專利名稱：大豆肽-鈣復合物的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于保健食品或食品添加劑制備技術領域，特別涉及大豆深加工技術 的一種大豆肽一鈣復合物的制備方法。
技術背景鈣是人體必需的營養(yǎng)元素，為保證人體健康和增強體質，通過食物成分科學 合理地補鈣，并促進人體對鈣的吸收是十分重要的。目前市場上的補鈣產品有無 機鈣、有機酸鈣、氨基酸螯合鈣、酪蛋白磷酸肽鈣等。無機鈣、有機酸鈣的牽丐吸收率不足40%，氨基酸螯合鈣和來源于牛奶的酪蛋白磷酸肽鈣吸收率高，但生產 成本也高，大大限制了其應用。大豆含有豐富的蛋白質，研究發(fā)現(xiàn)大豆蛋白中含 有大量谷氨酸和天冬氨酸(含量〉20%)的羧酸基團能夠與鈣結合，使攝入的鈣 離子在小腸內處于可溶性狀態(tài)或攜帶鈣離子直接進入小腸細胞而促進鈣的吸收。在目前的研究中，日本曾采用離子交換的方法去除植酸，得到能與鈣結合并 促進鈣吸收的大豆分離蛋白，但該方法會增加生產成本，同時鈣的加入也會導致 大豆蛋白形成不可溶性沉淀。國內相關研究得到的大豆肽未脫酰胺，與本發(fā)明的 大豆肽-鈣復合物相比鈣含量明顯降低。本發(fā)明利用外源酶體外酶解大豆分離蛋 白得到低分子量的脫酰胺大豆肽，與同組成的氨基酸和蛋白質相比具有吸收快速 的特點，同時在酶解后加入過量的鈣直接去除植酸，與離子交換的方法相比大大 降低了生產成本，得到的大豆肽-鈣復合物具有溶解性好、分子量低、鈣結合量 高、易吸收的特點。發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在于，以 低溫脫脂豆粕或大豆分離蛋白為原料，采用蛋白酶脫酰胺酶酶解、酶滅活、大豆 肽與鈣螯合、干燥制粉而得到大豆肽一鈣復合物。該方法是一種生產成本低，植 酸含量低且鈣結合量高，對酸堿處理、熱處理穩(wěn)定，生物利用率高的可溶性大豆 肽-鈣復合物的制備方法。
所述大豆肽-鈣復合物的制備工藝步驟如下1) 蛋白酶酶解將大豆蛋白分散在水中充分攪拌10 15min，將pH調至2 4， 在溫度為45-55"條件下，加入蛋白酶保溫水解40-60min，在4， OOOrpm轉速下 離心20min，收集上清液獲得大豆肽溶液；2) 脫酰胺將大豆肽溶液pH調到6 8，在溫度為45-55。C條件下，加入脫 酰胺酶進行脫酰胺120-180min，獲得脫酰胺的大豆肽溶液； '3) 調制可溶性大豆肽-鈣復合物將脫酰胺的大豆肽溶液，在25 45"C溫度 下，加入鈣離子溶液，反應充分后，在6，000卬m轉速下離心15min，收集上清， 干燥制粉獲得可溶性大豆肽-鈣復合物。所述大豆蛋白為脫脂豆粕調制、或用商業(yè)用大豆分離蛋白，蛋白含量在85 %以上。所述大豆蛋白濃度為1% 5%。 (w/v)所述的蛋白酶為蛋白酶M (protease M，天野制藥)，加入量為底物的0. 5wt % 1. 5wt%。所述脫酰胺酶為谷氨酰胺酶或天冬酰胺酶或它們的混合物。(glutaminase， 天野制藥)，加入量為底物的l wt% 3 wt%。所述加入脫酰胺大豆肽溶液中的CaCl2溶液濃度為lmol/L，比例為30: 1 (v/v)，反應溫度為25 37°C、反應時間為10 40min，離心(4， OOOrpm， 20min)， 取上清干燥，得大豆肽一鈣復合物。本發(fā)明的有益效果是根據(jù)以上可溶性大豆肽-鈣復合物制造方法生產的可溶 性大豆肽鈣復合物，由甲均分子量為24000Da、 14400Da和9330Da的三個組分組 成-,肽含量(以蛋白計)達到80%;鈣結合量達到110mg/g以卜.；植酸含量小于0.55%;在pH 3—10內性質穩(wěn)定；固態(tài)為淡黃色粉末；易溶于水。可以直接作為高效補鈣產品，或作為基料添加于保健品或普通食品。該方法生產的可溶性大豆肽-鈣復合物生產成本低、工藝簡單、生物利用率 高。該方法為大豆蛋白深加工領域開辟了新的方向。
具體實施例方式
