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一種靖西細(xì)筒苣苔組培葉片兩步成苗方法

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一種靖西細(xì)筒苣苔組培葉片兩步成苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域,具體地,涉及靖西細(xì)筒苣苔組培葉片兩步成苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 靖西細(xì)筒苣苔為苦苣苔科細(xì)筒苣苔屬植物,是2011年發(fā)現(xiàn)的新種,靖西細(xì)筒苣苔 為多年生草本,根狀莖圓柱形,葉片腎形或圓形,花序梗、花序和花期外被線狀短柔毛和紫 色腺體,花期5-6月,果期6月。中國(guó)特有珍稀植物,特產(chǎn)廣西靖西,生于石灰?guī)r山地巖石上, 海拔約為200-250m。
[0003] 靖西細(xì)筒苣苔分布區(qū)域極其狹窄,目前僅在廣西靖西地區(qū)石灰?guī)r山陡崖上發(fā)現(xiàn)少 量植株,由于生長(zhǎng)環(huán)境惡劣缺少水肥,加之其種子細(xì)小,萌發(fā)需要的溫度范圍、濕度范圍和 土壤酸堿度范圍比較小,自然界難以進(jìn)行有性繁殖,急需建立有效的繁育和保護(hù)體系,本發(fā) 明旨在通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)葉片兩步成苗方法對(duì)靖西細(xì)筒苣苔種質(zhì)資源進(jìn)行有效的繁育和 保護(hù),是目前對(duì)靖西細(xì)筒苣苔育苗最便捷、穩(wěn)定的手段,可以節(jié)約大量的人力、物力和場(chǎng)地, 便于種質(zhì)交換和轉(zhuǎn)移,避免有害病蟲的人為傳播。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的在于提供一種靖西細(xì)筒苣苔組培葉片兩步成苗方法,能夠短時(shí)間內(nèi)提 供大量?jī)?yōu)質(zhì)適合栽培的靖西細(xì)筒苣苔種苗。
[0005] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的,本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案: 靖西細(xì)筒苣苔組培葉片兩步成苗方法,其特征在于: (1) 葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng):取靖西細(xì)筒苣苔幼嫩葉片,在75%乙醇中表面消毒30~ 45s,無(wú)菌水2~3次,投入0.1% Hcl2 5min,無(wú)菌水2~3次,0.1% Hcl2 3min,無(wú)菌水2~3次沖洗 干后切分為0.5 cmXl cm大小接種在誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上,在溫度為22~26° C,光照強(qiáng)度 1800~26001ux,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下,10~15天葉片分化出不定芽; (2) 不定芽壯苗生根培養(yǎng):選擇靖西細(xì)筒苣苔葉片分化1~1.5個(gè)月高2~3cm不定芽接種 到壯苗生根培養(yǎng)基,在溫度為22~26° C,光照強(qiáng)度2000~28001ux,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的 條件下進(jìn)行培養(yǎng),1~2個(gè)月不定芽長(zhǎng)至高4~6cm的無(wú)菌苗。
[0006] 當(dāng)無(wú)菌苗每株生根4條以上、根長(zhǎng)達(dá)2.5~4cm時(shí),打開瓶蓋,在室內(nèi)煉苗3~4天后,將 組培苗從培養(yǎng)瓶中取出,洗去培養(yǎng)基,將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。
[0007] 采用本發(fā)明所述方法得到的種苗健壯、成活率高,可在短期內(nèi)提供大量靖西細(xì)筒 苣苔的優(yōu)質(zhì)種苗,并減少了配制培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)瓶的步驟,節(jié)約了大量人力物力,因此簡(jiǎn)單易 行、生產(chǎn)成本降低,有效解決了靖西細(xì)筒苣苔規(guī)模化育苗及種質(zhì)資源保存問(wèn)題。
【具體實(shí)施方式】
[0008] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說(shuō)明。
[0009] 靖西細(xì)筒苣苔組培葉片兩步成苗方法法,包括以下步驟: (1)葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng):取靖西細(xì)筒苣苔幼嫩葉片,在75%乙醇中表面消毒30~ 45s,無(wú)菌水2~3次,投入0.1% Hch 5min,無(wú)菌水2~3次,0.1% Hch 3min,無(wú)菌水2~3次沖洗 干后切分為0.5 cmXl cm大小接種在誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上,在溫度為22~26° C,光照強(qiáng)度 1800~26001ux,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下,10~15天葉片分化出不定芽,觀察發(fā)現(xiàn), 6-BA和NAA濃度對(duì)不定芽數(shù)誘導(dǎo)有顯著影響,在6-BA濃度為1.5mg/L,NAA濃度為1.0 mg/L, KT濃度為0.2 mg/L時(shí)不定芽數(shù)最高,達(dá)到11.6個(gè)。 表i不同激素對(duì)不定芽數(shù)的影_
[0010] 上述誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基為:以MS為基本培養(yǎng)基,每升添加6-芐氨基嘌呤1~2.0 mg、 α-萘乙酸0.3~lmg、激動(dòng)素0.2~0.5 mg、瓊脂3.8~4.5 g和蔗糖20~25 g,pH值5.8~6.0,培養(yǎng) 溫度為24 ± 2° C,光照強(qiáng)度1800~26001UX,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天。
