專利名稱：：一種耐熱植酸酶的產(chǎn)生菌的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及微生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)是一種耐熱植酸酶產(chǎn)生菌。技術(shù)背景植酸(phytate，Phyticacid,IP6)又名肌醇六磷酸酯(phosphoricacidesterofthecyclicalcoholinositol,myo-inositol-hexakisphosphate)，分子式C6H18024P5。植酸分子含有6個(gè)磷酸基團(tuán)，是磷的重要貯藏形式，植物體內(nèi)約60%80%的有機(jī)磷以植酸為載體存在。植酸不僅使磷不能被單胃動(dòng)物利用，并且作為一種抗?fàn)I養(yǎng)因子，植酸分子可迅速與二價(jià)、三價(jià)陽(yáng)離子(如Ca2+、Mg2+、Fe3+、Zi^+等)及蛋白質(zhì)結(jié)合形成不溶鰲合物，阻礙了單胃動(dòng)物對(duì)其他礦質(zhì)元素、蛋白質(zhì)、淀粉、脂類、維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和利用。為了解決單胃動(dòng)物磷攝入量不足的問(wèn)題，滿足其對(duì)磷的需求，就必須在飼料中添加無(wú)機(jī)磷。但是，這樣不僅提高了飼料的成本，而且飼料中未被分解的植酸磷隨動(dòng)物糞便排出體外。更嚴(yán)重的問(wèn)題是大量的磷排入水中，作為水生植物最主要的限制性營(yíng)養(yǎng)因子，刺激藻類及地面其他水生植物的生長(zhǎng)，水體富營(yíng)養(yǎng)化，隨著過(guò)多水生植物的迅速生長(zhǎng)、腐敗，導(dǎo)致淡水水質(zhì)惡化，水體溶氧量降低，危及魚(yú)類和其他野生生物的生存植酸酶(phytase)是催化植酸水解成肌醇和磷酸的一類酶的總稱，包括植酸酶與酸性磷。植酸酶是一種新型酶制劑，主要作為飼料和食品的添加劑，應(yīng)用前景十分廣闊。在飼料工業(yè)中，磷是有機(jī)體的重要組成部分，作為一種必須的礦物元素在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中具有重要作用，除了作為骨骼的成分外，也是機(jī)體內(nèi)重要有機(jī)化合物及生物活性物質(zhì)的元素來(lái)源。國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)證明，在單胃動(dòng)物飼料中添加植酸酶能夠提高磷的利用率，解除植酸的抗?fàn)I養(yǎng)作用，提高礦物元素和蛋白質(zhì)的吸收利用率，植酸酶在動(dòng)物生長(zhǎng)中的效果則主要表現(xiàn)在以下幾方面增加血漿無(wú)機(jī)磷濃度及趾骨、脛骨灰分；同時(shí)對(duì)體重的增長(zhǎng)也有一定效果。采用植酸酶代替無(wú)機(jī)磷還能使豬禽糞便中的含磷量減少25%65%。因此在飼料中添加植酸酶，不僅可以降低飼料的成本，而且可以降低排泄物中的磷含量，從而減少環(huán)境中的磷污染，有利于保護(hù)生態(tài)環(huán)境。在食品工業(yè)中，由于人類小腸中的植酸酶活性極低的特點(diǎn)，也導(dǎo)致了人類鋅、鐵、鎂的缺乏和數(shù)量不平衡。目前，已有實(shí)驗(yàn)利用植酸酶處理大豆和面粉，以分解其中的植酸鹽，提高植酸的降解率，消除植酸對(duì)礦物元素和蛋白質(zhì)的鰲合作用，以提高糧食的利用率，提高糧食的營(yíng)養(yǎng)和商品價(jià)值。植酸酶自1907年發(fā)現(xiàn)以來(lái)，微生物植酸酶的研究工作自20世紀(jì)60年代開(kāi)始。工業(yè)生產(chǎn)植酸酶的微生物主要包括真菌中的黑曲霉(^5^^//船w扭r入根霉(朋/zo/附)和細(xì)菌中的大腸桿菌(Esc^n'cWaco//)和芽孢桿菌(WaccW7"s)。植酸酶于1993年在西歐實(shí)現(xiàn)商品化。歐共體推出了當(dāng)前啟用的3種植酸酶制劑荷蘭Gise-Brocades公司推出了"自然磷"(Natuphos),其特點(diǎn)是對(duì)熱穩(wěn)定，且在堿性和酸性的條件下均具有活性；美國(guó)Allzeech公司推出的"澳吉美"植酸酶(Allxymephytase)，是一種黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物，其對(duì)熱和pH穩(wěn)定性較好；芬蘭NovoNordisk公司推出了"NOVO"植酸酶，BASF公司生產(chǎn)的"酶他富"植酸酶等。目前，把植酸酶作為飼料添加劑已應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)，但仍然存在阻礙其廣泛應(yīng)用的技術(shù)難題。為防止沙門(mén)氏菌的污染，飼料加工過(guò)程中需要采用高溫滅菌；同時(shí)顆粒飼料的制粒工藝也要經(jīng)過(guò)一個(gè)短暫的高溫(73°C95°C)過(guò)程，一般植酸酶的活性在此溫度下不可避免地失活，因此耐熱是植酸酶作為飼用添加劑應(yīng)用的關(guān)鍵性問(wèn)題。研究表明，隨著制粒溫度的升高(608(TC)其酶活力將隨著下降(P〈0.01)。當(dāng)6(TC時(shí)只有48°/。58%的酶活殘留，而加熱到80。C時(shí)僅有2%15%的殘余酶活。因此耐熱性是植酸酶在飼料工業(yè)應(yīng)用中最主要的問(wèn)題。迄今為止，國(guó)內(nèi)外所報(bào)道的產(chǎn)耐酸耐熱植酸酶的菌株主要為黑曲霉(^;pe^7/^m'g^)禾口芽抱桿菌(5accj7J"50。2005年KwanjiraChantasartrasamee等牛艮道的y^/erg/〃"51植酸酶最適溫度為70°C，經(jīng)8(TC處理2小時(shí)，剩余酶活為66%;2001年王婭茹等純化得到的枯草芽孢桿菌中性植酸酶6(TC處理l小時(shí)活性減少90y。