專利名稱：具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)功能的新的人蛋白及其編碼序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及新的編碼具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸，以及此多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。
人基因組學(xué)研究目前是國(guó)際上的熱點(diǎn)，除人染色體DNA大規(guī)模測(cè)序，表達(dá)序列測(cè)序(EST)的方法外，還缺少?gòu)墓δ荛_始的篩選具有功能基因的高通量的方法。
癌癥是危害人類健康的主要疾病之一。為了有效地治療和預(yù)防腫瘤，目前人們已越來(lái)越關(guān)注腫瘤的基因治療。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)研究具有抑癌功能的人蛋白及其激動(dòng)劑/抑制劑。
本發(fā)明的目的是提供一類新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、類似物和衍生物。
本發(fā)明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。
本發(fā)明的另一目的是提供生產(chǎn)這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。
在本發(fā)明的第一方面，提供新穎的分離出的具有抑癌功能的蛋白多肽，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQID NO:26；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
較佳地，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:26。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種分離的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。較佳地，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQID NO:26。更佳地，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQID NO:27的編碼區(qū)序列或全長(zhǎng)序列。
在本發(fā)明的第三方面，提供了含有上述多核苷酸的載體，以及被該載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞或者被上述多核苷酸直接轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
在本發(fā)明的第四方面，提供了制備具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制備方法，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有抑癌功能的蛋白的條件下，培養(yǎng)上述被轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本發(fā)明的第五方面，提供了與上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特異性結(jié)合的抗體。還提供了可用于檢測(cè)的核酸分子，它含有上述的多核苷酸中連續(xù)的10-800個(gè)核苷酸。
在本發(fā)明的第六方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。這些藥物組合物可治療癌癥以及細(xì)胞異常增殖等病癥。
本發(fā)明的其它方面由于本文的技術(shù)的公開，對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。
本發(fā)明采用大規(guī)模cDNA克隆轉(zhuǎn)染癌細(xì)胞，在獲得具有抑癌作用的基礎(chǔ)上，經(jīng)測(cè)序證明為新的基因，進(jìn)一步得到全長(zhǎng)cDNA克隆。DNA轉(zhuǎn)染試驗(yàn)證明，本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白對(duì)癌細(xì)胞(肝癌細(xì)胞)具有抑制克隆形成的作用，其抑制率在50％或50％以上。
如本文所用，“分離的”是指物質(zhì)從其原始環(huán)境中分離出來(lái)(如果是天然的物質(zhì)，原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細(xì)胞內(nèi)的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的，但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質(zhì)中分開，則為分離純化的。
如本文所用，“分離的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然與其相關(guān)的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質(zhì)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)純化技術(shù)純化具有抑癌功能的蛋白。基本上純的多肽在非還原聚丙烯酰胺凝膠上能產(chǎn)生單一的主帶。具有抑癌功能的蛋白多肽的純度能用氨基酸序列分析。
本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽，優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產(chǎn)物，或是化學(xué)合成的產(chǎn)物，或使用重組技術(shù)從原核或真核宿主(例如，細(xì)菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中產(chǎn)生。根據(jù)重組生產(chǎn)方案所用的宿主，本發(fā)明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發(fā)明還包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和類似物。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持本發(fā)明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物學(xué)功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(ⅰ)有一個(gè)或多個(gè)保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)選保守性氨基酸殘基)被取代的多肽，而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的，或(ⅱ)在一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基中具有取代基團(tuán)的多肽，或(ⅲ)成熟多肽與另一個(gè)化合物(比如延長(zhǎng)多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(ⅳ)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導(dǎo)序列或分泌序列或用來(lái)純化此多肽的序列或蛋白原序列)。根據(jù)本文的教導(dǎo)，這些片段、衍生物和類似物屬于本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員公知的范圍。
本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。以PP894蛋白(在本申請(qǐng)中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO:3所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡(jiǎn)并的變異體。如本文所用，“簡(jiǎn)并的變異體”在本發(fā)明中是指編碼具有SEQ ID NO:2的蛋白質(zhì)，但與SEQ IDNO:3所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。以PP1030蛋白(在本申請(qǐng)中，蛋白質(zhì)的命名采用其克隆編號(hào))為例，編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO:6所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡(jiǎn)并的變異體。如本文所用，“簡(jiǎn)并的變異體”在本發(fā)明中是指編碼具有SEQ ID NO:5的蛋白質(zhì)，但與SEQ ID NO:6所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。對(duì)于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此類推。對(duì)于其他具有抑癌功能的蛋白，可依此類推。
編碼成熟多肽的多核苷酸包括只編碼成熟多肽的編碼序列；成熟多肽的編碼序列和各種附加編碼序列；成熟多肽的編碼序列(和任選的附加編碼序列)以及非編碼序列。
術(shù)語(yǔ)“編碼多肽的多核苷酸”可以是包括編碼此多肽的多核苷酸，也可以是還包括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。
本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體，其編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領(lǐng)域所知的，等位變異體是一個(gè)多核苷酸的替換形式，它可能是一個(gè)或多個(gè)核苷酸的取代、缺失或插入，但不會(huì)從實(shí)質(zhì)上改變其編碼的多肽的功能。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交且兩個(gè)序列之間具有至少50％，較佳地至少70％，更佳地至少80％相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在嚴(yán)格條件下與本發(fā)明所述多核苷酸可雜交的多核苷酸。在本發(fā)明中，“嚴(yán)格條件”是指(1)在較低離子強(qiáng)度和較高溫度下的雜交和洗脫，如0.2×SSC,0.1％SDS,60℃；或(2)雜交時(shí)加有變性劑，如50％(v/v)甲酰胺，0.1％小牛血清/0.1％Ficoll,42℃等；或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在95％以上，更好是97％以上時(shí)才發(fā)生雜交。并且，可雜交的多核苷酸編碼的多肽與SEQ IDNO:2所示的成熟多肽有相同的生物學(xué)功能和活性。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交的核酸片段。如本文所用，“核酸片段”的長(zhǎng)度至少含15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的擴(kuò)增技術(shù)(如PCR)以確定和/或分離編碼具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本發(fā)明中的多肽和多核苷酸優(yōu)選以分離的形式提供，更佳地被純化至均質(zhì)。
本發(fā)明的DNA序列能用幾種方法獲得。例如，用本領(lǐng)域熟知的雜交技術(shù)分離DNA。這些技術(shù)包括但不局限于1)用探針與基因組或cDNA文庫(kù)雜交以檢出同源性核苷酸序列，和2)表達(dá)文庫(kù)的抗體篩選以檢出具有共同結(jié)構(gòu)特征的克隆的DNA片段。
編碼具有抑癌功能的蛋白的特異DNA片段序列產(chǎn)生也能用下列方法獲得1)從基因組DNA分離雙鏈DNA序列；2)化學(xué)合成DNA序列以獲得所需多肽的雙鏈DNA。
上述提到的方法中，分離基因組DNA最不常用。當(dāng)需要的多肽產(chǎn)物的整個(gè)氨基酸序列已知時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是經(jīng)常選用的方法。如果所需的氨基酸的整個(gè)序列不清楚時(shí)，DNA序列的直接化學(xué)合成是不可能的，選用的方法是cDNA序列的分離。分離感興趣的cDNA的標(biāo)準(zhǔn)方法是從高表達(dá)該基因的供體細(xì)胞分離mRNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，形成質(zhì)?；蚴删wcDNA文庫(kù)。提取mRNA的方法已有多種成熟的技術(shù)，試劑盒也可從商業(yè)途徑獲得(Qiagene)。而構(gòu)建cDNA文庫(kù)也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。還可得到商業(yè)供應(yīng)的cDNA文庫(kù)，如Clontech公司的不同cDNA文庫(kù)。當(dāng)結(jié)合使用聚合酶反應(yīng)技術(shù)時(shí)，即使極少的表達(dá)產(chǎn)物也能克隆。
可用常規(guī)方法從這些cDNA文庫(kù)中篩選本發(fā)明的基因。這些方法包括(但不限于)(1)DNA-DNA或DNA-RNA雜交；(2)標(biāo)志基因的功能出現(xiàn)或喪失；(3)測(cè)定具有抑癌功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄本的水平；(4)通過(guò)免疫學(xué)技術(shù)或測(cè)定生物學(xué)活性，來(lái)檢測(cè)基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物。上述方法可單用，也可多種方法聯(lián)合應(yīng)用。
在第(1)種方法中，雜交所用的探針是與本發(fā)明的多核苷酸的任何一部分同源，其長(zhǎng)度至少15個(gè)核苷酸，較好是至少30個(gè)核苷酸，更好是至少50個(gè)核苷酸，最好是至少100個(gè)核苷酸。此外，探針的長(zhǎng)度通常在2kb之內(nèi)，較佳地為1kb之內(nèi)。此處所用的探針通常是在本發(fā)明的基因DNA序列信息的基礎(chǔ)上化學(xué)合成的DNA序列。本發(fā)明的基因本身或者片段當(dāng)然可以用作探針。DNA探針的標(biāo)記可用放射性同位素，熒光素或酶(如堿性磷酸酶)等。
在第(4)種方法中，檢測(cè)具有抑癌功能的蛋白基因表達(dá)的蛋白產(chǎn)物可用免疫學(xué)技術(shù)如Western印跡法，放射免疫沉淀法，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。
