專利名稱：一種利用微生物發(fā)酵高產(chǎn)α、ω－正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级岬姆椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及發(fā)酵領(lǐng)域，更具體地，涉及利用微生物同步發(fā)酵正十四烷(nC14)高產(chǎn)α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级?DCA14)的方法。
背景技術(shù)：
長(zhǎng)鏈二元酸(DCA)是合成香料、工程塑料、耐寒增塑劑、高級(jí)潤(rùn)滑油和聚酰胺熱熔膠等產(chǎn)品的重要原料。發(fā)酵法生產(chǎn)DCA是70年代興起的微生物發(fā)酵技術(shù)在石油化工領(lǐng)域的應(yīng)用。它以原料來源廣、反應(yīng)專一性強(qiáng)和反應(yīng)條件溫和等優(yōu)點(diǎn)取代了傳統(tǒng)的化學(xué)合成法，在國(guó)內(nèi)外受到普遍重視。以DCA為原料的下游產(chǎn)品開發(fā)不僅可以增加精細(xì)化工新產(chǎn)品種類，還可以進(jìn)一步提高DCA的附加值，為液體石蠟深加工開辟市場(chǎng)。
長(zhǎng)鏈二元酸是一系列特種合成材料的基礎(chǔ)單體原料，長(zhǎng)鏈二元酸及其衍生單體可以生產(chǎn)特種尼龍、聚碳酸酯、粉末涂料、香料、熱熔膠、特種潤(rùn)滑劑等。目前市場(chǎng)上只有化學(xué)法生產(chǎn)和半合成法生產(chǎn)的兩三種長(zhǎng)鏈二元酸單體在工業(yè)規(guī)模上應(yīng)用于以上產(chǎn)品中。
生物法可提供多達(dá)十四種以上的系列長(zhǎng)鏈二元酸單體，這些新型特種長(zhǎng)鏈二元酸單體的應(yīng)用一方面可以替代化學(xué)法生產(chǎn)的長(zhǎng)鏈二元酸單體市場(chǎng)，同時(shí)，不同性質(zhì)的系列特種長(zhǎng)鏈二元酸單體將會(huì)產(chǎn)生一系列具有不同性質(zhì)的新功能材料。
目前國(guó)際上大規(guī)模產(chǎn)業(yè)應(yīng)用的長(zhǎng)鏈二元酸主要是癸二酸(中國(guó)，約3萬噸/年)和十二碳二元酸(美國(guó)杜邦，約10萬噸/年)。癸二酸的出發(fā)原料為蓖麻油，由于受氣候、種植面積、蓖麻油的其它工業(yè)用途等因素的制約，癸二酸的工業(yè)用量一直徘徊不前；十二碳二元酸是美國(guó)杜邦公司采用化學(xué)法生產(chǎn)的產(chǎn)品，在國(guó)際上居絕對(duì)壟斷地位，價(jià)格長(zhǎng)期據(jù)高不下，嚴(yán)重影響下游產(chǎn)品的成本；同時(shí)由于化學(xué)法不能生產(chǎn)十二碳二元酸以外的其它長(zhǎng)鏈二元酸，使得下游產(chǎn)品應(yīng)用領(lǐng)域有所局限。
十四碳二元酸的理化性質(zhì)與目前大量使用的十二碳二元酸最為接近，以其為單體制備的聚合材料性能在某些方面優(yōu)于十二碳二元酸衍生物，同時(shí)，還具有某些特殊的用途。由于沒有商品化的十四碳二元酸產(chǎn)品供應(yīng)市場(chǎng)，其下游應(yīng)用無法廣泛開展。
在現(xiàn)有的專利文獻(xiàn)中，有從正十四烷發(fā)酵生產(chǎn)十四碳二元酸的實(shí)驗(yàn)例子，但都是實(shí)驗(yàn)室水平。在CN 1048754C(申請(qǐng)人陳遠(yuǎn)童，申請(qǐng)日1995年11月9日)中，由生產(chǎn)DCA14的實(shí)驗(yàn)例，但只在搖瓶中做到72g/L。在CN 1257126A(申請(qǐng)人中國(guó)石油化工集團(tuán)公司等，申請(qǐng)日1998.12.16)中，在13.7L的發(fā)酵罐中生產(chǎn)DCA14，發(fā)酵120小時(shí)，發(fā)酵清液的產(chǎn)酸達(dá)到148g/L，重量轉(zhuǎn)化率為88％。在US6066480(申請(qǐng)人美國(guó)General Electric Company，申請(qǐng)日1998年9月21日)中，利用假絲酵母發(fā)酵97小時(shí)，DCA14產(chǎn)量達(dá)到94g/L。
綜上所述，目前尚沒有適用于大規(guī)模生產(chǎn)十四碳二元酸的有效的生物學(xué)方法。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的有效地大規(guī)模生產(chǎn)十四碳二元酸的工藝。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種有效和大規(guī)模生產(chǎn)十四碳二元酸的方法。
本發(fā)明的另一目的是提供用于該方法的微生物。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種熱帶假絲酵母，其特征在于它是熱帶假絲酵母(Candida Tropicalis)誘變菌株ES4-6-5，保藏號(hào)為CCTCC M202042。
在本發(fā)明的第二方面，提供了本發(fā)明熱帶假絲酵母的用途，它被用于生產(chǎn)α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级帷?br> 在本發(fā)明的第三方面，提供了一種生產(chǎn)α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级岬姆椒?，它包括步驟(a)用熱帶假絲酵母(Candida tropicals)誘變株ES4-6-5，保藏號(hào)CCTCC M202042，在含有糖質(zhì)作生長(zhǎng)碳源的液體培養(yǎng)基中，并在添加正烷烴C14的條件下發(fā)酵，(b)從培養(yǎng)基中分離出α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级帷?br> 在本發(fā)明的一優(yōu)選例中，所述的發(fā)酵條件是在28-35℃下，發(fā)酵90-200小時(shí)，較佳地120-150小時(shí)。
在另一優(yōu)選例中，所述的液體培養(yǎng)基包括葡萄糖10-50g/L，金屬磷酸鹽1-12g/L，酵母膏0-3.0g/L，玉米漿0-6g/L，尿素1.0-4.0g/L，NaCl 0.5-1.5g/L，KNO35-15g/L，pH5.5-7.5。
在另一優(yōu)選例中，在步驟(a)中，所述正烷烴C14采用流加的方式加入發(fā)酵罐中，發(fā)酵起始培養(yǎng)基中不含正烷烴C14，其流加總量控制在放罐體積的25-35％。
在另一優(yōu)選例中，所述的熱帶假絲酵母為接種于麥芽汁克氏瓶斜面的種子。
在另一優(yōu)選例中，所述的熱帶假絲酵母為生長(zhǎng)在液體種子培養(yǎng)基的熱帶假絲酵母，且所述的液體種子培養(yǎng)基包括葡萄糖10-50g/L，金屬磷酸鹽1-12g/L，酵母膏1.0-3.0g/L，玉米漿1.0-3.0g/L，尿素1.0-3.0g/L，NaCl 0.5-1.5g/L，C14正烷烴0-50mL/L，自來水配制，pH自然。
在另一優(yōu)選例中，在步驟(a)中，分批次補(bǔ)加碳源和/或氮源。較佳地，補(bǔ)加的碳源為葡萄糖或蔗糖，補(bǔ)加的氮源為玉米漿、酵母膏、銨鹽、尿素。


圖1是用本發(fā)明方法制備的十四碳二元酸的氣相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明人經(jīng)過深入而廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)并分離了一株能高效地產(chǎn)生α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级岬臒釒Ъ俳z酵母(Candida Tropicalis)，即誘變菌株ES4-6-5，并在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
本發(fā)明所用的菌株熱帶假絲酵母(Candida Tropicalis)誘變株ES4-6-5已經(jīng)于2002年11月4日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，中國(guó)，武漢市)，保藏號(hào)為M202042。其主要生理特性如下，其中+表示利用，-表示不利用。