，6(TC處理2小時(shí)，活性全部喪失。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能耐較高溫度喪失活性較少的耐熱植酸酶的產(chǎn)生菌。本發(fā)明是從騰沖溫泉中分離得到一株產(chǎn)耐熱植酸酶的菌株，菌株的分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.2076，保藏日期為2007年6月8日，保藏單位中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)。其所產(chǎn)酶最適pH為5.5，最適溫度為6(TC左右，將該酶在7(TC分別保溫60min，120min和180min，殘余酶活性分別為70%，68%和63%;將該植酸酶在80。C分別保溫60min，120min和180min，殘余酶活性分別為43%，23%和15%;將該酶在90。C分別保溫60min和120min，酶活損失明顯，殘余酶活性分別為21%，10%;說(shuō)明該酶具有良好耐溫性。該菌株的16SrRNA基因?yàn)椤礣B-11CTGGCGGCGTGCCTMTACATGCMGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGA71CGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATMCTCCGGGAMCCGGGGCTAATACCGG141CGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGMTCTTCCGCMTGGAC351GMAGTCTGACGGAGCMCGCCGCGTGAGTGATGMGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGM421GGTMTACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGMTTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGG561TTTCTTMGTCTGATGTGMAGCCCCCGGCTCMCCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGMCTTGAGTG631CAGMGAGGAGAGTGGMTTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGMCACCAGTGGCGA701AGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCT771AATTCGAAGCMCGCGMGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAA981TCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCG1051TGAGATGTTGGGTTMGTCCCGCMCGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTCCCAGCATTCAGTTGGGCACT1121CTAAGGTGACTGCCGGTGAC嵐CCGGAGGMGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACC1191TGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGMCAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTMGCCAATCCCACM1261ATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGCTGGMTCGCTAGTMTCGCGGAT1331CAGCATGCCGCGGTGMTACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTMCA1401CCCGAAGTCGGTGAGGTMCCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGMGGTGGGACAGATGATTGGGGTGMGTCG1471TAACMGGTAGCC本發(fā)明菌株的制備1、菌株的分離采集騰沖溫泉的水樣直接涂布初篩培養(yǎng)基平板5(TC培養(yǎng)3-5天，觀察透明圈生長(zhǎng)情況，選出H/C比值較大的菌株(H/C為透明圈直徑H和菌落直徑C之比)，挑選大而明顯的透明圈的菌落劃線分離純化2-3次。純化后將其菌株接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵，37°C，200、轉(zhuǎn)/分條件下發(fā)酵5天后，進(jìn)一步復(fù)篩，最終分離篩選到產(chǎn)耐熱植酸酶的菌株，命名為T(mén)B-1。2、菌株的初步鑒定根據(jù)《常見(jiàn)細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》以及《一般細(xì)菌常用鑒定方法》對(duì)其進(jìn)行形態(tài)特征、培養(yǎng)特征，生理生化測(cè)定等方面的初步鑒定。菌株TB-1為革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌，具有中生芽孢。在LB瓊脂平板上菌落米白色，邊緣波狀，呈不規(guī)則形，表面具有皺褶，不透明。TB-1好氧生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍是306(TC，5y。