專利名稱：一種致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液的配制方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動(dòng)物疫病診斷和防治技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
奶牛乳房炎發(fā)病率高，危害性大，是影響世界奶牛業(yè)發(fā)展的最主要疾病之一。據(jù)國際牛奶聯(lián)合會(huì)資料記載，大約有50％的母?；既榉垦?，其中大約有2％患臨床型乳房炎，48％患隱性乳房炎。我國臨床型乳房炎發(fā)病率33.41％(9.7％～55.6％)，隱性乳房炎的檢出率為50-80％。臨床型乳房炎具有泌乳量下降、乳房腫脹、乳汁變質(zhì)等明顯的臨床癥狀，而隱性乳房炎的乳房和乳汁外觀雖無可見的肉眼變化，但常常造成原料奶的品質(zhì)下降，威脅人們的身體健康。據(jù)估計(jì)，我國每年因乳房炎所造成的經(jīng)濟(jì)損失超過3.16億元。引起乳房炎的病原微生物主要包括金色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌、牛乳房鏈球菌、大腸桿菌、克雷伯氏菌、綠膿桿菌以及其他一些真菌、病毒等。但在這些病原體中，以金黃色葡萄球菌、鏈球菌和大腸桿菌為主，約占整個(gè)奶牛乳房炎病例90％以上。
奶牛乳房炎的治療以抗生素為主，但由于抗生素的不規(guī)范使用，已導(dǎo)致牛奶中抗生素殘留、耐藥菌株普遍、無藥可治乳房炎病例增多等嚴(yán)重問題。造成這種現(xiàn)象的主要原因是由于奶牛場經(jīng)濟(jì)、技術(shù)和實(shí)驗(yàn)條件的限制，在用抗菌素防治奶牛乳房炎前很少進(jìn)行必要的細(xì)菌分離和藥物敏感試驗(yàn)，僅靠獸醫(yī)的喜好和經(jīng)驗(yàn)，長期、盲目和超量使用抗菌素。
目前國內(nèi)外通常使用的藥敏試驗(yàn)方法主要有紙片擴(kuò)散法、肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法、自動(dòng)化藥敏儀法和Etest法。其中，紙片擴(kuò)散法是通過測量抑菌圈的直徑來判定細(xì)菌對抗生素的敏感或耐受，最大優(yōu)點(diǎn)是費(fèi)用低和藥物選擇靈活，但存在受接種菌量、孵育時(shí)間、抗生素含量及擴(kuò)散力、平皿厚度等多種因素影響，需要嚴(yán)格進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，才能確保結(jié)果的可靠性，而且具有耗時(shí)、費(fèi)力和不適用厭氧菌和苛氧菌等缺點(diǎn)；肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法是將抗生素倍比稀釋在肉湯或瓊脂中來定量測定最低抑菌濃度(MIC)的方法，其優(yōu)點(diǎn)是可精確測定一些厭氧菌和苛氧菌對抗生素的敏感性，而且一套試管可測多株細(xì)菌，但具有耗時(shí)和費(fèi)力等缺點(diǎn)；自動(dòng)化藥敏儀是通過檢測濁度、熒光指示劑的熒光強(qiáng)度或熒光底物的水解反應(yīng)來判讀結(jié)果，具有快速和強(qiáng)大統(tǒng)計(jì)分析功能等優(yōu)點(diǎn)，但具有藥物選擇缺乏靈活性、難以檢測某些特殊菌和儀器價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)；Etest法結(jié)合擴(kuò)散法和稀釋法的優(yōu)點(diǎn)，用含有連續(xù)濃度梯度抗生素塑料條檢測細(xì)菌的敏感性，具有精確、可靠、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于多種細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)，唯一缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴。
對于致奶牛乳房炎葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)，目前國內(nèi)外常用的方法是將無菌采集的奶樣接種綿羊血瓊脂平板，37℃培養(yǎng)18-48小時(shí)后根據(jù)菌落形態(tài)和溶血特點(diǎn)做出初步鑒定，再挑取可疑菌落進(jìn)行凝固酶等生化試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)，最后用典型菌落在Mueller-Hinton(MH)等瓊脂平板上進(jìn)行紙片法藥敏試驗(yàn)，或用肉湯稀釋法進(jìn)行MIC的測定。這些方法不僅至少需要3-5天才能得出結(jié)果，具備必要的細(xì)菌學(xué)鑒定的設(shè)備、試劑和技術(shù)條件，而且用單菌落進(jìn)行的藥敏試驗(yàn)結(jié)果有時(shí)不能真實(shí)反映細(xì)菌“群體”對抗生素的敏感性。至于自動(dòng)化藥敏儀法和Etest法，由于價(jià)格很貴難以被國內(nèi)獸醫(yī)臨床和奶牛場接受。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一個(gè)目的是提供一種能快速對奶牛奶樣中葡萄球菌選擇性擴(kuò)培的致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液的配制方法。
本發(fā)明先將10g蛋白胨、5g酵母粉、10g丙酮酸鈉、12g甘氨酸、5g氯化鋰完全溶解于980ml水中，再用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.3，然后，于121℃下滅菌，冷卻至50℃±10℃時(shí)加入無菌1％亞碲酸鉀溶液10ml和7ml吐溫80(Tween-80)，4℃保存。
本發(fā)明中另一目的是提供上述致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液的用途用途之一是用于鑒別致奶牛乳房炎葡萄球菌的方法將上述方法獲得的培養(yǎng)液分裝于培養(yǎng)板孔，接種奶樣，在37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)液出現(xiàn)產(chǎn)生黑色產(chǎn)物并渾濁，判斷奶樣中有葡萄球菌。
用途之二是用于致奶牛乳房炎葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)在包被有國際標(biāo)準(zhǔn)MIC抗生素的培養(yǎng)板孔加入上述方法獲得的培養(yǎng)液，再接種奶樣，在35℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)，測定葡萄球菌對抗生素的敏感性。
本發(fā)明在葡萄球菌選擇培養(yǎng)Baird-Parker培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，用酵母粉代替牛肉膏和酵母膏，用吐溫80(Tween-80)代替卵黃液，即為呈透明狀葡萄球菌培養(yǎng)液，命名為mBP培養(yǎng)液，如再加入1.5％瓊脂粉即為mBP瓊脂平板，可用于致奶牛乳房炎葡萄球菌快速選擇/鑒別。不僅能保證葡萄球菌生長的營養(yǎng)需要和非葡萄球菌生長的抑制，而且使培養(yǎng)液透明，以便根據(jù)細(xì)菌培養(yǎng)后培養(yǎng)液是否渾濁和產(chǎn)生黑色產(chǎn)物判斷有無葡萄球菌生長。
在判斷奶樣中有無葡萄球菌時(shí)，經(jīng)培養(yǎng)24小時(shí)后，培養(yǎng)液出現(xiàn)黑色產(chǎn)物和渾濁，則，可明確奶樣中有葡萄球菌。如培養(yǎng)液仍然為透明液體，則，奶樣中無葡萄球菌。
在測定葡萄球菌對抗生素的敏感性時(shí)，經(jīng)培養(yǎng)24小時(shí)后，根據(jù)培養(yǎng)液是否產(chǎn)生黑色產(chǎn)物和渾濁判斷有無葡萄球菌生長及對相應(yīng)抗生素的敏感性或耐藥性。
本發(fā)明是在現(xiàn)有葡萄球菌選擇培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，通過對培養(yǎng)基配方和培養(yǎng)方法的改進(jìn)，研制出能直接用臨床奶樣進(jìn)行葡萄球菌快速鑒別和藥敏試驗(yàn)的方法，其顯著優(yōu)點(diǎn)是快速、準(zhǔn)確、價(jià)廉和不需復(fù)雜的儀器設(shè)備，特別適合國內(nèi)中小型奶牛場和基層獸醫(yī)使用。


圖1為金黃色葡萄球菌在mBP培養(yǎng)液和普通肉湯中的生長曲線圖。