一.糖類的發(fā)酵葡萄糖+，半乳糖+，蔗糖+，麥芽糖+，乳糖。
二.同化葡萄糖+，半乳糖+，山梨糖-，蔗糖+，麥芽糖+，纖維二糖+，海藻糖+，乳糖-，密二糖-，棉籽糖-，松三糖+，菊芋糖-，可溶性淀粉+，木糖+，L-阿戊糖+，D-阿戊糖-，核糖-，鼠李糖-，α-甲基葡萄糖苷+，甘油+，乙醇+，赤蘚醇-，甘露醇+，肌醇-，核糖醇+，半乳糖醇-，葡萄糖醇+，檸檬酸鈉-，丁二酸鈉+，乳酸鈣-。
三.生長(zhǎng)素的需要生物素++，維生素B1++，維生素B2+，維生素B6+，維生素B12+，葉酸+，煙酸+，泛酸+，肌醇+，對(duì)氨基苯甲酸+。
四.其它硝酸鹽-，凍化牛奶-，熊果酸分解-，凝固牛奶-，油脂酶-。
形態(tài)特征奶油白色，褶皺型，菌落為蛋糕狀和桃酥狀。
培養(yǎng)特征在麥芽汁液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，假菌絲多而長(zhǎng)；在烷烴種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，有一定數(shù)量的短假菌絲；在發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵時(shí)，大部分是單個(gè)橢圓的細(xì)胞。
在本發(fā)明的實(shí)施過程中，通常先制備發(fā)酵種子。可用于本發(fā)明的種子培養(yǎng)基包括(但并不限于)(1)10個(gè)巴林糖度的麥芽汁加2％瓊脂制成的固體克氏瓶斜面；(2)烷烴液體種子培養(yǎng)基包含葡萄糖10-50g/L，金屬磷酸鹽1-12g/L，酵母膏1.0-3.0g/L，玉米漿1.0-3.0g/L，尿素1.0-3.0g/L，NaCl 0.5-1.5g/L，C14正烷烴0-0.5％(V∶V)，自來水配制，pH自然。
通常，培養(yǎng)種子的過程為取一環(huán)接種酵母菌體，涂布在克氏瓶麥芽汁固體斜面上，于28-30℃培養(yǎng)40-48小時(shí)。取上述培養(yǎng)好的克氏瓶2-3個(gè)將菌種全部刮入100mL無菌水中，適當(dāng)搖勻后作為一級(jí)種子罐的種子。接種一級(jí)種子罐后，28-30℃培養(yǎng)24-32小時(shí)，當(dāng)菌株生長(zhǎng)光密度(OD)達(dá)到0.5以上，接種二級(jí)種子罐，28-30℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，當(dāng)菌株生長(zhǎng)光密度(OD)達(dá)到0.5以上，準(zhǔn)備接種發(fā)酵罐。
在獲得了發(fā)酵種子后，將其接種于生產(chǎn)發(fā)酵罐中。發(fā)酵可以是間歇式，也可以是連續(xù)式。
間歇式發(fā)酵通常分為兩個(gè)階段(1)菌體生長(zhǎng)階段即讓菌體在適合生長(zhǎng)的條件下生長(zhǎng)，直至菌體生長(zhǎng)到預(yù)定程度(如光密度大于0.6)。
(2)生產(chǎn)階段當(dāng)菌體生長(zhǎng)到預(yù)定程度(如光密度大于0.6)后，添加C14烷烴，從而在本發(fā)明熱帶假絲酵母(Candida Tropicalis)誘變株ES4-6-5的作用下產(chǎn)生α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级帷?br> 在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例中，把生長(zhǎng)好的種子接入pH4.0-7.0，最好為5.5-6.5的培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為葡萄糖10-50g/L，金屬磷酸鹽1-12g/L，酵母膏0-3.0g/L，玉米漿0-6g/L，尿素1.0-4.0g/L，NaCl 0.5-1.5g/L，KNO30.5-1.5g/L，在25-35℃，最好在28-32℃通氣發(fā)酵140-170小時(shí)。20小時(shí)前，pH控制在6.0以下，以菌體生長(zhǎng)為主。