的NaCl、0.001%的溶菌酶中生長(zhǎng)，能水解淀粉、酪素、明膠，過(guò)氧化氫酶、卵磷脂酶、硝酸鹽還原結(jié)果為陽(yáng)性，形成吲哚、V.P實(shí)驗(yàn)、檸檬酸鹽及丙酸鹽利用、苯丙氨酸脫氨酶、酪氨酸分解結(jié)果為陰性。該菌株初步鑒定為枯草芽孢桿菌(5aciW^s^tj7is)，其保藏登記號(hào)為CGMCCNo.2076。3、菌株的發(fā)酵將種子培養(yǎng)液倒入裝有250ml發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，置于回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速搖瓶柜中進(jìn)行好氧發(fā)酵，轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分，37。C發(fā)酵5天。發(fā)酵液離心，取上清液，即為粗酶酶液，置于4'C保存。本發(fā)明菌株所產(chǎn)植酸酶的最適pH5.5左右，當(dāng)pH2.2時(shí)，酶液在室溫放置2hr后，殘余酶活力為47.7%;最適溫度為6(TC，在溫度55'C-65'C的范圍內(nèi)，酶活性變化不大，將該酶在7(TC分別保溫60min，120min和180min，殘余酶活性分別為70%，68°/。和63%;將該植酸酶在8(TC分別保溫60min，120min和180min，殘余酶活性分別為43%，23%和15%;將該酶在90。C分別保溫60min和120min,酶活損失明顯，殘余酶活性分別為21%，10%;說(shuō)明該酶具有良好耐溫性。相比較而言，比已報(bào)道的枯草芽孢桿菌植酸酶有更好的耐熱特性。本發(fā)明菌株既i滿足飼料加工工業(yè)中高溫滅菌的要求，同時(shí)又滿足顆粒飼料的制粒工藝短暫的高溫(73°C95°C)要求，本菌株所產(chǎn)耐熱植酸酶可以作為飼料添加劑，應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中具有優(yōu)異的效果。圖l為本發(fā)明的菌株TB-l電鏡照片(X15000);圖2為本發(fā)明的KAP04標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；圖3為本發(fā)明的植酸酶反應(yīng)的最適溫度圖；圖4為本發(fā)明的溫度對(duì)酶穩(wěn)定性的影響圖；圖5為本發(fā)明的植酸酶反應(yīng)的最適PH圖；圖6為本發(fā)明的pH對(duì)酶穩(wěn)定性的影響圖；具體實(shí)施方式實(shí)施例11、菌株的分離從中國(guó)云南騰沖溫泉水樣直接涂布初篩培養(yǎng)基平板5(TC培養(yǎng)3-5天，觀察透明圈生長(zhǎng)情況，選出H/C比值較大的菌株(H/C為透明圈直徑H和菌落直徑C之比)，選大而明顯的透明圈的菌落劃線分離純化2-3次；純化后將其菌株接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基搖瓶發(fā)酵，37°C，200、轉(zhuǎn)/分條件下發(fā)酵5天后，進(jìn)一步復(fù)篩，最終分離篩選到產(chǎn)耐熱植酸酶的菌株。所用培養(yǎng)基初篩培養(yǎng)基葡萄糖3.0g，NH萬(wàn)0.5g，MgS040.003g，蒸餾水100ml，植酸鈣0.5g，瓊脂2g，pH5.5。液體搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基蛋白胨l.Og，米糠l.Og，蒸餾水100ml，pH5.5。2、菌株的鑒定根據(jù)形態(tài)特征、培養(yǎng)特征，生理生化測(cè)定，16SrRNA序列分析進(jìn)行系統(tǒng)的分類研究。菌株TB-1為革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌，具有中生芽孢。在LB瓊脂平板上菌落米白色，邊緣波狀，呈不規(guī)則形，表面具有皺褶，不透明。TB-1好氧生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍是3060'C，5。/。的NaCl、0.001%的溶菌酶中生長(zhǎng)，能水解淀粉、酪素、明膠，過(guò)氧化氫酶、卵磷脂酶、硝酸鹽還原結(jié)果為陽(yáng)性，形成吲哚、V.P實(shí)驗(yàn)、檸檬酸鹽及丙酸鹽利用、苯丙氨酸脫氨酶、酪氨酸分解結(jié)果為陰性。菌株的16SrRNA基因?yàn)椤礣B-11CTGGCGGCGTGCCTMTACATGCMGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGA71CGGGTGAGTAACACGTGGGTMCCTGCCTGTMGACTGGGATMCTCCGGGAMCCGGGGCTAATACCGG141AGTTGGTGAGGTMCGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCG281GCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGMTCTTCCGCMTGGAC351G嵐GTCTGACGGAGCMCGCCGCGTGAGTGATGMGGTTTTCGGATCGT嵐GCTCTGTTGTTAGGGM421GGTMTACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGMTTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGG561TTTCTTMGTCTGATGTGMAGCCCCCGGCTCMCCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGMCTTGAGTG631CAGAAGAGGAGAGTGGMTTCCACGTGTAGCGGTG嵐TGCGTAGAGATGTGGAGGMCACCAGTGGCGA701AGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAMGCGTGGGGAGCGMCAGGATTAGATACCCT771TCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCMGACTGAMCTCAAAGGMTTGACGGGGGCCCGCACA911AGCGGTGGAGCATGTGGTTTMTTCGAAGCMCGCGMGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACM981TCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCG1051TGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCMCGAGCGCMCCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACT1121CTMGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGMGGTGGGGATGACGTCMATCATCATGCCCCTTATGACC1191TGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGMC雄GGGCAGCGAMCCGCGAGGTTAAGCCMTCCCACAA1261ATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGMGCTGGMTCGCTAGTMTCGCGGAT1331CAGCATGCCGCGGTGMTACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTMCA1401CCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGMGGTGGGACAGATGATTGGGGTGMGTCG1471TAAC線GTAGCC3、菌株的發(fā)酵將種子培養(yǎng)液倒入裝有250ml發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，置于回轉(zhuǎn)式恒溫調(diào)速搖瓶柜中進(jìn)行好氧發(fā)酵，轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分，37。C發(fā)酵5天；發(fā)酵液離心，取上清液，即為粗酶液，置于4。C保存。所用發(fā)酵培養(yǎng)基為麩皮4.0g，牛肉浸膏1.5g，吐溫80400ppm，pH6.5。4、酶活測(cè)定方法和粗酶酶學(xué)性質(zhì)(1)酶活測(cè)定方法采用GB/T18634-2002進(jìn)行酶活性的測(cè)定。植酸酶活性單位定義為在PH5.5，6(TC條件下，每分鐘從一定濃度的植酸鈉溶液中釋放lumol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活單位。i原理植酸酶在一定溫度和pH條件下，水解底物植酸鈉，生成正磷酸和肌醇衍生物，在酸性溶液中，用釩鉬酸銨處理會(huì)生成黃色的[(NH4)3P04NH4V0316Mo03]復(fù)合物，在波長(zhǎng)415nm下進(jìn)行比色測(cè)定。ii試劑和溶液①乙酸緩沖液I:三水乙酸鈉34.02g，吐溫200.lg，蒸餾水1000ml，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.50士0.01，常溫下存放2個(gè)月有效。②植酸鈉溶液植酸鈉(sigma)0.4950g，乙酸緩沖液I100ml;③硝酸溶液硝酸溶液100ml，蒸餾水200ml;鉬酸銨溶液鉬酸銨10.0g，氨水(25%)l.Oml，蒸餾水100ml;⑤饑酸銨溶液釩酸銨0.235g，硝酸溶液(D2ml，蒸餾水100ml，避光條件下保存一周有效；⑥顏色終止液硝酸溶液③鉬酸銨溶液④釩酸銨溶液=2:1:1，混勻后使用，現(xiàn)用現(xiàn)配；⑦基準(zhǔn)物磷酸二氫鉀；m測(cè)定步驟①標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取0.6804g在105匸烘至恒重(2h)的基準(zhǔn)物磷酸二氫鉀于100ml容量瓶中，用乙酸緩沖液I溶解，并定容至100ml，濃度為50mmol/L，按表1稀釋成不同比例濃度，以蒸餾水調(diào)零，在分光光度計(jì)415nm測(cè)定OD值。以無(wú)機(jī)磷濃度為橫坐標(biāo)，00415為縱坐標(biāo)，列出直線回歸方程(y=kx+b)。表1標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度的配制<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>②反應(yīng)順序表2植酸酶活力測(cè)定步驟<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>依次加入待測(cè)反應(yīng)液0.2ml0.2mlC最后"一步)6(TC反應(yīng)30minV依次加入顏色終止液4ml4ml混合VV總體積10ml10ml③樣品測(cè)定反應(yīng)后的試樣在室溫下靜止10min，如出現(xiàn)混濁，需在離心機(jī)上以10，000rpm/min離心10min，上清液以蒸餾水調(diào)零，在分光光度計(jì)415nm測(cè)定0D值。iv植酸酶活性單位定義為在pH5.5，60'C條件下，每分鐘從一定濃度的植酸鈉溶液中釋放lumol的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活單位。v酶活力的計(jì)算公式U=A0D415*n/k*t△0D415:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組0D^之差；k:標(biāo)準(zhǔn)曲線k值；t:反應(yīng)時(shí)間30min;m酶液稀釋倍數(shù)。