具體實(shí)施例一、配制mBP培養(yǎng)液用天平分別稱取蛋白胨10g、酵母粉5g、丙酮酸鈉10g、甘氨酸12g、氯化鋰5g于玻璃容器中，加水980ml，攪拌均勻和完全溶解后，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.3，在121℃高溫下滅菌15分鐘，冷卻至50℃±10℃時(shí)加入過濾除菌的1％亞碲酸鉀溶液10ml和7ml吐溫80(Tween-80)，然后4℃保存，備用。
二、葡萄球菌的快速鑒別根據(jù)臨床檢查或加州乳房炎試驗(yàn)(CMT)檢測結(jié)果初步判斷患臨床型或隱性乳房炎奶牛，用常規(guī)擠奶法擠去前三把奶，用常規(guī)消毒液消毒乳頭及其附近區(qū)域，用酒精棉球消毒乳頭。將消毒試管蓋打開，一手將試管保持水平狀態(tài)，另一手?jǐn)D奶，并使奶“射入”試管中，立即蓋好試管蓋，置于冰浴中立即帶回實(shí)(檢)驗(yàn)室。在無菌工作臺(tái)內(nèi)打開無菌的24或96孔培養(yǎng)板，將mBP培養(yǎng)液分培養(yǎng)板的各孔中，每孔200μl，向每孔中加入未稀釋或用生理鹽水適當(dāng)稀釋的奶樣10μl，蓋好蓋后37℃靜置培養(yǎng)24小時(shí)，根據(jù)培養(yǎng)液是否渾濁和產(chǎn)生黑色產(chǎn)物判斷有無葡萄球菌生長。
三、葡萄球菌的快速藥敏試驗(yàn)1、抗生素濃度的確定及培養(yǎng)板包被參照國際標(biāo)準(zhǔn)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS20012)推薦的紙片擴(kuò)散法抑菌試驗(yàn)方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)，篩選出對所試抗菌素敏感的金黃色葡萄球菌若干株，將其在普通瓊脂平板上進(jìn)行純培養(yǎng)，分別挑取單個(gè)菌落接種2ml營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)12小時(shí)后供MIC測定用。將0.5、1、2或3倍于標(biāo)準(zhǔn)MIC的抗生素、200μl mBP培養(yǎng)液和10μl葡萄球菌培養(yǎng)物加入96孔培養(yǎng)板的各孔中，35℃培養(yǎng)24小時(shí)后，根據(jù)無敏感葡萄球菌生長(培養(yǎng)液不渾濁和無黑色產(chǎn)物)確定藥敏試驗(yàn)所需的抗生素MIC。將抗生素配成1000倍于校正后的MIC，分裝于無菌的96孔培養(yǎng)板各孔中，在無菌工作臺(tái)內(nèi)吹干或冷凍干燥后，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 2、葡萄球菌的快速藥敏試驗(yàn)在無菌工作臺(tái)內(nèi)，將mBP培養(yǎng)液分裝于包被有抗生素的96孔培養(yǎng)板，每孔200μl，分別向各孔中加入10μl葡萄球菌初次選擇培養(yǎng)物或乳房炎奶樣，35℃培養(yǎng)24小時(shí)，根據(jù)培養(yǎng)液是否渾濁和產(chǎn)生黑色產(chǎn)物判斷有無葡萄球菌生長以及對相應(yīng)抗生素是否敏感。
三、對比試驗(yàn)1、金黃色葡萄球菌在mBP培養(yǎng)基中的生長情況將25株從乳房炎患牛分離的金黃色葡萄球菌劃線接種mBP瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，細(xì)菌生長成典型的葡萄球菌菌落，直徑為0.5-1.5mm，邊緣半透明，中心黑色。挑取典型菌落制成細(xì)菌涂片，經(jīng)革蘭氏染色后鏡檢，為典型的葡萄串狀。挑取典型菌落進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)，25株細(xì)菌均表現(xiàn)為血漿凝固酶陽性，接觸酶陽性，7.5％高鹽生長陽性。
挑取金黃色葡萄球菌典型菌落接種營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，以1％的比例接種mBP培養(yǎng)液，在37℃培養(yǎng)過程中，每隔2小時(shí)取一次樣，用分光光度計(jì)測OD600值，以O(shè)D600值為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)描繪生長曲線。從細(xì)菌生長曲線(圖1)上可以看出，金黃色葡萄球菌在mBP培養(yǎng)液中的生長動(dòng)態(tài)與在營養(yǎng)肉湯中基本相似，4小時(shí)后進(jìn)入對數(shù)生長期，14小時(shí)進(jìn)入生長平臺(tái)期，24小時(shí)后生長率下降。