應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985；230:1350-1354)被優(yōu)選用于獲得本發(fā)明的基因。特別是很難從文庫(kù)中得到全長(zhǎng)的cDNA時(shí)，可優(yōu)選使用RACE法(RACE-cDNA末端快速擴(kuò)增法)，用于PCR的引物可根據(jù)本文所公開的本發(fā)明的序列信息適當(dāng)?shù)剡x擇，并可用常規(guī)方法合成?？捎贸Ｒ?guī)方法如通過(guò)凝膠電泳分離和純化擴(kuò)增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本發(fā)明的基因，或者各種DNA片段等的核苷酸序列的測(cè)定可用常規(guī)方法如雙脫氧鏈終止法(Sanger et al.PNAS,1977,74:5463-5467)。這類核苷酸序列測(cè)定也可用商業(yè)測(cè)序試劑盒等。為了獲得全長(zhǎng)的cDNA序列，測(cè)序需反復(fù)進(jìn)行。有時(shí)需要測(cè)定多個(gè)克隆的cDNA序列，才能拼接成全長(zhǎng)的cDNA序列。
本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明的多核苷酸的載體，以及用本發(fā)明的載體或具有抑癌功能的蛋白編碼序列經(jīng)基因工程產(chǎn)生的宿主細(xì)胞，以及經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明所述多肽的方法。
通過(guò)常規(guī)的重組DNA技術(shù)，可利用本發(fā)明的多聚核苷酸序列可用來(lái)表達(dá)或生產(chǎn)重組的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science,1984:224:1431)。一般來(lái)說(shuō)有以下步驟(1)．用本發(fā)明的編碼具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或變異體)，或用含有該多核苷酸的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)合適的宿主細(xì)胞；(2)．在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的宿主細(xì)胞；(3)．從培養(yǎng)基或細(xì)胞中分離、純化蛋白質(zhì)。
本發(fā)明中，具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重組表達(dá)載體中。術(shù)語(yǔ)“重組表達(dá)載體”指本領(lǐng)域熟知的細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體、酵母質(zhì)粒、植物細(xì)胞病毒、哺乳動(dòng)物細(xì)胞病毒如腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒或其他載體。在本發(fā)明中適用的載體包括但不限于在細(xì)菌中表達(dá)的基于T7的表達(dá)載體(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125)；在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的pMSXND表達(dá)載體(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)的來(lái)源于桿狀病毒的載體?？傊灰茉谒拗黧w內(nèi)復(fù)制和穩(wěn)定，任何質(zhì)粒和載體都可以用。表達(dá)載體的一個(gè)重要特征是通常含有復(fù)制起點(diǎn)、啟動(dòng)子、標(biāo)記基因和翻譯控制元件。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的方法能用于構(gòu)建含具有抑癌功能的人蛋白編碼DNA序列和合適的轉(zhuǎn)錄/翻譯控制信號(hào)的表達(dá)載體。這些方法包括體外重組DNA技術(shù)、DNA合成技術(shù)、體內(nèi)重組技術(shù)等(Sambroook,et al.Molecular Cloning,a Laboratory Manual,coldSpring Harbor Laboratory.New York,1989)。所述的DNA序列可有效連接到表達(dá)載體中的適當(dāng)啟動(dòng)子上，以指導(dǎo)mRNA合成。這些啟動(dòng)子的代表性例子有大腸桿菌的lac或trp啟動(dòng)子；λ噬菌體PL啟動(dòng)子；真核啟動(dòng)子包括CMV立即早期啟動(dòng)子、HSV胸苷激酶啟動(dòng)子、早期和晚期SV40啟動(dòng)子、反轉(zhuǎn)錄病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核細(xì)胞或其病毒中表達(dá)的啟動(dòng)子。表達(dá)載體還包括翻譯起始用的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止子。
此外，表達(dá)載體優(yōu)選地包含一個(gè)或多個(gè)選擇性標(biāo)記基因，以提供用于選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的表型性狀，如真核細(xì)胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(GFP)，或用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。
包含上述的適當(dāng)DNA序列以及適當(dāng)啟動(dòng)子或者控制序列的載體，可以用于轉(zhuǎn)化適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞，以使其能夠表達(dá)蛋白質(zhì)。
宿主細(xì)胞可以是原核細(xì)胞，如細(xì)菌細(xì)胞；或是低等真核細(xì)胞，如酵母細(xì)胞；或是高等真核細(xì)胞，如哺乳動(dòng)物細(xì)胞。代表性例子有大腸桿菌，鏈霉菌屬；鼠傷寒沙門氏菌的細(xì)菌細(xì)胞；真菌細(xì)胞如酵母；植物細(xì)胞；果蠅S2或Sf9的昆蟲細(xì)胞；CHO、COS或Bowes黑素瘤細(xì)胞的動(dòng)物細(xì)胞等。
本發(fā)明的多核苷酸在高等真核細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，如果在載體中插入增強(qiáng)子序列時(shí)將會(huì)使轉(zhuǎn)錄得到增強(qiáng)。增強(qiáng)子是DNA的順式作用因子，通常大約有10到300個(gè)堿基對(duì)，作用于啟動(dòng)子以增強(qiáng)基因的轉(zhuǎn)錄。可舉的例子包括在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的100到270個(gè)堿基對(duì)的SV40增強(qiáng)子、在復(fù)制起始點(diǎn)晚期一側(cè)的多瘤增強(qiáng)子以及腺病毒增強(qiáng)子等。
本領(lǐng)域一般技術(shù)人員都清楚如何選擇適當(dāng)?shù)妮d體、啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和宿主細(xì)胞。
用重組DNA轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)技術(shù)進(jìn)行。當(dāng)宿主為原核生物如大腸桿菌時(shí)，能吸收DNA的感受態(tài)細(xì)胞可在指數(shù)生長(zhǎng)期后收獲，用CaCl2法處理，所用的步驟在本領(lǐng)域眾所周知?？晒┻x擇的是用MgCl2。如果需要，轉(zhuǎn)化也可用電穿孔的方法進(jìn)行。當(dāng)宿主是真核生物，可選用如下的DNA轉(zhuǎn)染方法磷酸鈣共沉淀法，常規(guī)機(jī)械方法如顯微注射、電穿孔、脂質(zhì)體包裝等。
獲得的轉(zhuǎn)化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng)，表達(dá)本發(fā)明的基因所編碼的多肽。根據(jù)所用的宿主細(xì)胞，培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基可選自各種常規(guī)培養(yǎng)基。在適于宿主細(xì)胞生長(zhǎng)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。當(dāng)宿主細(xì)胞生長(zhǎng)到適當(dāng)?shù)募?xì)胞密度后，用合適的方法(如溫度轉(zhuǎn)換或化學(xué)誘導(dǎo))誘導(dǎo)選擇的啟動(dòng)子，將細(xì)胞再培養(yǎng)一段時(shí)間。
在上面的方法中的重組多肽可包被于細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外或在細(xì)胞膜上表達(dá)或分泌到細(xì)胞外。如果需要，可利用其物理的、化學(xué)的和其它特性通過(guò)各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于常規(guī)的復(fù)性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過(guò)濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術(shù)及這些方法的結(jié)合。
重組的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。這些用途包括(但不限于)直接做為藥物治療具有抑癌功能的蛋白功能低下或喪失所致的疾病，和用于篩選促進(jìn)或?qū)咕哂幸职┕δ艿牡鞍坠δ艿目贵w、多肽或其它配體。例如，抗體可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表達(dá)的重組具有抑癌功能的人蛋白篩選多肽庫(kù)可用于尋找有治療價(jià)值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本發(fā)明也提供了篩選藥物以鑒定提高(激動(dòng)劑)或阻遏(拮抗劑)具有抑癌功能的人蛋白的藥劑的方法。激動(dòng)劑提高具有抑癌功能的人蛋白刺激細(xì)胞增殖等生物功能，而拮抗劑阻止和治療與細(xì)胞過(guò)度增殖有關(guān)的紊亂如各種癌癥。例如，能在藥物的存在下，將哺乳動(dòng)物細(xì)胞或表達(dá)具有抑癌功能的人蛋白的膜制劑與標(biāo)記的具有抑癌功能的人蛋白一起培養(yǎng)。然后測(cè)定藥物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑包括篩選出的抗體、化合物、受體缺失物和類似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑可以與具有抑癌功能的人蛋白結(jié)合并消除其功能，或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的產(chǎn)生，或是與多肽的活性位點(diǎn)結(jié)合使多肽不能發(fā)揮生物學(xué)功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑可用于治療用途。
在篩選作為拮抗劑的化合物時(shí)，可以將具有抑癌功能的蛋白加入生物分析測(cè)定中，通過(guò)測(cè)定化合物影響具有抑癌功能的蛋白和其受體之間的相互作用來(lái)確定化合物是否是拮抗劑。用上述篩選化合物的同樣方法，可以篩選出起拮抗劑作用的受體缺失物和類似物。
本發(fā)明的多肽可直接用于疾病治療，例如，各種惡性腫瘤、和細(xì)胞異常增殖等。
本發(fā)明的多肽，及其片段、衍生物、類似物或它們的細(xì)胞可以用來(lái)作為抗原以生產(chǎn)抗體。這些抗體可以是多克隆或單克隆抗體。多克隆抗體可以通過(guò)將此多肽直接注射動(dòng)物的方法得到。制備單克隆抗體的技術(shù)包括雜交瘤技術(shù)，三瘤技術(shù)，人B-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，EBV-雜交瘤技術(shù)等。
可以將本發(fā)明的多肽和拮抗劑與合適的藥物載體組合后使用。這些載體可以是水、葡萄糖、乙醇、鹽類、緩沖液、甘油以及它們的組合。組合物包含安全有效量的多肽或拮抗劑以及不影響藥物效果的載體和賦形劑。這些組合物可以作為藥物用于疾病治療。
本發(fā)明還提供含有一種或多種容器的藥盒或試劑盒，容器中裝有一種或多種本發(fā)明的藥用組合物成分。與這些容器一起，可以有由制造、使用或銷售藥品或生物制品的政府管理機(jī)構(gòu)所給出的指示性提示，該提示反映出生產(chǎn)、使用或銷售的政府管理機(jī)構(gòu)許可其在人體上施用。此外，本發(fā)明的多肽可以與其它的治療化合物結(jié)合使用。
藥物組合物可以以方便的方式給藥，如通過(guò)局部、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)或皮內(nèi)的給藥途徑。具有抑癌功能的蛋白以有效地治療和/或預(yù)防具體的適應(yīng)癥的量來(lái)給藥。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和劑量范圍將取決于許多因素，如給藥方式、待治療者的健康條件和診斷醫(yī)生的判斷。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多種治療目的。基因治療技術(shù)可用于治療由于具有抑癌功能的蛋白的無(wú)表達(dá)或異常/無(wú)活性的具有抑癌功能的蛋白的表達(dá)所致的細(xì)胞增殖、發(fā)育或代謝異常。重組的基因治療載體(如病毒載體)可設(shè)計(jì)成表達(dá)變異的具有抑癌功能的蛋白，以抑制內(nèi)源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如，一種變異的具有抑癌功能的蛋白可以是縮短的、缺失了信號(hào)傳導(dǎo)功能域的具有抑癌功能的蛋白，雖可與下游的底物結(jié)合，但缺乏信號(hào)傳導(dǎo)活性。因此重組的基因治療載體可用于治療具有抑癌功能的蛋白表達(dá)或活性異常所致的疾病。來(lái)源于病毒的表達(dá)載體如逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺病毒相關(guān)病毒、單純皰疹病毒、細(xì)小病毒等可用于將具有抑癌功能的蛋白基因轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。構(gòu)建攜帶具有抑癌功能的蛋白基因的重組病毒載體的方法可見于已有文獻(xiàn)(Sambrook,et al.)。另外重組具有抑癌功能的人蛋白基因可包裝到脂質(zhì)體中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反義RNA和DNA)以及核酶也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。核酶是一種能特異性分解特定RNA的酶樣RNA分子，其作用機(jī)制是核酶分子與互補(bǔ)的靶RNA特異性雜交后進(jìn)行核酸內(nèi)切作用。反義的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技術(shù)獲得，如固相磷酸酰胺化學(xué)合成法合成寡核苷酸的技術(shù)已廣泛應(yīng)用。反義RNA分子可通過(guò)編碼該RNA的DNA序列在體外或體內(nèi)轉(zhuǎn)錄獲得。這種DNA序列已整合到載體的RNA聚合酶啟動(dòng)子的下游。為了增加核酸分子的穩(wěn)定性，可用多種方法對(duì)其進(jìn)行修飾，如增加兩側(cè)的序列長(zhǎng)度，核糖核苷之間的連接應(yīng)用磷酸硫酯鍵或肽鍵而非磷酸二酯鍵。