當(dāng)菌體生長(zhǎng)光密度(OD)大于0.6，開始流加烷烴，控制發(fā)酵液中烷烴濃度維持在5％(V∶V)左右，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至7.0，48小時(shí)以內(nèi)，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0，48-72小時(shí)，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.5，72-120小時(shí)，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.8，120小時(shí)至放罐，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.0。
在發(fā)酵過程中，可以補(bǔ)加碳源和/或氮源，以及其他成分。例如，在發(fā)酵至24、48、72小時(shí)時(shí)批式補(bǔ)加1％(W∶V)的葡萄糖或蔗糖；發(fā)酵至96小時(shí)補(bǔ)加2％(W∶V)的氮源，補(bǔ)加的氮源為玉米漿、酵母膏等有機(jī)氮源或銨鹽、尿素等無機(jī)氮源。培養(yǎng)基中的磷酸鹽可以從KH2PO4，NaH2PO4，K2HPO4和Na2HPO4中選一種。硝酸鹽可從鉀鹽或鈉鹽中選一種。
發(fā)酵過程中或發(fā)酵結(jié)束后，將產(chǎn)生的α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级釓陌l(fā)酵液中分離出來。在本發(fā)明的一優(yōu)選例中，在發(fā)酵結(jié)束后，加入適量的水，加堿至pH10-12，加熱至85-90℃，靜置過夜，進(jìn)行破乳分層，上層為殘烴，回收再用，放出中間清液，下層菌體層或壓濾或離心，合并清液，加入適量活性炭，在80-90℃脫色30分鐘，過濾除去活性炭后，脫色液加熱至60-70℃，用HCl或H2SO4調(diào)節(jié)pH至3-4進(jìn)行酸化結(jié)晶，冷卻至30℃后，壓濾，用空氣吹干，60℃烘干，得白色的DCA14結(jié)晶。
用本發(fā)明發(fā)酵生產(chǎn)十四碳二元酸的方法，在5噸罐上發(fā)酵144小時(shí)，發(fā)酵144小時(shí)發(fā)酵原液DCA14含量高達(dá)190g/L以上(相當(dāng)于清液產(chǎn)酸220g/L)，發(fā)酵重量轉(zhuǎn)化率達(dá)到90％以上，后處理總收率大于94％，產(chǎn)品純度達(dá)到98％以上。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例1小規(guī)模發(fā)酵(1)取一接種環(huán)菌種(熱帶假絲酵母(Candida Tropicalis)誘變株ES4-6-5，保藏號(hào)CCTCC M202042)，涂布在克氏瓶麥芽汁斜面上，29℃培養(yǎng)兩天。
(2)取上述菌種克氏瓶斜面一個(gè)，用100mL無菌水將菌體全部洗下，接入裝有6L烷烴種子培養(yǎng)基的10L攪拌式發(fā)酵罐中，于29℃培養(yǎng)24小時(shí)。烷烴種子培養(yǎng)基的成分為葡萄糖15g/L，KH2PO48g/L，酵母膏2g/L，玉米漿1g/L，尿素1.5g/L，NaCl 0.5g/L，C14正烷烴40mL/L，自來水配制，pH自然。
(3)在裝有6L培養(yǎng)基的10L發(fā)酵罐中，接入1.0L上述種子液，開始發(fā)酵。發(fā)酵培養(yǎng)基成分為葡萄糖10g/L，KH2PO48g/L，酵母膏1g/L，玉米漿1.5g/L，尿素1g/L，NaCl 1g/L，KNO37g/L，自來水配制，pH自然，121℃滅菌20分鐘。烷烴和補(bǔ)料糖分消。于29℃、600rpm、通氣量0.8vvm、罐壓1.0Mpa條件下培養(yǎng)。