本發(fā)明提供一種大豆肽一鈣復合物的制備方法。該方法以低溫脫脂豆粕或大 豆分離蛋白為原料，采用蛋白酶脫酰胺酶酶解、酶滅活、大豆肽與鈣螯合、干燥 制粉而得到大豆肽一鈣復合物。該方法是一種生產成本低，植酸含量低且鈣結合 量高，對酸堿處理、熱處理穩(wěn)定，生物利用率高的可溶性大豆肽-l丐'復合物的制 備方法。下面列舉實施例對本發(fā)明予以進一步說明。實施例1、以脫脂豆粕為原料生產可溶性大豆肽-鈣復合物的方法脫脂豆粕與水以l: 10 (w/v)的比例在pH為7. 0 8. 0條件下提取90min， 離心(4，000rpm ， 20min)除去豆渣得到蛋白質凝乳，加5倍體積水后攪拌分散， 離心(l，OOOrpm， 5min)'棄去上層的乳清(重復2次);將得到蛋白質凝乳按5 % (m/v)比例加水，強力攪拌使凝乳均勻分散，調pH至3.0， 5(TC保溫，加入 蛋白酶M (酶與底物比為1/100)水解60min，水解結束后加熱到85°C， 10min 滅酶，冷卻，離心(4000rpm ， 20min)，收集上清液，將大豆肽溶液pH調到7. 0， 溫度在5(TC條件下，加入谷酰胺酶(酶與底物比為1/50)進行脫酰胺180min， 酶解結束后加熱到85t:， 10min滅酶，獲得脫酰胺的大豆肽溶液。按30: 1 (v/v) 的比例加入lmol/L CaCL溶液，在37"C條件下反應30分鐘，離心(4， OOOrpm， 20min)、取上清，冷凍干燥，即得大豆肽一鈣復合物。實施例2、以脫脂豆粕為原料生產可溶性大豆肽一鈣復合物的方法 脫脂豆粕與水以1: 10 (w/v)的比例在pH為7. 0 8. 0條件下提取90min， 離心(4， OOOrpm ， 20min)除去豆渣得到蛋白質凝乳，加5倍體積水后攪拌分散， 離心(l，OOOrpm， 5min)，棄去上層的乳清(重復2次)，得到蛋白質凝乳按5% (m,/v)比例加水，用均質機攪拌至均勻分散液，pH調至3.0， 45°〇保溫，加入 蛋白酶M (酶與底物比為1/100)在45i:保溫水解60min，水解結束后加熱到85 。C， 10min滅酶，冷卻，離心(4000rpm ， 20min)，收集上清液，將大豆肽溶液 pH調到7.0，溫度在55。C條件下，加入天冬酰胺酶(酶與底物比為1/50)進行 脫酰胺180min，酶解結束后加熱到85'C， 10min滅酶，獲得脫酰胺的大豆肽溶液。 按30: 1 (v/v)的比例加入lmol/LCaCl,溶液，在25"條件下反應30分鐘，離 心(4，000rpm， 20min)、取上清，冷凍干燥，即得大豆肽一鈣復合物。
實施例3、以商用大豆分離蛋白為原料生產可溶性大豆肽一鈣復合物的方法將大豆分離蛋白加10倍體積水用均質機攪拌至均勻分散液，pH調至3. 0， 55。C保溫，加A蛋白酶M (酶與底物比為1/100)， 55。C保溫水解60min，水解結 束后加熱到85。C， 10min滅酶，冷卻，離心(4， OOOrpm ， 20min)，收集上清液， 將大豆肽溶液pH調到7.0，溫度在5(TC條件下，加入谷氨酰胺酶(酶與底物比 為1/50)進行脫酰胺180min，獲得脫酰胺的大豆肽溶液。按30: 1 (v/v)的比 例加入lmol/L CaCl2溶液，在30。C條件下反應30分鐘，離心(4， OOOrpm， 20min)、 取上清，冷凍干燥，即得大豆肽一鈣復合物。實施例4、以商用大豆分離蛋白為原料生產可溶性大豆肽一鈣復合物的方法 將大豆分離蛋白加10倍體積水用均質機攪拌至均勻分散液，pH調至3. 0， 45。C保溫，加入蛋白酶M (酶與底物比為1/100)， 45。C保溫水解60min，水解結 束后加熱到85"C， 10min滅酶，冷卻，離心(4， OOOrpm ， 20min)，收集上清液， 將大豆肽溶液pH調到7.0，溫度在45'C條件下，加入天冬酰胺酶(酶與底物比 為1/50)進行脫酰胺180min，獲得脫酰胺的大豆肽溶液。按30: 1 (v/v)的比 例加入lmol/L CaCl2溶液，在28。C條件下反應30分鐘，離心(4， OOO卬m， 20min)、 取上清，冷凍干燥，即得大豆肽一鈣復合物。實施例5、以商用大豆分離蛋白為原料生產可溶性大豆肽一鈣復合物的方法 將大豆分離蛋白加10倍體積水用均質機攪拌至均勻分散液，pH調至3. 0， 55t:保溫，加入蛋白酶M (酶與底物比為1/100)， 55°〇保溫水解60min，水解結 束后加熱到85。C， 10min滅酶，冷卻，離心(4， OOOrpm ， 20min)，收集上清液， 將大豆肽溶液pH調到7. 0，溫度在45。C條件下，加入谷氨酰胺酶和天冬酰胺酶(1:1)(酶與底物比為1/50)進行脫酰胺180min，獲得脫酰胺的大豆肽溶液。 按30: 1的比例加入lmol/L CaCl2溶液，在25。C條件下反應30分鐘，離心 (4，000rpm， 20min)、取上清，冷凍干燥，即得大豆肽一韓復合物。