2、mBP培養(yǎng)基的選擇特性分別將金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、枯草桿菌、豬丹毒桿菌、鏈球菌、大腸桿菌、沙門氏菌、變形桿菌、多殺性巴氏桿菌、綠膿桿菌、痢疾志賀氏菌接種含5％小牛血清的營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，分別取100μl培養(yǎng)物涂布于mBP瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，除金黃色葡萄球菌外，其它細(xì)菌均未見可見生長。分別取上述細(xì)菌的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物20μl，接種入2ml mBP培養(yǎng)液中，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，除金黃色葡萄球菌接種管外，其余細(xì)菌接種管培養(yǎng)液的顏色和渾濁度均未發(fā)生變化，表明僅金黃色葡萄球菌能在mBP培養(yǎng)液中生長。
將20μl金黃色葡萄球菌肉湯培養(yǎng)物、200μl大腸桿菌肉湯培養(yǎng)物和鏈球菌肉湯培養(yǎng)物混合，取40μl接種入4ml mBP培養(yǎng)液，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，分別取100μl培養(yǎng)物涂布鏈球菌和大腸桿菌選擇培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)48小時(shí)后，未見大腸桿菌和鏈球菌生長，進(jìn)一步證明mBP培養(yǎng)液對大腸桿菌和鏈球菌生長具有很強(qiáng)的抑制作用。
金黃色葡萄球菌在mBP培養(yǎng)液和普通肉湯中的生長曲線如圖1所示，圖中，縱坐標(biāo)為細(xì)菌培養(yǎng)物的光吸收值，橫坐標(biāo)為培養(yǎng)時(shí)間(小時(shí))；選擇性表示金黃色葡萄球菌在快速選擇/鑒別mBP培養(yǎng)液中的生長曲線；普通表示金黃色葡萄球菌在營養(yǎng)肉湯中的生長曲線。
3、用mBP培養(yǎng)液分離葡萄球菌的靈敏度以1∶9的比例，用生理鹽水將金黃色葡萄球菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物進(jìn)行連續(xù)10倍稀釋，直至10-8，從每管中吸取50μl接種入1ml mBP培養(yǎng)液，從最后三管中吸取100μl涂布營養(yǎng)瓊脂，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，1-7管(10-1-10-7)中均有渾濁和黑色產(chǎn)物，說明有葡萄球菌生長，菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，mBP培養(yǎng)液分離葡萄球菌的靈敏度為60個(gè)細(xì)菌。
4、mBP培養(yǎng)液對臨床奶樣中葡萄球菌的分離效果根據(jù)臨床診斷和奶樣體細(xì)胞檢測(CMT法)結(jié)果，無菌采集臨床型和隱性奶牛乳房炎奶樣4份，用常規(guī)的綿羊血瓊脂平板分離法和生化試驗(yàn)確定為金黃色葡萄球菌感染奶樣，將其適當(dāng)稀釋后分別接種mBP培養(yǎng)液、mBP瓊脂平板和營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，mBP培養(yǎng)液中有金黃色葡萄球菌生長，培養(yǎng)物明顯渾濁，并有黑色產(chǎn)物；菌落計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，mBP瓊脂平板與營養(yǎng)瓊脂平板上的金黃色葡萄球菌菌落數(shù)接近(表1)。