多聚核苷酸導(dǎo)入組織或細(xì)胞內(nèi)的方法包括將多聚核苷酸直接注入到體內(nèi)組織中；或在體外通過(guò)載體(如病毒、噬菌體或質(zhì)粒等)先將多聚核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞中，再將細(xì)胞移植到體內(nèi)等。
本發(fā)明的多肽還可用作肽譜分析，例如，多肽可用物理的、化學(xué)或酶進(jìn)行特異性切割，并進(jìn)行一維或二維或三維的凝膠電泳分析。
本發(fā)明還提供了針對(duì)具有抑癌功能的人蛋白抗原決定簇的抗體。這些抗體包括(但不限于)多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達(dá)文庫(kù)產(chǎn)生的片段。
抗具有抑癌功能的人蛋白的抗體可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)中，檢測(cè)活檢標(biāo)本中的具有抑癌功能的人蛋白。
與具有抑癌功能的人蛋白結(jié)合的單克隆抗體也可用放射性同位素標(biāo)記，注入體內(nèi)可跟蹤其位置和分布。這種放射性標(biāo)記的抗體可作為一種非創(chuàng)傷性診斷方法用于腫瘤細(xì)胞的定位和判斷是否有轉(zhuǎn)移。
本發(fā)明中的抗體可用于治療或預(yù)防與具有抑癌功能的人蛋白相關(guān)的疾病。給予適當(dāng)劑量的抗體可以刺激或阻斷具有抑癌功能的人蛋白的產(chǎn)生或活性。
抗體也可用于設(shè)計(jì)針對(duì)體內(nèi)某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高親和性的單克隆抗體可與細(xì)菌或植物毒素(如白喉毒素，蓖麻蛋白，紅豆堿等)共價(jià)結(jié)合。一種通常的方法是用巰基交聯(lián)劑如SPDP，攻擊抗體的氨基，通過(guò)二硫鍵的交換，將毒素結(jié)合于抗體上，這種雜交抗體可用于殺滅具有抑癌功能的人蛋白陽(yáng)性的細(xì)胞。
多克隆抗體的生產(chǎn)可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫動(dòng)物，如家兔，小鼠，大鼠等。多種佐劑可用于增強(qiáng)免疫反應(yīng)，包括但不限于弗氏佐劑等。
具有抑癌功能的人蛋白單克隆抗體可用雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。將人恒定區(qū)和非人源的可變區(qū)結(jié)合的嵌合抗體可用已有的技術(shù)生產(chǎn)(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生產(chǎn)單鏈抗體的技術(shù)(U.S.PatNo.4946778)也可用于生產(chǎn)抗具有抑癌功能的人蛋白的單鏈抗體。
能與具有抑癌功能的人蛋白結(jié)合的多肽分子可通過(guò)篩選由各種可能組合的氨基酸結(jié)合于固相物組成的隨機(jī)多肽庫(kù)而獲得。篩選時(shí)，必須對(duì)具有抑癌功能的人蛋白分子進(jìn)行標(biāo)記。
本發(fā)明還涉及定量和定位檢測(cè)具有抑癌功能的人蛋白水平的診斷試驗(yàn)方法。這些試驗(yàn)是本領(lǐng)域所熟知的，且包括FISH測(cè)定和放射免疫測(cè)定。試驗(yàn)中所檢測(cè)的具有抑癌功能的人蛋白水平，可以用作解釋具有抑癌功能的人蛋白在各種疾病中的重要性和用于診斷具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。在診斷方面，具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于檢測(cè)具有抑癌功能的蛋白的表達(dá)與否或在疾病狀態(tài)下具有抑癌功能的蛋白的異常表達(dá)。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于對(duì)活檢標(biāo)本的雜交以判斷具有抑癌功能的蛋白的表達(dá)異常。雜交技術(shù)包括Southern印跡法，Northern印跡法、原位雜交等。這些技術(shù)方法都是公開的成熟技術(shù)，相關(guān)的試劑盒都可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA芯片(又稱為“基因芯片”)上，用于分析組織中基因的差異表達(dá)分析和基因診斷。用具有抑癌功能的蛋白特異的引物進(jìn)行RNA-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)體外擴(kuò)增也可檢測(cè)具有抑癌功能的蛋白的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
檢測(cè)具有抑癌功能的蛋白基因的突變也可用于診斷具有抑癌功能的蛋白相關(guān)的疾病。具有抑癌功能的蛋白突變的形式包括與正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的點(diǎn)突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等?？捎靡延械募夹g(shù)如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測(cè)突變。另外，突變有可能影響蛋白的表達(dá)，因此用Northern印跡法、Western印跡法可間接判斷基因有無(wú)突變。
本發(fā)明的序列對(duì)染色體鑒定也是有價(jià)值的。該序列會(huì)特異性地針對(duì)某條人染色體具體位置且并可以與其雜交。目前，需要鑒定染色體上的各基因的具體位點(diǎn)?，F(xiàn)在，只有很少的基于實(shí)際序列數(shù)據(jù)(重復(fù)多態(tài)性)的染色體標(biāo)記物可用于標(biāo)記染色體位置。根據(jù)本發(fā)明，為了將這些序列與疾病相關(guān)基因相關(guān)聯(lián)，其重要的第一步就是將這些DNA序列定位于染色體上。
簡(jiǎn)而言之，根據(jù)cDNA制備PCR引物(優(yōu)選15-35bp)，可以將序列定位于染色體上。然后，將這些引物用于PCR篩選含各條人染色體的體細(xì)胞雜合細(xì)胞。只有那些含有相應(yīng)于引物的人基因的雜合細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生擴(kuò)增的片段。
體細(xì)胞雜合細(xì)胞的PCR定位法，是將DNA定位到具體染色體的快捷方法。使用本發(fā)明的的寡核苷酸引物，通過(guò)類似方法，可利用一組來(lái)自特定染色體的片段或大量基因組克隆而實(shí)現(xiàn)亞定位。可用于染色體定位的其它類似策略包括原位雜交、用標(biāo)記的流式分選的染色體預(yù)篩選和雜交預(yù)選，從而構(gòu)建染色體特異的cDNA庫(kù)。
將cDNA克隆與中期染色體進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)，可以在一個(gè)步驟中精確地進(jìn)行染色體定位。此技術(shù)的綜述，參見Verma等，Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到準(zhǔn)確的染色體位置，此序列在染色體上的物理位置就可以與基因圖數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)。這些數(shù)據(jù)可見于例如，V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通過(guò)與Johns Hopkins University Welch Medical Library聯(lián)機(jī)獲得)。然后可通過(guò)連鎖分析，確定基因與業(yè)已定位到染色體區(qū)域上的疾病之間的關(guān)系。
接著，需要測(cè)定患病和未患病個(gè)體間的cDNA或基因組序列差異。如果在一些或所有的患病個(gè)體中觀察到某突變，而該突變?cè)谌魏握€(gè)體中未觀察到，則該突變可能是疾病的病因。比較患病和未患病個(gè)體，通常涉及首先尋找染色體中結(jié)構(gòu)的變化，如從染色體水平可見的或用基于cDNA序列的PCR可檢測(cè)的缺失或易位。根據(jù)目前的物理作圖和基因定位技術(shù)的分辨能力，被精確定位至與疾病有關(guān)的染色體區(qū)域的cDNA，可以是50至500個(gè)潛在致病基因間之一種(假定1兆堿基作圖分辨能力和每20kb對(duì)應(yīng)于一個(gè)基因)。
本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全長(zhǎng)序列或其片段通?？梢杂肞CR擴(kuò)增法、重組法或人工合成的方法獲得。對(duì)于PCR擴(kuò)增法，可根據(jù)本發(fā)明所公開的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開放閱讀框序列來(lái)設(shè)計(jì)引物，并用市售的cDNA庫(kù)或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫(kù)作為模板，擴(kuò)增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長(zhǎng)時(shí)，常常需要進(jìn)行兩次或多次PCR擴(kuò)增，然后再將各次擴(kuò)增出的片段按正確次序拼接在一起。
一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來(lái)大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細(xì)胞，然后通過(guò)常規(guī)方法從增殖后的宿主細(xì)胞中分離得到有關(guān)序列。
此外，還可用人工合成的方法來(lái)合成有關(guān)序列，尤其是片段長(zhǎng)度較短時(shí)。通常，通過(guò)先合成多個(gè)小片段，然后再進(jìn)行連接可獲得序列很長(zhǎng)的片段。
目前，已經(jīng)可以完全通過(guò)化學(xué)合成來(lái)編碼本發(fā)明蛋白(或其片段，或其衍生物)的DNA序列。然后可將該DNA序列引入本領(lǐng)域中的各種DNA分子(如載體)和細(xì)胞中。此外，還可通過(guò)化學(xué)合成將突變引入本發(fā)明蛋白序列中。
此外，由于本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列，因此，與來(lái)源于其他物種的同族蛋白相比，預(yù)計(jì)在施用于人時(shí)將具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人體內(nèi)的免疫原性更低或沒有)。
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例1cDNA基因的獲得及對(duì)癌細(xì)胞克隆形成的抑制作用PP894,PP1030,PP1164,PP1187,PP1498,PP2464,PP3051,PP3105,PP5423是通過(guò)用常規(guī)方法構(gòu)建人胎盤cDNA文庫(kù)獲得的。取3、6、10月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說(shuō)明書提取總RNA，用mRNA提純?cè)噭┖?Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文庫(kù)構(gòu)建試劑盒(Stratagene公司)構(gòu)建上述mRNA的cDNA文庫(kù)。其中反轉(zhuǎn)錄酶改用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL)，反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)在42℃進(jìn)行。轉(zhuǎn)化XL 10-Gold感受細(xì)胞，獲得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文庫(kù)。第一輪隨機(jī)挑取cDNA克隆，其后以高豐度cDNA克隆和已證明有抑癌細(xì)胞生長(zhǎng)功能的cDNA克隆為探針，雜交篩選cDNA文庫(kù)，挑取弱陽(yáng)性及陰性克隆。用Qiagen 96孔板質(zhì)粒抽提試劑盒，按廠家說(shuō)明書進(jìn)行質(zhì)粒DNA的提取。質(zhì)粒DNA和空載體同時(shí)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后，加6μl H2O溶解，待轉(zhuǎn)染。每份DNA樣品中加0.74μl脂質(zhì)體及9.3μl無(wú)血清培液，混勻后，室溫放置10分鐘。每管中加1501μl無(wú)血清培液，均分加入3孔生長(zhǎng)于96孔板的7721細(xì)胞中，37℃放置2小時(shí)，每孔再加50μl無(wú)血清培液，37℃24小時(shí)。每孔換100μl全培液，37℃24小時(shí)，換含G418的全培液100μl，37℃24～48小時(shí)，邊觀察，邊換G418濃度不等的培液。約2～3次后，直到鏡檢細(xì)胞有克隆形成，計(jì)數(shù)。發(fā)現(xiàn)上述克隆有抑制細(xì)胞克隆形成作用，結(jié)果如下表所示。
cDNA克隆轉(zhuǎn)染細(xì)胞(7721)克隆形成情況
對(duì)cDNA克隆采用雙脫氧終止法，在ABI377 DNA自動(dòng)測(cè)序儀上測(cè)定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后，確定為新基因克隆，進(jìn)行另一端測(cè)序，仍未獲得全長(zhǎng)cDNA序列，設(shè)計(jì)引物，再次進(jìn)行測(cè)序，直到獲得全長(zhǎng)序列(SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、25)。
實(shí)施例2從胎盤cDNA中PCR獲得全長(zhǎng)基因取3、6、10月齡的胎盤組織，用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說(shuō)明書提取總RNA，用mRNA提純?cè)噭┖?Pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL)反轉(zhuǎn)錄酶在42℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，獲得胎盤cDNA。利用各個(gè)基因的轉(zhuǎn)異引物(如下表所示)，按90℃3分鐘1個(gè)循環(huán)；94℃30秒，60℃30秒，72℃1分鐘，共35個(gè)循環(huán)；72℃10分鐘，1個(gè)循環(huán)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得含有完整開放閱讀框序列的各蛋白基因的擴(kuò)增產(chǎn)物。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證，與實(shí)施例1測(cè)得的序列相符，隨后用常規(guī)技術(shù)將擴(kuò)增產(chǎn)物轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞，以獲得重組蛋白?；蛱禺愐镄蛄?
