解物用于各個測試。如下構(gòu)成活性測試960μ1IOOmMTEA緩沖液ρΗ7.OUmMMgCl2,160μgNADPH、10μ1稀釋的細(xì)胞裂解物。通過添加10μIlOOmM底物溶液至該反應(yīng)混合物中開始反應(yīng)。對于酶的大量回收，將30g細(xì)胞重懸浮于150ml三乙醇胺緩沖液(100mM，pH=7，2mMMgCl2,10%甘油)，并且應(yīng)用高壓勻化器消化。隨后，將該酶溶液與150ml甘油混合并儲存在_20°C。與在實施例2中提到的方法類似，還可提供氧化還原酶SEQIDN0:2、3、4、8、9、10、11、12、13、14、15。實施例3氧化還原酶SEQIDNO^gSEQIDNO15就它們還原式I化合物的特性而言的表征如下就式I化合物的轉(zhuǎn)化檢測序列SEQIDNO1至SEQIDNO15的氧化還原酶。反應(yīng)批次A(無輔酶再生)160μ1緩沖液(三乙醇胺IOOmMρΗ=7，ImMMgCl2,10%甘油)150μ1NAD(P)H(40mg/ml)=6mg20μ12-丙醇2mg式I化合物50μ1根據(jù)實施例ID的酶溶液反應(yīng)批次B(有輔酶再生)400μ1緩沖液(三乙醇胺IOOmMρΗ=7，ImMMgCl2,10%甘油)0.05mgNAD(P)H50μ12-丙醇IOmg式I化合物50μ1根據(jù)實施例ID的酶溶液在溫育樣本A和B24h后，在每種情況下往完成的反應(yīng)批次中加入Iml乙腈，離心反應(yīng)批次，并轉(zhuǎn)移至HPLC分析容器(lmg/ml)。通過HPLC(Nucleodur1005C18ec，125mm，直徑4mm，Macherey-Nagel)分析反應(yīng)批次。應(yīng)用了Iml/分鐘的流速和乙腈⑶及水㈧的溶劑系統(tǒng)。用從40%至80%遞增線性梯度的乙腈可在10分鐘內(nèi)分離式I、II和III的化合物。保持的時間是(酮式I)10.0分鐘，(R，S-化合物式11)9.3分鐘，以及(S，S-化合物式111)8.5分鐘。結(jié)果_批次A_批次B_<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實施例4通過氧化還原酶SEQIDNO1將式I化合物轉(zhuǎn)化為式II化合物(R,S-化合物)為將式I化合物轉(zhuǎn)化為式II化合物(R，S-化合物)，在每種情況下將2.25mlSEQIDNo1的酶懸浮液(參見實施例1D)和75單位(=2ml)過表達(dá)的來自Thermoanerobiumbrockii的醇脫氫酶加入到3ml緩沖液(IOOmMΤΕΑ,ρΗ=8，10%甘油)、1.5g式I化合物、0.3mgNADP和7ml4-甲基-2-戊醇的混合物中。在室溫中在恒定完全的混合下溫育該反應(yīng)混合物。48h后，超過95%的所使用的式I化合物被還原為式II化合物。對映體過量總計>98%。實施例5通過氧化還原酶SEQIDNO5將式I化合物轉(zhuǎn)化為式III化合物(S,S-化合物)為進(jìn)一步將式I化合物轉(zhuǎn)化為式III化合物(S，S-化合物)，在Eppendorf反應(yīng)容器中溫育600μ1緩沖液(IOOmMΤΕΑ,ρΗ=9)、200μ12-丙醇、50mg式I化合物、0.ImgNAD和200μ1SEQIDNO5的酶懸浮液(參見實施例1D)的混合物。在室溫中在恒定完全的混合下溫育該反應(yīng)混合物。48h后，超過90%的所使用的式I化合物被還原為式III化合物(S，S)。對映體過量總計>98%。序列表氨基酸序列SEQIDNo1木蘭假絲酵母CBS6396蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mnalvtggsrgigeaiatklaedgysvtiasrgidqlnkvkaklpvvregqthhvwqldl61sdaeaassfkgaplpassydvlvnnagvtdpspiakqsdseihklfsvnllspvaltkty121vqavtgkpretpahiifissgvairgypnvavysatksgldgfmrslarelgpegvhvnt181vspgltktemasgvslddfppspiggwiqpeaiadavrylvksknitgtilsvdngitvSEQIDNo2木蘭假絲酵母JOLMM蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mpstlnalvtggsrgigeatavklaeegygitlaardikklndvkaklptikqgqehhvw61qldladvqaalelkgaplpaskydllvanagvsahvptaehddahwqnvitinlssqial121tqalvraigersdeapfhivyvssiaalrgnpmsavysaskagldgfarsisrelgpkgi181hvntvhpgltktdmtvrmrpaedqpikgwvlpdaiadavvflaksknitgtnivvdngrv241νSEQIDNo3CandidageocharesMUCL29832蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mssvpassssssptlnalvtgasrgigeataiqlasqgysvtlasrgleqlkavkaklpl61vrqgqthhvwqldladvaaagsfkgaplpassydvlvsnagvalfspigdqadedwqrml121avnltspialtkalvkaiadkprenpahiifvssavslrgyplvgvysatkagldgftrs181lahelgpkrihvntvnpgltktemakdveldsfggnvpisgwiqvdaiadavsflvnskn241itgtslvvdngisvSEQIDNo4木蘭假絲酵母CBS5659蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mnalvtggsrgigeataiqlaqegygvtlvargarqlnevlaklpvvrdgqthhiwqldl61sdpeaaaafrgaplpassydvlinnagvsslspfvaqsdevqktilavnllspialtkaf121vkaavgkprerpahiifissgaalrgfanmavysatkggldsfmrslarelgpqgihvns181vnpgftetemtattdlndypptpiegwiqpraiadailf1lksrnitgtnvtvdngitvSEQIDNo5RubrobacterxylanophilusDSM9941蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mlegkvavitgagsgigratalrfaregarvvvaelderrgeevvreilesggeavfvrt61dvsefeqveaaveraveeygtldvmfnnagighyapllehdpehydrvvrvnqygvyygi121laagrkmaelenpgviintasvyaflaspgvigyhaskgavkmmtqaaalelaphgirvv181aiapggvdtpiiqgykdmglgerlargqmrrrlqtpeqiagavvllateeadaingsvvm241tddgyaefkSEQIDNo6GeobacilluskaustophilusJCM12893(HTA426)蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mrIkgkaaiνtggasgigratairfaeegakvavsdineeggeetvrlirekggeaifvq61tdvadskqvsrlvqtavdafgglhilfnnagighsevrstdlseeewdrvinvnlkqvf1121gikyavpvmkqcgggaivntssllgikgkkyesaynaskagvilltknaaleygkfnirv181naiapgvidtniitpwkqderkwpiiskanalgrigtpeevanavlflasdeasfitgat241lsvdgggltfSEQIDNo7橙色綠屈撓菌DSMZ635(J-10-fl)蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1meppfigkvalvtgaaagigrasalafaregakvvvadvnveggeetialcralntdamf61vrcdvsqrdeverlialavdtfgridfahnnagiegvgamladypeevwdrvieinlkgv121wlcmkyeirhmlkqgggaivntssvaglagsrgvsayvaskhgivgitkaaaleyarngi181rvnaicpgtihtamidrftqgdpqllaqfaegepigrlgspeevanaviwlcsdkasfvt241gatlavdggrlaSEQIDNo8木3假絲酵母DSM70638蛋白質(zhì)序列羰某還原酶1mtstpnalitggsrgigasaaiklaqegysvtlasrdlekltevkdklpivrggqkhyvw61qldladveaassfkaaplpassydlfvsnagiaqfsptaehtnsewlnimtinlvspial121tkallqavsgrssenpfqivfissvaalrgvaqtavysaskagtdgfarslarelgpqgv181hvnvvnpgwtktdmtegvetpkdmpikgwiqpeaiadavvflarsknitganivvdngfs241tSEQIDNo9木蘭假絲酵母DSM70638蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mtttsnalvtggsrgigaasaiklaqegynvtlasrsvdklnevkaklpivqdgqkhyiw61eldladveaassfkgaplparsydvfvsnagvaafsptadhddkewqnllavnlsspial121tkallkdvserpvdkplqiiyissvaglhgaaqvavysaskagldgfmrsvarevgpkgi181hvnsinpgytktemtagiealpdlpikgwiepeaiadavlflaksknitgtnivvdngli241aSEQIDNo10木蘭假絲酵母ATCC12573蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1msyqmsssapsstslnalvtggsrgigeataiklaeegysvtiasrglkqleavkaklpi61vkqgqvhhvwqldlsdvdaaaafkgsplpasrydvlvsnagvaqfspfiehakqdwsqml121ainlaapialaqtfakaigdkprntpahivfvssnvslrgfpnigvytatkagidgfmrs181varelgpsginvnsvnpgptrtemtkgidvgtidmpikgwiepeaiadavlfvvksknit241gttvvvdngssaSEQIDNo11木蘭假絲酵母DSM70639蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mttsstssstssrslnalvtgasrgigeataiklasegysvtlasrsleqlkalkeklpv61vkqgqthhvwqldlsdvdaaatfkgsplpassydavisnagvaqfsplseharedwsqml121tinlaapialaqafvkaigdkkrdipaqivfvssnvvmrglpylgiytaskagidgfmrs181aarelgpkginvnsvnpgatqtemtkgvdvnaldlpikgwiqleavadavlfvvqsknit241gttivvdngsvaSEQIDNo12木蘭假絲酵母CBS2798蛋白質(zhì)序列羰某還原酶1mnalvtgasrgigeaiavklaedgysvtlasrslekleslkkglpvvkdgqahhvweldl61gdvdaassfkgaplpaeaydvfvsnagmakstlmvdhpidelqdminvnlvspialtqgl121vkalteskrdkpahivfmssirsfrgipngavysatksgldgfmrsiarelgpqgihvns181vcpgfvqtemtrkvdmeskkdqlpiagwiqpdaiadtvlffvksknitgqaivvdngitvSEQIDNo13CandidagropengoesseriMUCL29836蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mpsglnalvtggsrgigaaaatklaaagynvtvasrgvealnkvkaslpvvkegqqhhvw61qldvsdlaavsgfkgsplpaksydvvvvnagvanlsplaaqdddviqnivtvnllspial121vkslikaygegpratpahivfvssvaairgfpngavysstksaldgltrslakelgpqni181rvnsvnpgftrtelasgvdidavtqsspikgwvepeaigdailflatsnhitgtitvidn241gtsaSEQIDNo14Candidasp.MUCL40660蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1msssssstplnalvtgasrgigevislqlanegynvtlaarslddlnavkaklpivrdaq61khsvwpldisdidavtnfkgsplpaekydlfvsnagvvdfaplvhqspesisslfnvnli121apvaltkallkafgdsprkttthfiyvssvvalrgfpnvavysssksgldgfvrslaaev181aplnirvnsinpgptktemtasldveaftagnpikgwiypdaiadgvvylaksknitgit241lqvdngagiSEQIDNo15CandidavacciniiCBS7318蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1mrstpnalvtggsrgigaaaaiklaeagysvtlasrgldklnevkaklpvvkqgqehhvw61qldlsdvqaalefkgaplpaskydlfvsnagvatfsptaehddkdwqniiavnltspiai121tkalvkavgersndnpfqiaflssaaalrgvpqtavysatkagldgftrslakelgpkgi181hvnivhpgwtqtemtagvdeprdtpipgwiqpeaiaeaivylaksknitgtnivvdnglt241iSEQIDNo16木蘭假絲酵母CBS6396核酸序列羰基還原酶1atgaacgctctagtgaccggtggtagccgtggcattggcgaggcgatcgcgaccaagctg61gccgaagatggctacagcgtgacaatcgcctcgcgcggaatcgatcagctcaacaaggta121aaggctaaacttccggttgtgagggagggccagacccaccacgtgtggcagcttgatttg181agcgacgccgaggccgcgtcgtccttcaagggcgctcctttgccagcaagcagctacgat241gtccttgtcaacaacgccggagtaacggatccgagtcccattgcgaagcagtcggatagc301gagattcacaagctgtttagcgtgaatctgctgtcaccagttgctttgacaaagacgtac361gtccaggcggttaccggaaagcctcgtgagacgccagctcacattatttttatctcgtca421ggcgttgccattcgaggctacccaaacgtcgctgtatactcggctactaagagcgggctc481gacggtttcatgaggtctctggcgcgcgagcttggccccgagggcgtccatgtgaacact541gtcagcccgggtctcaccaaaaccgagatggccagcggcgtcagcctcgacgacttcccg601ccatcgccgattgggggctggatccagcccgaggccatcgctgatgcagtgaggtacctg661gtgaagtcgaagaacatcacaggcacgattctgtcagttgacaacggaatcacggtttaaSEQIDNo17木蘭假絲酵母TCM9448核酸序列羰基還原酶1mpstlnalvtggsrgigeatavklaeegygitlaardikklndvkaklptikqgqehhvw61gldladvqaalelkgaplpaskydllvanagvsahvptaehddahwqnvitinlssgial121tqalvraigersdeapfhivyvssiaalrgnpmsavysaskagldgfarsisrelgpkgi181hvntvhpgltktdmtvrmrpaedqpikgwvlpdaiadavvflaksknitgtnivvdngrv241νSEQIDNo18CandidageocharesMUCL29832蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgccttctactctgaacgctcttgtcactggcggcagtcgcggtattggcgaggctacc61gcagtgaagctcgccgaggagggctacggtatcacacttgctgcgcgcgatatcaaaaaa121ctgaatgacgtgaaggccaaactacccacaatcaagcagggtcaagagcaccacgtctgg181cagcttgacttggccgatgtgcaggctgcgcttgagctcaagggcgcaccactgcctgcg241agcaagtacgacctgttggtcgcgaatgcgggcgtttccgcacacgttcctacggccgag301cacgacgatgcgcactggcagaacgtcataactatcaacttgagctcgcagattgcgctc361acgcaggccctagttagggccattggcgagaggtctgatgaagcgcctttccacattgtg421tatgtgtcctcgatcgccgccctgcgcggtaaccccatgagcgcggtgtacagtgcctcg481aaggccggacttgatggatttgctcgttccatctctcgcgagctcggcccgaagggtatt541catgtgaatacggtgcacccgggactcacgaagacggacatgaccgttcgcatgcggcct601gctgaggaccagccgatcaagggctgggtactgcccgatgcaattgctgatgccgttgtg661ttcctcgcgaagtctaaaaacatcacgggcacaaacatcgttgtcgacaacggccgggtg721gtctaaSEQIDNo19木蘭假絲酵母CBS5659蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgaacgcgttagtgaccggcggaagccgcgggatcggcgaggccacggccatacagctg61gctcaggagggctacggtgtgacattggttgcgcgaggagcccgccagctcaatgaagtg121ttggcaaagctaccagttgtgagagacggacagacgcaccacatttggcagctagatctg181agcgatcctgaggcggccgctgccttcaggggtgctcctttgcccgccagcagctacgac241gtgctgatcaataacgcaggtgttagtagtctcagcccgttcgtcgcgcagtctgatgag301gtccagaaaactattttagcggtgaatcttttgtcgccaatcgcgttgacgaaggcgttc361gtgaaggcagcggtgggcaagccgcgtgagaggccggcgcatatcattttcatctcttcg421ggcgctgccctgcgcggtttcgcgaacatggcagtgtatagtgcaacgaaaggcggcctt481gacagtttcatgcgctcgctagctagagagctaggtccccagggcatccacgtcaactca541gtcaatccgggctttactgaaacagaaatgacagccactacagatttgaatgactacccc601ccgacccccattgagggctggattcagcctcgcgcaatcgccgacgctatacttttccta661ctgaagtccagaaacatcactggcacaaatgtgaccgtcgacaacggcatcactgtttgaSEQIDNo20RubrobacterxylanophilusDSM9941蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgctcgaggggaaggtcgcggtcatcacgggggccggcagcggcataggccgggccacc61gcgctcaggttcgcccgcgaBggggcccgggtggtcgtggcggagctcgacgagcggagg121ggggaggaggtcgtccgggagatcctcgagtccggcggggaggccgtcttcgtgaggacg181gacgtctcggagttcgagcaggttgaggccgccgtcgagcgcgccgtcgaggagtacggg241acgctggacgtcatgttcaacaacgccggcatcgggcactacgcccccctgctggagcac301gacccggagcactacgaccgggtggtccgggtgaaccagtacggcgtctactacgggata361ctcgccgccggcaggaagatggccgagctggagaaccccggcgtgatcatcaacaccgcc421tcggtctacgctttcctggcctcccccggtgtgatcggctatcacgcttccaagggggcg481gtgaagatgatgacccaggccgcagccctggagctcgccccccacggcatacgggtcgtc541gccatcgccccgggcggggtggacaccccgatcatccagggctacaaggacatgggcctc601ggtgagcggctggcccgcggccagatgcgtcgcaggctccagacccccgagcagatcgcc661ggcgccgtcgtcctgctcgccaccgaggaggcagacgccataaacggctcggtggtgatg721accgacgacggctacgcggagttcaagtaaSEQIDNo21GeobacilluskaustophilusJCM12893(HTA426)蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgaggctaaaaggaaaagcggcgattgtcaccggcggcgcgagcggcatcggccgggcg61acggcgattcgctttgcggaagaaggcgccaaagtggcggtgagcgacatcaatgaggaa121ggaggggaagaaacggtccgcctgattcgggaaaaaggaggggaggcgatttttgtccaa181acggacgtagccgattccaagcaagtgagccgccttgtccaaacggcggttgatgccttt241ggcggcctacatattctctttaacaatgccggcatcggccattcggaagtgcggagcacc301gacttgtctgaagaagagtgggaccgggtcatcaacgttaatttgaaaggagtgttcctt361ggcatcaaatacgcggtgcccgtgatgaagcaatgcggtggcggggccattgtcaacaca421tcgagcctgcttggaatcaaagggaaaaagtacgaatcggcctacaacgcctcgaaggcc481ggggtgattttgttgacgaaaaatgcagcattggaatatgggaagtttaacattcgcgtc541aatgccattgcaccgggggtcattgatacgaacatcatcacgccgtggaaacaagatgag601cgcaaatggccgatcatttcgaaagcgaacgccctcggccgcatcgggacgccagaggaa661gtggcgaacgcggtgttgtttttggcgtccgatgaagcgtcgtttatcaccggcgcgaca721ttgtcggtcgacggcggcgggctgacgttttagSEQIDNo22橙色綠屈撓菌DSMZ635(J-10-fl)蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atggagccacctttcattgggaaggttgcgctggtcaccggcgcagcagccggtattggt61cgtgcttcagcactggcgtttgcccgtgagggtgccaaggttgtcgttgctgatgtgaat121gtcgagggcggggaagagacgattgcgctgtgtcgggctttgaataccgatgcaatgttc181gtgcgttgtgatgtttcgcaacgcgatgaagtggagcgattaattgctctggcagttgac241acgttcggtcggatcgactttgcgcacaacaacgccgggattgaaggcgtgcaggcaatg301ctggccgattatcccgaagaggtctgggatcgggtgatcgagatcaacctcaaaggggtc361tggttgtgtatgaagtacgaaatccggcacatgctcaagcagggtggcggtgcgattgtg421aatacctcatcggtcgccggtctggccggatcacgtggcgtttcggcgtatgtagccagc481aagcacggtattgttggtattaccaaagcggcagcccttgagtatgcgcgtaacggtatt541cgtgtcaacgcaatctgtccaggtacgattcatactgcgatgatcgaccgctttacccag601ggtgatccccaactgcttgcccagttcgctgagggtgaaccgattggtcggctcggctcg661cctgaagaggtcgccaatgcggtgatctggctctgctcagataaggcttcgtttgtgacc721ggagcgacactggcggttgatggtggccgcctggcgtaaSEQIDNo23木蘭假絲酵母DSM70638蛋白質(zhì)序列羰某還原酶1atgacatctacacctaatgccctcatcacgggaggcagccgcggcattggcgcttccgcc61gccatcaaactggctcaagaagggtacagcgtcacgctggcgtcccgcgaccttgagaaa121cttactgaggtcaaggacaagctgccaatcgtgagaggtggacagaaacactacgtttgg181cagctcgatcttgccgatgtggaggctgcatcgtctttcaaggcggctcctctgccggcc241agcagctacgatttgtttgtttcgaacgccggaattgcccagttctcgcctacggcagag301catactaatagtgagtggctgaacattatgaccattaacttagtgtccccgattgccctg361acgaaggctcttttgcaggccgtttctgggaggtcgagcgagaacccgtttcagatcgtc421ttcatctcgtcggttgcagcactacgtggcgttgcacaaacggccgtctacagtgcgtcg481aaggctggtactgatggattcgcacgctcacttgctcgcgaactaggtcctcaaggtgtt541catgtgaacgtggtgaaccctggctggactaagacagacatgacggaaggagtcgaaacc601ccaaaggacatgcccattaagggctggatccagcctgaggcaattgctgatgctgtagta661ttccttgcgaggtcgaaaaacattaccggcgcgaatattgtagtggacaatggtttctcg721acgtaaSEQIDNo24木蘭假絲酵母DSM70638蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgacgactacttcaaacgcgcttgtcactggaggcagccgcggcattggcgctgcctcc61gccattaagctggctcaggagggctacaatgttacgctggcctctcgcagtgttgataaa121ctgaatgaagtaaaggcgaaactcccaattgtacaggacgggcagaagcactacatttgg181gaactcgatctggctgatgtggaagctgcttcgtcgttcaagggtgctcctttgcctgct241cgcagctacgacgtctttgtttcgaacgcgggcgtcgctgcgttctcgcccacagccgac301cacgatgataaggagtggcagaacttgcttgccgtgaacttgtcgtcgcccattgccctc361acgaaggccctcttgaaggatgtctccgaaaggcctgtggacaagccactgcagattatc421tacatttcgtcggtggccggcttgcatggcgccgcgcaggtcgccgtgtacagtgcatct481aaggccggtcttgatggttttatgcgctccgtcgcccgtgaggtgggcccgaagggcatc541catgtgaactccatcaaccccggatacacgaagactgaaatgaccgcgggcattgaagcc601cttcctgatttgcctatcaaggggtggatcgagcccgaggcaattgctgacgcggttctg661tttctggcaaagtccaagaatatcaccggcacaaacattgtggtcgacaatggcttgatt721gcttaaSEQIDNo25木蘭假絲酵母ATCC12573蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgtcttatcaaatgtcttcttctgctccatcctccacctccctgaatgcgcttgtcacg61ggcggcagccgcggcattggcgaagccactgccattaagctcgccgaggagggctacagc121gtcacgattgcgtctcgcggccttaagcagctcgaggctgtgaaggccaaactacccatt181gtgaagcagggacaggttcaccacgtgtggcagcttgatctcagtgatgtcgacgctgcg241gccgccttcaaagggtcgccgctacctgccagccgctacgacgtgctcgtcagcaatgct301ggcgtggcccagtttagcccgttcatcgagcatgcgaagcaggactggtcgcagatgctt361gccatcaatctggcggcacccattgcgctggcccagacatttgctaaggccattggcgac421aagccgcgcaacacaccggcccacattgtgtttgtctcgtcgaacgtctcgttgcgaggc481ttcccgaacatcggcgtctacacggccacgaaagccggcattgacggcttcatgcgctcg541gtcgcacgcgaactggggcccagcggcattaacgtgaactccgtgaaccccgggcccacg601cggacggagatgacgaagggcattgacgtcggcacgatcgatatgccgatcaagggctgg661atcgagcccgaggcgattgcggatgccgtgctcttcgtggtcaagtcgaagaacattacg721ggcacgaccgttgttgtcgacaacggctcctccgcttgaSEQIDNo26木3假絲酵母DSM70639蛋白質(zhì)序列羰某還原酶1atgaccacctcctccacctcctcctccacctcctcccgctctctaaacgctcttgtcacc61ggcgctagccgcggcattggcgaggccactgcaatcaagctagcatctgagggatacagc121gttacgcttgcatctcgtagcctcgagcagctcaaggctttgaaggagaagttgcccgtt181gtgaagcagggccagacgcaccacgtctggcagctcgacttgagcgacgtcgacgccgct241gccacgttcaagggctcccccttgccggccagcagctacgacgccgtcatcagcaatgcc301ggtgttgctcagttctctccgttgtcggaacacgccagggaggactggtctcagatgctg361acgatcaacctcgcggctcccattgccctcgcgcaggcgtttgtgaaggccattggcgac421aagaagcgcgacatcccggcccaaattgtctttgtttcgtcgaatgtcgtgatgcgtggc481ctcccttacctcggcatctacacggcttcgaaggctggtatcgatggcttcatgcgctcg541gccgcccgcgagctgggacccaagggtatcaacgtgaactcagtaaacccgggcgccacg601cagaccgagatgacgaagggcgttgatgtcaacgccctcgacctgccgatcaagggatgg661attcagctcgaggctgtcgcggacgccgtgctcttcgtggtccagtcgaagaacattacc721ggcacgacgattgttgtcgacaacggctccgtcgcttgaSEQIDNo27木蘭假絲酵母CBS2798蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgaatgccttagttactggtgcgagccgcgggatcggcgaagcaattgcggtgaagctg61gccgaggacgggtacagcgtgacactggcctcgcgctctcttgaaaagctggagtcgctc121aagaaagggctgccggtcgtgaaggacggccaagcacatcatgtatgggagcttgatctc181ggtgatgttgatgccgcgtcatccttcaagggggcgcctctgcctgccgaggcctatgac241gtgttcgtcagtaacgctggaatggccaaatccaccttgatggtagaccatcccattgac301gagctgcaggacatgattaacgtgaatcttgtgtcgccaattgcactcacacagggcctt361gtcaaggctctgacagaatctaagcgagacaagcctgcgcatatcgtgttcatgtcgtcc421atccgctcgttcaggggcattccgaatggcgcggtgtacagcgccacaaagagtggtctt481gacggattcatgcgatccattgcgcgagagctgggccctcagggcatccacgtcaactct541gtgtgccccggattcgtgcaaacggaaatgacgcgcaaggttgatatggagtcgaagaaa601gaccagctacccatcgccggctggatccagcccgacgcgattgctgacaccgttctgttt661tttgtgaaatcgaagaacatcacgggccaggcaattgtcgttgacaatggcatcactgtc721tgaSEQIDNo28CandidagropengoesseriMUCL29836蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgccctctggactcaatgctcttgtcactggcggcagccgcggaatcggcgctgccgct61gctaccaagctcgccgctgcaggatacaacgtcacggttgcgtcccgcggggtcgaggct121ctgaataaggtcaaggcctccttgcctgttgtcaaggagggccagcagcaccatgtctgg181cagctcgacgtaagcgatctcgcagcggtgtctggcttcaagggatctccgctgccggct241aagagctacgatgttgttgttgttaacgccggcgtcgcgaacctgagcccgctggctgcc301caggacgacgacgtcattcagaacattgtgaccgtgaacctgctgtcgccgattgcgctg361gtgaagtcgctgatcaaggcgtacggcgagggtcctcgcgcgacaccggcccacattgtg421tttgtgtcgtcggtggccgcgatccgtgggttccccaacggcgccgtctatagctcgacg481aagagtgcgctcgacgggctgacgcggtcgctggcgaaggagctggggccccagaacatc541cgggtcaactccgtgaaccccggcttcacgaggaccgagctggccagcggcgtcgacatt601gacgccgtgacgcagagctctccgatcaaggggtgggttgagccggaggcgattggcgat661gcgattttgtttctcgcgacgtcgaaccacatcacgggcacgatcaccgtcatcgacaac721ggcactagcgcgtagSEQIDNo29假絲酵母屬物種MUCL40660蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgtcctcctcttcctcctcgactcctctcaacgctctcgtcaccggtgccagccgcggc61atcggtgaggtcatctctctccagctcgccaacgagggctacaatgttaccctcgcagcc121cgcagtcttgacgacctcaatgcggtgaaggctaagctccctatcgtaagggatgcccag181aagcactctgtctggccgctcgacattagcgatatcgacgccgtgacgaacttcaaggga241tcgcccctgccggccgagaagtacgatctgttcgtcagcaacgccggcgtggtcgacttc301gctccgcttgtccaccagagccccgagagcatcagcagcctgttcaatgtgaacctaatc361gcgcctgttgccttgacaaaagctcttcttaaggcgttcggtgacagccctcgcaagact421acgactcactttatctacgtttcgtccgttgttgccctccgcggcttccccaatgttgcg481gtttacagctcctccaagagcggcctcgacgggtttgtgcgctcccttgccgccgaggtt541gctccgctcaacatccgcgtcaactccattaacccaggccctaccaagactgagatgacc601gcttccctggatgttgaggcgtttactgcgggcaaccccatcaagggttggatttacccc661gatgctattgctgatggagtggtgtacctggcgaagtcgaagaacattactggtatcacc721ctccaagtcgacaacggcgccggcatctaaSEQIDNo30CandidavacciniiCBS7318蛋白質(zhì)序列羰基還原酶1atgaggtcgacacctaacgcccttgtgactggcggcagccgcggcattggcgcggccgct61gcaattaaactcgccgaggcaggctacagcgtgacgctcgcgtcgcgcggtctcgacaag121ctcaacgaggtgaaggccaagcttcctgtcgtgaagcagggccaggagcaccatgtatgg181cagcttgatctcagcgacgtgcaggccgcgctcgagttcaagggcgcaccgctgcccgcg241agtaagtacgatttgtttgtctcgaacgccggcgtggctactttctcgccaacggctgag301catgacgacaaggactggcagaacattattgccgtgaacttgacatcgcccattgccatt361acgaaggcgctcgttaaggccgttggcgagcgctcaaacgataacccgtttcagatcgcg421ttcctgtcatcggcggccgccctgcgcggtgtgccgcagaccgctgtttacagcgctacg481aaggccggcctcgacggcttcacgcgctcgctcgccaaggagctcggcccaaagggcatc541catgtgaacatcgtacaccctggatggacgcagaccgagatgactgcgggtgtagatgag601cctagggatacgcccatcccgggctggatccagccggaagccatcgccgaggccattgtg661tatctcgcgaagtcaaagaacatcacgggaacgaacatcgttgtcgacaacggcctgact721atttaaSEQIDNo31氨基酸序列部分nalvtgasrgigSEQIDNo32氨基酸序列部分nalvtggsrgigSEQIDNo33氨基酸序列部分gysvtSEQIDNo34氨基酸序列部分gynvtSEQIDNo35氨基酸序列部分gygitlSEQIDNo51氨基酸序列部分gygvtSEQIDNo36氨基酸序列部分vlaklpSEQIDNo37氨基酸序列部分vkaklpSEQIDNo38氨基酸序列部分fkgaplpaSEQIDNo39氨基酸序列部分frgaplpaSEQIDNo40氨基酸序列部分IkgaplpaSEQIDNo41氨基酸序列部分spialtkSEQIDNo42氨基酸序列部分spvaltkSEQIDNo43氨基酸序列部分sqialtqSEQIDNo44氨基酸序列部分avysaskSEQIDNo45氨基酸序列部分avysatkSEQIDNo46氨基酸序列部分gvysatkSEQIDNo47氨基酸序列部分pikgwiSEQIDNo48氨基酸序列部分piegwiSEQIDNo49氨基酸序列部分piggwiSEQIDNo50氨基酸序列部分pisgwiSEQIDNo52氨基酸序列部分fkaaplpaSEQIDNo53氨基酸序列部分fkgsplpaSEQIDNo54氨基酸序列部分gigratSEQIDNo55氨基酸序列部分gigrasaSEQIDNo56氨基酸序列部分gigretSEQIDNo57氨基酸序列部分nnagigSEQIDNo58氨基酸序列部分nnagiegSEQIDNo59氨基酸序列部分irvvaiapgSEQIDNo60氨基酸序列部分irvnaiapgSEQIDNo61氨基酸序列部分irvnaicpgSEQIDNo62氨基酸序列部分irvvgiapgSEQIDNo63氨基酸序列部分peqiagavSEQIDNo64氨基酸序列部分peaianavSEQIDNo65氨基酸序列部分peevanav.SEQIDNo66氨基酸序列部分peaianavSEQIDNo67GGGAATTCCATATGATGCTCGAGGGGAAGGTCGSEQIDNo68CACATGCATGCGAATGCTCGAGGGGAAGGTCSEQIDNo69CCCAAGCTTATTACTTGAACTCCGCGTAGCCGTCSEQIDNo70RubrobacterxylanophilusDSM9941核酸序列羰基還原酶半合成latgctggaaggtaaagtggcagtcatcaccggtgcaggcagcggcattgggcgtgccact6lgcgctgcgttttgcgcgtgaaggcgctcgcgtcgttgtggccgagctggatgaacgtcgc12lggtgaggaagttgtacgtgagattctggaatctggcggggaggccgtcttcgtgaggacg18lgacgtctcggagttcgagcaggttgaggccgccgtcgagcgcgccgtcgaggagtacggg241acgctggacgtcatgttcaacaacgccggcatcgggcactacgcccccctgctggagcac30lgacccggagcactacgaccgggtggtccgggtgaaccagtacggcgtctactacgggata36lctcgccgccggcaggaagatggccgagctggagaaccccggcgtgatcatCaaCaCCgCC42ltcggtctacgctttcctggcctcccccggtgtgatcggctatcacgcttccaagggggcg]48lgtgaagatgatgacccaggccgcagccctggagctcgccccccacggcatacgggtcgtc541gccatcgccccgggcggggtggacaccccgatcatccagggctacaaggacatgggcctc601ggtgagcggctggcccgcggccagatgcgtcgcaggctccagacccccgagcagatcgcc66lggcgccgtcgtcctgctcgccaccgaggaggcagacgccataaacggctcggtggtgatg72laccgacgacggctacgcggagttcaagtaaSEQIDNo7lCCTAGCTAGCATGCTGGAAGGTAAAGTGGCSEQIDNo72CCTTTRCCTGCIuGCAGC／AYGSEQIDNo73GGCTGGATCCAGCCCTTRA／SGGSEQIDNo74GGAATTCCATATGATGAACGCTCTAGTGACCGGTGGTAGSEQIDNo75CCCAAGCTTATTAAACCGTGATTCCGTTGTCAACTGAC權(quán)利要求將通式I酮化合物對映選擇性酶還原為通式II羥基化合物(R，S-化合物)的方法，其中，R可以表示氨基官能的任何保護(hù)基團(tuán)(叔丁氧羰基(BOC)、芐氧羰基、9-芴甲氧羰基)且X＝-Cl、-CN、-OH、Br、F，其中R和X具有與式I相同的含義，所述的酮化合物在輔因子的存在下被氧化還原酶還原，其特征在于通過氧化通式RXRYCHOH的仲醇持續(xù)地再生形成的氧化的輔因子NAD或NADP，其中RX，RY獨立地表示氫、支鏈或非支鏈C1-C8-烷基并且C總≥3。FPA00001064678700011.tif,FPA00001064678700012.tif2.將通式I酮化合物對映選擇性酶還原為通式II羥基化合物(R，S-化合物)的方法，<image>imageseeoriginaldocumentpage2</image>(I)其中，R可以表示氨基官能的任何保護(hù)基團(tuán)(叔丁氧羰基(BOC)、芐氧羰基、9-芴甲氧羰基)且X=-Cl、-CN、-0H、Br、F，<image>imageseeoriginaldocumentpage2</image>(II)其中R和X具有與式I相同的含義，所述的酮化合物在輔因子的存在下被氧化還原酶還原，其特征在于所述氧化還原酶a)包含根據(jù)SEQIDNO1,SEQIDNo2，SEQIDNo3或SEQIDNo4的氨基酸序列，或b)包含這樣的氨基酸序列，其中至少65%的所述氨基酸與氨基酸序列SEQIDNO:1，SEQIDNo2或SEQIDNo3,SEQIDNo4的那些相同，或c)包含這樣的氨基酸序列，其中至少72%的所述氨基酸與氨基酸序列SEQIDNO:1，SEQIDNo2或SEQIDNo3,SEQIDNo4的那些相同，或d)由核酸序列SEQIDNO16,SEQIDNo17，SEQIDNo18，SEQIDNo19編碼，或e)由在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO16,SEQIDNo17，SEQIDNo18，SEQIDNo19雜交的核酸序列編碼，或f)具有220至260個氨基酸的長度，并且包含一個或若干個選自序列SEQIDN0:31至SEQIDNO51的部分序列，并且優(yōu)先將式I化合物還原為式II化合物。