5、mBP培養(yǎng)液成分對抗生素抑菌活性的影響用從臨床奶樣中分離到的金黃色葡萄球菌7株，參照NCCLS20012葡萄球菌屬紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)，在MH培養(yǎng)基上進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，確定7株金黃色葡萄球菌對7類8種抗生素的敏感性(表2)。將上述金黃色葡萄球菌在普通瓊脂平板上培養(yǎng)，分別挑取單個(gè)菌落接種2ml營養(yǎng)肉湯，37℃培養(yǎng)12小時(shí)后進(jìn)行96孔培養(yǎng)板法藥敏試驗(yàn)。將mBP培養(yǎng)液分裝96孔培養(yǎng)板，每孔200μl，將0.5、1、2或3倍于標(biāo)準(zhǔn)MIC的抗菌素加入相應(yīng)孔中，每孔接種10μl金黃色葡萄球菌營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)物，35℃培養(yǎng)24小時(shí)后，根據(jù)培養(yǎng)液是否渾濁和產(chǎn)生黑色產(chǎn)物判斷有無葡萄球菌生長及其對相應(yīng)抗生素的敏感性。如表3所示，以mBP培養(yǎng)液，用4個(gè)濃度的7類8種抗生素在96孔培養(yǎng)板上進(jìn)行的藥敏試驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)的紙片擴(kuò)散法結(jié)果一致，表明mBP培養(yǎng)液成分對所試抗生素的抑菌效果無明顯影響。
6、用mBP培養(yǎng)液進(jìn)行快速藥敏試驗(yàn)根據(jù)臨床檢查和奶樣體細(xì)胞CMT檢測結(jié)果，采集乳房炎陽性奶樣7份，將每份奶樣一分為二，分別用于紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)和以mBP為培養(yǎng)液的快速藥敏試驗(yàn)。將mBP培養(yǎng)液分裝于包被有標(biāo)準(zhǔn)MIC抗生素的96孔板，每孔200μl，向各孔中分別加入10μl臨床奶樣，35℃培養(yǎng)24小時(shí)后，根據(jù)培養(yǎng)液是否渾濁和產(chǎn)生黑色產(chǎn)物判斷有無葡萄球菌生長及其對相應(yīng)抗生素的敏感性，結(jié)果顯示兩種藥敏試驗(yàn)方法結(jié)果一致(表4)。
以上試驗(yàn)結(jié)果表明mBP培養(yǎng)液(基)對致奶牛乳房炎金黃色葡萄球菌具有很強(qiáng)的選擇特異性、靈敏度和鑒別能力。將mBP培養(yǎng)液與24或96孔細(xì)菌培養(yǎng)板組合，建立了致奶牛乳房炎葡萄球菌的快速鑒別方法，只要將培養(yǎng)液分裝于培養(yǎng)板孔、接種微量奶樣和經(jīng)過24小時(shí)培養(yǎng)，即能明確得出是否為葡萄球菌感染的結(jié)論。將包被有國際標(biāo)準(zhǔn)MIC抗生素的96孔培養(yǎng)板與mBP培養(yǎng)液組合，建立了致奶牛乳房炎葡萄球菌的快速藥敏試驗(yàn)方法，只要將培養(yǎng)液分裝、接種微量樣品和24小時(shí)培養(yǎng)，即能明確知道葡萄球菌對何種抗生素敏感或耐藥，不僅可用于葡萄球菌純培養(yǎng)的藥敏試驗(yàn)，更重要的是能直接用臨床奶樣進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，其特出優(yōu)點(diǎn)是快速、簡便、價(jià)廉和不需專門儀器設(shè)備，特別適合奶牛場和臨床獸醫(yī)使用。
表1用不同培養(yǎng)基從臨床奶樣中分離葡萄球菌的效果比較 注+++表示奶樣CMT檢測結(jié)果，為強(qiáng)陽性隱性乳房炎；+表示葡萄球菌生長陽性。
表2國際標(biāo)準(zhǔn)NCCLS20012關(guān)于金黃色葡萄球菌紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)及相關(guān)MIC的解釋 S代表敏感，I代表中度敏感，R代表不敏感(耐藥)。
表37株金黃色葡萄球菌對7種抗生素的敏感性(標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法)
結(jié)果表明，大鼠灌服玉參多糖50、100、200mg/kg后，明顯抑制ADP、花生四烯酸及膠原誘導(dǎo)的血小板聚集，與對照組比較對ADP、誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率分別為16％(P＞0.05)、31％(P＜0.01)、37％(P＜0.001)；對花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率分別為31％(P＜0.01)、36％(P＜0.001)、48％(P＜0.001)、對膠原誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率分別為18％(P＜0.05)、20％(P＜0.05)、38％(P＜0.001)；陽性藥物阿司匹林抑制作用明顯。