實(shí)施例3cDNA克隆序列分析1．PP894A核苷酸序列(SEQ ID NO:1)長(zhǎng)度1492bp1GGCATCTGAG AGGCTGGTCG TGGACTGTGG TTGGGGGAGG TGGGAGCTGT51TTTAACCGTG TGCCCCCTCT CCTGTGCCGG CGTGGGCATC CCCCGGGGCA101GTGGAACGCG GGCGCTCCTC CAGCTTCCGA GTCCAGCCAG CCTGGGCGCG151GGGCGCCGCC CCCGAGACAC CCGAGGAGTC CGTTCCTCCC TGGTTACGTG201GACTGTGGAG CTGGTCTCTT GTGGCTCAGC GCCGTGCGGA GGTTGAAGCG251TACCTGCGGA GGTCGCACCA GGGCGTGAGG AGGAGGAGGA AGGGCATGAG301CCGAGCTTGA GGAATCCGTG CTCCAAACTC TACACTCAAG GGTGGCCCTT351GGGTAGGGTG AAGATCCCCT GTCTTTATCC TAGTTCCACA CCTTGGTGTG401GGTTACTGGG TGCAGGATGA ACTGTCGCTC GGAGGTGCTG GAGGTGTCGG451TGGAGGGGCG GCAGGTGGAG GAGGCCATGC TGGCTGTGCT GCACACGGTG501CTTCTGCACC GCAGCACAGG CAAGTTCCAC TACAAGAAGG AGGGCACCTA551CTCCATTGGC ACCGTGGGCA CCCAGGATGT TGACTGTGAC TTCATCGACT601TCACTTATGT GCGTGTCTCT TCTGAGGAAC TGGATCGTGC CCTGCGCAAG651GTTGTTGGGG AGTTCAAGGA TGCACTGCGC AACTCTGGTG GCGATGGGCT701GGGGCAGATG TCCTTGGAGT TCTACCAGAA GAAGAAGTCT CGCTGCCATT751CTCAGACGAG TGCATCCCAT GGGAAGTGTG GACGGTCAAG GTGCATGTGG801TAGCCCTGGC CACGGAGCAG GAGCGGCAGA TCTGCCGGGA GAAGGTGGGT851GAGAAACTCT GCGAGAAGAT CATCAACATC GTGGAGGTGA TGAATCGGCA901TGAGTACTTG CCCAAGATGC CCACACAGTC GGAGGTGGAT AACGTGTTTG951ACACAGGCTT GCGGGACGTG CAGCCCTACC TGTACAAGAT CTCCTTCCAG1001ATCACTGATG CCCTGGGCAC CTCAGTCACC ACCACCATGC GCAGGCTCAT1051CAAAGACACC CTTGCCCTCT GAGCGTCGCT GGATCTCTGG GAGCTCCTTG1101ATGGCTCCCA GACCTTGGCT TTTGGGAATT GCACTTTTGG GCCTTTGGGC1151TCTGGAACCT GCTCTGGGTC ATTGGTGAGA CTTGGAAGGG GCAGCCCCCG1201CTGGCTTCTT GGTTTTGTGG TTGCCAGCCT CAGGTCATCC TTTTAATCTT1251TGCTGATGGT TCAGTCCTGC CTCTACTGTC TCTCCATAGC CCTGGTGGGG1301TCCCCCTTCT TTCTCCACTG TACAGAAGAG CCACCACTGG GATGGGGAAT1351AAAGTTGAGA ACATGAGTTT GGAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA1401AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA1451CCTGGGGGGG GGGCCCGGTC CCAGGTAAGT GTACCCAATT CGB氨基酸序列(SEQ ID NO:2)長(zhǎng)度128個(gè)氨基酸1 MNCRSEVLEV SVEGRQVEEA MLAVLHTVLL HRSTGKFHYK KEGTYSIGTV51 GTQDVDCDFI DFTYVRVSSE ELDRALRKVV GEFKDALRNS GGDGLGQMSL101 EFYQKKKSRC HSQTSASHGK CGRSRCMWC核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:3)克隆號(hào)和蛋白名稱PP894起始編碼子417 ATG終止編碼子803 TAG蛋白質(zhì)分子量14426.671 GG CAT CTG AGA GGC TGG TCG TGG ACT GTG GTT GGG GGA GGT GGG AGC 4748 TGT TTT AAC CGT GTG CCC CCT CTC CTG TGC CGG CGT GGG CAT CCC CCG 9596 GGG CAG TGG AAC GCG GGC GCT CCT CCA GCT TCC GAG TCC AGC CAG CCT 143144 GGG CGC GGG GCG CCG CCC CCG AGA CAC CCG AGG AGT CCG TTC CTC CCT 191192 GGT TAC GTG GAC TGT GGA GCT GGT CTC TTG TGG CTC AGC GCC GTG CGG 239240 AGG TTG AAG CGT ACC TGC GGA GGT CGC ACC AGG GCG TGA GGA GGA GGA 287288 GGA AGG GCA TGA GCC GAG CTT GAG GAA TCC GTG CTC CAA ACT CTA CAC 335336 TCA AGG GTG GCC CTT GGG TAG GGT GAA GAT CCC CTG TCT TTA TCC TAG 383384 TTC CAC ACC TTG GTG TGG GTT ACT GGG TGC AGG ATG AAC TGT CGC TCG 4311 Met Asn Cys Arg Ser 5432 GAG GTG CTG GAG GTG TCG GTG GAG GGG CGG CAG GTG GAG GAG GCC ATG 4796 Glu Val Leu Glu Val Ser Val Glu Gly Arg Gln Val Glu Glu Ala Met 21480 CTG GCT GTG CTG CAC ACG GTG CTT CTG CAC CGC AGC ACA GGC AAG TTC 52722 Leu Ala Val Leu His Thr Val Leu Leu His Arg Ser Thr Gly Lys Phe 37528 CAC TAC AAG AAG GAG GGC ACC TAC TCC ATT GGC ACC GTG GGC ACC CAG 57538 His Tyr Lys Lys Glu Gly Thr Tyr Ser Ile Gly Thr Val Gly Thr Gln 53576 GAT GTT GAC TGT GAC TTC ATC GAC TTC ACT TAT GTG CGT GTC TCT TCT 62354 Asp Val Asp Cys Asp Phe Ile Asp Phe Thr Tyr Val Arg Val Ser Ser 69624 GAG GAA CTG GAT CGT GCC CTG CGC AAG GTT GTT GGG GAG TTC AAG GAT 67170 Glu Glu Leu Asp Arg Ala Leu Arg Lys Val Val Gly Glu Phe Lys Asp 85672 GCA CTG CGC AAC TCT GGT GGC GAT GGG CTG GGG CAG ATG TCC TTG GAG 71986 Ala Leu Arg Asn Ser Gly Gly Asp Gly Leu Gly Gln Met Ser Leu Glu 101720 TTC TAC CAG AAG AAG AAG TCT CGC TGC CAT TCT CAG ACG AGT GCA TCC 767102 Phe Tyr Gln Lys Lys Lys Ser Arg Cys His Ser Gln Thr Ser Ala Ser 117768 CAT GGG AAG TGT GGA CGG TCA AGG TGC ATG TGG TAG CCC TGG CCA CGG 815118 His Gly Lys Cys Gly Arg Ser Arg Cys Met Trp *** 129816 AGC AGG AGC GGC AGA TCT GCC GGG AGA AGG TGG GTG AGA AAC TCT GCG 863864 AGA AGA TCA TCA ACA TCG TGG AGG TGA TGA ATC GGC ATG AGT ACT TGC 911912 CCA AGA TGC CCA CAC AGT CGG AGG TGG ATA ACG TGT TTG ACA CAG GCT 959960 TGC GGG ACG TGC AGC CCT ACC TGT ACA AGA TCT CCT TCC AGA TCA CTG10071008 ATG CCC TGG GCA CCT CAG TCA CCA CCA CCA TGC GCA GGC TCA TCA AAG10551056 ACA CCC TTG CCC TCT GAG CGT CGC TGG ATC TCT GGG AGC TCC TTG ATG11031104 GCT CCC AGA CCT TGG CTT TTG GGA ATT GCA CTT TTG GGC CTT TGG GCT11511152 CTG GAA CCT GCT CTG GGT CAT TGG TGA GAC TTG GAA GGG GCA GCC CCC11991200 GCT GGC TTC TTG GTT TTG TGG TTG CCA GCC TCA GGT CAT CCT TTT AAT12471248 CTT TGC TGA TGG TTC AGT CCT GCC TCT ACT GTC TCT CCA TAG CCC TGG12951296 TGG GGT CCC CCT TCT TTC TCC ACT GTA CAG AAG AGC CAC CAC TGG GAT13431344 GGG GAA TAA AGT TGA GAA CAT GAG TTT GGA AAA AAA AAA AAA AAA AAA13911392 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA14391440 AAA AAA AAA AAC CTG GGG GGG GGG CCC GGT CCC AGG TAA GTG TAC CCA14871488 ATT CG 1492D:Blastp結(jié)果Query=PP894[基因=PP894](128個(gè)氨基酸)>SP FUN:013978 013978 schizosaccharomyces pombe(fission yeasthypothetical 20.3 kd protein c25h1.03 in chromosome6/1998長(zhǎng)度=184分值=35.6 bits(80)，預(yù)計(jì)值=0.17相同性=30/103(29％)，相似性=44/103(42％)，缺口=18/103(1Query: 8 LEVSVEGRQVEEAMLAVLHTVLLHRSTGKFHYKKEGTYSIGTVGTQDVDCDFIDFTYVRV 67+E+ + + E + AVL +L HRTV + +D +D T +Sbjct: 7 IELKIGYKYAAEVVKAVLGVILFHRQ-------------FSTVPARTIDV--LDITVPTL 51Query: 68 SSEELDRALRKVVGEFKDALRNSGGDGLGQMSLEFYQK--KKS 108EL+ L EF D +RN GGQM L Y++ KKSSbjct: 52 VGAELNEQLATKAAEFIDTIRNEAGAN-GQMILLLYERSPKKS 932．PP1030A核苷酸序列(SEQ ID NO:4)長(zhǎng)度2258bp1 CCCAACTGGG GGTGGTCCCT GGGATTGGAC ACTAGTGGAG GAGGGCGATG51 GACGCCTTCA GCCCCAGGCA CCCAGCTGGC CGGCAGCTGA GGAGGGAGAG101 GGGGAGCGTA GCCTTACAGC ACGAGAGCAC AGCCCTGAGG AGGCGCGGGA151 GCTGCGGGCT GCGGTGATCC AGCTTCTGGA CACCTCCTAT CTGCTCACTC201 CTGTGGCCCA GGCCCAGCTC CTGTGGCTGC TGGGCTGGGC CCTGCGGGGT251 CTGCAGGGAC AGCCACCGGC ACTCTTCAAG CCGCAGCTGG TACGGCTGCT301 AGGCACAGCA CAGCTGACAC TGTTGCACGC CATGCTTGCG CTCAAGGCGG351 CCTTTGGTGA GGCCTTGTTC ACAGCCCAGG ATGAAGCGTT GCTGCTCCGC401 CGGCTCACCT TGGCTGCCCA GCACCCTGCT CTGCCTCCGC CCACCCATCT451 CTTTTACCTG CACTGCGTCC TGAGCTTCCC TGAGAACTGG CCGCTGGGCC501 TGAAGGTGAG GAGGCTGCCC CACTGCTGCT AGGGCCCCAG CTATGCCGTG551 GTCTCCTGCC CAGTCTCCTG CATGACCCAA TGGCCCTCCT GGCCCGCCTG601 CATTTACTGT GCCTGCTCTG TGCCGAGGAG GAAGAAGAGG AGAAAGGCCA651 GCTTCCAAGC CCACGGCACT ACCTGGAAGA GCTGCTGGCT GGCTTGCGGC701 ACGGGGCAGC CCTGGATGGG GGCCCCCGGG CTTGGCCACT CTCTGCTTCC751 AGGCCTCGTA TCTGGTGGCC TGCTGCCTGG CTGGGCAACC TACGGTGCTG801 ACCCCCTTGA TCCACGGACT GGCCCAGCTG TACCAAGCCC GGCCCATGCT851 GGCTCCCCAC TTTGTGGACC TCTTGGATCA GGTGGACTCT GAGCTGAGGG901 AGCCCCTGAA GGTGGTGTTG CGGCAGGTGG TGGTGTCCAG GCCGGGCAGG951 GATGAAGCTC TTTGCTGGCA CCTGCAAATG CTGGCAAAGG TGGCAGATGG1001 AGATGCCCAG AGTGCTACCC TCAACTTTCT ACAGGCCGCG GCTGCCCACT1051 GCACGAACTG GGACCTACAG CAGGGCCTGC TGCGGGTCTG CCGGGCGCTG1101 CTGCGGGCAG GGGTGAGGGG CGGCCTGGTC GACTTGCTGC AGGTGCTGGC1151 CAGGCAGCTG GAGGACCCTG