專(zhuān)利名稱：動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于動(dòng)物骨髓提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝，具體以鮮牛骨、鮮羊骨等動(dòng)物骨頭混合提取骨髓氨基酸的方法。
骨髓多肽對(duì)人體細(xì)胞免疫功能具有促進(jìn)作用早已有文獻(xiàn)記載，但目前尚未文獻(xiàn)公開(kāi)利用鮮牛骨、鮮羊等動(dòng)物骨頭混合提取骨髓氨基酸的方法。
本發(fā)明的目的在于提供一種以鮮牛骨、鮮羊骨等動(dòng)物骨頭混合提取骨髓氨基酸的生產(chǎn)工藝。
本發(fā)明之工藝如下1)取鮮牛骨或鮮牛骨及組織、鮮羊骨或鮮羊骨及組織、鮮駱駝骨或鮮駱駝骨及組織清洗破碎；2)對(duì)破碎后的動(dòng)物骨進(jìn)行脫臭、脫腥處理；3)蒸煮破碎后的動(dòng)物骨；4)在PH4—5的條件下進(jìn)行酸水解；5)在PH3.5—5.5，溫度35—55℃的條件下，通過(guò)胰蛋白酶和木瓜酶進(jìn)行酶解；6)過(guò)濾取液體進(jìn)行濃縮為濃縮液；7)將濃縮液噴霧干燥成粉末。
在取動(dòng)物骨時(shí)，還可以取鮮銀狐骨或鮮銀狐骨及組織和鮮梅花鹿骨或鮮梅花鹿骨及組織，骨頭可覆蓋一些組織，選取各動(dòng)物骨及組織的重量份為鮮牛骨及組織鮮羊骨及組織鮮駱駝骨及組織鮮銀狐骨及組織鮮梅花鹿骨及組織＝70—80∶20—30∶1—2∶0—1∶0—1。
在工藝過(guò)程中胰蛋白酸和木瓜酶的重量比為2∶0.5，酶的用量為底物重量的1—2‰，酶解時(shí)間為8—10小時(shí)。
實(shí)施例1取鮮牛骨及組織，鮮羊骨及組織，鮮駱駝骨及組織，鮮銀狐骨及組織，鮮梅花鹿骨及組織，重量份比為75∶25∶1∶1∶1按以上工藝，制得干粉末，取樣，利用高效液相色譜，依據(jù)紫外吸收光譜分析通則，分析測(cè)試其中骨髓多肽含量為0.38mg/mg。
實(shí)施例2鮮牛骨及組織，鮮羊骨及組織，鮮駱駝骨及組織，重量分比為80∶28∶2，按以上工藝，制得干粉末，取樣，利用高效液相色譜，依據(jù)紫外吸收光譜分析通則分析測(cè)試其中骨髓多肽含量為0.29mg/mg。
以上產(chǎn)品依據(jù)GB4789、2—5、10、11、15—94進(jìn)行食品衛(wèi)生檢驗(yàn)，結(jié)果如下砷(以As計(jì)，mg/mg)0.16，鉛(以Pb計(jì)，mg/kg)0.30，細(xì)菌總數(shù)(個(gè)/g)1.8×103，大腸菌群(個(gè)/100g)＜30，霉菌(個(gè)/g)＜10，酵母(個(gè)/g)＜10，致病毒未檢出。符號(hào)GB16740-1997保健(功能)食品通用標(biāo)準(zhǔn)。
利用日立835 50 AA儀J AICP9000，依據(jù)Z/NSJ001-1997對(duì)產(chǎn)品中的微量元素的含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下微量元素含量的單位mg/kg，磷415，鐵260，鈣211，鎂88.1，錳1.50，銅1.31，鋅9.6，硅216，鉀3356，鋁18.2，硼3.40，鍶0.07，鋰0.61，鉻0.42，鈉(％)1.44。依據(jù)GB/T14965-94對(duì)氨基酸的含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下天冬氨酸5.01％蘇氨酸1.76％絲氨酸2.47％谷氨酸11.68％甘氨酸18.28％丙氨酸8.30％胱氨酸0.92％頡氨酸3.19％蛋氨酸1.46％異亮氨酸1.80％亮氨酸4.00％酪氨酸0.78％苯丙氨酸2.73％賴氨酸3.43％組氨酸0.87％精氨酸7.51％脯氨酸10.86％γ氨基丁酸0.68％鳥(niǎo)氨酸0.31％羥基脯氨酸10.15％。
1、以上產(chǎn)品進(jìn)行毒性試驗(yàn)。
1急性毒性實(shí)驗(yàn)1.1試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，18-20g，雌雄各10只。
1.2試驗(yàn)方法取受試物30g。用蒸餾水配成150ml均勻混懸液，按0.3m1/10g.bw經(jīng)口灌胃，灌胃前停食16h，每三小時(shí)灌胃一次，連續(xù)給予三次，累計(jì)為0.9ml/10g.bW，含固形物重為0.18g，即18g/kg.bw，觀察一周，并記錄動(dòng)物中毒癥狀及死亡情況。結(jié)果見(jiàn)表1表1小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果
1.3結(jié)論一周內(nèi)動(dòng)物未見(jiàn)明顯中毒癥狀及死亡發(fā)生，LD50＞18g/kg。按急性毒性分級(jí)，該受試物屬無(wú)毒級(jí)類(lèi)物質(zhì)。
2.微核實(shí)驗(yàn)2.1試驗(yàn)動(dòng)物昆明種小鼠，24—26g，雌雄各30只。