[0011] (2)不定芽壯苗生根培養(yǎng):選擇靖西細(xì)筒苣苔葉片分化1~1.5個(gè)月高2~3cm不定芽 接種到壯苗生根培養(yǎng)基,在溫度為22~26° C,光照強(qiáng)度2000~28001UX,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/ 天的條件下進(jìn)行培養(yǎng),1~2個(gè)月不定芽長(zhǎng)至高4~6cm的無(wú)菌苗。觀察發(fā)現(xiàn),在添加0.5g/L活 性炭的MS培養(yǎng)基中6-BA和IAA協(xié)同作用對(duì)靖西細(xì)筒苣苔生根效果好,當(dāng)6-BA濃度升高為0.6 mg/L,NAA濃度為1.0 mg/L時(shí)靖西細(xì)筒苣苔組培苗生根效果最好,植株粗壯,植株高度 5 · 3cm,生根率達(dá)到100%,平均根數(shù)達(dá)到6根。 表2不同激素水平對(duì)不定根效果的影明
[0012] 當(dāng)無(wú)菌苗每株生根4條以上、根長(zhǎng)達(dá)2.5~4cm時(shí),打開瓶蓋,在室內(nèi)煉苗3~4天后,將 組培苗從培養(yǎng)瓶中取出,洗去培養(yǎng)基,將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。
[0013] 備注:6-BA(6-節(jié)氨基嘌呤),NAA(萘乙酸),KT(激動(dòng)素),IAA(B引噪乙酸),AC (活性炭)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種靖西細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗方法,其特征在于: (1) 葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng):取靖西細(xì)筒苣苔幼嫩葉片,在75%乙醇中表面消毒30~ 45s,無(wú)菌水2~3次,投入0.1% Hcl2 5min,無(wú)菌水2~3次,0.1% Hcl2 3min,無(wú)菌水2~3次沖洗 干后切分為0 · 5 cmX lcm大小接種在MS+ 1 · 0~1 · 5mg/L6_BA+0 · 5~1 · 0mg/LNAA+0 · 1~0 · 2mg/L KT誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上,在溫度為22~26° C,光照強(qiáng)度1800~26001ux,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/ 天的條件下,10~15天葉片分化出不定芽; (2) 不定芽壯苗生根培養(yǎng):選擇靖西細(xì)筒苣苔葉片分化1~1.5個(gè)月高2~3cm不定芽接種 到MS+0 · 2~0 · 4mg/L6-BA+l · 0~1 · 5mg/LNAA+0 · 5mg/L AC壯苗生根培養(yǎng)基,在溫度為22~26° C, 光照強(qiáng)度2000~28001UX,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下進(jìn)行培養(yǎng),1~2個(gè)月不定芽長(zhǎng)至 高4~6cm的無(wú)菌苗。2. 如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于: (1) 葉片誘導(dǎo)分化不定芽培養(yǎng):取靖西細(xì)筒苣苔幼嫩葉片,在75%乙醇中表面消毒30~ 45s,無(wú)菌水2~3次,投入0.1% Hcl2 5min,無(wú)菌水2~3次,0.1% Hcl2 3min,無(wú)菌水2~3次沖洗 干后切分為0.5 cmXl cm大小接種在MS+ 1.5~2.0mg/L6_BA+0.5~1.0mg/LNAA+0.2~0.4mg/ L KT誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上,在溫度為22~26°C,光照強(qiáng)度1800~26001ux,光照時(shí)間為8~10小 時(shí)/天的條件下,10~15天葉片分化出不定芽, (2) 不定芽壯苗生根培養(yǎng):選擇靖西細(xì)筒苣苔葉片分化1~1.5個(gè)月高2~3cm不定芽接種 到MS+0 · 2~0 · 4mg/L6-BA+l · 0~1 · 5mg/LNAA+0 · 5mg/L AC壯苗生根培養(yǎng)基,在溫度為22~26° C, 光照強(qiáng)度2000~28001UX,光照時(shí)間為8~10小時(shí)/天的條件下進(jìn)行培養(yǎng),1~2個(gè)月不定芽長(zhǎng)至 高4~6cm的無(wú)菌苗。
【專利摘要】一種靖西細(xì)筒苣苔葉片組培兩步成苗方法:取靖西細(xì)筒苣苔幼嫩葉片作為外植體進(jìn)行滅菌處理,然后將其切分成含主脈0.5?cm×1?cm大小后接種到誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基上,1?~1.5個(gè)月后選擇幼嫩葉片上分化出的具有2片以上葉子、高1~2.5cm的無(wú)菌芽苗轉(zhuǎn)接到壯苗生根培養(yǎng)基上;當(dāng)無(wú)菌苗每株生根4條以上、根長(zhǎng)達(dá)2.5~4cm時(shí),煉苗3~4天,將組培苗從培養(yǎng)瓶中取出,將其移栽至滅菌的栽培基質(zhì)中。采用本發(fā)明方法得到的種苗健壯、成活率高,可在短期內(nèi)提供大量靖西細(xì)筒苣苔的優(yōu)質(zhì)種苗,并減少了配制培養(yǎng)基和轉(zhuǎn)瓶的步驟,節(jié)約了大量人力物力,因此簡(jiǎn)單易行、生產(chǎn)成本降低,有效解決了靖西細(xì)筒苣苔規(guī)?;缂胺N質(zhì)資源保存問(wèn)題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號(hào)】CN105519447
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610108416
【發(fā)明人】李翠, 張占江, 繆劍華, 韋坤華, 韋瑩, 李林軒, 王一諾, 肖冬, 王曉峰
【申請(qǐng)人】廣西壯族自治區(qū)藥用植物園
【公開日】2016年4月27日
【申請(qǐng)日】2016年2月29日
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