權利要求
1.一種大豆肽-鈣復合物的制備方法，其特征在于，以低溫脫脂豆粕或大豆分離蛋白為原料，采用蛋白酶脫酰胺酶酶解、酶滅活、大豆肽與鈣螯合、干燥制粉而得到大豆肽-鈣復合物。
2. 根據(jù)權利要求1所述大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在于，所述制備大豆肽-鈣復合物的生產工藝，包括以下步驟(1)將低溫脫脂豆粕與水按1: 10的比例溶解60分鐘，pH 7.0—8.0、離 心，取上清液調pH 4.5酸沉，除去上清后用水分散，并進一步調pH 3.0-4.0， 使其溶解，分離，制得大豆蛋白，其純度在85%-90%;2) 蛋白酶酶解將大豆蛋白分散在水中充分攪拌10 15min，將pH調至2 4，在溫度為45-55T:條件下，加入蛋白酶保溫水解40-60min，在4， OOOrpm轉速 下離心20min，收集上清液獲得大豆肽溶液；3) 脫酰胺將大豆肽溶液pH調到6 8，在溫度為45-55。C條件下，加入脫 酰胺酶進行脫酰胺120-180min，獲得脫酰胺的大豆肽溶液；4) 調制可溶性大豆肽-鈣復合物將脫酰胺的大豆肽溶液，在25 45。C溫度 下，加入鈣離子溶液，反應充分后，在6000rpm轉速下離心15min，收集上清， 干燥制粉獲得可溶性大豆肽-鈣復合物。
3. 根據(jù)權利2要求所述人豆肽一轉復合物的制備方法，其特征在于，所述蛋白 酶為蛋白酶M (protease M，從天野制藥可得)，加入量為底物的0. 5wt% 1. 5wt %。
4. 根據(jù)權利2要求所述大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在于所述脫 酰胺酶為谷氨酰胺酶或天冬酰胺酶或它們的混合物(glutaminase，從天野制藥 可得)，加入量為底物的l wt% 3 wt%。
5. 根據(jù)權利2要求所述大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在于上述步 驟(2)的酶解是在大豆蛋白溶液的w/v濃度為2-5%，酶解時加入蛋白酶的重量 均為溶液中大豆蛋白重量的1-3%。
6. 根據(jù)權利2要求所述大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在于上述步驟(3)的酶解是在在大豆蛋白溶液的w/v濃度為2-5%，酶解時，加入脫酰胺酶 的重量均為溶液中大豆蛋白重量的0. 5-2%。
7. 根據(jù)權利要求1-6任意一項所述大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在 于得到的大豆肽的水解度為20-30%。
8. 根據(jù)權利1要求所述大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在于上述步 驟(4)在脫酰胺的大豆肽溶液中加入鈣離子溶液，是以體積比30 : 1的比例加 入lmol/L CaCL溶液，在25—37T條件下反應10 40min分鐘，離心(4， 000rpm， 20min)，取上清干燥，得大豆肽一鈣復合物。
9. 根據(jù)權利l一7要求所述大豆肽一鈣復合物的制備方法，其特征在于，所 得到的大豆肽一鈣復合物的植酸含量小于0. 55%，鈣結合量為1 1 0 m g / g以 上。
全文摘要
本發(fā)明公開了屬于保健食品或食品添加劑制備技術領域，特別涉及大豆深加工技術的一種大豆肽—鈣復合物的制備方法。本發(fā)明以低溫脫脂豆粕或大豆分離蛋白為原料，采用蛋白酶和脫酰胺酶酶解、酶滅活、大豆肽與鈣螯合、干燥制粉等工藝，提供一種鈣結合量高的大豆肽—鈣復合物產品。大豆肽—鈣復合物是一種淡黃色粉末，性質穩(wěn)定、鈣結合量為110mg/g。本發(fā)明的大豆肽—鈣復合物生產成本低、工藝簡單、促進鈣吸收的效果明顯，可以直接作為補鈣產品，或作為基料添加于保健品或普通食品，應用廣泛。
文檔編號A23L1/29GK101161114SQ20071017675
公開日2008年4月16日 申請日期2007年11月2日 優(yōu)先權日2007年11月2日
發(fā)明者包小蘭, 瑩 呂, 郭順堂 申請人:中國農業(yè)大學