專利名稱：一種可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種制備簡單，生物相容性好，可吸收的具有骨誘導(dǎo)活性多肽緩釋功能的微球及其制備方法。
背景技術(shù)：
骨缺損一直是骨科面臨的一個難題。近年來，通過在骨修復(fù)材料上復(fù)合骨生長因子越來越受到各國學(xué)者的關(guān)注，已成為當(dāng)今生物材料的研究熱點之一。骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMP)屬于轉(zhuǎn)化生長因子β超家族成員，是一種多功能的細(xì)胞生長因子，BMP具有促進(jìn)骨折愈合的能力，縮短了骨折的愈合周期。目前國內(nèi)外對BMP在臨床的骨誘導(dǎo)作用給予了很高的評價。其中ΒΜΡ-2是最主要的骨形成調(diào)控因子之一。但天然ΒΜΡ-2數(shù)量有限，且生活活性難以發(fā)揮。按ΒΜΡ-2核心功能區(qū)氨基酸序列合成的含I條24個核苷酸的短肽——ΒΜΡ-2活性多肽，相關(guān)研究表明ΒΜΡ-2 活性多肽具有良好的誘導(dǎo)成骨能力。然而ΒΜΡ-2活性多肽在體內(nèi)容易擴散稀釋，利用度低。為了更好的發(fā)揮ΒΜΡ-2活性多肽的生物學(xué)功能，實現(xiàn)其在骨修復(fù)部位的持續(xù)緩慢釋放，本發(fā)明以水溶性殼聚糖為載體材料，制備具有ΒΜΡ-2活性肽控釋功能的殼聚糖微球， 從而為骨修復(fù)領(lǐng)域提供具有生長因子控釋功能的載體系統(tǒng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種制備簡單，生物相容性好，效果顯著的可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
一種可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球，包括水溶性殼聚糖載體和ΒΜΡ-2活性多肽。水溶性殼聚糖載體和ΒΜΡ-2活性多肽的重量比為O. I 1000 :1。更優(yōu)的方案是所述的水溶性殼聚糖為羧甲基殼聚糖、山梨酰殼聚糖、對氨基苯甲酰殼聚糖等的一種。本發(fā)明的另一目的在于提供一種可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球的制備工藝。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
步驟一將O. Ig IOg水溶性殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
步驟二 將O. Olg 5g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ;
步驟三將5ml 20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤_80 (Span80) 的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加5mf50mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù)) 的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽 (BMP-2活性多肽)微球。本制備方法配方簡單，制備工藝易行。在24個小時內(nèi)，即可制備，制備簡單，生物相容性好。并具有低溫、低真空、低能耗、低污染的特點。符合“軟加工”(Soft Processing) 方式進(jìn)行材料的合成要求。本發(fā)明方法制備的微球形態(tài)上呈規(guī)則球形，粒徑分布在10 100 μ m,體外降解實驗發(fā)現(xiàn)生長因子呈持續(xù)緩慢釋放，制備工藝對活性肽的生物學(xué)功能沒有顯著影響。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明實施例I
I - I - - I
SK SK SK
騷騷騷步步步
將Ig羧甲基殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
將O. Ig BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ; :將20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加IOmL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。實施例2
步驟一將2g羧甲基殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
步驟二將O. Ig BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ;
步驟三:將20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加25mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。實施例3
步驟一將2g水溶性殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ；
步驟二將O. 2g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ;
步驟三將IOml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加25mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。實施例4
步驟一將將2g羧甲基殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
步驟二O. 1g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ;
步驟三:將20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加25mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。
實施例5
步驟一將Ig山梨酰殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
步驟二 將O. 4g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ; 步驟三將20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加25mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。實施例6
步驟一將3g山梨酰殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
步驟二 將O. 4g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ; 步驟三將20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加25mL 2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。實施例7
步驟一將2g對氨基苯甲酰殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
步驟二 將O. 2g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ; 步驟三將20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加15mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。實施例8
步驟一將4g對氨基苯甲酰殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ;
步驟二 將O. 4g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ; 步驟三將20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤-80 (Span80)的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌2h，然后向其中滴加25mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)。滴加完畢，繼續(xù)攪拌2h。沉淀，石油醚、 異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2 活性多肽)微球。以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明。對于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球，其特征在于包括水溶性殼聚糖載體和BMP-2活性多肽，水溶性殼聚糖載體和BMP-2活性多肽的重量比為O. I 1000 :1。
2.如權(quán)利要求I所述可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球，其特征在于所述的水溶性殼聚糖為羧甲基殼聚糖、山梨酰殼聚糖、對氨基苯甲酰殼聚糖等的一種。
3.—種可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球的制備工藝，其特征在于本發(fā)明采用如下技術(shù)方案步驟一將O. Ig IOg水溶性殼聚糖溶于20ml水中至完全溶解得到溶液A ；步驟二 將O. Olg 5g BMP-2活性多肽加入溶液A中，機械攪拌至混合均勻得到混合溶液B ;步驟三將5ml 20ml混合溶液B加入含2% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))乳化劑斯盤_80 (Span80) 的液體石蠟溶液IOOmL中，室溫下機械攪拌l 10h，然后向其中滴加5ml 50mL 5% (質(zhì)量分?jǐn)?shù))的三聚磷酸鈉(TPP)水溶液，使羧甲基殼聚糖發(fā)生交聯(lián)，滴加完畢，繼續(xù)攪拌flOh，沉淀，用石油醚、異丙醇反復(fù)漂洗，最后將沉淀物冷凍干燥至恒重即得到所需的可吸收載骨誘導(dǎo)多肽(BMP-2活性多肽)微球。
全文摘要
本發(fā)明一種可吸收的載骨誘導(dǎo)多肽微球，包括水溶性殼聚糖載體和BMP-2活性多肽，水溶性殼聚糖載體和BMP-2活性多肽的重量比為0.1～1000∶1。在24個小時內(nèi)，即可制備，方法簡單，生物相容性好，并具有低溫、低真空、低能耗、低污染的特點，符合“軟加工”(SoftProcessing)方式進(jìn)行材料的合成要求。本發(fā)明方法制備的微球形態(tài)上呈規(guī)則球形，粒徑分布在10～100μm，體外降解實驗發(fā)現(xiàn)生長因子呈持續(xù)緩慢釋放，制備工藝對活性肽的生物學(xué)功能沒有顯著影響。
文檔編號A61L27/54GK102600510SQ20111002153
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月19日
發(fā)明者甘少磊 申請人:北京博恩康生物科技有限公司