發(fā)酵前20小時(shí)pH自然，以菌體生長(zhǎng)為主，當(dāng)菌體生長(zhǎng)光密度(OD)大于0.6，開始流加烷烴，控制發(fā)酵液中烷烴濃度維持在5％(V∶V)左右，同時(shí)調(diào)節(jié)pH至7.0，48小時(shí)以內(nèi)，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.0，48-72小時(shí)，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.5，72-120小時(shí)，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至7.8，120小時(shí)至放罐，每4小時(shí)用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至8.0。發(fā)酵至24、48、72小時(shí)時(shí)批式補(bǔ)加1％(W∶V)的葡萄糖，發(fā)酵至96小時(shí)補(bǔ)加2％(W∶V)的玉米漿。從接種到發(fā)酵結(jié)束，總培養(yǎng)時(shí)間為142小時(shí)，發(fā)酵液中濕菌體80g/L，殘烴3.4％，放罐體積6.5L，加入烷烴總量1500g，用乙醚萃取NaOH滴定法測(cè)定發(fā)酵原液DC14含量為186.5g/L，烷烴對(duì)二元酸的重量轉(zhuǎn)化率為90.5％，摩爾轉(zhuǎn)化率為70％。將發(fā)酵液加水稀釋一倍，加堿調(diào)pH至10.0，加熱到90℃，趁熱離心，除去菌體和殘烴。離心清液加活性炭脫色后用硫酸調(diào)節(jié)pH至3.0，冷卻至室溫，過濾、洗滌至中性，80℃烘干12小時(shí)，得到產(chǎn)品1138g，氣相色譜分析總酸純度為99.0％，DC14純度為98.1％，提取收率為93％。
實(shí)施例2 大規(guī)模發(fā)酵按照實(shí)施例1的工藝控制，進(jìn)行5M3罐中試生產(chǎn)。一級(jí)種子罐200L，接種兩個(gè)克氏瓶，培養(yǎng)時(shí)間24-32小時(shí)，二級(jí)種子罐1M3，培養(yǎng)18-24小時(shí)。發(fā)酵148小時(shí)，共投烷烴905.83kg，放罐體積4.224M3，氣相色譜法測(cè)定發(fā)酵原液中DC14含量為197.4g/L，發(fā)酵重量收率為92.18％，摩爾收率為70.74％。后提取共得到779kg產(chǎn)物，收率為93.3％，產(chǎn)品經(jīng)氣相色譜分析總酸純度為98.9％，單酸含量為98.5％(圖1)。
實(shí)施例3發(fā)酵過程不補(bǔ)加糖條件下的小規(guī)模生產(chǎn)在10L發(fā)酵罐中裝液6.0L進(jìn)行十四碳二元酸發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為蔗糖20g/L，KH2PO48g/L，酵母膏1g/L，玉米漿1.5g/L，尿素1g/L，NaCl 1g/L，KNO37g/L，C14烷烴20％，自來水配制，pH自然，121℃滅菌20分鐘。發(fā)酵24、48、72、96小時(shí)分四批各補(bǔ)300mL烷烴，過程中不補(bǔ)糖，其余工藝條件及控制同實(shí)施例1，發(fā)酵160小時(shí)，放罐體積7.0L，共補(bǔ)烷烴2400mL。
發(fā)酵原液產(chǎn)酸用乙醚萃取NaOH滴定法測(cè)濃度為177g/L，殘烴2.7％，發(fā)酵重量收率85％。結(jié)果表明，在不補(bǔ)加糖條件下，本發(fā)明的的熱帶假絲酵母(Candidatropicals)突變株ES4-6-6仍可高效地生產(chǎn)α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级幔皇巧圆钣谘a(bǔ)糖條件的生產(chǎn)。
實(shí)施例4發(fā)酵過程不補(bǔ)加糖條件下的大規(guī)模生產(chǎn)在5M3罐中重復(fù)實(shí)施例3的工藝，發(fā)酵172小時(shí)，共補(bǔ)烷烴1270L，放罐體積3.8M3，殘烴5.0％，發(fā)酵原液產(chǎn)酸濃度乙醚萃取NaOH滴定法測(cè)定為185.6g/L，發(fā)酵重量收率為87.3％。
結(jié)果表明，在不補(bǔ)加糖條件下，本發(fā)明的的熱帶假絲酵母(Candida tropicals)突變株ES4-6-6仍可高效地、大規(guī)模地生產(chǎn)α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级?，只是稍差于補(bǔ)糖條件的生產(chǎn)。