ATGGGCGTGA CCACGCCCGC CTCTACTACA1201 TCCTGCTGGC ACACCTGGCA GCACCCAAGT TGGGGGTGGC CCTGGGCCCC1251 TCGCTTGCCG CACCTGCACT GGCCTCTTCA CTGGTGGCCG AGAACCAGGG1301 CTTTGTGGCA GCACTGATGG TGCAGGAGGC ACCGGCCCTG GTACGGCTGA1351 GCCTGGGGTC CCATCGGGTC AAGGGCCCAC TCCCAGTGTT GAAGCTCCAC1401 CGGAGGCGCT GGAGCCCATC TACTCTCTGG AGTGCGCTTC GTGTGGAAGG1451 ACAGCTGTAT GCACCCCTGG AGGCTGTCCA TGTGCCCTGC CTGTGTCCTG1501 GCCGCCCTGC CCGCCCTCTG CTCCTGCCTC TGCAGCCCCG ATGCCCGGCC1551 CCCGCACGGC TGGATGTCCA TGCCCTTTAC ACCACATCCA CTGGTCTCAC1601 GTGCCATGCC CACTTGCCAC CCCTGTTCTG TGAACTTTGC CGACCTCTTT1651 CTGCCTTTCC CGCAGCCTCC AGAGGGGGCC GGGCTGGGCT TCTTTGAGGA1701 GCTCTGGGAT TCCTGCCTGC CAGAGGGTGC TGAGAGTCGT GTGTGGTGTC1751 CACTTGGGCC ACAGGGCCTG GAGGGCTTGG TGTCCCGCCA CCTGGAGCCT1801 TTTGTGGTGG TGGCCCAGCC TCCTACCAGC TACTGTGTAG CAATCCACCT1851 GCCCCCGGAC TCAAAGCTGC TGCTGCGGCT GGAGGCGGCC CTGGCAGATG1901 GAGTGCCTGT GGCCCTGCGG ACCGATGACT GGGCCGTGCT GCCCCTGGCG1951 GGGGACTACC TCCGTGGGCT GGCGGCTGCT GTTTGAGCCC CGGGAGACCA2001 GGTGGGGGCA GGACTGTGGC CCTTGTGGGG GCCAAGGCAC ACTCCTGTAG2051 CTCTGTCGCC AAAACCCTGC ATTCCGCAGT GCCCTCGCTG GCTTGTTTTC2101 TTTTGGGCCC CGGTTGGGAG CAGGCTCCTG GGGGTGAGGG TCTGTCTGAG2151 TCTGTTTTTG CTGCTCTAGC AAGATCCCTG AGACGGGGTA AGTTATAATA2201 AACAGAAATG TATTGGCTCC GCAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA2251 AAAAAAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO:5)長(zhǎng)度283個(gè)氨基酸1 MLAPHFVDLL DQVDSELREP LKVVLRQVVV SRPGRDEALC WHLQMLAKVA51 DGDAQSATLN FLQAAAAHCT NWDLQQGLLR VCRALLRAGV RGGLVDLLQV101 LARQLEDPDG RDHARLYYIL LAHLAAPKLG VALGPSLAAP ALASSLVAEN151 QGFVAALMVQ EAPALVRLSL GSHRVKGPLP VLKLHRRRWS PSTLWSALRV201 EGQLYAPLEA VHVPCLCPGR PARPLLLPLQ PRCPAPARLD VHALYTTSTG251 LTCHAHLPPL FCELCRPLSA FPAASRGGRA GLLC核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:6)克隆號(hào)和蛋白名稱PP1030起始編碼子846 ATG終止編碼子1697 TAG蛋白質(zhì)分子量30594.171 CC CAA CTG GGG GTG GTC CCT GGG ATT GGA CAC TAG TGG AGG AGG GCG 4748 ATG GAC GCC TTC AGC CCC AGG CAC CCA GCT GGC CGG CAG CTG AGG AGG 9596 GAG AGG GGG AGC GTA GCC TTA CAG CAC GAG AGC ACA GCC CTG AGG AGG 143144 CGC GGG AGC TGC GGG CTG CGG TGA TCC AGC TTC TGG ACA CCT CCT ATC 191192 TGC TCA CTC CTG TGG CCC AGG CCC AGC TCC TGT GGC TGC TGG GCT GGG 239240 CCC TGC GGG GTC TGC AGG GAC AGC CAC CGG CAC TCT TCA AGC CGC AGC 287288 TGG TAC GGC TGC TAG GCA CAG CAC AGC TGA CAC TGT TGC ACG CCA TGC335336 TTG CGC TCA AGG CGG CCT TTG GTG AGG CCT TGT TCA CAG CCC AGG ATG 383384 AAG CGT TGC TGC TCC GCC GGC TCA CCT TGG CTG CCC AGC ACC CTG CTC 431432 TGC CTC CGC CCA CCC ATC TCT TTT ACC TGC ACT GCG TCC TGA GCT TCC 479480 CTG AGA ACT GGC CGC TGG GCC TGA AGG TGA GGA GGC TGC CCC ACT GCT 527528 GCT AGG GCC CCA GCT ATG CCG TGG TCT CCT GCC CAG TCT CCT GCA TGA 575576 CCC AAT GGC CCT CCT GGC CCG CCT GCA TTT ACT GTG CCT GCT CTG TGC 623624 CGA GGA GGA AGA AGA GGA GAA AGG CCA GCT TCC AAG CCC ACG GCA CTA 671672 CCT GGA AGA GCT GCT GGC TGG CTT GCG GCA CGG GGC AGC CCT GGA TGG 719720 GGG CCC CCG GGC TTG GCC ACT CTC TGC TTC CAG GCC TCG TAT CTG GTG 767768 GCC TGC TGC CTG GCT GGG CAA CCT ACG GTG CTG ACC CCC TTG ATC CAC 815816 GGA CTG GCC CAG CTG TAC CAA GCC CGG CCC ATG CTG GCT CCC CAC TTT 8631 Met Leu Ala Pro His Phe 6864 GTG GAC CTC TTG GAT CAG GTG GAC TCT GAG CTG AGG GAG CCC CTG AAG 9117 Val Asp Leu Leu Asp Gln Val Asp Ser Glu Leu Arg Glu Pro Leu Lys 22912 GTG GTG TTG CGG CAG GTG GTG GTG TCC AGG CCG GGC AGG GAT GAA GCT 95923 Val Val Leu Arg Gln Val Val Val Ser Arg Pro Gly Arg Asp Glu Ala 38960 CTT TGC TGG CAC CTG CAA ATG CTG GCA AAG GTG GCA GAT GGA GAT GCC100739 Leu Cys Trp His Leu Gln Met Leu Ala Lys Val Ala Asp Gly Asp Ala 541008 CAG AGT GCT ACC CTC AAC TTT CTA CAG GCC GCG GCT GCC CAC TGC ACG105555 Gln Ser Ala Thr Leu Asn Phe Leu Gln Ala Ala Ala Ala His Cys Thr 701056 AAC TGG GAC CTA CAG CAG GGC CTG CTG CGG GTC TGC CGG GCG CTG CTG110371 Asn Trp Asp Leu Gln Gln Gly Leu Leu Arg Val Cys Arg Ala Leu Leu 861104 CGG GCA GGG GTG AGG GGC GGC CTG GTC GAC TTG CTG CAG GTG CTG GCC115187 Arg Ala Gly Val Arg Gly Gly Leu Val Asp Leu Leu Gln Val Leu Ala 1021152 AGG CAG CTG GAG GAC CCT GAT GGG CGT GAC CAC GCC CGC CTC TAC TAC1199103 Arg Gln Leu Glu Asp Pro Asp Gly Arg Asp His Ala Arg Leu Tyr Tyr 1181200 ATC CTG CTG GCA CAC CTG GCA GCA CCC AAG TTG GGG GTG GCC CTG GGC1247119 Ile Leu Leu Ala His Leu Ala Ala Pro Lys Leu Gly Val Ala Leu Gly 1341248 CCC TCG CTT GCC GCA CCT GCA CTG GCC TCT TCA CTG GTG GCC GAG AAC1295135 Pro Ser Leu Ala Ala Pro Ala Leu Ala Ser Ser Leu Val Ala Glu Asn 1501296 CAG GGC TTT GTG GCA GCA CTG ATG GTG CAG GAG GCA CCG GCC CTG GTA1343151 Gln Gly Phe Val Ala Ala Leu Met Val Gln Glu Ala Pro Ala Leu Val 1661344 CGG CTG AGC CTG GGG TCC CAT CGG GTC AAG GGC CCA CTC CCA GTG TTG 391167 Arg Leu Ser Leu Gly Ser His Arg Val Lys Gly Pro Leu Pro Val Leu 1821392 AAG CTC CAC CGG AGG CGC TGG AGC CCA TCT ACT CTC TGG AGT GCG CTT1439183 Lys Leu His Arg Arg Arg Trp Ser Pro Ser Thr Leu Trp Ser Ala Leu 1981440 CGT GTG GAA GGA CAG CTG TAT GCA CCC CTG GAG GCT GTC CAT GTG CCC1487199 Arg Val Glu Gly Gln Leu Tyr Ala Pro Leu Glu Ala Val His Val Pro 2141488 TGC CTG TGT CCT GGC CGC CCT GCC CGC CCT CTG CTC CTG CCT CTG CAG1535215 Cys Leu Cys Pro Gly Arg Pro Ala Arg Pro Leu Leu Leu Pro Leu Gln 2301536 CCC CGA TGC CCG GCC CCC GCA CGG CTG GAT GTC CAT GCC CTT TAC ACC1583231 Pro Arg Cys Pro Ala Pro Ala Arg Leu Asp Val His Ala Leu Tyr Thr 2461584 ACA TCC ACT GGT CTC ACG TGC CAT GCC CAC TTG CCA CCC CTG TTC TGT1631247 Thr Ser Thr Gly Leu Thr Cys His Ala His Leu Pro Pro Leu Phe Cys 2621632 GAA CTT TGC CGA CCT CTT TCT GCC TTT CCC GCA GCC TCC AGA GGG GGC1679263 Glu Leu Cys Arg Pro Leu Ser Ala Phe Pro Ala Ala Ser Arg Gly Gly 2781680 CGG GCT GGG CTT CTT TGA GGA GCT CTG GGA TTC CTG CCT GCC AGA GGG1727279 Arg Ala Gly Leu Leu *** 2841728 TGC TGA GAG TCG TGT GTG GTG TCC ACT TGG GCC ACA GGG CCT GGA GGG17751776 CTT GGT GTC CCG CCA CCT GGA GCC TTT TGT GGT GGT GGC CCA GCC TCC18231824 TAC CAG CTA CTG TGT AGC AAT CCA CCT GCC CCC GGA CTC AAA GCT GCT18711872 GCT GCG GCT GGA GGC GGC CCT GGC AGA TGG AGT GCC TGT GGC CCT GCG19191920 GAC CGA TGA CTG GGC CGT GCT GCC CCT GGC GGG GGA CTA CCT CCG TGG19671968 GCT GGC GGC TGC TGT TTG AGC CCC GGG AGA CCA GGT GGG GGC AGG ACT20152016 GTG GCC CTT GTG GGG GCC AAG GCA CAC TCC TGT AGC TCT GTC GCC AAA20632064 ACC CTG CAT TCC GCA GTG CCC TCG CTG GCT TGT TTT CTT TTG GGC CCC21112112 GGT TGG GAG CAG GCT CCT GGG GGT GAG GGT CTG TCT GAG TCT GTT TTT21592160 GCT GCT CTA GCA AGA TCC CTG AGA CGG GGT AAG TTA TAA TAA ACA GAA22072208 ATG TAT TGG CTC CGC AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA22552256 AAA2258D:Blastp結(jié)果Query=PP1030[基因=PP1030](283個(gè)氨基酸)>SW:DIS3_SCHPO P37202 schizosaccharomyces pombe(fission yeast)mitotic control protein dis3.12/1998長(zhǎng)度=970分值=36.7 bits(83)，預(yù)計(jì)值=0.23相同性=23/75(30％)，相似性=42/75(55％)，缺口=3/75(4％)Query: 12 QVDSELREPLKVVLRQVVVSRPGRDE-ALCWHLQMLAKVADGDAQSATLNFLQAAAAHCT 70Q D+E +P+ V ++Q++ ++E L ++ + K+ D Q+A L + AA TSbjct: 669 QTDNETSDPMDVEIKQLLETNSLVEEFMLLANISVAQKIYDAFPQTAVLR--RHAAPPLT 726Query: 71 NWDLQQGLLRVCRAL 85N+D Q +LRVC+ +Sbjct: 727 NFDSLQDILRVCKGM 741
3．PP1164A核苷酸序列(SEQ ID NO:7)長(zhǎng)度1094bp1 GAGGGCCTCA CGGGGTGGGT GTGAGTCTGG CCTGCCTGGG CTCGGGGTGG51 GGGGTGTTTA CAGACGCATT TCAGCCCCGC AGCAGGGGCT GGGGAGGTCC101 CGCTCGTGAC AGTCTCTGCA CCAAGGCAGG AGAGATGGAA GCCGCCCAGA151 GAACTGCCAC TCCATAGCCT GTGGGCATCC AGGGGTGAGC GGCAGCGATG201 GCGCCCCATG GAGGAAACAC ACTGGAAATC GTGCAGAAGA TGGGAAGATG251 CAGGCTGGAG TGCGGAGAAG GACTGAGACC CTGCCTGGTA GACGGCACCG301 TCACAGCAGC CGTCTGCCTG CTAGGAGGAG CGTCTCCACC AGCAGCAGGC351 CGGCCCCTGA GGGAGACAGC AGAGAGCTGG AGTCCTGGCC AGCCAGGCGG401 GGATCCTTCA GCAGGACACA GGGGACACAG CAGGCAACAG GAGCTCAGAA451 CGCTCTCGGC GACCCTGCTG AGTAACTTGT GGACTTTGTC GTCTGGCCAG501 TCATGCAGGA TCCGGCACAG GACGTACAGC TCAGCGCTGG GGAGGGGGTC551 CCTGAAAAAG TCACCTGGTT TAAAGACAAA AGGAGACACG TCCGTCAGGT601 ATGGAAGAAG CAGTCCTCCC CGGACAGATC CTGGGACGGC CACCCGCATC651 CTAAGTCAGG GACAGAGAAG AGAGGGGTGT GGGCGGGAAT GGGTCTTCCT701 GAAGTACATC CCCGTGGGGA CTTGAACAGA GCTCCATGAG GAGCTGGTTA751 GTGATGTCAC GCCCGTGCGG TTTGACTCCG GCTGAGAAAA CGCTGGGGAC801 AGTGGCTCAC ACCTGTAATC TCAGCCTCCC AGACGGCTGG GATTCCAGGC851 GTGAGCCTGG GCACGTGGCC CAGGCGTCTC CTGTCAATCC GTCCTGGCCT901 CAGCAGCTGC CACCTGGAAG TTCTCCTTCA AGTCTAACCT AAGGCCGCCC951 TGTGACGGCT CTCGGGTCAG TTCCTTCTGT GACCTCGGCA CCGTGGATGC1001 CCATGAATGC TGATCTCGGC TGTTCCCCAT CTCCACTCCC CTCCCGTCTC1051 GGCTATTTGC ACTGATGATA ACTTCAAAAA AAAAAAAAAA AAAAB氨基酸序列(SEQ ID NO:8)長(zhǎng)度175個(gè)氨基酸1 MAPHGGNTLE IVQKMGRCRL ECGEGLRPCL VDGTVTAAVC LLGGASPPAA51 GRPLRETAES WSPGQPGGDP SAGHRGHSRQ QELRTLSATL LSNLWTLSSG101 QSCRIRHRTY SSALGRGSLK KSPGLKTKGD TSVRYGRSSP PRTDPGTATR151 ILSQGQRREG CGREWVFLKY IPVGTC核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:9)克隆號(hào)和蛋白名稱PP1164起始編碼子198 ATG終止編碼子725 TGA蛋白質(zhì)分子量18634.151 GA GGG CCT CAC GGG GTG GGT GTG AGT CTG GCC TGC CTG GGC TCG GGG 4748 TGG GGG GTG TTT ACA GAC GCA TTT CAG CCC CGC AGC AGG GGC TGG GGA 9596 GGT CCC GCT CGT GAC AGT CTC TGC ACC AAG GCA GGA GAG ATG GAA GCC 143144 GCC CAG AGA ACT GCC ACT CCA TAG CCT GTG GGC ATC CAG GGG TGA GCG 191192 GCA GCG ATG GCG CCC CAT GGA GGA AAC ACA CTG GAA ATC GTG CAG AAG 2391 Met Ala Pro His Gly Gly Asn Thr Leu Glu Ile Val Gln Lys 14240 ATG GGA AGA TGC AGG CTG GAG TGC GGA GAA GGA CTG AGA CCC TGC CTG 28715 Met Gly Arg Cys Arg Leu Glu Cys Gly Glu Gly Leu Arg Pro Cys Leu 30288 GTA GAC GGC ACC GTC ACA GCA GCC GTC TGC CTG CTA GGA GGA GCG TCT 33531 Val Asp Gly Thr Val Thr Ala Ala Val Cys Leu Leu Gly Gly Ala Ser 46336 CCA CCA GCA GCA GGC CGG CCC CTG AGG GAG ACA GCA GAG AGC TGG AGT 38347 Pro Pro Ala Ala Gly Arg Pro Leu Arg Glu Thr Ala Glu Ser Trp Ser 62384 CCT GGC CAG CCA GGC GGG GAT CCT TCA GCA GGA CAC AGG GGA CAC AGC 43163 Pro Gly Gln Pro Gly Gly Asp Pro Ser Ala Gly His Arg Gly His Ser 78432 AGG CAA CAG GAG CTC AGA ACG CTC TCG GCG ACC CTG CTG AGT AAC TTG 47979 Arg Gln Gln Glu Leu Arg Thr Leu Ser Ala Thr Leu Leu Ser Asn Leu 94480 TGG ACT TTG TCG TCT GGC CAG TCA TGC AGG ATC CGG CAC AGG ACG TAC 52795 Trp Thr Leu Ser Ser Gly Gln Ser Cys Arg Ile Arg His Arg Thr Tyr 110528 AGC TCA GCG CTG GGG AGG GGG TCC CTG AAA AAG TCA CCT GGT TTA AAG 575111 Ser Ser Ala Leu Gly Arg Gly Ser Leu Lys Lys Ser Pro Gly Leu Lys 126576 ACA AAA GGA GAC ACG TCC GTC AGG TAT GGA AGA AGC AGT CCT CCC CGG 623127 Thr Lys Gly Asp Thr Ser Val Arg Tyr Gly Arg Ser Ser Pro Pro Arg 142624 ACA GAT CCT GGG ACG GCC ACC CGC ATC CTA AGT CAG GGA CAG AGA AGA 671143 Thr Asp Pro Gly Thr Ala Thr Arg Ile Leu Ser Gln Gly Gln Arg Arg 158672 GAG GGG TGT GGG CGG GAA TGG GTC TTC CTG AAG TAC ATC CCC GTG GGG 719159 Glu Gly Cys Gly Arg Glu Trp Val Phe Leu Lys Tyr Ile Pro Val Gly 174720 ACT TGA ACA GAG CTC CAT GAG GAG CTG GTT AGT GAT GTC ACG CCC GTG 767175 Thr *** 176768 CGG TTT GAC TCC GGC TGA GAA AAC GCT GGG GAC AGT GGC TCA CAC CTG 815816 TAA TCT CAG CCT CCC AGA CGG CTG GGA TTC CAG GCG TGA GCC TGG GCA 863864 CGT GGC CCA GGC GTC TCC TGT CAA TCC GTC CTG GCC TCA GCA GCT GCC 911912 ACC TGG AAG TTC TCC TTC AAG TCT AAC CTA AGG CCG CCC TGT GAC GGC 959960 TCT CGG GTC AGT TCC TTC TGT GAC CTC GGC ACC GTG GAT GCC CAT GAA10071008 TGC TGA TCT CGG CTG TTC CCC ATC TCC ACT CCC CTC CCG TCT CGG CTA10551056 TTT GCA CTG ATG ATA ACT TCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA1094D:Blastp結(jié)果Query=PP1164[基因=PP1164](175個(gè)氨基酸)>SP_IN:017642 017642 caenorhabditis elegans.c34f6.3 protein.5/1999長(zhǎng)度=283分值=31.3 bits(69)，預(yù)計(jì)值=5.5相同性=23/56(41％)，相似性=28/56(49％)，缺口=10/56(17％)Query: 23 GEGLRPCLVDGTVTAAVCLLGGASPPAAGRPLRETAESWSPGQPGGDPSAGHRGHS 78GEG RP T +ASPP G+P + E SPG+PG D AGH G +Sbjct: 190 GEGGRPGQAGQTRSAP-------SPP--GQP-GQPGEPGSPGEPGPDGRAGHPGRN 235>SP_IN:017641 017641 caenorhabditis elegans c34f6.2 protein.5/1999長(zhǎng)度=283分值=31.3 bits(69)，預(yù)計(jì)值=5.5相同性=23/56(41％)，相似性=28/56(49％)，缺口=10/56(17％)Query: 23 GEGLRPCLVDGTVTAAVCLLGGASPPAAGRPLRETAESWSPGQPGGDPSAGHRGHS 78GEG RP T +ASPP G+P + E SPG+PG D AGH G +Sbjct: 190 GEGGRPGQAGQTRSAP-------SPP--GQP-GQPGEPGSPGEPGPDGRAGHPGRN 2354．PP1187A核苷酸序列(SEQ ID NO:10)長(zhǎng)度1562bp1 CGGAGACTAA CGAGTGTCCT TTCATCCCGG TCATGCATTC CTTTGACCCT51 GCAGGTATGA CGCTGGGCGG GATGGCTTCA TCGACCTGAT GGAGCTGAAG101 CTGATGATGG AGAAGCTGGG GGCCCCCCAG ACCCACCTGG GCCTGAAGAG151 CATGATCAAG GAGGTGGATG 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5．PP1498A核苷酸序列(SEQ ID N0:13)長(zhǎng)度2112bp1 CCTGTGTGGC CTTCGCCTGG GTGTCCCTCA ATGCATGGTT CTGGTCCACA51 GTCTTCCACA CCAGGGACAC TGACCTCACA GAGAAAATGG ACTACTTCTG101 TGCCTCCACT GTCATCCTAC ACTCAATCTA CCTGTGCTGC GTCAGGCCTG151 GTCAACGTGG TGTGGTGGCT GGCCTGGTGC CTGTGGAACC AGCGGCGGCT201 GCCTCACGTG CGCAAGTGCG TGGTGGTGGT CTTGCTGCTG CAGGGGCTGT251 CCCTGCTCGA GCTGCTTGAC TTCCCACCGC TCTTCTGGGT CCTGGATGCC301 CATGCCATCT GGCACATCAG CACCATCCCT GTCCACGTCC TCTTTTTCAG351 CTTTCTGGAA GATGACAGCC TGTACCTGCT GAAGGAATCA GAGGACAAGT401 TCAAGCTGGA CTGAAGACCT TGGAGCGAGT CTGCCCCAGT GGGGATCCTG451 CCCCCGCCCT GCTGGCCTCC CTTCTCCCCT CAACCCTTGA GATGATTTTC501 TCTTTTCAAC TTCTTGAACT TGGACATGAA GGATGTGGGC CCAGAATCAT551 GTGGCCAGCC CACCCCCTGT TGGCCCTCAC CAGCCTTGGA GTCTGTTCTA601 GGGAAGGCCT CCCAGCATCT GGGACTCGAG AGTGGGCAGC CCCTCTACCT651 CCTGGAGCTG AACTGGGGTG GAACTGAGTG TGTTCTTAGC TCTACCGGGA701 GGACAGCTGC CTGTTTCCTC CCCACCAGCC TCCTCCCCAC ATCCCCAGCT751 GCCTGGCTGG GTCCTGAAGC CCTCTGTCTA CCTGGGAGAC CAGGGACCAC801 AGGCCTTAGG GATACAGGGG 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CCA CTC CGC CTA TCG 142143 CTC CCC TCG GCT ACG CTG CCA CTT CAA TGC CCC GCA GGT CGC GAG CTG 190191 CTG TTC TTT CGA AGG CGT CGG AGA ACC AGG GGC GTC CCG CGC CAC CTC 238239 TGA CTC GGA GCA GCG CCG AGC ACT GAC GCT CCC GCC CTT GGG CAA GGA 286287 CGC CAG TGC GCC CGC GCG CGT CCC TCT GCG CGG CAG CCC GTC GCG GGC 334335 CCT CAA GGG GAA GCC CAG GCC AGG ATG GCC CCG GGT CGC GCG GTG GCC 3821 Met Ala Pro Gly Arg Ala Val Ala 8383 GGG CTC CTG TTG CTG GCG GCC GCC GGC CTC GGA GGA GTG GCG GAG GGG 4309 Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Ala Gly Leu Gly Gly Val Ala Glu Gly 24431 CCA GGG CTA GCC TTC AGC GAG GAT GTG CTG AGC GTG TTC GGC GCG AAT 47825 Pro Gly Leu Ala Phe Ser Glu Asp Val Leu Ser Val Phe Gly Ala Asn 40479 CTG AGC CTG TCG GCG GCG CAG CTC CAG CAC TTG CTG GAG CAG ATG GGA 52641 Leu Ser Leu Ser Ala Ala Gln Leu Gln His Leu Leu Glu Gln Met Gly 56527 GCC GCC TCC CGC GTG GGC GTC CCG GAG CCT GGC CAG CTG CAC TTC AAC 57457 Ala Ala Ser Arg Val Gly Val Pro Glu Pro Gly Gln Leu His Phe Asn 72575 CAG TGT TTA ACT GCT GAA 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GAC AGT TAT GTT GAG AAG GCA GTT 958185 Ala Phe Gly Phe Asp Pro Lys Val Asp Ser Tyr Val Glu Lys Ala Val 200959 GCT GTG TTT GGT GGA TTT TAC CTA CTT TTC TTT TTT GAA AGA ATG CTA1006201 Ala Val Phe Gly Gly Phe Tyr Leu Leu Phe Phe Phe Glu Arg Met Leu 2161007 AAG ATG TTA TTA AAG ACA TAT GGT CAG AAT GGT CAT ACC CAC TTT GGA1054217 Lys Met Leu Leu Lys Thr Tyr Gly Gln Asn Gly His Thr His Phe Gly 2321055 AAT GAT AAC TTT GGT CCT CAA GAA AAA ACT CAT CAA CCT AAA GCA TTA1102233 Asn Asp Asn Phe Gly Pro Gln Glu Lys Thr His Gln Pro Lys Ala Leu 2481103 CCT GCC ATC AAT GGT GTG ACA TGC TAT GCA AAT CCT GCT GTC ACA GAA1150249 Pro Ala Ile Asn Gly Val Thr Cys Tyr Ala Asn Pro Ala Val Thr Glu 2641151 GCT AAT GGA CAT ATC CAT TTT GAT AAT GTC AGT GTG GTA TCT CTA CAG1198265 Ala Asn Gly His Ile His Phe Asp Asn Val Ser Val Val Ser Leu Gln 2801199 GAT GGA AAA AAA GAG CCA AGT TCA TGT ACC TGT TTG AAG GGG CCC AAA1246281 Asp Gly Lys Lys Glu Pro Ser Ser Cys Thr Cys Leu Lys Gly Pro Lys 2961247 CTG TCA GAA ATA GGG ACG ATT GCC TGG ATG ATA ACG CTC TGC GAT GCC1294297 Leu Ser Glu Ile Gly Thr Ile Ala Trp Met Ile Thr Leu Cys Asp Ala 3121295 CTC CAC AAT TTC ATC GAT GGC CTG GCG ATT GGG GCT TCC TGC ACC TTG1342313 Leu His Asn Phe Ile Asp Gly Leu Ala Ile Gly Ala Ser Cys Thr Leu 3281343 TCT CTC CTT CAG GGA CTC AGT ACT TCC ATA GCA ATC CTA TGT GAG GAG1390329 Ser Leu Leu Gln Gly Leu Ser Thr Ser Ile Ala Ile Leu Cys Glu Glu 3441391 TTT CCC CAC GAG TTA GGA GAC TTT GTG ATC CTA CTC AAT GCA GGG ATG1438345 Phe Pro His Glu Leu Gly Asp Phe Val Ile Leu Leu Asn Ala Gly Met 3601439 AGC ACT CGA CAA GCC TTG CTA TTC AAC TTC CTT TCT GCA TGT TCC TGC1486361 Ser Thr Arg Gln Ala Leu Leu Phe Asn Phe Leu Ser Ala Cys Ser Cys 3761487 TAT GTT GGG CTA GCT TTT GGC ATT TTG GTG GGC AAC AAT TTC GCT CCA1534377 Tyr Val Gly Leu Ala Phe Gly Ile Leu Val Gly Asn Asn Phe Ala Pro 3921535 AAT ATT ATA TTT GCA CTT GCT GGA GGC ATG TTC CTC TAT ATT TCT CTG1582393 Asn Ile Ile Phe Ala Leu Ala Gly Gly Met Phe Leu Tyr Ile Ser Leu 4081583 GCA GAT ATG TTT CCA GAG ATG AAT GAT ATG CTG AGA GAA AAG GTA ACT1630409 Ala Asp Met Phe Pro Glu Met Asn Asp Met Leu Arg Glu Lys Val Thr 4241631 GGA AGA AAA ACC GAT TTC ACC TTC TTC ATG ATT CAG AAT GCT GGA ATG1678425 Gly Arg Lys Thr Asp Phe Thr Phe Phe Met Ile Gln Asn Ala Gly Met 4401679 TTA ACT GGA TTC ACA GCC ATT CTA CTC ATT ACC TTG TAT GCA GGA GAA1726441 Leu Thr Gly Phe Thr Ala Ile Leu Leu Ile Thr Leu Tyr Ala Gly Glu 4561727 ATC GAA TTG GAG TAA TAG AAA ATG GAA GAT GGT GTT GTT AAT AAA GGC1774457 Ile Glu Leu Glu *** 4611775 ATT TAA TAG ATA AAA AAA AAA AAA AAA AA 1803DBlastp結(jié)果Query=PP3105[基因=PP3105](460個(gè)氨基酸)>SP_IN:Q22395 Q22395 caenorhabditis elegans.t11f9.2 protein.1/1999長(zhǎng)度=586分值=98.7 bits(242)，預(yù)計(jì)值=9e-20相同性=48/154(31％)，相似性=92/154(59％)，缺口=3/154(1％)Query: 295 PKLSEIGTIAWMITLCDALHNFIDGLAIGASCTLSLLQGLSTSIAILCEEFPHELGDFVI 354P E+ ++A+MI+ +NF+DG+++GA+ + +LL+GLS IA++ ++FP ELG ISbjct: 420 PAAMEVASVAYMIIFGSSANNFVDGMSMGAAFSDNLLRGLSIGIAVISQQFPQELGTLAI 479Query: 355 LLNAGMSTRQALLFNFLSACSCYVGLAFGILVG--NNFAPNIIFALAGGMFLYISLADMF 412L+ +G+ ++ LLFN + ++G + G+++ ++ IFA++ GM++YI L +Sbjct: 480 LVKSGLGLKKTLLFNMVPIVLSFLGFSIGVMLDSVDDSYDEYIFAISSGMYMYIFLGTLI 539Query: 413 PEMNDMLREKVTGRKTD-FTFFMIQNAGMLTGFT 445PE+ + E + + ++Q G+L G TSbjct: 540 PEIRESTNELIKENLAESILVSILQACGILFGTT 573分值=63.6 bits(152)，預(yù)計(jì)值=3e-09相同性=32/101(31％)，相似性=57/101(55％)，缺口=1/101(0％)Query: 122 RPSHSEVWGYGFLSVTIINLASLLGLILTPLIKKSYFPKILTFFVGLAIGTLFSNAIFQL 181+P + WG GF V+ + ++ LG++L P + KS + +I+TF V + IG L + IF +Sbjct: 117 KPPAWQTWGIGFAIVSGCSFSAPLGILLLPCLSKSLYERIMTFLVAVGIGALSGSTIFIM 176Query: 182 IPEAFGFDP-KVDSYVEKAVAVFGGFYLLFFFERMLKMLLK 221+P+AF + Y K++ +Y F +RML+ +L+Sbjct: 177 LPQAFHLTSFEHFEYHTKSLIILCALYAFFTVDRMLQYILE 217>PIR2:S49959 probable membrane protein YIL023c-yeast(Saccharomyces cerevisiae)長(zhǎng)度=346分值=71.0 bits(171)，預(yù)計(jì)值=2e-11相同性=69/330(20％)，相似性=127/330(37％)，缺口=70/330(21％)Query: 134 LSVTIINLASLLGLILTPLIKKSYFPKI-LTFFVGLAIGTLFSNAIFQLIPEAFGFDPKV 192+++ II L L ++ P ++K++ L+ V ++GTL + + +IPE+ VSbjct: 71 VAILIIQLMPCLFVLFVPGLRKNDRASLTLSLLVSFSLGTLLGDILLHVIPESLS---GV 127Query: 193 DSYVEKAVAVFGGFYLLFFFERMLKMLLKTYGQNGHTHFGNDNFGPQEKTHQPKALPAIN 252A+F GF ++ +++L T +G HSbjct: 128 TDVTMVGGAIFLGFISFLTLDKTMRILSGTSNDDGSIH--------------------- 165Query: 253 GVTCYANPAVTEANGHIHFDNVSVVSLQDGKKEPSSCTCLKGPKLSEIGTIAWMITLCDA 312++ H H+K + A++ +Sbjct: 166 ------------SHSHSHTPQQTA------------------EKKAGFNMSAYLNVISGI 195Query: 313 LHNFIDGLAIGASCTLSLLQGLSTSIAILCEEFPHELGDFVILLNAGMSTRQALLFNFLS 372H+ DG+A+ S S G+ TSIA+ E PHELGDF ILL++G + QA+++Sbjct: 196 AHHITDGIALATSFYSSTQVGIMTSIAVTFHEIPHELGDFAILLSSGFTFPQAIRAQAVT 255Query: 373 ACSCYVGLAFGIL---VGNNF---------APNIIFALAGGMFLYISLADMFPEMNDMLR 420AVG + G +GNN A ++ G +YI+ + P++ +Sbjct: 256 AFGAVVGTSIGCWMNEIGNNSHKATSSSANASELMLPFTAGGLIYIATTSVVPQI--LHS 313Query: 421 EKVTGRKTDFTFFMIQNAGMLTGFTAILLI 450+ +F + +Q + GF + L+Sbjct: 314 SAPDSKLREFKKWALQLVFIFVGFAVMALM 3439．PP5423A核苷酸序列(SEQ ID NO:25)長(zhǎng)度1832bp1 TTGGAGCTCC ACCGCGGTGG CGGCCGCTCT AGCCCGGGCG GATCCCCCGG51 GCTGCAGGGA CCATCAACGC ACGGGCCGAG GAGGATGTGG AGCCTGAGTG101 CATCATGGAG AAGGTGGCCA AGGCTTCAGG TGCCAACTAC AGCTTTCACA151 AGGAGAGTGG CCGCTTCCAG GACGTGGGAC CCCAGGCCCC AGTGGGCTCT201 GTGTACCAGA AGACCAATGC CGTGTCTGAG ATTAAAAGGG TTGGTAAAGA251 CAGCTTCTGG GCCAAAGCAG AGAAGGAGGA GGAGAACCGT CGGCTGGAGG301 AAAAGCGGCG GGCCGAGGAG GCACAGCGGC AGCTGGAGCA GGAGCGCCGG351 GAGCGTGAGC TGCGTGAGGC TGCACGCCGG GAGCAGCGCT ATCAGGAGCA401 GGGTGGCGAG GCCAGCCCCC AAAGGACGTG GGAGCAGCAG CAAGAAGTGG451 TTTCAAGGAA CCGAAATGAG CAGGAGTCTG CCGTGCACCC GAGGGAGATT501 TTCAAGCAGA AGGAGAGGGC CATGTCCACC ACCTCCATCT CCAGTCCTCA551 GCCTGGCAAG CTGAGGAGCC CCTTCCTGCA GAAGCAGCTC ACCCAACCAG60I AGACCCACTT TGGCAGAGAG CCAGCTGCTG CCATCTCAAG GCCCAGGGCA651 GATCTCCCTG CTGAGGAGCC GGCGCCCAGC ACTCCTCCAT GTCTGGTGCA701 GGCAGAAGAG GAGGCTGTGT ATGAGGAACC TCCAGAGCAG GAGACCTTCT751 ACGAGCAGCC CCCACTGGTG CAGCAGCAAG GTGCTGGCTC TGAGCACATT801 GACCACCACA TTCAGGGCCA GGGGCTCAGT GGGCAAGGGC TCTGTGCCCG851 TGCCCTGTAC GACTACCAGG CAGCCGACGA CACAGAGATC TCCTTTGACC901 CCGAGAACCT CATCACGGGC ATCGAGGTGA TCGACGAAGG CTGGTGGCGT951 GGCTATGGGC CGGATGGCCA TTTTGGCATG TTCCCTGCCA ACTACGTGGA1001 GCTCATTGAG TGAGGCTGAG GGCACATCTT GCCCTTCCCC TCTCAGACAT1051 GGCTTCCTTA TTGCTGGAAG AGGAGGCCTG GGAGTTGACA TTCAGCACTC1101 TTCCAGGAAT AGGACCCCCA GTGAGGATGA GGCCTCAGGG CTCCCTCCGG1151 CTTGGCAGAC TCAGCCTGTC ACCCCAAATG CAGCAATGGC CTGGTGATTC1201 CCACACATCC TTCCTGCATC CCCCGACCCT CCCAGACAGC TTGGCTCTTG1251 