2.2試驗(yàn)方法動(dòng)物按體重隨機(jī)分成6組，A組為陰性對(duì)照組，F(xiàn)組為環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組，另設(shè)四個(gè)試驗(yàn)劑量組。試驗(yàn)組劑量分別為2.0、4.0、6.0、8.0g/kg.bw。每只動(dòng)物經(jīng)口灌胃給予受試物。兩次灌胃間隔24小時(shí)，第二次灌胃6小時(shí)后，處死動(dòng)物，取胸骨骨髓涂片，Giemsa染色。每只動(dòng)物油鏡下觀察1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞，結(jié)果如下表2微核試驗(yàn)觀察結(jié)果(X±S)
2.3結(jié)論各實(shí)驗(yàn)紐與陰性對(duì)照組結(jié)果比較，差異無(wú)顯著必性；表明受試物骨髓微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
3.小鼠精子畸形試驗(yàn)3.1試驗(yàn)動(dòng)物昆明種雄性小鼠，23—25g，共30只。
3.2試驗(yàn)方法動(dòng)物按體重隨機(jī)分成5組，A組為陰性對(duì)照組，E組為環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組，B、C、D組為試驗(yàn)組。試驗(yàn)組劑量分別為5.0、10.0、15.0g/kg.bw。動(dòng)物連續(xù)灌胃五天后，再繼續(xù)喂養(yǎng)30天，處死動(dòng)物，取兩側(cè)副睪涂片，伊紅染色。每只動(dòng)物高倍鏡下觀察1000個(gè)精子，記錄畸形精子數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表3表3小鼠精子畸形試驗(yàn)結(jié)果(x±s)
3.3結(jié)論各實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組結(jié)果比較，差異無(wú)顯著性，表明該受試物精子畸形試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
4.Ames試驗(yàn)4.1試驗(yàn)菌珠采用經(jīng)鑒定符合生物學(xué)要求的鼠傷寒沙門(mén)氏菌組氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株進(jìn)行試驗(yàn)。
4.2試驗(yàn)方法采用多氯聯(lián)苯(PCB)誘導(dǎo)的大鼠肝勻漿作為體外活化系統(tǒng)(+S9)。受試物分為五個(gè)劑量組，每皿加入量0.2mL含2、8、40、200、500ug受試物(以固形物計(jì))分別作為各劑量組，0.103Mpa、20min滅菌處理。同時(shí)設(shè)置空白及陽(yáng)性對(duì)照組。采用平板摻入法記錄二次重復(fù)的平行樣品結(jié)果。
表4Ames試驗(yàn)結(jié)果(個(gè)/皿，x±s)
注-S9陽(yáng)性對(duì)照組TA97、98、100為2、4、7-TNFone，加入量為0.3ug/皿，TA102陽(yáng)性物為敵克松，加入量為50ug/皿。
+S9陽(yáng)性對(duì)照組TA97、98、100為2-AF，加入量為20ug/皿，TA102陽(yáng)性物為1、8一二羥基蒽醌，加入量為50ug/皿。
4.3結(jié)論受試物各組回變菌落數(shù)均未超過(guò)自發(fā)回變數(shù)2倍，且無(wú)劑量反應(yīng)關(guān)系，故Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
5.30天喂養(yǎng)試驗(yàn)5.1動(dòng)物品種Wistar大鼠，共80只，體重75-90g，雌雄各半。
5.2劑量與分組設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組，每組20只動(dòng)物，雌雄各半。按人群推薦日攝入量0.1g/kg.bw擴(kuò)大20、50、100倍分別作為低、中、高劑量組，相應(yīng)實(shí)際劑量為2.0、5.0、10.0g/kg.bw。受試物給予途徑按1.5ml/100gbw經(jīng)口灌胃，連續(xù)給予30天，對(duì)照組同時(shí)給予等量蒸餾水。然后按試驗(yàn)要求測(cè)定有關(guān)的指標(biāo)。
5.3觀察指標(biāo)5.3.1臨床檢查包括一般表現(xiàn)、行為、中毒及死亡情況，記錄各組動(dòng)物每周體重和進(jìn)食量，計(jì)算食物利用率。