菌種保藏本發(fā)明的菌株熱帶假絲酵母(Candida Tropicalis)誘變株ES4-6-5已經(jīng)于2002年11月4日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC，中國(guó)，武漢市)，保藏號(hào)為M202042。
在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種熱帶假絲酵母，其特征在于它是熱帶假絲酵母(Candida Tropicalis)誘變菌株ES4-6-5，保藏號(hào)為CCTCC M202042。
2.如權(quán)利要求1所述的熱帶假絲酵母的用途，其特征在于，用于生產(chǎn)α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级帷?br> 3.一種生產(chǎn)α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级岬姆椒?，其特征在于，包括步驟(a)用熱帶假絲酵母(Candida tropicals)誘變株ES4-6-5，保藏號(hào)CCTCC M202042，在含有糖質(zhì)作生長(zhǎng)碳源的液體培養(yǎng)基中，并在添加正烷烴C14的條件下發(fā)酵，(b)從培養(yǎng)基中分離出α、ω-正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级帷?br> 4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的發(fā)酵條件是在28-35℃下，發(fā)酵90-200小時(shí)。
5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的液體培養(yǎng)基包括葡萄糖10-50g/L，金屬磷酸鹽1-12g/L，酵母膏0-3.0g/L，玉米漿0-6g/L，尿素1.0-4.0g/L，NaCl 0.5-1.5g/L，KN035-15g/L，pH5.5-7.5。
6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟(a)中，所述正烷烴C14采用流加的方式加入發(fā)酵罐中，發(fā)酵起始培養(yǎng)基中不含正烷烴C14，其流加總量控制在放罐體積的25-35％。
7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述的熱帶假絲酵母為接種于麥芽汁克氏瓶斜面的種子。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的熱帶假絲酵母為生長(zhǎng)在液體種子培養(yǎng)基的熱帶假絲酵母，且所述的液體種子培養(yǎng)基包括葡萄糖10-50g/L，金屬磷酸鹽1-12g/L，酵母膏1.0-3.0g/L，玉米漿1.0-3.0g/L，尿素1.0-3.0g/L，NaCl 0.5-1.5g/L，C14正烷烴0-50mL/L，自來水配制，pH自然。
9.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟(a)中，分批次補(bǔ)加碳源和/或氮源。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，補(bǔ)加的碳源為葡萄糖或蔗糖，補(bǔ)加的氮源為玉米漿、酵母膏、銨鹽、尿素。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用微生物氧化C14正烷烴高產(chǎn)α、ω－正長(zhǎng)鏈?zhǔn)奶级?DCA
文檔編號(hào)C12P7/46GK1502700SQ0214543
公開日2004年6月9日 申請(qǐng)日期2002年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月20日
發(fā)明者陳遠(yuǎn)童, 衷金生, 劉文鳳, 李乃強(qiáng), 陳建康, 邱勇雋 申請(qǐng)人:上海凱賽生物技術(shù)有限公司