六.對小鼠凝血時(shí)間的影響昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18-22g，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為溶劑對照組(1％CMC-Na)、玉參多糖200、400、800mg/kg組，阿司匹林200mg/kg組及天保寧200mg/kg，組，每鼠給藥體積均為0.2ml/10g，連續(xù)灌胃7天，于末次給藥后1小時(shí)分別剪斷小鼠尾尖3mm，待血液自行溢出開始計(jì)時(shí)，每隔30秒用濾紙吸去血滴一次，直至血液自然停止(濾紙吸時(shí)無血)為止，即為該鼠的凝血時(shí)間。結(jié)果見表8。
表8玉參多糖對小鼠凝血時(shí)間的影響(X±SD)

注與對照組比較*p＜0.05**p＜0.01；與等劑量阿司匹林組比較無顯著差異結(jié)果表明，小鼠灌服玉參多糖400、800mg/kg后，與對照組比對，明顯延長小<p>取中密度纖維板，均勻涂布實(shí)施例1～6所得防腐防霉劑(以空白不涂布防腐防霉劑以及涂布竹醋液作為對照)，置于野外自然條件下，觀察纖維板開始霉變的時(shí)間，結(jié)果如表1表1木材防腐防霉實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

由表中數(shù)據(jù)可以看出，運(yùn)用本發(fā)明防腐防霉劑，板材霉變時(shí)間與竹醋液處理和以水為基質(zhì)制得防腐防霉劑處理的板材的霉變時(shí)間均有不同程度的推遲。
實(shí)施例14竹材防腐防霉效果實(shí)驗(yàn)取新鮮竹材，浸泡實(shí)施例7～12所得防腐防霉劑(以空白未處理為對照)，于室內(nèi)溫度25℃、濕度95％條件下，觀察四周，記錄竹材開始霉變的時(shí)間，結(jié)果見表2表2竹材防腐防霉實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

權(quán)利要求
1.一種致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液的配制方法，其特征在于先將10g蛋白胨、5g酵母粉、10g丙酮酸鈉、12g甘氨酸、5g氯化鋰完全溶解于980ml水中，再用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.3，然后，于121℃下滅菌，冷卻至50℃±10℃時(shí)加入無菌1％亞碲酸鉀溶液10ml和7ml吐溫80，4℃保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液用于鑒別致奶牛乳房炎葡萄球菌的方法，其特征在于將培養(yǎng)液分裝于培養(yǎng)板孔，接種奶樣，在37℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)，培養(yǎng)液出現(xiàn)黑色產(chǎn)物和渾濁，判斷奶樣中有葡萄球菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液用于致奶牛乳房炎葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)，其特征在于在包被有國際標(biāo)準(zhǔn)MIC抗生素的培養(yǎng)板孔加入培養(yǎng)液，再接種奶樣，在35℃條件下培養(yǎng)24小時(shí)，測定葡萄球菌對抗生素的敏感性。
全文摘要
一種致奶牛乳房炎葡萄球菌培養(yǎng)液的配制方法及其用途，屬于動(dòng)物疫病診斷和防治技術(shù)領(lǐng)域。先將10g蛋白胨、5g酵母粉、10g丙酮酸鈉、12g甘氨酸、5g氯化鋰完全溶解于980ml水中，再用氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.3，然后，于121℃下滅菌，冷卻至50℃±10℃時(shí)加入無菌1％亞碲酸鉀溶液10ml和7ml吐溫80，4℃保存，制成的培養(yǎng)液可用于快速鑒別致奶牛乳房炎葡萄球菌和乳房炎葡萄球菌的藥敏試驗(yàn)。
文檔編號(hào)C12Q1/04GK1858234SQ20061003881
公開日2006年11月8日 申請日期2006年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月14日
發(fā)明者孫懷昌, 仇華磊, 錢科, 張鑫宇 申請人:揚(yáng)州大學(xué)