5.3.2血液學(xué)檢查連續(xù)給予30天后，測(cè)定后組動(dòng)物血紅蛋白(Hb)含量、紅細(xì)胞(RBC)計(jì)數(shù)、白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)及分類(lèi)、血小板(PLT)計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)除網(wǎng)織紅細(xì)胞為試管色法涂片計(jì)數(shù)外，其余指標(biāo)均采用日本產(chǎn)SYSMEXTMF820型自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀測(cè)定。
5.3.3血液生化學(xué)檢查連續(xù)給予30天后，測(cè)定各組動(dòng)物血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(Glu)、肌酐(Cre)、總膽固醇(T.C)含量及白蛋白/球蛋白(Alb/Glo)比值。除葡萄糖采用美國(guó)Johnson公司產(chǎn)ONE TOUCHTM血糖分析儀快速紙片法測(cè)定外，其余指標(biāo)均采用德國(guó)產(chǎn)eppendorTMECOM-F 6124型自動(dòng)化分析儀、北京中生生物高技術(shù)公司生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒測(cè)定。
5.3.4稱取各組動(dòng)物主要臟器重量并計(jì)算臟器系數(shù)。
5.3.5病理組織學(xué)檢查對(duì)各組動(dòng)物進(jìn)行大體解剖檢查，并對(duì)心、肝、脾、肺、腎等主要臟器進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
5.4試驗(yàn)結(jié)果5.4.1臨床檢查試驗(yàn)中各劑量動(dòng)物無(wú)中毒癥狀。體重及食物利用率結(jié)果見(jiàn)表5。
表中可見(jiàn)各劑量組動(dòng)物及食物利用率與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)顯著性。
表5受試物對(duì)大鼠體重及食物利用率的影響(x±s)
5.4.2血液學(xué)檢查各組隨機(jī)抽取部分動(dòng)物測(cè)定血液指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表6.1、6.2。從表中可知，各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)顯著性。所有血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果均在正常范圍內(nèi)。
表6.1受試物對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(x±s)
表6.2受試物對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響(x±s)
5.4.3血液生化學(xué)檢查各組隨機(jī)抽取部分動(dòng)物測(cè)定血液生化學(xué)指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表7.1、7.2。從表中可知，各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)顯著性。
表7.1受試物對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響(x±s)
表7.2受試物對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響(x±s)
5.4.4臟器重量及系數(shù)稱取各組動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎主要臟器重量埋頭苦干計(jì)算臟器系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表8.1、8.2。從表中可知，各劑量組各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果，與對(duì)照組比較，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異無(wú)顯著性。
表8.1受試物大鼠臟器重量及系數(shù)的影響(X±S)
表8.2受試物大鼠臟器重量及系數(shù)的影響(X±S)
5.4.5病理組織學(xué)檢查結(jié)果對(duì)部分動(dòng)物心、肝、脾、肺、腎、腎上腺等臟器進(jìn)行大體解剖觀察和病理組織切片，除少量動(dòng)物肺組織呈現(xiàn)大鼠肺炎圖像外，其余臟器未見(jiàn)明顯中毒性病理改變。
