專利名稱：：類黃酮醛類作為農(nóng)藥的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及經(jīng)營(yíng)養(yǎng)傳遞而對(duì)植物病原的生物控制。本發(fā)明以使用肉桂醛和松柏醛來(lái)控制真菌和寄生性昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)，包括定居在植物各部分和組織表面上的吸樹(shù)汁昆蟲(chóng)，作為例子。背景植物各部分的表面如根和葉的表面定居著各種生物體，其中很多生物體依賴宿主植物作為營(yíng)養(yǎng)來(lái)源。定居的生物體包括病原性真菌和吸樹(shù)汁昆蟲(chóng)；兩組生物體均能給宿主植物帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p傷，包括阻礙宿主植物的發(fā)育生長(zhǎng)，和降低植物生產(chǎn)力，以及殺死宿主植物。對(duì)于植物的病原性真菌是多種多樣的，它們存在于真菌的大多數(shù)族內(nèi)。有一些，如銹菌，夏孢銹菌目，白粉菌和霜霉，白粉菌和霜霉(Erysiphacea和Peronosporacea)，是專性寄生物。一般一種特殊的銹菌或霉與制造加工該病原體所需營(yíng)養(yǎng)的特定宿主植物相關(guān)。作為一個(gè)例子，由短尖多胞銹菌(Phragmidriummucronatrum)引起的銹病是一種重要的與玫瑰相關(guān)的真菌病害；其在玫瑰葉背面產(chǎn)生亮橙色的色點(diǎn)，且在梢頂產(chǎn)生淺黃色斑點(diǎn)。由薔薇單絲殼菌(Sphaerothecapannosa)(Wallr.ex.Fr.)Levvar.rosaeWoronichine引起的白粉病也與玫瑰相關(guān)，并可能是溫室，花園和野生玫瑰等分布最廣最為嚴(yán)重的病害。侵害植物的病原性昆蟲(chóng)包括那些與細(xì)菌共生的昆蟲(chóng)物種，如蚜蟲(chóng)，葉蟬，和白蠅；宿主寄生蟲(chóng)在沒(méi)有共生生物情況下不能生存。例如蚜蟲(chóng)(homoptera)在稱為血腔內(nèi)菌胞的細(xì)胞中擁有Buchnera屬共生細(xì)菌。該細(xì)菌直接從其母體蚜蟲(chóng)遺傳給其后代，并且不會(huì)自然產(chǎn)生無(wú)共生的蚜蟲(chóng)。該細(xì)菌提供宿主昆蟲(chóng)胚胎發(fā)育所需的脂類，但該脂類在這些昆蟲(chóng)侵害的植物韌皮部分樹(shù)汁中不存在或以低濃度存在。植物病原體包括葡萄瘤蚜蟲(chóng)屬(Daktulosphairavitifoliae)，一種類蚜蟲(chóng)昆蟲(chóng)，和線蟲(chóng)。葡萄瘤蚜蟲(chóng)屬是美國(guó)Rocky山脈東部本生的，其生活在已演變?yōu)橄拗评ハx(chóng)進(jìn)食的天然野生種葡萄上。用來(lái)生產(chǎn)葡萄的歐洲葡萄(Vitisvinifera)在西亞已種植發(fā)展，但其對(duì)葡萄瘤蚜蟲(chóng)屬?zèng)]有抵抗性。莖和鱗莖線蟲(chóng)(Ditylenchusdipsaci)在所有加利弗尼亞主要農(nóng)業(yè)區(qū)均有記錄。如此廣泛的分布可能反映其在如大蒜鱗莖之被侵害的植物材料上的散布。無(wú)論這樣被侵害的植物在何處生長(zhǎng)，線蟲(chóng)都可能會(huì)被引入。Ditylenchusdipsaci被發(fā)現(xiàn)寄生于寬范圍養(yǎng)植和野生植物上。線蟲(chóng)在被侵染的組織中產(chǎn)生蟲(chóng)癭。除線蟲(chóng)蟲(chóng)癭本身對(duì)植物引起的侵?jǐn)_外，某些寄生真菌對(duì)受侵植物的傷害也增加，這些真菌易附于衰弱的根組織和蟲(chóng)癭的肥大、未分化細(xì)胞上。而且有些真菌，例如腐霉屬(Pythium)，鐮孢霉菌(Fusarium)，和絲核菌屬(Rhizoctonia)在蟲(chóng)癭中生長(zhǎng)繁殖要比在根的其它區(qū)快得多，因此引起根組織提早毀壞。多種農(nóng)藥組合物被用來(lái)控制植物病原體。例如，當(dāng)環(huán)境條件適于發(fā)生病害時(shí)，對(duì)銹病和白粉病兩者進(jìn)行6-7天程的保護(hù)性殺真菌噴霧是控制的典型方法。兩種常用的系統(tǒng)殺真菌劑是苯菌靈和嗪氨靈。但是控制白粉病的殺真菌劑的費(fèi)用高在剪下的玫瑰作物中，加州處理的費(fèi)用一年有幾百萬(wàn)美元。較早的殺真菌劑包括無(wú)機(jī)化合物，如銅和硫的化合物，以及有機(jī)保護(hù)物如福美雙，captam，代森錳和chlorotholonilo。這些化合物只在植物表面作用，并且為了防止侵染，必須在真菌病原出現(xiàn)之時(shí)或之前存在。這些較早的殺真菌劑是多點(diǎn)抑制劑；即它們影響許多真菌的代謝活性。較新的殺真菌劑趨向于是高度有效的有機(jī)體系，如苯并咪唑，甾醇生物合成抑制劑，N-甲酰苯胺，和苯酰胺，它們?cè)谥参飪?nèi)部和表面都有良好的作用。與較早的表面保護(hù)劑相反，該體系的殺真菌劑一般以低得多的劑量起作用，而且能治愈已發(fā)生的真菌感染，這是病害防治中的一個(gè)關(guān)鍵因素。該體系的殺真菌劑通常在真菌的單一靶位點(diǎn)作用，干擾產(chǎn)生生長(zhǎng)，生存和真菌生物體的傳染所需要的所有新的細(xì)胞物質(zhì)所必需的特定代謝過(guò)程。這些制劑一般只在抗真菌病原體方面是有效的?，F(xiàn)在使用方法中控制某些地上害蟲(chóng)(例如蜘蛛蚲，蚜蟲(chóng)，銀箔白蠅，葉蟬)的化學(xué)物質(zhì)包括那些結(jié)合兩種來(lái)自不同化學(xué)類別的殺蟲(chóng)劑，例如結(jié)合一種合成的帶有機(jī)磷或有機(jī)氯殺蟲(chóng)劑的擬除蟲(chóng)菊酯。土壤熏蒸劑已經(jīng)成為一種防治土壤害蟲(chóng)(線蟲(chóng)，葡萄瘤蚜蟲(chóng))的普遍的方法。使用某些高效型殺昆蟲(chóng)劑和熏蒸劑已由于取消了產(chǎn)品的公共協(xié)調(diào)機(jī)構(gòu)注冊(cè)，或拒絕再注冊(cè)而在最近幾年明顯減少了。農(nóng)藥的廣泛的使用已導(dǎo)致抗性病原體的發(fā)展及進(jìn)化，以及提高了人們對(duì)環(huán)境和健康的關(guān)注。成效高度顯著的生態(tài)環(huán)境活動(dòng)者團(tuán)體和公共調(diào)節(jié)機(jī)構(gòu)已經(jīng)造成越來(lái)越少的農(nóng)藥登記，并且隨之而來(lái)的是減少的相關(guān)的研究和發(fā)展。因此，人們對(duì)具有較低的動(dòng)物和環(huán)境毒性，且在控制病原真菌和昆蟲(chóng)的使用濃度下不具有明顯的生理毒性的“生物合理”殺真菌劑感興趣，將其鑒別和/或發(fā)展。相關(guān)文獻(xiàn)使用含有肉桂醛且需要一種抗氧化劑的組合物而保護(hù)作物不受有害昆蟲(chóng)，微生物和病原性微生物的侵害的方法在美國(guó)專利No.4978686中公開(kāi)。通過(guò)使用含肉桂醛的含水的組合物而保護(hù)作用抗病原性微生物和有害害蟲(chóng)在法國(guó)專利申請(qǐng)2529755中公開(kāi)。美國(guó)專利2465854中公開(kāi)了含有肉桂醛衍生物的殺昆蟲(chóng)組合物。在種植香菇的基質(zhì)中使用肉桂醛控制輪枝孢屬(Verticillium)公開(kāi)于美國(guó)專利No.5149715。Reweri等說(shuō)明了用磷酸鹽誘發(fā)對(duì)黃瓜白菌病的系統(tǒng)抗性。Biol.Agric，andHort.(1993)9305-315。Horst和Kawamato在《植物病害》(PlantDisease)，1992年3月，p.247中公開(kāi)了碳酸氫鈉和油對(duì)控制玫瑰白粉病和黑點(diǎn)病的作用。碳酸氫鈉和溶劑精煉的輕石蠟油已被用來(lái)控制黑點(diǎn)病和白粉病。Ziv等，Hort.Science(1993)28124-126。Elad等在Phytoparasitica(1989)，17279-288中公開(kāi)了膜生成聚合物對(duì)黃瓜白粉病的作用。Hagiladi和Ziv在J.Environ.Hortic.(1986)，469-71中公開(kāi)了使用抗蒸騰劑控制田間白粉病。Macro等人在Phytoparasitica(1994)2219-29中公開(kāi)了用涂上聚合物的抗蒸騰劑控制玫瑰白粉病。Paulus和Nelson在Calif.Agric.1988，4215中公開(kāi)了使用氟硅唑(flusilarzol)，腈菌唑，氯苯嘧啶醇(fenarimol)，pentonazote和烯唑醇控制玫瑰白粉病和銹病。美國(guó)專利No.4402950公開(kāi)了通過(guò)使用由芳香植物經(jīng)蒸汽應(yīng)用而獲得的萜烯而使活體人或動(dòng)物生物體內(nèi)的病毒去活。引用的萜烯是黑胡椒油，肉桂粉油，小豆蔻油，乙酸沉香酯，肉桂醛，黃樟油精，香芹酮，和順式/反式檸檬醛。美國(guó)專利No.4477361描述了包含抗微生物表面活性劑的肉桂化合物，其使實(shí)體變成被沖洗的表面。涉及單獨(dú)或與其它試劑結(jié)合的各種皂草苷的抗微生物性質(zhì)的參考文獻(xiàn)包括下面文獻(xiàn)JP2157205，DE3724595，JP61065802，JP61007290。已建議將抑制轉(zhuǎn)基因植物中CAD活性作為減少植物內(nèi)木質(zhì)素合成的一個(gè)方法，從而提高素材作物的消化性(WO93/05159)。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種通過(guò)營(yíng)養(yǎng)傳遞控制植物，種子，籽苗和基本上不帶植物病原體的植物上的病原性生物體的方法。該方法包括用足以控制目標(biāo)病原性生物體生長(zhǎng)的量的抗病原體試劑接觸有病害植物或易受病原體侵害的植物的一部分或幾部分或組織這一步驟。該生長(zhǎng)調(diào)節(jié)產(chǎn)物具有下面(1)中給出的結(jié)構(gòu)式其中R代表-CH2OH或-CHO，n是0至3的整數(shù)；每個(gè)R1獨(dú)立地代表OH或含有1至10個(gè)碳原子及0至5個(gè)雜原子的有機(jī)取代基，其中所述化合物中所有R1取代基中的碳和雜原子總數(shù)不超過(guò)15；且R4代表氫原子或1至10個(gè)碳原子的有機(jī)基團(tuán)。這些化合物包括天然化合物，如肉桂醛。α取代的醛如α-己基肉桂醛(HCA)也是令人感興趣的。該方法發(fā)現(xiàn)了防治觀賞和農(nóng)作物病原體生物的應(yīng)用。具體實(shí)施方案的說(shuō)明提供了基本上不帶病原生物體如真菌和吸樹(shù)汁昆蟲(chóng)的種子，籽苗和植物部分，如果實(shí)，以及用類黃酮醛對(duì)植物上的病原體侵害進(jìn)行生物控制的方法。“生物控制”是指藉直接的抗病原活性和/或誘導(dǎo)的宿主植物對(duì)病原體侵害的抗性來(lái)控制植物病原。定居在植物部分如葉，根，或花，或組織如木質(zhì)部或韌皮部的表面的真菌和/或昆蟲(chóng)與一種天然產(chǎn)物接觸?！凹纳敝敢环N微生物或昆蟲(chóng)與一種植物的部分或組織相關(guān)聯(lián)，病原體從該植物部分或組織攝取營(yíng)養(yǎng)，一般是基本養(yǎng)分如氨基酸，特別是蛋氨酸?！疤烊划a(chǎn)物”指對(duì)于一種生物體是獨(dú)特的、或者對(duì)于少數(shù)密切相關(guān)的生物體是共同的一種天然來(lái)源的有機(jī)化合物，并且包括真菌的第二代謝物和植物產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì)。天然產(chǎn)物可以從天然來(lái)源中分離，可以全部或部分合成，或者用重組技術(shù)生產(chǎn)。本發(fā)明方法是通過(guò)對(duì)植物宿主或?qū)Σ≡L(zhǎng)或?qū)⒁L(zhǎng)的底物施以有效抑制病原量的本發(fā)明化合物而實(shí)行的。施加到植物本身或施加到其根隙的抗病原劑的量將取決于受侵害程度并在某種程度上取決于制劑和使用的特定的化合物，因此必須經(jīng)實(shí)驗(yàn)確定才能取得最好的結(jié)果。“抗病原劑”是指有效控制病原體生長(zhǎng)，且能涉及殺死病原體和/或減緩或停止其繁殖的農(nóng)藥，即制劑。病原體包括對(duì)它們所寄生的植物具有不利影響的昆蟲(chóng)，真菌和其它微生物。本發(fā)明組合物和方法與現(xiàn)有組合物和方法相比有幾點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)。盡管已經(jīng)報(bào)導(dǎo)類黃酮醛，肉桂醛具有抗真菌性能，但原先并沒(méi)有用于植物作為無(wú)抗氧化劑存在時(shí)的水性乳劑或水溶液。作為一個(gè)例子，美國(guó)專利申請(qǐng)No.4978686公開(kāi)了抗氧化劑對(duì)于用來(lái)施用給作物的含肉桂醛的組合物來(lái)說(shuō)是必需的?？寡趸瘎┦前嘿F的，因此本發(fā)明制劑顯示出明顯的成本利益。另外，單一使用肉桂醛足以長(zhǎng)期保護(hù)植物宿主免受病原生物體，包括銹菌和白粉菌，的侵害，并且在比現(xiàn)有報(bào)道的濃度更低的濃度下有效。本發(fā)明制劑對(duì)已知對(duì)常規(guī)處理方法有抗性的害蟲(chóng)(包括如薊馬科食植物害蟲(chóng)和甜瓜蚜蟲(chóng))也有效。因此使用的醛的濃度減小且所需施用的次數(shù)減少，從而使制劑的毒性也降低了。本發(fā)明制劑也有效控制真菌和昆蟲(chóng)兩者，從而排除了施用多種試劑的需要。在特殊情況下，如昆蟲(chóng)傷害植物部分或組織并發(fā)生第二種真菌病害時(shí)，本發(fā)明的該方面特別有利。與未處理的植物相比，長(zhǎng)期控制病原生物體會(huì)使植物更健康并提高宿主植物的產(chǎn)率。更低濃度和單一劑量的抗病原試劑不僅降低對(duì)植物或作物的損害的可能性，也降低了對(duì)施農(nóng)藥的工人，或?qū)z食被處理過(guò)的植物的組織或部分的動(dòng)物，魚(yú)或鳥(niǎo)的副作用的可能性。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是芳香醛特別具有實(shí)際的器官感覺(jué)的和嗅覺(jué)性質(zhì)，在某些情況下可以提高處理過(guò)產(chǎn)物的味覺(jué)和/或嗅覺(jué)性質(zhì)。HCA的氣味被描述為有某些草質(zhì)特征的花或象茉莉一樣的氣味(技術(shù)數(shù)據(jù)頁(yè))。一些發(fā)現(xiàn)在本發(fā)明中有用的芳香族和脂肪族醛類如α-己基肉桂醛，苯甲醛，乙醛，肉桂醛，胡椒醛，和香草醛一般被認(rèn)為是安全(GRAS)合成香料(21CFR172.515)。HCA在五十年代前就已公用，并且現(xiàn)在廣泛用于消費(fèi)品(肥皂，清潔劑，雪花膏，洗液，香水)(香料原料的有關(guān)專題著作，F(xiàn)oodCosmet.Toxicol.12增刊，915，1974)。1965年HCA被FEMA(香料提取物制造商協(xié)會(huì)，香料成份使用標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查，No.2569，F(xiàn)d.Technol.，Champaign，19(第2部分)155，1965)授予GRAS(一般認(rèn)為是安全的)權(quán)，并且美國(guó)FDA允許其用于食品(21CFR121.1164)。歐洲理事會(huì)(1970)(歐洲理事會(huì)，天然和人工香料物質(zhì)，社會(huì)和公共健康領(lǐng)域部分協(xié)議，斯特拉斯堡，表A(1)，第1系列，no.129，p.55，1970)。在可允許的、1ppm水平的人工香料物質(zhì)名單中包括HCA。這些化合物的許多種已被報(bào)道具有抗肉毒梭狀芽孢桿菌(C.botulinum)孢子產(chǎn)生的抑制活性，參見(jiàn)Bowles和Miller，G.FoodProtection(1993)56788-794。這些化合物的通式見(jiàn)上文的(1)?？捎米魅榛瘎┤鏣weens(多乙氧基醚)的表面活性劑也已經(jīng)用作食品添加劑，象皂草苷(也已有GRAS權(quán))一樣。另外，制劑殘留量可以控制。這一點(diǎn)在與有益昆蟲(chóng)相關(guān)的整體害蟲(chóng)控制計(jì)劃需要短期殘留時(shí)有很大益處。另外，本發(fā)明制劑有效抗那些對(duì)其它試劑有抗性的害蟲(chóng)。再次進(jìn)入溫室的時(shí)間也不是問(wèn)題。一般情況下該制劑快速使目標(biāo)生物體致死；當(dāng)與無(wú)再進(jìn)入時(shí)間聯(lián)系起來(lái)時(shí)，這一點(diǎn)是特別有價(jià)值的特點(diǎn)，(例如，剪花總量沒(méi)有損失)。本發(fā)明制劑和方法的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于治理不僅僅提供長(zhǎng)期持續(xù)的抗害蟲(chóng)的保護(hù)作用，而且在距施用本發(fā)明制劑點(diǎn)較遠(yuǎn)的植物上的位點(diǎn)也是有效的。例如，對(duì)葉施用本發(fā)明化合物，在較遠(yuǎn)和達(dá)不到的植物區(qū)位如根和分生組織處對(duì)定居的病原體也是有效的。之所以發(fā)生遠(yuǎn)效果是因?yàn)轭慄S酮醛在植物維管系統(tǒng)中運(yùn)送，其使化合物在活植物內(nèi)長(zhǎng)距離運(yùn)送，和/或因?yàn)楸景l(fā)明制劑的施用誘導(dǎo)系統(tǒng)獲得抗性(SAR)。SAR發(fā)生于有受侵染響應(yīng)、特別是由引起壞死的病原體侵染的植物內(nèi)，其提供對(duì)相同或甚至不相關(guān)的病原體的相繼侵害的增強(qiáng)的抗性。SAR提供貫穿植物(系統(tǒng)的)抗廣譜范圍不相關(guān)病原體的長(zhǎng)期(幾星期或幾個(gè)月)的保護(hù)作用。植物細(xì)胞中抵御響應(yīng)的例子包括誘發(fā)的植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)成份的合成，如角質(zhì)和木栓質(zhì)，胼胝質(zhì)，木質(zhì)素，化學(xué)抵御化合物如H2O2，和抗細(xì)菌或抗真菌化合物，如單寧和植物抗毒素。優(yōu)選的結(jié)構(gòu)在下面結(jié)構(gòu)式(2)中給出其中R1代表-CHO，R2代表-OH或有1至10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，且R3代表甲氧基或有1至10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，和R4代表氫原子或有1至10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。特別令人感興趣的是類黃酮醛類，特別是芳香族醛類。用在本發(fā)明中的芳香醛的例子是肉桂醛(下面(3)式)和松柏醛(下面式(4))令人感興趣的其它化合物包括式(1)化合物的類似物，如在α位被烷基如己基或支鏈烷基如戊基取代的化合物。一般情況下α位的基團(tuán)是C-5至C-10。這樣的化合物包括α-己基肉桂醛和α-戊基肉桂醛。α-己基肉桂醛(HCA)的化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)(5)(下)。HCA的化學(xué)文摘社(CAS)的名稱是2-(苯基亞甲基)辛醛，化學(xué)文摘登記號(hào)是[101-86-0]。該化合物的化學(xué)名稱也叫2-己基-3-苯基-2-丙烯醛?；衔锓肿邮绞荂15H20O，分子量是216.3。HCA是低至中度揮發(fā)性化合物，25℃時(shí)的蒸汽壓是70×10-5mmHg。其母體化合物，肉桂醛，具有大約40倍高的蒸汽壓(2970×10-5mmHg，25℃)。為了比較的目的，昆蟲(chóng)相斥的N，N-二乙基-m-甲苯胺具有稍高的蒸汽壓(167×10-5mmHg，25℃)(Reifenrath，W.G.(1995)VolatileSubstances.CosmeticsandToiletries，11085-93)。本發(fā)明芳香族和脂肪族醛可通過(guò)各種本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的合成方法來(lái)制備。例如，參見(jiàn)J.March，ed.，附錄B，有機(jī)化學(xué)進(jìn)展反應(yīng)，機(jī)理，和結(jié)構(gòu)，第二版(AppendixB，AdvancedOrganicChemistryReactions，Mechanisms，andSeructure，2ndEd.，)，McGraw-Hill，NewYork，1977。肉桂醛可以通過(guò)例如氧化肉桂醇(Traynelis等，J.Am.Chem.Soc.(1964)86298)或通過(guò)苯乙烯與甲酰甲苯胺的縮合(英國(guó)專利504125)而合成制備。本發(fā)明醛類也可以從天然來(lái)源中分離得到。例如，肉桂醛可以從木腐真菌密絨韌革菌(Stereumsubpileatum)中分離到。參見(jiàn)Birkinshaw等，Biochem.J.(1957)66188。HCA可以按照例如USPN5055621的說(shuō)明來(lái)合成。在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模上，HCA可以通過(guò)苯甲醛與辛醛在氮?dú)獗Ｗo(hù)下反應(yīng)而合成(醛醇縮合)(私人信息，EricWalborsky，F(xiàn)irmenichChemicalManufacturingCenter，PortNewark，NewJersey)。反應(yīng)在裝有甲醇，309ppm二苯胺，氫氧化鉀和苯甲醛的攪拌瓶中進(jìn)行。緩慢加入辛醛后用乙酸將反應(yīng)混合物調(diào)至pH7.5-9.5。蒸發(fā)掉甲醇后，用水洗滌反應(yīng)混合物，有機(jī)相轉(zhuǎn)移到蒸餾裝置中。其中大約20-24％作為苯甲醛和“輕成分”被除掉了，剩下的餾出液包括α-己基肉桂醛“主餾分”。將“主餾分”再分餾，其中物質(zhì)的1-5％(重量)在“輕”級(jí)分中去除，根據(jù)的是氣味評(píng)估。終產(chǎn)物是淺黃色油狀物，其20℃時(shí)的比重是0.955-0.965，20℃時(shí)的折光指數(shù)為1.548-1.562，一大氣壓下的沸點(diǎn)為305℃，熔點(diǎn)是26℃。也可以從Firmenich獲得HCA；他們的產(chǎn)物主要由(E)-順式異構(gòu)體(最多93.8％)和(Z)-反式異構(gòu)體(最多6％)組成。少量成分是辛醛自身醛醇縮合產(chǎn)物(1-1.5％)(個(gè)人信息，JuneBurkhardt，F(xiàn)irmenich，Plainsboro，NewJersey)。加入起抗氧化劑(技術(shù)數(shù)據(jù)頁(yè)，己基肉桂醛907600，Revision853，F(xiàn)irmenichInc.，Plainsboro，NewJersey)作用的0.04％2，6-二叔丁基-對(duì)甲苯酚(丁基化的羥基甲苯或BHT)，來(lái)穩(wěn)定商售產(chǎn)物。據(jù)報(bào)道HCA天然存在于稻中，可從稻中分離(Givaudan-RoureIndex，Givaudan-RoureCorporafion，Clifton，NewJersey，1994，p.89)。本發(fā)明醛化合物可以單獨(dú)使用或者結(jié)合其它活性或非活性物質(zhì)使用。在某些情況下，通過(guò)向制劑中加入一種或幾種其它成分，即除式(1)化合物外的一種化合物，可提高該制劑的效力。優(yōu)選附加的成分減小特定制劑的植物毒性，同時(shí)提高該制劑的抗病原效果。具體優(yōu)選的是一種“協(xié)同劑”，其是一種由于其存在而增強(qiáng)比添加量更多的所期效果的成分?？梢宰兓环N或幾種其它制劑成分的濃度，同時(shí)保持或提高該制劑所期的植物毒性和抗病原性效果。特別令人感興趣的是向一種制劑中加入幾種成分，使減小給定制劑中一種或幾種其它成分的濃度，同時(shí)基本上保持該制劑的效力。這樣一種成分與該制劑的其它組分的結(jié)合可以在混合和/或施用的任何合適的階段在一步或幾步中進(jìn)行。特別令人感興趣的是向制劑中加入助劑?！爸鷦敝赶蛑苿┲屑尤氲挠兄谥饕煞植僮鞯奈镔|(zhì)。在施用農(nóng)用化學(xué)物質(zhì)時(shí)噴霧助劑擔(dān)當(dāng)此作用。有效噴霧助劑可以配制成含有一種或幾種表面活性劑，溶劑或助溶劑。含有表面活性劑，水和油成分的體系有許多形成有序相的其它可能性，表面活性劑可以使其自身聚集成各種形狀以產(chǎn)生微胞，第一有序相是一種可能性。表面活性劑也可以在互相貫穿的油和水相之間的界面聚集，產(chǎn)生微滴乳狀液。例如，該制劑可以通過(guò)加入的乳化劑如吐溫80而變得持久。其它可以使用的洗滌劑包括陰離子洗滌劑，如美國(guó)專利申請(qǐng)No.4978686公開(kāi)的那些洗滌劑。一般情況下，用于本發(fā)明制劑的洗滌劑和其它試劑不有損于類黃酮醛類的農(nóng)藥性質(zhì)，而且還提高了該制劑的實(shí)質(zhì)性質(zhì)(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利U.S.-4477361)，而且可以改善該殺蟲(chóng)性能。一種用于農(nóng)藥的優(yōu)選表面活性劑是皂草苷，其從任何一種各種來(lái)源獲得。皂草苷可以用作助劑和表面活性劑，用來(lái)減小所用類芳族醛的植物毒性和/或提高其效力。皂草苷是一類由皂草配基部分和糖基構(gòu)成的化合物。皂草配基可以是一甾類化合物或一三萜烯，糖基部分可以是葡萄糖，半乳糖，戊糖，或甲基戊糖。參見(jiàn)S.Budavari.ed.，TheMerckIndex，11版，Merck&amp;Co.，Inc.，Rahway，N.J.，1990，p.1328。用于本發(fā)明的皂草苷可以用本領(lǐng)域已知的方法，從多種來(lái)源包括已知可產(chǎn)生皂草苷的各種植物，范圍從絲蘭，龍舌蘭，皂樹(shù)屬(quillaja)，煙草，甘草，大豆，人參和蘆筍到蘆薈，從各植物部分包括果實(shí)，葉，種子和/或根中制備和/或提取。用于本發(fā)明的皂草苷優(yōu)選在使用濃度對(duì)人和高級(jí)動(dòng)物無(wú)毒性的。更優(yōu)選用于本發(fā)明的皂草苷是無(wú)毒性食品級(jí)的，其來(lái)源是絲蘭植物。更為優(yōu)選的是來(lái)自Yuccaschidigera或Y.valida和其等價(jià)物的皂草苷?？紤]到植物毒性控制以及毒性安全性，優(yōu)選的皂草苷來(lái)自絲蘭屬，并且優(yōu)選不結(jié)合包括那些來(lái)自蘆筍的膽甾醇的皂草苷。皂草苷一般由冷壓萃取方法制得，并且用HPLC分析所得萃取液的皂草苷濃度。也可以使用絲蘭纖維；其一般經(jīng)日曬，研磨并篩選大小。已知多種結(jié)構(gòu)相關(guān)的皂草苷，變化最多的結(jié)構(gòu)特征是糖基化形式。皂草苷也可以包含另外的修飾形式，如連接甾族化合物的拔葜苷，且皂草苷結(jié)構(gòu)可以通過(guò)任何本領(lǐng)域已知的酶學(xué)，化學(xué)和/或機(jī)械方法來(lái)修飾。參見(jiàn)Nobel，ParkS.，Agaves，OxfordUniv.Press，NewYork，1994，pp.42-44。因此，生產(chǎn)具有所期抗病原性和/或植物毒性效果的制劑的這些化合物的衍生物被認(rèn)為是本發(fā)明的等價(jià)物。一種給定的皂草苷可以根據(jù)其結(jié)構(gòu)而具有特殊的殺蟲(chóng)性能并為本發(fā)明所使用。皂草苷的有效量一般是0.01至3％范圍，且最優(yōu)選大約0.25％v/v10°白利糖度的皂草苷萃取水溶液。本發(fā)明制劑可任選地包含有附加成分，如多元酸鹽如碳酸氫鈉，硫酸鈉，磷酸鈉或磷酸氫鈉的含水制劑，來(lái)提高該制劑的殺真菌性能。所得乳化液被稀釋至合適濃度備用。其它化合物可以單獨(dú)或結(jié)合該組合物使用，例如H2O2，其已知在堿性環(huán)境中殺死特定的真菌如黃色曲霉(A.flavus)。也可以包含一種抗凍成分如甘油，丙二醇，乙二醇和/或異丙醇，和一種膠或類膠物質(zhì)如黃原膠，金合歡膠，明膠，羥丙基甲基纖維素及類似物，如在美國(guó)專利No.5290557中公開(kāi)的那些。另外，對(duì)于收獲前使用，可以使用誘發(fā)植物對(duì)各種真菌的非系統(tǒng)性或系統(tǒng)性抗性的化合物來(lái)控制某些真菌在田間條件下的定居和/或生長(zhǎng)。包含式(1)，(2)，(3)，(4)和/或(5)化合物的組合物的最有效制劑可以使用如實(shí)施例中所描述的那些方案和本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它方法來(lái)確定。使用任一種式(1)化合物以及該制劑的其它成分如吐溫80和/或碳酸氫鈉，來(lái)評(píng)估每一制劑對(duì)具體害蟲(chóng)和/或植物宿主的作用，和適于減小毒性同時(shí)保持或提高該制劑抗病原體的效果的特定應(yīng)用的結(jié)合物和每一組分的有效量。各組分有效量可以通過(guò)系統(tǒng)地改變?cè)囼?yàn)制劑中的該組分的量、用試驗(yàn)制劑處理感興趣的植物、并監(jiān)測(cè)與未處理對(duì)照植物相比較的害蟲(chóng)侵害的程度來(lái)確定。被試驗(yàn)組分的有效量可以定義為控制病原體在植物宿主上生長(zhǎng)、因而減小植物病害程度的量。對(duì)于每一特定應(yīng)用，可以計(jì)算平均病害抗性(MPDC)。MPDC由下面的計(jì)算式確定MPDC=(MDIC-MDIT)&times;100MDIC]]>MDIC＝未處理對(duì)照物病害發(fā)生的平均百分?jǐn)?shù)MDIT＝處理植物病害發(fā)生平均百分?jǐn)?shù)一般情況下，對(duì)于有效病原體控制，病害控制平均百分?jǐn)?shù)(MPDC)大于60％，優(yōu)選至少約70％。也需要評(píng)估制劑的植物毒性，因此在宿主品種活植物上至少進(jìn)行一次制劑毒性評(píng)估是重要的。可以隨毒性嚴(yán)重程度增加的順序來(lái)評(píng)定植物毒性0-植物沒(méi)有任何癥狀；1-胚軸非常輕微地變?yōu)楹稚?沒(méi)有其它癥狀)；2-植物有些萎蔫，低部的葉子近于死亡，維管系統(tǒng)有些變?yōu)楹稚?-整個(gè)植物萎蔫，葉子死亡，胚軸有外部和內(nèi)部癥狀；4-莖壞死，植物死亡。優(yōu)選使用的制劑具有2或更小、更優(yōu)選1或更小的植物毒性評(píng)定值。作為一個(gè)例子，評(píng)估了肉桂醛對(duì)白粉菌在0.1ppm至25,000ppm范圍時(shí)的效果。平均病害控制可以通過(guò)使用較高劑量的肉桂醛、和/或加入式(1)的其它化合物、或者通過(guò)加入清潔劑等而增加制劑的實(shí)體，而提高。試驗(yàn)組分的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)有效量可以確定為或者通過(guò)殺死害蟲(chóng)、或者通過(guò)防止其再生而減小害蟲(chóng)定居宿主植物的程度的量。一種或幾種式(1)，(2)，(3)，(4)，或(5)化合物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)有效量一般是大約0.01g/l至25g/l，更優(yōu)選大約1g/l至20g/l，最優(yōu)選大約5g/l至10g/l。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明制劑在包含吐溫80或皂草苷為乳化劑并任選地含有碳酸氫鈉的配方中含有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)有效量的α-己基肉桂醛，肉桂醛和/或松柏醛。優(yōu)選的制劑是含有α-己基肉桂醛，肉桂醛和/或松柏醛(0.5％至10％重量)、且可以含有質(zhì)子惰性酸的鹽(8％至12％重量)和配平的水的乳狀液。優(yōu)選有6-12％質(zhì)子惰性酸的制劑。一般情況下，制劑中醛的總量是5％或更少。用于防治白粉病、銹病和孢子、以及蚜蟲(chóng)的優(yōu)選制劑是含有肉桂醛和/或松柏醛(0.001％至10％重量)、多元酸的鹽(4％至12％重量)、乳化劑(1％至4％重量)和配平的水的乳狀液。本發(fā)明制劑不使用除特定醛例如松柏醛所固有的抗氧化劑性能之外的抗氧化劑時(shí)是有效的。該制劑的穩(wěn)定性可以用各種方法評(píng)估，包括將感興趣的制劑在升高的溫度下暴露一段時(shí)間的加速試驗(yàn)。制劑樣品在規(guī)定的間隔時(shí)間取出，并用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行化學(xué)分析，以測(cè)定分解的速度和性質(zhì)。例如，HCA可以通過(guò)氣液色譜(GLC)，使用30米非極性聚二甲基硅氧烷毛細(xì)柱(例如，HP-1，Hewlett-Packard，或SPB-1，Supelco)和火焰離子化檢測(cè)器來(lái)分析。使用氦氣為載氣(8ml/min)，柱溫度大約240℃，(E)-順式異構(gòu)體(主要成分)保留時(shí)間是大約6.0分鐘，(Z)-反式異構(gòu)體(小成分)的保留時(shí)間是大約6.3分鐘。為了該制劑將要用來(lái)制備種植易受特殊病原體感染的宿主植物的土壤或其它生長(zhǎng)基質(zhì)，或施用到一種已受侵害的生長(zhǎng)基質(zhì)、或應(yīng)用到收獲的材料，本發(fā)明制劑可以直接加至根圍、底物或已收獲的材料，或者將制劑結(jié)合于固體載體或包裹在緩釋材料中。在使用固體載體的情況下，應(yīng)避免使用能導(dǎo)致活性醛氧化的物質(zhì)。輸送系統(tǒng)的例子包括淀粉-右旋糖，等等。輸送系統(tǒng)的例子參見(jiàn)，Yuan等，F(xiàn)undamentalandAppliedToxicology(1993)2083-87。也參見(jiàn)Kawada等(1994)10385-389。除上述式(1)，(2)，(3)，(4)和(5)的具體化合物及可任選的皂草苷外，由對(duì)衍生物的生物系統(tǒng)作用而產(chǎn)生上文鑒定的結(jié)構(gòu)的化合物的任何化合物的衍生物被認(rèn)為是本發(fā)明化合物的等價(jià)物。因此，將母體化合物施加到植物部分或組織或已收獲的材料等于本發(fā)明的實(shí)施。母體化合物生物轉(zhuǎn)化成類黃酮醛類描述于例如，美國(guó)專利U.S.5149715中，這里引入作為參考。也參見(jiàn)Casey和DobbEnzymeMicrob.Techol.(1992)14739-747。母體化合物的例子包括有關(guān)已得到的和/或?qū)χ参锊≡w有系統(tǒng)抗性的途徑中的那些化合物，如氨基酸解氨醚途徑中的那些化合物，且包括苯丙氨酸(產(chǎn)生肉桂酸)。其它感興趣的母體化合物包括那些產(chǎn)生木質(zhì)素和香豆素的生物途徑中的化合物，例如酪氨酸以產(chǎn)生p-香豆酸。因此，產(chǎn)生具有所期抗病原性和減小毒性作用的結(jié)構(gòu)的這些化合物的母體或衍生物被認(rèn)為是本發(fā)明等同物。本發(fā)明方法通過(guò)向目標(biāo)病原生物體引入足夠量的抗病原試劑，以阻礙目標(biāo)病原生物體的生長(zhǎng)和/或生存而實(shí)現(xiàn)的。將含有抗病原試劑的制劑在收獲前或收獲后引入到植物組織或部分。施用方法包括噴施，灑施，浸漬，注射等等?；钚猿煞忠匀橛停芤?，懸液，粉末等形式存在。例如，制劑以濕或干劑形式噴施到受植物病原體侵害的或易受植物病原體侵害的植物的葉的表面和/或背面，或其它植物組織或部分，使用濕劑時(shí)，優(yōu)選噴施到流溢程度。可在受侵害之前或之后，優(yōu)選在受侵害之前對(duì)植物噴施。但為了減小對(duì)宿主植物的傷害，在可能的情況下，優(yōu)選處理長(zhǎng)成植物，因?yàn)槟劬G葉對(duì)植物毒性要敏感得多。在收獲前，在抗病原性制劑中或作為分體式制劑，可任選使用一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，如皂草苷?；蛘?，該制劑可以干態(tài)或濕態(tài)施用，或者作為灌溉計(jì)劃的一部分，或者作為分開(kāi)式施用，施用到根圍，在那里，其可以接觸根和定居在根部的相關(guān)的病原微生物。在某些情況下，發(fā)現(xiàn)隨時(shí)間而釋放的制劑特別適用于對(duì)根圍或?qū)κ斋@后材料施用。對(duì)目標(biāo)生物體引入制劑活性成分的方法可以直接被害蟲(chóng)生物從被處理植物表面消化，或者在目標(biāo)害蟲(chóng)生物定居的提供營(yíng)養(yǎng)的宿主等部位表面由害蟲(chóng)生物進(jìn)食消化，所述宿主或者含有或者在其表面具有抗病原試劑。在提供營(yíng)養(yǎng)的宿主植物表面存在抗病原試劑可使抗病原試劑與植物部分直接接觸，或者努力從宿主植物發(fā)展成誘發(fā)出系統(tǒng)抗性作為前次用該抗病原試劑處理植物的第二效果的結(jié)果，或者作為宿主植物遺傳性修飾的結(jié)果。根據(jù)目標(biāo)生物，要使用的醛可以做成微膠囊或與固體載體偶聯(lián)，可任選地通過(guò)一連接劑如自多糖酶衍生的結(jié)合區(qū)，其中固體載體是一種多糖如纖維素，特別是微晶纖維素。纖維素結(jié)合區(qū)的制備在美國(guó)專利No.5340731；5202247和5166317中有所描述。也可使用來(lái)自支架蛋白的結(jié)合區(qū)。參見(jiàn)Shoseyen等(PCT申請(qǐng)PCT/0594/04132)。這些醛化合物可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法偶聯(lián)到有或沒(méi)有可裂解鍵的結(jié)合區(qū)或其它固體載體上。活性成份的固體或微膠囊形式特別適用于防治土壤生病原體的侵害。用分析化學(xué)技術(shù)來(lái)測(cè)定并優(yōu)化活性成分自固體或微膠囊形式釋放的速度。為了定性目的，可用氣相色譜技術(shù)來(lái)測(cè)定釋放出的醛的量。例如，制成膠囊(制成丸劑)的產(chǎn)物的樣品與選擇的土壤類型混合并在不同時(shí)間期間取樣來(lái)測(cè)定釋放。也可以分析從制劑中釋放出的揮發(fā)性氣體。用GC方法，用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法也可以評(píng)價(jià)葉和引管灌溉施用本發(fā)明制劑隨時(shí)間的活性和穩(wěn)定性。也可以制備該制劑的甲醇或醇提取物以用于HPLC分析。本發(fā)明制劑中的一種或幾種組分可以通過(guò)調(diào)節(jié)編碼一種或幾種酶的一種或幾種基因的表達(dá)，或改變控制所感興趣化合物在植物，植物部分，植物細(xì)胞，特定植物組織的水平和/或與植物生長(zhǎng)特定階段相關(guān)聯(lián)的酶途徑或簇，而在所感興趣的植物體內(nèi)產(chǎn)生。所述酶可以是生物合成途徑或降解途徑，調(diào)節(jié)分別是向上的或向下的，分別改變內(nèi)源植物基因或外源提供給植物的轉(zhuǎn)基因的表達(dá)。土著植物基因是宿主植物基因組天然的基因。內(nèi)源植物基因是存在于所感興趣植物宿主野生型基因組中的基因。它可以是土著基因，或者是作為植物侵害結(jié)果而存在的基因(例如，一種病毒基因)，或者是自然插入到植物基因組中的基因。宿主植物也可以通過(guò)重組方法或通過(guò)使傳統(tǒng)植物育種方法來(lái)改變，以引入一種或幾種對(duì)宿主植物來(lái)說(shuō)是外源的、編碼酶的基因，該酶控制所感興趣化合物水平并處于所述化合物是一種或幾種式(1)，(2)，(3)，(4)或(5)化合物合成途徑中。調(diào)節(jié)基因表達(dá)，是要在轉(zhuǎn)錄，翻譯和/或翻譯后水平上控制所感興趣的基因產(chǎn)物的產(chǎn)生。所感興趣化合物的水平通過(guò)調(diào)節(jié)編碼一種或幾種合成所感興趣化合物所需要的酶的一種或幾種內(nèi)源基因或轉(zhuǎn)基因的表達(dá)而控制。調(diào)節(jié)植物基因表達(dá)的方法是本領(lǐng)域已知的。生長(zhǎng)條件的改變或?qū)χ参锿獠渴┯没衔锬苡跋蚧虮磉_(dá)。例如，本發(fā)明制劑可用來(lái)通過(guò)調(diào)節(jié)內(nèi)源基因表達(dá)而誘導(dǎo)系統(tǒng)植物抗性。在分子水平上，基因表達(dá)基本上取決于轉(zhuǎn)錄，翻譯和調(diào)控結(jié)構(gòu)基因編碼區(qū)表達(dá)的終止控制區(qū)。通過(guò)利用調(diào)控這些控制區(qū)的植物信號(hào)或通過(guò)控制區(qū)的直接重組操作，可以調(diào)節(jié)例如編碼控制肉桂醛水平所需的酶的基因的表達(dá)。在轉(zhuǎn)基因?qū)χ参锼拗魇峭庠吹那闆r下，轉(zhuǎn)基因包括被選擇和設(shè)計(jì)來(lái)實(shí)現(xiàn)所期基因表達(dá)的水平和時(shí)間的控制區(qū)。合適的是，該控制區(qū)對(duì)于所感興趣的基因是同源(天然)或非同源(非天然)的。“同源”是指來(lái)自于或基本上類似于通常與所感興趣基因相關(guān)的控制區(qū)相同的控制區(qū)。“非同源”指從不同核苷酸源或序列產(chǎn)生的控制區(qū)，或?qū)嵸|(zhì)上不同于一般與所感興趣基因相關(guān)的控制區(qū)的控制區(qū)。例如，如果與控制區(qū)相比，酶編碼序列在來(lái)源中是非同源的，為使基因在所感興趣的植物細(xì)胞中表達(dá)，規(guī)定在這些植物細(xì)胞中提供轉(zhuǎn)錄和翻譯起始調(diào)節(jié)區(qū)或啟動(dòng)子功能可操作地連接到該編碼序列上。植物細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄和翻譯起始信號(hào)功能包括那些來(lái)自與植物宿主或其它植物品種土著關(guān)系或內(nèi)源的基因的功能，并在植物宿主中直接組成或選擇性表達(dá)，并且包括來(lái)自感染植物的病毒如CaMV的序列。特別令人感興趣的是選擇性調(diào)控在植物，植物部分，植物細(xì)胞，特定植物組織中的結(jié)構(gòu)基因表達(dá)的和/或與植物生長(zhǎng)特定階段有關(guān)基因控制區(qū)。優(yōu)選的是那些本領(lǐng)域已知的控制區(qū)，特別是能用來(lái)調(diào)節(jié)編碼控制式(1)，(2)，(3)，(4)，(5)和/或皂草苷成分在植物，植物部分，植物細(xì)胞，或特定植物組織中的水平所需的酶的基因的表達(dá)的和/或與植物生長(zhǎng)特定階段相關(guān)轉(zhuǎn)錄控制區(qū)或啟動(dòng)子。例如，為果實(shí)中不同表達(dá)模式而提供的啟動(dòng)子描述于USPN4943674和USPN5175095；為種子中不同表達(dá)模式而提供的啟動(dòng)子描述于USPN5315001；而對(duì)于快速生長(zhǎng)的組織和幼芽參見(jiàn)USPN5177011。在植物宿主中產(chǎn)生本發(fā)明制劑所需組分的優(yōu)選方法是通過(guò)重組DNA方法，特別是通過(guò)用本領(lǐng)域已知的重組技術(shù)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因植物而改變至少一種所感興趣的式(1)，(2)，(3)，(4)，(5)和/或皂草苷化合物在所感興趣植物組織中的水平。該方法涉及用在植物細(xì)胞中起作用的表達(dá)彈夾轉(zhuǎn)化所感興趣的植物細(xì)胞，包括作為5′至3′方向轉(zhuǎn)錄中的操縱連接成分，轉(zhuǎn)錄和翻譯起始調(diào)節(jié)區(qū)，在可讀框中使5′與一DNA序列連接，該DNA序列編碼一種或幾種能調(diào)節(jié)令人感興趣的化合物的產(chǎn)生和/或產(chǎn)生令人感興趣的化合物所需要的酶，和翻譯及轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。產(chǎn)生令人感興趣的化合物所需的酶的表達(dá)提供該化合物產(chǎn)量的提高，這是由于參與化合物的生物合成的酶的濃度改變所致。特別令人感興趣的是選擇性控制皂草苷，肉桂醛和/或松柏醛在植物組織如葉，根，果實(shí)和種子中的產(chǎn)生。對(duì)于在令人感興趣的組織中的肉桂醛生物合成，用一種表達(dá)彈夾轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，所述表達(dá)彈夾包含有合成肉桂醛所需要的并能增加肉桂醛在所感興趣的組織中的量的一種或幾種酶的結(jié)構(gòu)基因的編碼DNA。類似地，對(duì)于令人感興趣的組織中皂草苷生物合成的選擇性控制，用一種表達(dá)彈夾轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞，所述表達(dá)彈夾包含有合成皂草苷所需要的并能增加這些化合物在所感興趣的組織中的量的一種或幾種酶的結(jié)構(gòu)基因的編碼DNA。特別令人感興趣的是編碼一種或幾種酶的這些基因，所述酶能從一般在植物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的基質(zhì)中代謝所感興趣的皂草苷，肉桂醛和/或松柏醛化合物生物合成所需要的母體化合物。更特別令人感興趣的是至少一種式(1)，(2)，(3)，(4)，(5)和皂草苷化合物的轉(zhuǎn)基因表達(dá)。制備表達(dá)令人感興趣基因的DNA構(gòu)建，其提供表達(dá)彈夾進(jìn)入植物宿主基因組的整合。整合可以用本領(lǐng)域已知的轉(zhuǎn)化體系如土壤桿菌(Agrobacterium)，電穿孔或高速微粒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化作用來(lái)完成。根據(jù)應(yīng)用，皂草苷或一種令人感興趣的其它化合物可以在所感興趣的組織和/或特殊細(xì)胞器中被很好地表達(dá)。組織特異性通過(guò)使用具有所需表達(dá)分布的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)而實(shí)現(xiàn)。該酶至特殊細(xì)胞器的轉(zhuǎn)運(yùn)通過(guò)使用合適的轉(zhuǎn)運(yùn)肽而實(shí)現(xiàn)。DNA構(gòu)建的組織和細(xì)胞器特異性表達(dá)的方法已公開(kāi)且是本領(lǐng)域已知的。為了證明所感興趣的基因的調(diào)控和表達(dá)，有多種技術(shù)來(lái)測(cè)定存在于植物細(xì)胞中的所期DNA序列是否整合到了基因組中，和是否是正在被轉(zhuǎn)錄?？梢允褂萌鏝orthern印跡技術(shù)來(lái)檢測(cè)編碼所需酶的信使RNA。通過(guò)測(cè)試酶活性或?qū)Φ鞍桩a(chǎn)物的免疫測(cè)定可進(jìn)一步檢測(cè)表達(dá)。最優(yōu)選的是用本領(lǐng)域已知的方法測(cè)定植物宿主中存在的令人感興趣的化合物的水平。例如，一種所期望的表型是根據(jù)所感興趣的基因表達(dá)和/或存在于植物宿主中皂草苷的水平而測(cè)定的與對(duì)照植物相比的所感興趣植物組織中增加的皂草苷和/或類黃酮醛含量。為了向目標(biāo)生物體引入一種或幾種本發(fā)明化合物，表達(dá)編碼控制令人感興趣化合物的水平所需要的酶的基因的植物宿主使目標(biāo)生物體暴露于至少一種抗病原制劑組分。在另一實(shí)施方案中，令人感興趣的基因的選擇性表達(dá)誘導(dǎo)了對(duì)病原體侵害或定居的系統(tǒng)植物宿主抗性。至少一種抗病原制劑的組分可被植物宿主表達(dá)，而且可任選地，抗病原制劑的其它組分外部對(duì)植物宿主施用，從而當(dāng)直接或間接引入到目標(biāo)生物體時(shí)，這種結(jié)合得到所期望的抗病原效果。除抗植物病原的自身保護(hù)外，具有提高的聚集類黃酮醛如肉桂醛，α-己基肉桂醛和松柏醛能力的轉(zhuǎn)基因植物可以用作類黃酮醛類的來(lái)源，用于提取以及接下來(lái)用作化學(xué)農(nóng)藥。類黃酮醛類的積累可以通過(guò)向下調(diào)控編碼酶的特定植物基因的表達(dá)而實(shí)現(xiàn)，所述酶或者引起所期醛類的進(jìn)一步代謝，或者使代謝中間產(chǎn)物從所期醛類轉(zhuǎn)換。例如在肉桂醛的情況下，其包括向下調(diào)控肉桂酸4-羥基酶(CA4H)和肉桂醇脫氫酶(CAD)的表達(dá)。CA4H一般從肉桂醛轉(zhuǎn)換一些肉桂酸以產(chǎn)生p-香豆酸，其自身是一種代謝中間產(chǎn)物。只減小CA4H活性一般不足以引起肉桂醛的累積，因?yàn)镃AD能很快將肉桂醛轉(zhuǎn)換為肉桂醇，其然后結(jié)合到木質(zhì)素中或累積為糖苷。同時(shí)減小CA4H和CAD兩者的活性會(huì)造成肉桂酸至肉桂醛代謝轉(zhuǎn)變的增加，并降低肉桂醛類轉(zhuǎn)換成肉桂醇的作用。一些肉桂醛變成摻入木質(zhì)素中，但肉桂醛(游離的或者是糖苷形式)還是積累至正常水平之上，特別是在當(dāng)肉桂酸的生物合成增加的時(shí)候。這發(fā)生在當(dāng)苯丙氨酸解氨酶(PAL；一般苯丙類似物(phenylpropanoid)代謝中第一和速率限制步驟，Hahlbrock和Scheel，(1989)Annu.Rev.PlantPhysiol.PlantMol.Biol.40347-369)活性水平高的時(shí)候，這是一種在植物體內(nèi)自然發(fā)生的對(duì)寬廣范圍刺激有響應(yīng)的情況，刺激包括受真菌病原體侵害和與受傷和昆蟲(chóng)取食有關(guān)的機(jī)械損傷。一些植物CA4H和CAD基因已經(jīng)被克隆出，且它們的序列可從基因庫(kù)中獲得。部分包括在不同植物品種之間保守的核苷酸序列的這些基因的部分可直接用于植物表達(dá)載體(反義和有義方向)中，以抑制相應(yīng)的內(nèi)源基因的表達(dá)(例如，Pear等，(1993)，AntisenseRes.andDevelop.3181-190，Napoli等(1990)，ThePlantCell2279-289。也可參見(jiàn)USPN5107065)。更優(yōu)選的是，這些保守的基因序列被用來(lái)從要被修飾的植物品種的cDNA庫(kù)中分離CA4H和CADcDNA克隆。所得到的cDNA克隆或其部分隨后被引入植物表達(dá)載體中(反義或有義)，并被用來(lái)轉(zhuǎn)化所感興趣的植物。優(yōu)選本發(fā)明DNA構(gòu)建包括與內(nèi)源CA4H或CAD基因同源的至少50個(gè)堿基的序列。重組DNA分子通過(guò)將一載體操作連接于一有用的DNA片段以形成被用于植物轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒而產(chǎn)生。能指導(dǎo)RNA自一種基因被克隆部分表達(dá)的載體在本文中稱作“表達(dá)載體”。這樣的表達(dá)載體包含表達(dá)控制元件，包括啟動(dòng)子。在高級(jí)植物中用于基因表達(dá)的典型載體是本領(lǐng)域公知的，且包括Roger等在MethodsinEnzymology(1987)153253-277中描述的自根癌土壤桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)的Ti質(zhì)粒衍生的載體。一種被用來(lái)提供引入基因的強(qiáng)組成型表達(dá)的共同啟動(dòng)子是花椰菜嵌合體病毒(CaMV)35S啟動(dòng)子(得自Pharmacia，Piscataway，NJ)?？墒褂媒M成型啟動(dòng)子(如CaMV35S)或可誘導(dǎo)或發(fā)展性調(diào)控啟動(dòng)子(如來(lái)自PAL基因或內(nèi)源CA4H或CAD基因的啟動(dòng)子)。使用組成型啟動(dòng)子是要影響植物全部部分中的功能，而使用可誘導(dǎo)或發(fā)展性調(diào)控的啟動(dòng)子具有實(shí)質(zhì)上只在所期組織中并在其所需要的條件下產(chǎn)生反義或有義RNA的優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)選使用發(fā)展性調(diào)控的啟動(dòng)子，因?yàn)橐阎奖愃莆?phenylpropanoid)生物合成的下游調(diào)控能對(duì)包含異源PAL基因的轉(zhuǎn)基因植物的生長(zhǎng)產(chǎn)生所不期望的副作用(Elkind等(1990)，Proc.Nat.AcadSci879057-9061)。對(duì)于寬范圍植物品種的常規(guī)轉(zhuǎn)化有一些不同的轉(zhuǎn)化方法。一種將DNA傳遞給雙子葉植物特別有效的方法包括使用土壤桿菌。在該方法中，令人感興趣的基因插入到T-DNA區(qū)的邊緣之間，所述T-DNA區(qū)已被剪切成帶選擇性標(biāo)記基因的小的重組質(zhì)粒(選擇性標(biāo)記基因例如編碼新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶II或phosphinothricin乙酰轉(zhuǎn)移酶)。然后該重組質(zhì)粒通過(guò)轉(zhuǎn)化或三親代交配而引入到土壤桿菌宿主中。然后攜有令人感興趣基因的土壤桿菌菌株用來(lái)通過(guò)使細(xì)菌與合適的植物組織(例如葉盤(pán))共同培養(yǎng)而轉(zhuǎn)化植物組織。在組織培養(yǎng)物中用合適的選擇試劑選擇轉(zhuǎn)化的細(xì)胞后，使植物再生(參見(jiàn)Horsch等，(1985)Science2271229-1231)。其它已經(jīng)用于植物細(xì)胞轉(zhuǎn)化的方法，特別是對(duì)于更難處理的作物植物，包括biolistics和電穿孔(關(guān)于詳細(xì)步驟，參見(jiàn)Sanford等，(1993)MethodsinEnzymology217483-509；和Potter(1993)MethodsinEnzymology217461-478)。一旦產(chǎn)生出轉(zhuǎn)基因植物，要使用常規(guī)的對(duì)于CA4H和CAD的酶分析來(lái)測(cè)定不同轉(zhuǎn)化物中實(shí)現(xiàn)的抑制酶活性的水平?？赡苤挥挟a(chǎn)生的一小部分轉(zhuǎn)化物會(huì)具有足夠低的殘余酶活性，引起類黃酮醛類的累積而對(duì)植物的生長(zhǎng)不產(chǎn)生某些不期望的副作用。因?yàn)檫@一原因，優(yōu)選的產(chǎn)生所期望的CA4H和CAD兩者被抑制的轉(zhuǎn)化物的方法是將兩基因分別引入不同的轉(zhuǎn)化物中，然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的有性交配而將它們結(jié)合。這使得可在同時(shí)評(píng)估較大數(shù)目結(jié)合物的基因抑制水平。在轉(zhuǎn)基因植物中大量產(chǎn)生類黃酮醛的另一選擇是使用使微生物宿主具有合成特定類黃酮醛和/或皂草苷能力的植物基因。得到的微生物可以用來(lái)在發(fā)酵系統(tǒng)中產(chǎn)生類黃酮醛或者作為類黃酮醛在活的或不是活的微生物制劑中的天然運(yùn)送系統(tǒng)。酵母，尤其是啤酒糖酵母(Saccharomycescerevisiae)是為此目的的優(yōu)選的微生物，因?yàn)樗鼈円呀?jīng)被改變成高水平表達(dá)PAL(Faulkener等，(1994)Gene14313020)，并且一種植物肉桂酸4-羥基酶已被證明在酵母中起作用(Urban等，(1994)Eur.J.Biochem.222843-850。PAL的表達(dá)引出自苯丙氨酸產(chǎn)生肉桂酸的能力。需要兩步額外的步驟來(lái)從苯丙氨酸產(chǎn)生肉桂醛。在植物中，這些步驟由酶肉桂酸CoA連接酶(CL)和肉桂酰CoA還原酶(CCoAR)所催化，但因?yàn)?-香豆酸CoA連接酶(4CL)也能用肉桂酸作為基質(zhì)(Knobloch，和Hahlbrock(1977)Arch.Biochem.Biophys.184237-248)，因此4CL能代替CL使用。多于20個(gè)的克隆的PAL基因和多于6個(gè)的4CL基因已被充分詳細(xì)地描述過(guò)(GenBank)，以有利于在本發(fā)明實(shí)際中使用它們。CCoAR的基因通過(guò)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)基因克隆技術(shù)用探針序列分離cDNA克隆而獲得，所述探針序列衍生于純化蛋白的N-末端氨基酸序列，或肽片段。CCoAR已經(jīng)從大豆培養(yǎng)物中(wengenmayer等(1976)，歐洲生物化學(xué)雜志(Eur.J.Biochem.，65529-536；Luderitz和Grisebach(1981)，歐洲生物化學(xué)雜志，119115-124)，從云杉形成層汁(Luderitz和Grisebach，上文)，從白楊木質(zhì)部(Sami等(1984)，歐洲生物化學(xué)雜志，139259-265)，和從Eucalyptusgunnii分化著的木質(zhì)部(Goffner等(1994)，植物生理學(xué)(PlantPhysiol.)106625-632)中純化并部分表征出來(lái)。優(yōu)選的純化方法是Goffner等(上文)的方法，因?yàn)槠湓赟DS-聚丙烯酰胺凝膠上產(chǎn)生用于蛋白質(zhì)序列測(cè)定的單一的蛋白質(zhì)泳帶。為了表達(dá)α-己基肉桂醛，催化α-己基加成到肉桂醛的酶的編碼基因也被插入到微生物宿主或植物中。該基因例如可以從稻植物中克隆。克隆的基因被引入到標(biāo)準(zhǔn)的表達(dá)載體中，并用來(lái)藉標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化技術(shù)如電穿孔來(lái)轉(zhuǎn)化微生物宿主，優(yōu)選轉(zhuǎn)化酵母(Becker和Guarante(1991)，酶學(xué)方法(MethodsinEnzymol.194182-187)。用標(biāo)準(zhǔn)酶分析來(lái)證明已處理基因的功能表達(dá)，用對(duì)于類黃酮醛的分析挑選有最大產(chǎn)量的菌株。因?yàn)轭慄S酮醛有抗微生物性質(zhì)，因此優(yōu)選使用只是在生長(zhǎng)周期后期或響應(yīng)一種化學(xué)引誘物時(shí)引起插入基因的表達(dá)載體。也優(yōu)選使經(jīng)基因工程處理過(guò)的微生物宿主在固定的全細(xì)胞反應(yīng)器中生長(zhǎng)(例如Evans等(1987)，生物技術(shù)和生物工程(BiotechnologyandBioengineering)301067-1072)來(lái)防止醛在培養(yǎng)物中積累。本發(fā)明制劑和方法對(duì)于處理病原生物體定居的植物是有用的。這些植物包括開(kāi)花植物，草，包括觀賞用草皮草，葦草，蔬菜，谷類植物和水果，包括番茄，馬鈴薯，洋薊，草莓，玉米，谷子，洋蔥，黃瓜，萵苣，煙草和柑橘屬，如橙子，檸檬，萊姆和葡萄柚，以及胡椒和葡萄，和水果樹(shù)，如桃，蘋(píng)果和櫻桃，裝飾性植物，如玫瑰和樹(shù)，特別是針葉樹(shù)。也包括為魚(yú)，鳥(niǎo)和動(dòng)物包括人直接或間接取食的作物?！爸苯踊蜷g接”是指可以被例如人類(直接消費(fèi))消化的作物，或者由非人類動(dòng)物或鳥(niǎo)類消化的作物，接著被人類消化(間接消費(fèi))。要用于消費(fèi)的作物包括煙草，魚(yú)類，動(dòng)物和鳥(niǎo)類飼料，要加工成酒精或食品的作物如玉米糖漿和類似物質(zhì)。目標(biāo)病原生物體包括定居在植物或植物部分，特別是植物部分的表面的真菌。施用本發(fā)明制劑的最佳時(shí)間和方法由被真菌定居的植物的特定部分以及發(fā)生或可能發(fā)生特定侵害的植物生長(zhǎng)周期中的時(shí)間來(lái)確定。例如，為處理定居在宿主植物葉子上的白粉菌，銹菌和其它病原體，用本發(fā)明制劑對(duì)宿主植物噴施至流溢。使用的式(1)化合物的量將部分取決于目標(biāo)病原體和宿主植物而不同，并可以通過(guò)評(píng)估目標(biāo)生物體對(duì)該制劑的敏感性以及該制劑對(duì)宿主植物的植物毒性作用而憑經(jīng)驗(yàn)確定?？梢栽谑芮趾χ盎蛑螅瑑?yōu)選在受侵害之前對(duì)植物噴施，但在可行的情況下，為了減小對(duì)宿主植物的傷害，優(yōu)選處理長(zhǎng)成植物，因?yàn)槟鄣木G葉對(duì)植物毒性更敏感?；蛘撸梢允褂棉D(zhuǎn)基因作物，其以足以抑制病原體生長(zhǎng)和/或殺死病原體的量表達(dá)一種或幾種該制劑組分。優(yōu)選這些組分在病原體定居的組織中例如葉中表達(dá)。特別令人感興趣的是處理由目標(biāo)微生物真菌白粉病科(Erysiphaceae)引起的白粉病侵害的植物，例如，下面的菌種在指出的植物中引起白粉病二孢白粉菌(Erysiphecichoracearum秋海棠，菊花，大波斯菊，葫蘆，大利花，亞麻，萵苣和百日草；禾白粉菌(E.graminis)谷類植物和草類；蓼白粉菌(E.polgoni)豆類，大豆，苜蓿和其它豆科植物，甜菜，包心菜和其它十字花科植物，黃瓜和甜瓜，飛燕草和八仙花；Microsphaeraalni藍(lán)莓，梓樹(shù)，榆樹(shù)，紫丁香，橡樹(shù)，山杜鵑花，和甜豌豆；Phyllactiniasp.梓樹(shù)，榆樹(shù)，楓樹(shù)和橡樹(shù)；蘋(píng)果白粉病柄球菌(Podosphaeraleucotricha)蘋(píng)果，梨和榅桲；P.oxyacanthae杏樹(shù)，櫻桃樹(shù)，桃樹(shù)和梅樹(shù)；Spaelrothecamacularis草莓；S.mors-uvae醋栗和紅醋栗；S.pannosa桃樹(shù)和玫瑰；以及葡萄白粉病鉤絲殼霉葡萄，馬栗樹(shù)和歐椴。還有特別令人感興趣的是處理由擔(dān)子菌綱(Basidiomycetes)特別是夏孢銹菌目(Uredinales)引起的銹病侵害的植物。有大約4000種銹菌真菌菌種。最重要的銹菌真菌和受影響的植物包括柄銹菌屬(Puccinia)引起多種宿主如小麥和所有其它小谷類的銹病(禾柄銹菌(P.graminis))；黃色或條狀銹病小麥，大麥，和裸麥(條形柄銹菌(P.striiformis))；葉或棕色銹病小麥和裸麥(隱匿柄銹菌(P.recondita)；大麥的葉或棕色矮小銹病(P.hordei，大麥柄銹菌)；燕麥的冠狀銹病(P.coronata，禾冠柄銹菌)；玉米銹病(P.sorghi，高粱柄銹菌)；南方或熱帶玉米銹病(P.polysora，多堆柄銹菌)；蜀黍銹病(P.purpurea，紫色柄銹菌)；和甘蔗銹病(P.sacchari，和P.kuehnii，屈恩氏柄銹菌)。柄銹菌屬也引起田野作物如棉花(P.stakmanii)，蔬菜如蘆筍(P.asparagi，天門(mén)冬柄銹菌)，和花卉如菊花(P.chrysanthemi，菊柄銹菌)，蜀葵(P.malvacearum)，和金魚(yú)藻(P.antirrhini)的嚴(yán)重銹病。膠銹菌屬(Gymnosporangium)引起重要的西洋杉-蘋(píng)果銹病(G.juniperi-virginianae)和山楂-西洋杉銹病(G.globosum)。Hemileia引起荒廢咖啡葉銹病(H.vastatrix)。多胞銹菌屬(Phragmidium)引起玫瑰銹病和木莓黃銹病。其它引起銹病但能用本發(fā)明制劑處理的真菌菌種包括單胞銹菌屬豆科植物(豆，蠶豆，豌豆)(幾種單胞銹菌種)和石竹屬植物(U.caryophyllinus)；柱銹菌屬(Cronartium)松樹(shù)，橡樹(shù)和其它宿主嚴(yán)重的銹病，如白松水泡銹病(C.ribicola)；松樹(shù)和橡樹(shù)的鈁錘形銹病(C.quercuumf.sp.fusiforme)；東部癭或松樹(shù)-橡樹(shù)銹病(C.quercuumf.sp.virginianae)；香松樹(shù)蕨類植物水皰銹病(C.comptoniae)；Comandra松樹(shù)銹病(C.comandrae)；和南方玉米銹病(C.strobilinum)。其它的包括柵銹菌屬(Melampsora)，其引起亞麻的銹病(M.lini，亞麻柵銹菌)；鞘孢銹菌屬(Coleosporium)，其引起松針?biāo)掍P病(C.asterinum)；裸雙胞銹菌屬(Gymnoconia)，其引起黑莓和覆盆子的桔銹??；層銹菌(Phakopsora)，其引起潛在性大災(zāi)害的大豆銹病(P.pahyrhizi)；和疣雙胞銹菌屬(Tranzschelia)，其引起桃樹(shù)銹病。本發(fā)明制劑和方法也用來(lái)預(yù)防和處理定居在植物其它部分，如根和果實(shí)的生物體的侵害。對(duì)于侵襲植物根的真菌，如鐮孢屬(Fusariumsp.)，曲霉屬(Aspergillus)，和Verticulum(包括V.alboatrium和V.dahlise)，優(yōu)選通過(guò)葉施用本發(fā)明制劑來(lái)處理侵害，通過(guò)改變位置或通過(guò)誘發(fā)系統(tǒng)獲得性抗性(SAR)而使活性成分達(dá)到根。為治療果實(shí)侵害，如黑斑病，在果實(shí)長(zhǎng)成期間或之后，優(yōu)選直接向生長(zhǎng)著的果實(shí)施用本發(fā)明制劑。其它目標(biāo)真菌生物包括發(fā)光桿菌屬(Phragmidium)；玫瑰雙殼(Diplocaopanrosae)；Sphaerothecatannosa；Oibiapsissicula；Phytophoyataraesitica；柄銹菌屬(Pucciniaspp.)；鏈格孢屬(Alternariasp.)；susaiunspp；灰色葡萄孢(Botrytiscinerea)；SclerotiniaHomoeocarca；荷蘭榆樹(shù)病(Ceratocystisulmi)和橡樹(shù)萎蔫病(C.fagacearum)。還包括蘭-綠藻(Cyanobacteria)。本發(fā)明制劑也用來(lái)殺滅昆蟲(chóng)，特別是直翅目(Orthoptera)昆蟲(chóng)；纓翅目(Thysanoptera)包括薊馬科；同翅類(Homoptera)包括蚜蟲(chóng)，葉蟬，白蠅，粉狀小蟲(chóng)，蟬和毛蟲(chóng)。本發(fā)明的理論是可用本發(fā)明制劑處理的昆蟲(chóng)是那些內(nèi)臟中聚藏共生細(xì)菌的昆蟲(chóng)。因此，除上面所列昆蟲(chóng)外，聚藏共生物質(zhì)的昆蟲(chóng)也可用本發(fā)明制劑控制。其它目標(biāo)生物體包括蛛形綱昆蟲(chóng)，特別是蜘蛛(節(jié)肢動(dòng)物門(mén))。其它的昆蟲(chóng)目標(biāo)包括鞘翅目昆蟲(chóng)(Coleoptera)，如玉米根蠕蟲(chóng)和棉桃象鼻蟲(chóng)；和鱗翅目(Lepodoptera)，包括蘋(píng)果蠹蛾。特別令人感興趣的是處理葡萄瘤蚜侵襲。根部葡萄瘤蚜(DaktulosphairavitifoliaeFitch)是破壞葡萄的昆蟲(chóng)。植物損傷不只是因?yàn)槠咸蚜鲅寥∈?，而大部分是因?yàn)榈诙婢礆⑾x(chóng)劑沒(méi)有控制住的生物的侵襲。一般情況下在和宿主植物根一樣深，即可能是8英尺或更深的深度發(fā)現(xiàn)葡萄瘤蚜。因此為了防治葡萄的葡萄瘤蚜侵襲，應(yīng)將本發(fā)明制劑直接送至植物的根部，如將液體或固體制劑注入根周圍的土壤中?；蛘撸梢詫?duì)植物的葉或其它可能部位施用本發(fā)明制劑，并通過(guò)植物維管系統(tǒng)或通過(guò)SAR的誘導(dǎo)而轉(zhuǎn)移至根區(qū)。對(duì)防治白粉病和銹病的情況下，轉(zhuǎn)基因植物可用于防治葡萄瘤蚜；表達(dá)式(1)組分的優(yōu)選組織是根。式(1)化合物可以用來(lái)處理不同生長(zhǎng)階段的葡萄瘤蚜。這些化合物可配制或分別對(duì)葡萄瘤蚜生長(zhǎng)目標(biāo)特定階段如卵，若蟲(chóng)和成蟲(chóng)期施用。特定制劑和處理方案的效力可以用各種方法，如在田野和/或?qū)嶒?yàn)室條件下處理后測(cè)定葡萄瘤蚜死亡率，葡萄瘤蚜進(jìn)食，和/或不再受侵的取食點(diǎn)，或者通過(guò)改善受侵葡萄藤的生長(zhǎng)狀況來(lái)評(píng)估。另外，一種特定制劑和處理方案的效力可以通過(guò)用本領(lǐng)域已知方法分析代謝，易位和/或?qū)χ苿┨幚淼姆磻?yīng)中葡萄藤的生理狀況來(lái)評(píng)估。除一般測(cè)試的處理的劑量，制劑和時(shí)間選擇性外，也考慮其它因素，以確定葡萄瘤蚜物候?qū)W，植物物候?qū)W，植物健康，接枝和栽培品種(接穗和根狀莖兩者)的存在所涉及的情況。本發(fā)明方法和制劑也用于防治草皮被侵襲。一些非傳染性病害的生物制劑因競(jìng)爭(zhēng)而損害草皮。藻類常常通過(guò)占據(jù)草皮由于傳染性病害而變稀疏后留下的空地并迅速生長(zhǎng)而損害草皮。蘭-綠草藻(Ajanobacteria物種)在過(guò)濕土壤表面上長(zhǎng)成為黑色浮垢。這些藻減少了空氣和土壤間氣體的交換，也可能在植物中引起缺綠病。黑層是主要與高爾夫場(chǎng)鋪置的草坪相關(guān)的一種物質(zhì)狀況。特別指出的是高砂質(zhì)含量的草皮。另外，草皮真菌病害可以用本發(fā)明制劑防治。核盤(pán)菌屬(Sclerotinia)元點(diǎn)病，腐霉屬(Pythium)枯萎病和絲核菌屬(Rhizoctonia)枯萎病是多種草皮用草種尤其是葦草的破壞性病害。本發(fā)明制劑處理草皮的效力可通過(guò)改變制劑的組成，施用方法，施用容積和/或施用比例來(lái)測(cè)定。評(píng)估可以在田野和/或?qū)嶒?yàn)室條件下進(jìn)行，要考慮給定的環(huán)境條件如濕度，溫度，光的強(qiáng)弱，光量和光密度，土壤類型和肥力，含水量，排水等等。制劑持久性和活性效果也可以通過(guò)與日常的草葉的刈除和去除比較向頂?shù)囊孜缓统志眯远_定。本發(fā)明制劑可以以不同的施用比例和濃度，及施用方法施用，以達(dá)到所期望的病害控制程度和植物毒素水平。對(duì)于本發(fā)明應(yīng)用優(yōu)選式(2)和(5)的組合物，更優(yōu)選式(3)，(4)和(5)。特別令人感興趣的是本發(fā)明制劑控制核盤(pán)菌屬元點(diǎn)病(dollarspot)(Sclerotiniahomeocarpa)的應(yīng)用。核盤(pán)菌元點(diǎn)病是發(fā)生于全世界大部分草皮品種的分布廣泛，持久和損耗性的病害。對(duì)元點(diǎn)病有利的環(huán)境條件包括長(zhǎng)期高濕度和過(guò)剩的水分。這些環(huán)境條件再加上低氮肥力增加了元點(diǎn)病發(fā)生的可能性。密集稠密生長(zhǎng)習(xí)性的細(xì)葉草特別易受侵害，使元點(diǎn)病成為嚴(yán)重?fù)p害經(jīng)營(yíng)的高爾夫場(chǎng)綠地的主要威脅。特別令人感興趣的還有本發(fā)明制劑控制由腐霉屬種引起的病害的應(yīng)用。由腐霉屬種引起的病害經(jīng)常被認(rèn)為是腐霉屬枯萎病，油點(diǎn)病，斑點(diǎn)枯萎病，冠枯病和根枯病。腐霉屬也引起籽苗病害。所有草皮草易受腐霉屬侵襲，包括爬行葦草，高爾夫場(chǎng)綠地最普遍的草，生長(zhǎng)在美國(guó)南方的新型葦草。腐霉屬抗性生物型一般對(duì)傳統(tǒng)殺真菌劑的應(yīng)用沒(méi)有反應(yīng)。本發(fā)明制劑一般在促進(jìn)腐霉屬的種生長(zhǎng)的條件第一次出現(xiàn)之前或出現(xiàn)之時(shí)以葉噴施而施用。當(dāng)天氣熱且潮濕，而夜間仍熱的時(shí)候，這對(duì)于腐霉屬枯萎病特別有效。本發(fā)明方法和組合物另一優(yōu)選的應(yīng)用是控制絲核菌屬枯萎病，一般認(rèn)為是棕斑病。絲菌屬枯萎病當(dāng)周圍環(huán)境適合其生長(zhǎng)時(shí)其是一種特別快的毀壞性病害。因此，要使用的本發(fā)明制劑一般應(yīng)該在熱濕氣候，高氮肥力比例，密集葉生長(zhǎng)和/或常澆水的時(shí)候施用?？刂撇萜さ慕z菌屬枯萎病是困難的，傳統(tǒng)的殺真菌劑常常對(duì)該病害不起作用。用本發(fā)明制劑控制St.Augusting草絲菌屬枯萎病也是令人感興趣的。特別令人感興趣的是為昆蟲(chóng)目標(biāo)的oranamental花和其它植物的薊馬，白粉菌，黑斑病，葡萄孢和瓜蚜侵襲的防治和預(yù)防。本發(fā)明制劑對(duì)預(yù)防或處理玫瑰，圣誕樹(shù)(例如松樹(shù))，和果樹(shù)和果實(shí)的侵害特別有用。例如，本發(fā)明制劑對(duì)于處理桃樹(shù)不受星尺蛾侵害，處理蘋(píng)果樹(shù)不受蘋(píng)果蠹蛾侵害，處理葡萄不受卷葉蟲(chóng)，葡萄瘤蚜，葉蟬，葡萄孢，薊馬和白粉菌的侵害。優(yōu)選的制劑來(lái)自芳香族類黃酮醛式(2)和(5)，優(yōu)選式(3)，(4)和(5)。一個(gè)例子是處理棉花瓜蚜侵襲。最重要的物種是棉蚜或瓜蚜(AphisgossypiiGlover，棉蚜，瓜蚜)。幾乎在棉花一長(zhǎng)出葉時(shí)，小的軟體的白綠色植物小蟲(chóng)即飛向它們并開(kāi)始繁殖。因此本發(fā)明制劑應(yīng)該在其生長(zhǎng)早期對(duì)棉花施用。優(yōu)選葉噴施，因?yàn)檠料x(chóng)在地上部分取食。處理的最重要的時(shí)間是正好在冷濕季節(jié)之前和/或在冷濕季節(jié)期間，當(dāng)蚜蟲(chóng)多至足以阻礙植物生長(zhǎng)和損壞植物。本發(fā)明也用來(lái)防治和預(yù)防晚疫病。晚疫病影響番茄，馬鈴薯，茄子和其它薯類植物，并由蚜蟲(chóng)類侵害而產(chǎn)生。本發(fā)明制劑優(yōu)選在溫和溫度多雨期，一般當(dāng)發(fā)病由于孢子駐留在植物表面而開(kāi)始的時(shí)候?qū)χ参锸┯?。損傷是由象鼻蟲(chóng)成蟲(chóng)和它們的幼蟲(chóng)或蠐螬引起的。成蟲(chóng)咀嚼進(jìn)棉蕾和圓莢而戳破它們。本發(fā)明制劑應(yīng)該特別地直接地施加到植物的這一部分。處理制劑也用來(lái)控制開(kāi)花植物的傳花粉時(shí)間。例如，為防止或推遲傳花粉，以足夠的量施加本發(fā)明制劑來(lái)防蜜蜂和其它傳粉昆蟲(chóng)。通過(guò)判斷制劑的殘留量，人們可以控制抑制傳花粉時(shí)間的長(zhǎng)短。另一方面，對(duì)于交叉?zhèn)鞣坌枰┓实闹参?，如果傳粉昆蟲(chóng)被本發(fā)明制劑抵制或殺死，則應(yīng)該避免在此期間施用本發(fā)明制劑。特別是胡蜂科的種，包括群居峰，胡巢蜂(paper-nestwasps)，大胡蜂和胡蜂傳粉對(duì)本發(fā)明制劑敏感。用本發(fā)明化合物處理革翅目(歐洲蠼螋(Forticulaaureculatia歐洲球螋))也是令人感興趣的。蠼螋有極寬的食譜，以多種不同類型植物材料為食，包括花，蔬菜和果實(shí)，無(wú)論收獲前和收獲后。因此，本發(fā)明制劑例如通過(guò)對(duì)蠼螋侵襲了的正在生長(zhǎng)的植物和/或已收獲的植物部分葉噴施而施用。特別令人感興趣的是用本發(fā)明制劑收獲后處理剪下的花以控制那些在花瓶溶液中發(fā)現(xiàn)的微生物的生長(zhǎng)。本發(fā)明也能增長(zhǎng)剪下的花的壽命，這部分是由于對(duì)莖在水中生長(zhǎng)時(shí)對(duì)花瓶溶液微生物如細(xì)菌和真菌的控制。處理剪下的花可以用各種適于特定目的的方法，如將剪下的莖浸入本發(fā)明制劑后再取出，和/或向花瓶溶液中加入該制劑，或?qū)⒄麄€(gè)剪下的花在該制劑中浸一浸。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，收獲后控制是針對(duì)于葡萄孢開(kāi)花期枯萎病(由剪下的花上的灰色葡萄孢PersFr引起)。葡萄孢開(kāi)花期枯萎病是溫室生長(zhǎng)的玫瑰和很多其它剪下的花植物以及葡萄藤上分布廣泛且毀壞性病害。用試驗(yàn)化合物收獲后處理可以用來(lái)減少由灰色葡萄孢引起的灰色霉菌，延遲由灰色葡萄孢，根霉(Rhizopus)和擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum)引起的花的腐爛(或果實(shí)如木莓，草莓，蘋(píng)果，梨的腐爛)。優(yōu)選式(2)和(5)化合物。更優(yōu)選的是含有皂草苷和/或吐溫80的制劑中包括肉桂醛和/或α-己基肉桂醛的制劑。該制劑延長(zhǎng)或保持剪下的花的壽期的效力可通過(guò)監(jiān)視花葉，莖的枯萎，再水合作用，細(xì)菌生長(zhǎng)和莖污染，和微生物及生理性孢塞的收獲后控制而評(píng)估。本發(fā)明化合物可以在蘋(píng)果蠹蛾(Cydiapomonella)進(jìn)入果實(shí)前用來(lái)處理其三個(gè)生長(zhǎng)階段，成蟲(chóng)，卵和新生幼蟲(chóng)。對(duì)于這項(xiàng)應(yīng)用，必須研究這些生長(zhǎng)階段的敏感性曲線，以優(yōu)化施用本發(fā)明制劑的時(shí)間性。通過(guò)試驗(yàn)卵，新生幼蟲(chóng)和成蟲(chóng)對(duì)該制劑的敏感性，剛施藥時(shí)以及最初施藥后保留的殘余毒性來(lái)進(jìn)行。本發(fā)明類黃酮醛組合物也被用來(lái)控制SanJosé介殼蟲(chóng)，其是一種形狀奇特且不動(dòng)的昆蟲(chóng)。象粉蚧一樣，介殼蟲(chóng)比動(dòng)物更接近類似于病害微生物。有兩類介殼蟲(chóng)意為以花園植物為食的軟蚧(Coccidea)和優(yōu)選果園植物的盾蚧(Diaspididae)。介殼蟲(chóng)總科中的一些介殼蟲(chóng)自身接觸很多不同植物的葉，果實(shí)和莖皮。因此，本發(fā)明制劑優(yōu)選施與敏感植物的葉，果實(shí)和莖皮。本發(fā)明方法和組合物也用于控制與蚜蟲(chóng)，木虱，和葡萄瘤蚜類似的粉蚧。粉蚧從植物中吸取汁并傳播病害，它們分泌的蜜汁招來(lái)干擾光合作用的黑色真菌的生長(zhǎng)。葉施藥被用來(lái)控制黑色真菌的生長(zhǎng)，所用的量應(yīng)足以在植物中誘導(dǎo)SAR，以在昆蟲(chóng)取食的植物的遠(yuǎn)距離區(qū)控制吸汁昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)。除處理宿主植物外，也可用本發(fā)明制劑處理種子。種子可用粉末制劑在其上涂粉(參見(jiàn)美國(guó)專利No.4978686，是制劑能被吸附的無(wú)機(jī)材料的例子)或在植物基質(zhì)如蛭石中混合。種子也可自轉(zhuǎn)基因作物獲得，其中式(1)組分已在種子中表達(dá)，最好優(yōu)先在種子中表達(dá)。無(wú)菌條件下自處理過(guò)的種子生長(zhǎng)出的籽苗對(duì)真菌和昆蟲(chóng)無(wú)感應(yīng)性。另外也可以用本發(fā)明制劑處理籽苗。在一些情況下必須調(diào)整處理用制劑以減小與處理相關(guān)的任何植物毒性，因?yàn)槿跣∮籽扛赡茱@現(xiàn)出植物毒性癥狀。提供下面的實(shí)施例是為了詳細(xì)說(shuō)明而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例原料和方法從以下來(lái)源獲得下面給出的實(shí)施例中使用的化學(xué)物質(zhì)肉桂醛，Spectrum化學(xué)公司，N.J.，松柏醛，APIN化學(xué)公司，U.K.；吐溫80和碳酸氫鈉，Spectrum化學(xué)公司，Gardena，C.A.；α-己基肉桂醛，F(xiàn)irmenich，Plainsboro，新澤西；皂草苷，Danco有限公司，F(xiàn)resno，C.A.。實(shí)施例1玫瑰栽培植物上白粉菌的處理A.盆栽玫瑰.對(duì)8株玫瑰栽培植物進(jìn)行試驗(yàn)來(lái)研究肉桂醛/NaHCO3制劑對(duì)銹菌和孢子的作用。所用的栽培植物包括未命名的Moss(Moss)，Galica，RosetteDelize(HybridFea)，RosaRugosaRubra(Rugosa)，AbelMorrison(Hybrid多年生植物)，JohnLaing，BettyPrior，和RosedeRoi。選擇五種(5)盆栽栽培植物(Moss，Galica，HybridTea，Rugosa，和Hybrid多年生植物)，并根據(jù)Paulus和Nelson(上文)設(shè)計(jì)白粉菌，銹菌和孢子的發(fā)病等級(jí)，(只對(duì)Moss，GaliCa和對(duì)照植物評(píng)估孢子)。Moss和Galica栽培物是0-5等級(jí)中的5(其中0＝?jīng)]有白粉菌，銹菌/孢子病害，1＝1～25，2＝26～50，3＝51～75，4＝76～90，和5＝＞90％每叢中的葉受損傷)。HybridTea和Hybrid常年生植物等級(jí)為3，而Rugosa等級(jí)為1。Moss和Galica也受銹菌侵害至相當(dāng)于等級(jí)3。每株栽培的植物接受了大約100ml(肉桂醛制劑)的葉噴施，所述制劑中含有5g肉桂醛，80gNaHCO3，10g吐溫80，加水至1000g。另外，從第一次用肉桂醛/NaHCO3處理那天起每周一次對(duì)每株盆栽植物施加250ml0.01％(v/v)10°白利糖度皂草苷水溶液，該皂草苷是從絲蘭植物中提取的。對(duì)照植物沒(méi)有接受處理。至最后每周一次田間觀測(cè)，一次性處理8周后與未處理對(duì)照物相比根除了白粉菌，銹菌和孢子，其中對(duì)照植物分別保持5，3和4級(jí)的白粉菌，銹菌和孢子的發(fā)病等級(jí)。而且，該項(xiàng)處理顯示出誘發(fā)了系統(tǒng)抗性。沒(méi)有觀測(cè)到植物毒性。B.田間生長(zhǎng)的玫瑰對(duì)田間生長(zhǎng)的剪花玫瑰設(shè)計(jì)另一實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估同一時(shí)期(季節(jié))和環(huán)境條件下肉桂醛/NaHCO3控制白粉菌的效力。白粉菌和銹菌接種物在該試驗(yàn)田中有很多，不需另外的接種物來(lái)提供病害壓力。在該項(xiàng)研究中使用了栽培植物JohnLaing，BettyPrior，和RosedeRoi。從一列16株中挑選8株JohnLaing植物用于處理。該列中從第一株植物開(kāi)始處理每一株其它植物。從6株植物中挑選的3株BettyPrior植物被同樣處理，和從4株中挑選的2株RosedeRoi植物一樣。對(duì)每一組栽培植物施用一次制劑的葉噴施處理(大約100ml)，所述制劑中含有肉桂醛(5g)，吐溫80(10g)，NaHCO3(80g)和加至1000g的水。植物間距平均0.86m。發(fā)病等級(jí)與用來(lái)評(píng)估盆栽植物白粉菌的相同。對(duì)照物是未處理植物。沒(méi)有風(fēng)，且噴施要準(zhǔn)確以保證對(duì)照植物不受噴施轉(zhuǎn)移的影響。JohnLaing栽培物是嫩的生長(zhǎng)了45天的植物，白粉菌等級(jí)為5。BettyPrior栽培物是較大植物(≥240天)，事先用Eagle噴施(120天以前)，白粉菌等級(jí)為3，RosedeRoi是生長(zhǎng)了240天植物，白粉菌等級(jí)為2，銹菌等級(jí)為2，根據(jù)上文給出的相同的等級(jí)標(biāo)度。通過(guò)與未處理對(duì)照組比較，發(fā)現(xiàn)在處理后每一株植物上產(chