P 8、MMP9、 MMP13或其任意組合中至少一種的酶活性。在某些方面中，該MMP抑制劑可以降低或抑制 MMP1、MMP 8、MMP9、MMP13或其任意組合中至少兩種的酶活性。在某些方面中，該MMP抑制 劑可以降低或抑制MMPUMMP 8、MMP9、MMP13或其任意組合中至少三種的酶活性。此外，該 MMP抑制劑可包括但不限于天然或合成的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP)抑制劑。合成的MMP抑制 劑通常含有螯合基團(tuán)，其緊密地結(jié)合MMP活性位點(diǎn)處的催化性鋅原子。常見的螯合基團(tuán)包 括異羥肟酸酯/鹽、羧酸酯/鹽、硫醇和氧膦基。在某些方面中，異羥肟酸酯/鹽是特別強(qiáng) 力的MMP抑制劑，因?yàn)槠鋵?duì)鋅原子進(jìn)行雙齒螯合（bidentate chelation)。鋅螯合劑可包括 二乙基二硫代氨基甲酸（DEDTC)和乙二胺四乙酸鈣（EDTA)。在某些方面中，本文所述抑制 劑可包括但不限于：多西環(huán)素、PCK3145(對(duì)應(yīng)于前列腺分泌蛋白94的氨基酸31-45的合成 肽）、BB-2516 (馬立馬司他）、BB-94 (即巴馬司他，其是（2R，3S) -N4-羥基-Nl-[ (IS) -2-(甲 基氨基）-2_氧代-1-(苯基甲基）乙基]-2-(2-甲基丙基）-3-[(2_噻吩基硫代）甲基] 丁二酰胺）、調(diào)節(jié)內(nèi)源性金屬蛋白酶組織抑制劑（??ΜΡ)的化合物（例如調(diào)節(jié)??ΜΡ合成的化 合物），或其任意組合。例如，已證明一種天然化合物京尼平上調(diào)??ΜΡ-1的表達(dá)。不希望 受理論限制，京尼平誘導(dǎo)的??ΜΡ-1的上調(diào)降低或抑制了 MMP-2活性，且在某些方面中，京尼 平可用于在本發(fā)明所述方法和組合物中抑制或降低MMP酶活性。此外，已證明轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因 子-β (TGF-β)信號(hào)通過刺激膠原生成和其他胞外基質(zhì)蛋白并通過上調(diào)??ΜΡ-1基因抑制 基質(zhì)降解從而在胞外基質(zhì)沉積中起重要作用。因此，調(diào)節(jié)TGF-β信號(hào)并最終調(diào)節(jié)??ΜΡ表 達(dá)（如TIMP-I表達(dá)）和MMP抑制的化合物可用作本發(fā)明所述方法的抑制劑。
[0034] 在某些實(shí)施方式中，將生物材料置于包含至少一種降低或防止生物材料胞外基質(zhì) 完整性損失的試劑和至少一種或多種促進(jìn)細(xì)胞活力保留的試劑的溶液。
[0035] 在將生物材料置于上述任一種溶液中后，隨后可儲(chǔ)存該生物材料。例如，在將生 物材料置于包含至少一種試劑的溶液中后，可在多種溫度下儲(chǔ)存該混合物以進(jìn)一步促進(jìn)生 物材料胞外基質(zhì)的保存并進(jìn)一步防止或降低生物材料活力的損失。例如，這些溫度可包括 但不限于低溫溫度和常溫溫度。在將生物材料儲(chǔ)存于低溫溫度中時(shí)，優(yōu)選減少或防止冰 核。在某些方面中，低溫溫度可包括以下溫度范圍：_25°C至+35°C、_15°C至+30°C、_5°C至 +25°C、-5°C 至+20°C、-5°C 至 +15°C、-5°C 至+10°C、-5°C 至+5°C、0°C 至 +10°C、0°C 至+9°C、 0°C 至+8°C、0°C 至+7°C、0°C 至+6°C、0°C 至+5°C、0°C 至+5°C、0°C 至+4°C、0°C 至+3°C、0°C 至 +2°〇、+1°〇至+8°〇、+1°〇至+6°〇、+1°〇至+4°〇、+1°〇至+3°〇、+2°〇至+9°〇、+2°〇至+6°〇、+2°〇 至 +4°C、+3°C 至 +8°C、+3°C 至 +6°C、+3°C 至 +5°C、+4°C 至 +8°C、+4°C 至 +6°C、+5°C 至 +9°C、 +5°C至+7°C、+6°C至+10°C、+6°C至+8°C、+7°C至+9°C和 +8°C至+10°C。在某些方面中并 取決于生物材料，優(yōu)選低溫溫度。例如，如果軟骨細(xì)胞和/或軟骨是生物材料，可使用上文 所述低溫溫度保存軟骨細(xì)胞和/或軟骨。例如，如果軟骨細(xì)胞和/或軟骨是生物材料，低溫 溫度的范圍優(yōu)選-25°C至+35°C，更優(yōu)選-5°C至+25°C，且最優(yōu)選(TC至+10°C。在某些方面 中，可將生物材料儲(chǔ)存數(shù)小時(shí)、數(shù)天、數(shù)月或數(shù)年。例如，優(yōu)選將軟骨細(xì)胞和/或軟骨（如軟 骨組織塞）儲(chǔ)存數(shù)小時(shí)至最多三個(gè)月、數(shù)小時(shí)至最多兩個(gè)月、數(shù)小時(shí)至最多一個(gè)月，等。
[0036] 在某些方面中，可以多種所需時(shí)間間隔替換儲(chǔ)存的生物材料的不含動(dòng)物產(chǎn)品的溶 液。例如，可在生物材料儲(chǔ)存期間并直至從儲(chǔ)存中取出儲(chǔ)存的生物材料以用于進(jìn)一步使用 前，每周兩次、每周一次、每?jī)芍芤淮巍⒚吭乱淮?、每?jī)稍乱淮翁鎿Q不含動(dòng)物產(chǎn)品的溶液。
[0037] 在使用上文所述方法和組合物時(shí)，在某些方面中，該生物材料包括軟骨細(xì)胞和/ 或軟骨。本發(fā)明的一個(gè)目的包括在儲(chǔ)存期間降低或防止生物材料的胞外基質(zhì)材料性能損失 并優(yōu)化生物材料的細(xì)胞活力，用于以后的應(yīng)用。在該方面中，將軟骨細(xì)胞和/或軟骨置于包 含至少一種試劑的溶液中，所述試劑至少降低或防止胞外基質(zhì)完整性的損失。可將軟骨細(xì) 胞和/或軟骨置于胞外型溶液中，該胞外型溶液包含上文所述濃度的MMP抑制劑，且隨后可 將該混合物在范圍為-25°C至+30°C的低溫溫度下儲(chǔ)存一段時(shí)間。在另一個(gè)方面中，可將軟 骨細(xì)胞和/或軟骨置于胞內(nèi)型溶液中，該胞內(nèi)型溶液包含上文所述濃度的MMP抑制劑，且在 某些方面中，該胞內(nèi)型溶液任選地還包含上文所述營(yíng)養(yǎng)混合物以促進(jìn)細(xì)胞活力的保留。隨 后將置于胞內(nèi)型溶液中的軟骨細(xì)胞和/或軟骨在范圍為_25°C至+25°C的低溫溫度下儲(chǔ)存 一段時(shí)間。
[0038] 在一個(gè)方面中，需要確定最能夠降低或防止儲(chǔ)存期間生物材料性能（例如胞外基 質(zhì)完整性，包括胞外基質(zhì)滲透性、水含量、細(xì)胞活力等）損失的溶液。在進(jìn)一步確定最能夠 降低或防止生物材料性能損失的方法和組合物的同時(shí)，可將相同的生物材料置于上文所述 兩種不同的溶液（即胞內(nèi)型和胞外型）中。這兩種溶液都含有減少或防止生物材料胞外基 質(zhì)性能損失的試劑，且該胞內(nèi)型溶液可任選地含有營(yíng)養(yǎng)混合物。在將相同的生物材料置于 兩種不同溶液中后，可以類似方式（即在相同溫度下，儲(chǔ)存相同時(shí)間等）儲(chǔ)存兩種不同溶液 中的生物材料。一段時(shí)間后，將置于兩種不同溶液中的相同生物材料從儲(chǔ)存中取出并測(cè)試 生物材料性能（如細(xì)胞活力、胞外基質(zhì)滲透性等）并對(duì)其進(jìn)行比較以確定最能夠降低或防 止生物材料活力損失的方法和組合物。在某些方面中，這些方法和技術(shù)可適用于軟骨細(xì)胞 和/或軟骨以進(jìn)一步確定最能夠在儲(chǔ)存期間降低或防止生物材料完整性損失的溶液。
[0039] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含置于溶液中的生物材料，所述 溶液包含至少一種降低或防止生物材料性能損失的試劑。該生物材料性能可包括胞外基質(zhì) 完整性、細(xì)胞活力或其組合。胞外基質(zhì)完整性可包括例如胞外基質(zhì)滲透性、胞外基質(zhì)水含 量、胞外膜糖胺聚糖含量或其任意組合。該生物材料可包括真核組織。在一些實(shí)施方式中， 該生物材料可包括軟骨。在一些實(shí)施方式中，該生物材料可包括胞外基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞。在 一些實(shí)施方式中，該生物材料可包括含有活細(xì)胞的同種異體移植物材料。在一些實(shí)施方式 中，該生物材料可包括含有活細(xì)胞和胞外基質(zhì)的同種異體移植物材料，且該試劑降低或防 止胞外基質(zhì)完整性、細(xì)胞活力或其組合的損失。在這類實(shí)施方式中，該同種異體移植物材料 可以是軟骨。在一些實(shí)施方式中，該溶液可以是不含動(dòng)物產(chǎn)品的溶液，如不包含胎牛血清的 溶液。在一些實(shí)施方式中，該溶液可以是胞外型溶液，如等滲胞外型溶液。在一些實(shí)施方式 中，該溶液可以是胞內(nèi)型溶液，如等滲胞內(nèi)型溶液。
[0040] 在一些實(shí)施方式中，該至少一種降低或防止生物材料性能損失的試劑在溶液中的 濃度范圍是IOOpM至ImM。在一些實(shí)施方式中，該至少一種試劑是酶抑制劑，如最小化酶活 性以降低或防止生物材料性能損失的酶抑制劑，該生物材料性能包括胞外基質(zhì)完整性。例 如，該酶抑制劑可以抑制至少一種基質(zhì)金屬蛋白酶，如一種或多種以下物質(zhì)：MMP 1、MMP2、 MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP15、MMP16、MMP17、MMP 19、 MMP 20、MMP 21、MMP 23A、MMP23B、MMP24、MMP25、MMP26、MMP27、MMP28 或其任意組合。在 一些實(shí)施方式中，該酶抑制劑在溶液中的濃度范圍是1.0 nM至1000 μ Μ。在一些實(shí)施方式 中，該酶抑制劑可選自：多西環(huán)素、??ΜΡ、上調(diào)內(nèi)源性??ΜΡ的化合物、PCK3145、ΒΒ-2516和 ΒΒ-94。
[0041] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種組合物，其包含置于溶液中的生物材料，該溶 液包含至少一種降低或防止生物材料性能損失的試劑，其中該溶液是不含動(dòng)物產(chǎn)品的溶 液，包括等滲的胞外型溶液，該生物材料包括軟骨或胞外基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞，且該至少一種 試劑包括濃度為1.0 nM至ImM的基質(zhì)金屬蛋白酶的酶抑制劑。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明 涉及一種組合物，其包含置于溶液中的至少一種降低或防止生物材料性能損失的試劑，該 溶液是不含動(dòng)物產(chǎn)品的溶液，包括等滲的胞內(nèi)型溶液，該生物材料包括軟骨或胞外基質(zhì)中 的軟骨細(xì)胞，且該至少一種試劑包括濃度為1.0 nM至ImM的基質(zhì)金屬蛋白酶的酶抑制劑。
[0042] 在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及一種儲(chǔ)存生物材料的方法，該方法包括將生物材 料置于溶液中，所述溶液包含至少一種降低或防止生物材料性能損失的試劑。在一些實(shí)施 方式中，該生物材料可包含天然或工程改造的真核組織。在一些實(shí)施方式中，該生物材料可 包括軟骨。在一些實(shí)施方式中，該生物材料包括胞外基質(zhì)中的軟骨細(xì)胞。在一些實(shí)施方式 中，該生物材料包括含有活細(xì)胞的同種異體移植物材料。在一些實(shí)施方式中，該生物材料包 括含有活細(xì)胞和完整胞外基質(zhì)的同種異體移植物材料。在一些實(shí)施方式中，該同種異體移 植物材料可以是軟骨。在一些實(shí)施方式中，該溶液可以是不含動(dòng)物產(chǎn)品的溶液。在一些實(shí) 施方式中，該溶液可以是胞外型溶液，如等滲的胞外型溶液。在一些實(shí)施方式中，該溶液可 以是胞內(nèi)型溶液，如等滲的胞內(nèi)型溶液。在一些實(shí)施方式中，該溶液不包含胎牛血清。在一 些實(shí)施方式中，該至少