(2)粗酶酶學(xué)性質(zhì)①反應(yīng)的最適溫度和溫度對(duì)酶穩(wěn)定性的影響如圖3、4所示；②反應(yīng)的最適pH和pH對(duì)酶穩(wěn)定性的影響如圖5、6所示；◎離子對(duì)酶活力的影響表3離子對(duì)酶活力的影響一相對(duì)酶活(％)一相對(duì)酶活(％)離子離子5ppm30ppm100卯m5ppm30ppmlOO卯m空白100.0100.0100.0p5+104.889.141.1Ca2+90.389.1101.4Cu2+35.578.180.0Mg2+101.6118.8108.282.294.075.3Mn2+103.287.593.2r90.360.939.8Fe2+112.990.288.0Zn2+93,579.786.權(quán)利要求1、一種耐熱植酸酶的產(chǎn)生菌，菌株的分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.2076。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的植酸酶產(chǎn)生菌，其特征在于菌株的16SrRNA基因?yàn)椤礣B-11CTGGCGGCGTGCCTMTACATGCMGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGA1CGGGTGAGTAACACGTGGGTMCCTGCCTGTMGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGG141AGTTGGTGAGGTMCGGCTCACCMGGCMCGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCG281GCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGMTCTTCCGCMTGGAC351GAMGTCTGACGGAGCMCGCCGCGTGAGTGATGMGGTTTTCGGATCGTAMGCTCTGTTGTTAGGGM421AGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGMACTGGGGAACTTGAGTG631CAGMGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGMATGCGTAG八GATGTGGAGGMCACCAGTGGCGA701AGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAMGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCT771TCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCMGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACA911AGCGGTGGAGCATGTGGTTTMTTCGMGCAACGCGMGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACM981TCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCG1051TGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCMCGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACT1121ACGTGCTACAATGGACAGMCMAGGGCAGCGAMCCGCGAGGTTAAGCCMTCCCACM1261ATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGMGCTGGMTCGCTAGTAATCGCGGAT1331CAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTMCA1401CCCGMGTCGGTGAGGTMCCTTTTAGGAGCCAGCCGCCGMGGTGGGACAGATGATTGGGGTGMGTCG1471TMCMGGTAGCC。全文摘要本發(fā)明是一種耐熱植酸酶的產(chǎn)生菌。菌株的分類命名為枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)，其保藏編號(hào)為CGMCCNo.2076。本發(fā)明菌株所產(chǎn)植酸酶的最適pH5.5左右，當(dāng)pH2.2時(shí)，酶液在室溫放置2hr后，殘余酶活力為47.7％；最適溫度為60℃，在溫度55℃-65℃的范圍內(nèi)，酶活性變化不大，將該酶在70℃分別保溫60min，120min和180min，殘余酶活性分別為70％，68％和63％；將該植酸酶在80℃分別保溫60min，120min和180min，殘余酶活性分別為43％，23％和15％；將該酶在90℃分別保溫60min和120min，酶活損失明顯，殘余酶活性分別為21％，10％；說(shuō)明該酶具有良好耐溫性。本發(fā)明菌株既i滿足飼料加工工業(yè)中高溫滅菌的要求，同時(shí)又滿足顆粒飼料的制粒工藝短暫的高溫(73℃～95℃)要求，本菌株所產(chǎn)耐熱植酸酶可以作為飼料添加劑，應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中具有優(yōu)異的效果。文檔編號(hào)C12N15/31GK101113421SQ20071006598公開(kāi)日2008年1月30日申請(qǐng)日期2007年6月22日優(yōu)先權(quán)日2007年6月22日發(fā)明者唐湘華,萍桂,黃遵錫申請(qǐng)人:云南師范大學(xué)