3.將通式I酮化合物對映選擇性酶還原為通式III羥基化合物(S，S-化合物)的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，R可以表示氨基官能的任何保護(hù)基團(tuán)(叔丁氧羰基(BOC)、芐氧羰基、9-芴甲氧羰基)且X=-Cl、-CN、-0H、Br、F，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中R和X具有與式I相同的含義，所述的酮化合物在輔因子的存在下被氧化還原酶還原，其特征在于通過氧化通式RxRyCHOH的仲醇持續(xù)地再生形成的氧化的輔因子NAD或NADP，其中Rx，Ry獨立地表示氫、支鏈或非支鏈C1-C8-烷基并且彡3。4.將通式I酮化合物對映選擇性酶還原為通式III羥基化合物(S，S-化合物)的方法，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，R可以表示氨基官能的任何保護(hù)基團(tuán)(叔丁氧羰基、芐氧羰基、9-芴甲氧羰基)且X=-Cl、-CN、-0H、Br、F，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中R和X具有與式I相同的含義，所述的酮化合物在輔因子的存在下被氧化還原酶還原，其特征在于所述氧化還原酶a)包含根據(jù)SEQIDNO:5，SEQIDNo6，SEQIDNo7,SEQIDNo8，SEQIDNo9,SEQIDNolO,SEQIDNoll,SEQIDNol2,SEQIDNol3,SEQIDNol4,SEQIDNol5的氨基酸序列；或b)包含這樣的氨基酸序列，其中至少65%的所述氨基酸與根據(jù)SEQIDNO:5，SEQIDNo6，SEQIDNo7,SEQIDNo8，SEQIDNo9,SEQIDNo10,SEQIDNoll,SEQIDNol2,SEQIDNol3,SEQIDNol4,SEQIDNol5的氨基酸序列的那些相同，或c)由核酸序列SEQIDNO:20，SEQIDNo21，SEQIDNo22,SEQIDNo23，SEQIDNo24，SEQIDNo25,SEQIDNo26,SEQIDNo27,SEQIDNo28,SEQIDNo29或SEQIDNo30編碼，或d)由在嚴(yán)格條件下與SEQIDNO20,SEQIDNo21，SEQIDNo22，SEQIDNo23，SEQIDNo24,SEQIDNo25,SEQIDNo26,SEQIDNo27,SEQIDNo28,SEQIDNo29或SEQIDNo30雜交的核酸序列編碼；或e)具有220至260個氨基酸的長度，并且包含一個或若干個選自序列SEQIDN0:31至SEQIDNO66的部分序列，并且優(yōu)先將式I化合物還原為式III化合物。5.權(quán)利要求2或4任一項的方法，其特征在于持續(xù)地再生形成的氧化的輔因子NAD或NADP。6.權(quán)利要求2、4或5任一項的方法，其特征在于通過氧化通式RxRyCHOH的仲醇持續(xù)地再生形成的氧化的輔因子NAD或NADP。7.權(quán)利要求1-6任一項的方法，其特征在于將2-丙醇、2-丁醇、2-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-庚醇或2-辛醇分別用作共底物或仲醇。8.權(quán)利要求1-7任一項的方法，其特征在于添加附加的氧化還原酶/脫氫酶用于輔因子的再生。9.權(quán)利要求1-8任一項的方法，其特征在于式I化合物以>20g/l，優(yōu)選>50g/l且特別優(yōu)選>100g/l的濃度存在于反應(yīng)批次中。10.權(quán)利要求1-9任一項的方法，其特征在于TTN(總轉(zhuǎn)化數(shù)=還原的式I化合物mol/所使用的輔因子mol)彡IO3011.權(quán)利要求1-10任一項的方法，其特征在于其在水有機(jī)兩相系統(tǒng)中進(jìn)行。12.權(quán)利要求1-11任一項的方法，其特征在于還應(yīng)用了有機(jī)溶劑，例如，諸如二乙醚、叔丁基甲基醚、二異丙基醚、二丁基醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、庚烷、己烷或環(huán)己烷。13.權(quán)利要求1-11任一項的方法，其特征在于應(yīng)用式IV的特定化合物作為酮化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>14.氨基酸序列SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO11，SEQIDN0:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:14禾口SEQIDNO:15的多月太。15.與氨基酸序列SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO11，SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO:14禾口SEQIDNO15之一至少65%、優(yōu)選70%以及特別優(yōu)選超過75%相同的多肽。16.可通過替換、插入、缺失或添加至少一個氨基酸來源于序列SEQIDNO1,SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:11，SEQIDNO:12，SEQIDNO:13，SEQIDNO14和SEQIDNO15的多肽。17.由核酸序列SEQIDNO16,SEQIDNO17,SEQIDNO18,SEQIDNO19,SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:28，SEQIDNO29或SEQIDNO30編碼的多肽。18.由在嚴(yán)格條件下與序列SEQIDNO:16，SEQIDNO:17，SEQIDNO:18，SEQIDNO19，SEQIDNO:26，SEQIDNO:27，SEQIDNO:28，SEQIDNO29或SEQIDNO30之一雜交的核酸序列編碼的多肽。19.具有220至260個氨基酸的長度，包含一個或若干個選自序列SEQIDN0:31至SEQIDNO51的部分序列，并且優(yōu)先將式I化合物還原為式II化合物的多肽。全文摘要對映選擇性酶還原通式I酮化合物的方法，其中，R可以表示氨基官能的任何保護(hù)基團(tuán)(叔丁氧羰基(BOC)、芐氧羰基、9-芴甲氧羰基)且X＝-Cl、-CN、-OH、Br、F。文檔編號C12P7/04GK101809158SQ200880108175公開日2010年8月18日申請日期2008年9月22日優(yōu)先權(quán)日2007年9月27日發(fā)明者A·古普塔,A·申茨徹爾,M·博布科瓦申請人:Iep有限責(zé)任公司