由以上實(shí)驗(yàn)得知，本發(fā)明之工藝生產(chǎn)出的骨髓氨基酸多肽對(duì)兩種性別昆明種小鼠經(jīng)口毒性，累計(jì)三次經(jīng)口灌胃總量為18g/kg.bw，一周內(nèi)動(dòng)物未見(jiàn)明顯中毒癥狀，也無(wú)動(dòng)物死亡。按急性毒性分級(jí)，該受試物屬無(wú)毒級(jí)類(lèi)物質(zhì)。三項(xiàng)致突變?cè)囼?yàn)(小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠精子畸形試驗(yàn)、Ames試驗(yàn))結(jié)果均為陰性。30天喂養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明該受試物2.0、5.0、10.0g/kg.bw劑量(相當(dāng)于人群日推薦攝入量6g/60kg.bw的20、50、100倍)，對(duì)Wistar大鼠的臨床檢查(含體重增加和食物利用率)、血液學(xué)檢查、血液生化學(xué)檢查、主要臟器重量及臟器系數(shù)和病理組織學(xué)檢查均無(wú)明顯毒性影響。
二、以上產(chǎn)品進(jìn)行免疫性實(shí)驗(yàn)1.樣品給予途徑將樣品用無(wú)菌蒸餾水配成相應(yīng)濃度，各組小鼠每天經(jīng)口灌服相應(yīng)劑量，連續(xù)給予一個(gè)月后進(jìn)行以下試驗(yàn)工作。正常對(duì)照組灌服普通自來(lái)水。
2.動(dòng)物昆明種雄性小鼠，18—22g。湖北省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物批準(zhǔn)號(hào)為鄂動(dòng)醫(yī)管字19-007。
3.分組按生產(chǎn)廠家推薦人群日飲用6g/60kg.bw，擴(kuò)大10、20、30倍，設(shè)計(jì)低、中、高三個(gè)劑量組，即1、2、3g/kg.bw。
4.試驗(yàn)方法與結(jié)果4.1試驗(yàn)前后動(dòng)物體重記錄見(jiàn)表1.各組動(dòng)物間體重?zé)o明顯差異。
表1試驗(yàn)前后動(dòng)物體重記錄(克，X±S)
4.2對(duì)動(dòng)物淋巴器官/體重比值的影響見(jiàn)表2，各組動(dòng)物間胸腺體重比和脾臟/體重比值無(wú)明顯差異。
表2對(duì)動(dòng)物沐巴器官/體重比值的影響(X±S)
4.3 CouA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)方法MTT法(步驟同功能實(shí)驗(yàn)程序規(guī)定)結(jié)果見(jiàn)表3，從表3可見(jiàn)，與空白組比較，本產(chǎn)品中、高劑量組顯性增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)的脾淋巴細(xì)胞增殖能力。
表3對(duì)小鼠細(xì)胞免疫功能影響
與空白組比較*P＜0.01#0.01＜P＜0.05注取0.1ml測(cè)定OD570值4.4二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)方法耳腫脹法。用DNFB致敏小鼠后，第5天再用NDFB攻擊右耳，24h后處死動(dòng)物剪下左右耳殼用打孔器取下直徑8mm的耳片，稱重，以左右耳的重之差來(lái)表示DTH的程度。
結(jié)果見(jiàn)表3，從表3可見(jiàn)與空白組比較，本產(chǎn)品低、中、高劑量組顯著性增強(qiáng)小鼠對(duì)DNFB誘發(fā)的DTH反應(yīng)。
4.5血清溶血素的測(cè)定方法血凝法。按照功能實(shí)驗(yàn)程序操作，根據(jù)血清凝聚程度的級(jí)別計(jì)算出抗體積數(shù)。
結(jié)果從表4可見(jiàn)，本發(fā)明生產(chǎn)的產(chǎn)品高劑量組可顯著性升高血清溶血素含量。
表4對(duì)小鼠體液免疫功能的影響
與空白組比較*P＜0.01#0.01＜P＜0.054.6腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)方法半體內(nèi)法。制血20％的雞紅細(xì)胞懸液；每只鼠腹腔注射1mL該懸液，30min后處死動(dòng)物，將其仰立固定于鼠板上，開(kāi)腹，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2mL，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠1min，然后，吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片載玻片上，37℃溫育30min育畢用生理鹽水漂洗，涼干，以1∶1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸緩沖液染色3min，再用蒸餾水漂洗晾干。油鏡下計(jì)數(shù)100個(gè)巨噬細(xì)胞，按下式計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)
結(jié)果見(jiàn)表5，從表5可見(jiàn)，本產(chǎn)品低中、高劑量吞噬百分?jǐn)?shù)、吞噬指數(shù)均明顯高于空白對(duì)照組。
表5對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
與空白組比較*P＜0.01
4.7小鼠碳廓清試驗(yàn)方法依程序規(guī)定的方法。根據(jù)注入墨汁2min、10min后血中碳濃度(測(cè)吸光值)，計(jì)算出各組小鼠的吞噬指數(shù)。
結(jié)果見(jiàn)表6，從表6可見(jiàn)，本發(fā)明生產(chǎn)的產(chǎn)品低、中、高劑量組可顯著性提高小鼠碳廓清吞噬指數(shù)。
表6對(duì)小鼠碳廓清功能的影響
與空白組比較*P＜0.014.8抗體生成細(xì)胞檢測(cè)方法改良Jerne玻片法(略)。
結(jié)果見(jiàn)表7，從表7可見(jiàn)，中、高劑量組均明顯高于正常對(duì)照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異有顯著性(p＜0.01)。
表7對(duì)抗體生成細(xì)胞功能的影響
以上試驗(yàn)結(jié)果表明與空白組比較，1)中、高劑量組能明顯增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力；2)低、中、高劑量組能明顯增強(qiáng)二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)；3)中、高劑量組能明顯升高小鼠血清溶血素含量；4)低、中、高劑量組能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞功能；5)低、中、高劑量組能明顯增強(qiáng)小鼠碳廓清能力；6)中、高劑量組能明顯增強(qiáng)抗體生成細(xì)胞能力。按照免疫調(diào)節(jié)作用評(píng)價(jià)程序規(guī)定，該受試物具有免疫調(diào)節(jié)作用。
權(quán)利要求
1.一種動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝，其特征工藝為1)取鮮牛骨或鮮牛骨及組織、鮮羊骨或鮮羊骨及組織、鮮駱駝骨或鮮駱駝骨及組織清洗破碎；2)對(duì)破碎后的動(dòng)物骨進(jìn)行脫臭、脫腥處理；3)蒸煮破碎后的動(dòng)物骨；4)在PH4-5的條件下進(jìn)行酸水解；5)在PH3.5-5.5，溫度35-55℃的條件下，通過(guò)胰蛋白酶和木瓜酶進(jìn)行酶解；6)過(guò)濾取液體進(jìn)行濃縮為濃縮液；7)將濃縮液噴霧干燥。
2.如權(quán)利要求1所述動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝，其特征在于取得動(dòng)物骨還有鮮銀狐骨或鮮銀狐骨及組織，鮮梅花鹿骨或鮮梅花鹿骨及組織。
3.如權(quán)利要求1或2所述動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝，其特征在于動(dòng)物骨上覆組織，各動(dòng)物骨及組織的重量份為鮮牛骨及組織鮮羊骨及組織鮮駱駝骨及組織鮮銀狐骨及組織鮮梅花鹿骨及組織＝70—80∶20—30∶1—2∶0—1∶0—1。
4.如權(quán)利要求1所述動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝，其特征在于胰蛋白酶和木瓜酶的重量比為2∶0.5。
5.如權(quán)利要求4所述動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝，其特征在于酶的用量為底物重量的1-2‰。
6.如權(quán)利要求1或4或5所述動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝，其特征在于酶解時(shí)間為8-10小時(shí)。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種動(dòng)物骨髓及組織提取骨髓氨基酸多肽生產(chǎn)工藝。工藝為:取動(dòng)物骨清洗破碎;進(jìn)行脫臭、脫腥處理;蒸煮;在PH4－5的條件下進(jìn)行酸水解;在PH3.5－5.5,溫度35－55℃的條件下,通過(guò)胰蛋白酶和木瓜酶進(jìn)行酶解;過(guò)濾取液體進(jìn)行濃縮為流浸膏;將流浸膏噴霧干燥。該工藝簡(jiǎn)單易操作。所生產(chǎn)的骨髓氨基酸多肽具有提高機(jī)體免疫能力的功效。
文檔編號(hào)C12P21/02GK1327069SQ0111421
公開(kāi)日2001年12月19日 申請(qǐng)日期2001年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月24日
發(fā)明者謝啟安 申請(qǐng)人:謝啟安