CCCCTGACAG GATACTGAGC CAAGCCCTGC CTGTGGCCAA GCCCTGAGTG1301 GCCACTGCCA AGCTGCGGGG AAGGGTCCTG AGCAGGGGCA TCTGGGAGGC1351 TCTGGCTGCC TTCTGCATTT ATTTGCCTTT ITTCTTTTTC TCTTGCTTCT1401 AAGGGGTGGT GGCCACCACT GTTTAGAATG ACCCTTGGGA ACAGTGAACG1451 TAGAGAATTG TTTTTAGCAG AGTTTGTGAC CAAAGTCAGA GTGGATCATG1501 GTGGTTTGGC AGCAGGGAAT TTGTCTTGTT GGAGCCTGCT CTGTGCTCCC1551 CACTCCATTT CTCTGTCCCT CTGCCTGGGC TATGGGAAGT GGGGATGCAG1601 ATGGCCAAGC TCCCACCCTG GGTATTCAAA AACGGCAGAC ACAACATGTT1651 CCTCCACGCG GCTCACTCGA TGCCTGCAGG CCCCAGTGTG TGCCTCAACT1701 GATTCTGACT TCAGGAAAAG TAACACAGAG TGGCCTTGGC CTGTTGTCTT1751 CCCCTATTTT CTGTCCCAGC TCATCCGTGT CTCTGAAGAA CAAATATGCT1801TTTGGACCAC GAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAB氨基酸序列(SEQ ID NO:26)長(zhǎng)度302個(gè)氨基酸1MEKVAKASGA NYSFHKESGR FQDVGPQAPV GSVYQKTNAV SEIKRVGKDS51 FWAKAEKEEE NRRLEEKRRA EEAQRQLEQE RRERELREAA RREQRYQEQG101 GEASPQRTWE QQQEVVSRNR NEQESAVHPR EIFKQKERAM STTSISSPQP151 GKLRSPFLQK QLTQPETHFG REPAAAISRP RADLPAEEPA PSTPPCLVQA201 EEEAVYEEPP EQETFYEQPP LVQQQGAGSE HIDHHIQGQG LSGQGLCARA251 LYDYQAADDT EISFDPENLI TGIEVIDEGW WRGYGPDGHF GMFPANYVEL301 IEC核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:27)克隆號(hào)和蛋白名稱PP5423起始編碼子105 ATG終止編碼子1013 TGA蛋白質(zhì)分子量34386.031 TT GGA GCT CCA CCG CGG TGG CGG CCG CTC TAG CCC GGG CGG ATC CCC 4748 CGG GCT GCA GGG ACC ATC AAC GCA CGG GCC GAG GAG GAT GTG GAG CCT 9596 GAG TGC ATC ATG GAG AAG GTG GCC AAG GCT TCA GGT GCC AAC TAC AGC 1431 Met Glu Lys Val Ala Lys Ala Ser Gly Ala Asn Tyr Ser 13144 TTT CAC AAG GAG AGT GGC CGC TTC CAG GAC GTG GGA CCC CAG GCC CCA 19114 Phe His Lys Glu Ser Gly Arg Phe Gln Asp Val Gly Pro Gln Ala Pro 29192 GTG GGC TCT GTG TAC CAG AAG ACC AAT GCC GTG TCT GAG ATT AAA AGG 23930 Val Gly Ser Val Tyr Gln Lys Thr Asn Ala Val Ser Glu Ile Lys Arg 45240 GTT GGT AAA GAC AGC TTC TGG GCC AAA GCA GAG AAG GAG GAG GAG AAC 28746 Val Gly Lys Asp Ser Phe Trp Ala Lys Ala Glu Lys Glu Glu Glu Asn 61288 CGT CGG CTG GAG GAA AAG CGG CGG GCC GAG GAG GCA CAG CGG CAG CTG 33562 Arg Arg Leu Glu Glu Lys Arg Arg Ala Glu Glu Ala Gln Arg Gln Leu 77336 GAG CAG GAG CGC CGG GAG CGT GAG CTG CGT GAG GCT GCA CGC CGG GAG 38378 Glu Gln Glu Arg Arg Glu Arg Glu Leu Arg Glu Ala Ala Arg Arg Glu 93384 CAG CGC TAT CAG GAG CAG GGT GGC GAG GCC AGC CCC CAA AGG ACG TGG 43194 Gln Arg Tyr Gln Glu Gln Gly Gly Glu Ala Ser Pro Gln Arg Thr Trp 109432 GAG CAG CAG CAA GAA GTG GTT TCA AGG AAC CGA AAT GAG CAG GAG TCT 479110 Glu Gln Gln Gln Glu Val Val Ser Arg Asn Arg Asn Glu Gln Glu Ser 125480 GCC GTG CAC CCG AGG GAG ATT TTC AAG CAG AAG GAG AGG GCC ATG TCC 527126 Ala Val His Pro Arg Glu Ile Phe Lys Gln Lys Glu Arg Ala Met Ser 141528 ACC ACC TCC ATC TCC AGT CCT CAG CCT GGC AAG CTG AGG AGC CCC TTC 575142 Thr Thr Ser Ile Ser Ser Pro Gln Pro Gly Lys Leu Arg Ser Pro Phe 157576 CTG CAG AAG CAG CTC ACC CAA CCA GAG ACC CAC TTT GGC AGA GAG CCA 23158 Leu Gln Lys Gln Leu Thr Gln Pro Glu Thr His Phe Gly Arg Glu Pro 73624 GCT GCT GCC ATC TCA AGG CCC AGG GCA GAT CTC CCT GCT GAG GAG CCG 671174 Ala Ala Ala Ile Ser Arg Pro Arg Ala Asp Leu Pro Ala Glu Glu Pro 189672 GCG CCC AGC ACT CCT CCA TGT CTG GTG CAG GCA GAA GAG GAG GCT GTG 719190 Ala Pro Ser Thr Pro Pro Cys Leu Val Gln Ala Glu Glu Glu Ala Val 205720 TAT GAG GAA CCT CCA GAG CAG GAG ACC TTC TAC GAG CAG CCC CCA CTG 767206 Tyr Glu Glu Pro Pro Glu Gln Glu Thr Phe Tyr Glu Gln Pro Pro Leu 221768 GTG CAG CAG CAA GGT GCT GGC TCT GAG CAC ATT GAC CAC CAC ATT CAG 815222 Val Gln Gln Gln Gly Ala Gly Ser Glu His Ile Asp His His Ile Gln 237816 GGC CAG GGG CTC AGT GGG CAA GGG CTC TGT GCC CGT GCC CTG TAC GAC 863238 Gly Gln Gly Leu Ser Gly Gln Gly Leu Cys Ala Arg Ala Leu Tyr Asp 253864 TAC CAG GCA GCC GAC GAC ACA GAG ATC TCC TTT GAC CCC GAG AAC CTC 911254 Tyr Gln Ala Ala Asp Asp Thr Glu Ile Ser Phe Asp Pro Glu Asn Leu 269912 ATC ACG GGC ATC GAG GTG ATC GAC GAA GGC TGG TGG CGT GGC TAT GGG 959270 Ile Thr Gly Ile Glu Val Ile Asp Glu Gly Trp Trp Arg Gly Tyr Gly 285960 CCG GAT GGC CAT TTT GGC ATG TTC CCT GCC AAC TAC GTG GAG CTC ATT1007286 Pro Asp Gly His Phe Gly Met Phe Pro Ala Asn Tyr Val Glu Leu Ile 3011008 GAG TGA GGC TGA GGG CAC ATC TTG CCC TTC CCC TCT CAG ACA TGG CTT1055302 Glu ***3031056 CCT TAT TGC TGG AAG AGG AGG CCT GGG AGT TGA CAT TCA GCA CTC TTC11031104 CAG GAA TAG GAC CCC CAG TGA GGA TGA GGC CTC AGG GCT CCC TCC GGC11511152 TTG GCA GAC TCA GCC TGT CAC CCC AAA TGC AGC AAT GGC CTG GTG ATT11991200 CCC ACA CAT CCT TCC TGC ATC CCC CGA CCC TCC CAG ACA GCT TGG CTC12471248 TTG CCC CTG ACA GGA TAC TGA GCC AAG CCC TGC CTG TGG CCA AGC CCT12951296 GAG TGG CCA CTG CCA AGC TGC GGG GAA GGG TCC TGA GCA GGG GCA TCT13431344 GGG AGG CTC TGG CTG CCT TCT GCA TTT ATT TGC CTT TTT TCT TTT TCT13911392 CTT GCT TCT AAG GGG TGG TGG CCA CCA CTG TTT AGA ATG ACC CTT GGG14391440 AAC AGT GAA CGT AGA GAA TTG TTT TTA GCA GAG TTT GTG ACC AAA GTC14871488 AGA GTG GAT CAT GGT GGT TTG GCA GCA GGG AAT TTG TCT TGT TGG AGC15351536 CTG CTC TGT GCT CCC CAC TCC ATT TCT CTG TCC CTC TGC CTG GGC TAT15831584 GGG AAG TGG GGA TGC AGA TGG CCA AGC TCC CAC CCT GGG TAT TCA AAA16311632 ACG GCA GAC ACA ACA TGT TCC TCC ACG CGG CTC ACT CGA TGC CTG CAG16791680 GCC CCA GTG TGT GCC TCA ACT GAT TCT GAC TTC AGG AAA AGT AAC ACA17271728 GAG TGG CCT TGG CCT GTT GTC TTC CCC TAT TTT CTG TCC CAG CTC ATC17751776 CGT GTC TCT GAA GAA CAA ATA TGC TTT TGG ACC ACG AAA AAA AAA AAA18231824 AAA AAA AAA183權(quán)利要求
1．一種分離的具有抑癌功能的人蛋白，其特征在于，它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26；或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2．如權(quán)利要求1所述的多肽，其特征在于，該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。
3．一種分離的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85％相同性(a)編碼如權(quán)利要求1和2所述多肽的多核苷酸；(b)與多核苷酸(a)互補(bǔ)的多核苷酸。
4．如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。
5．如權(quán)利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27的編碼區(qū)序列或全長(zhǎng)序列。
6．一種載體，其特征在于，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
7．一種遺傳工程化的宿主細(xì)胞，其特征在于，它是選自下組的一種宿主細(xì)胞(a)用權(quán)利要求6所述的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞；(b)用權(quán)利要求3所述的多核苷酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)的宿主細(xì)胞。
8．一種具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制備方法，其特征在于，該方法包含(a)在適合表達(dá)具有抑癌功能的人蛋白的條件下，培養(yǎng)權(quán)利要求7所述的宿主細(xì)胞；(b)從培養(yǎng)物中分離出具有具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9．一種能與權(quán)利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特異性結(jié)合的抗體。
10．一種核酸分子，它含有權(quán)利要求3所述的多核苷酸中連續(xù)的10-800個(gè)核苷酸。
11．一種藥物組合物，其特征在于，它含有安全有效量的權(quán)利要求1所述的多肽以及藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的具有抑癌功能的人蛋白,編碼此多肽的多核苷酸和經(jīng)重組技術(shù)產(chǎn)生該多肽的方法。本發(fā)明還公開了此多肽用于治療多種疾病如癌癥等的方法。本發(fā)明還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明還公開了編碼這類新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文檔編號(hào)C12N15/11GK1313316SQ00111990
公開日2001年9月19日 申請(qǐng)日期2000年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月13日
發(fā)明者顧健人, 楊勝利 申請(qǐng)人:上海市腫瘤研究所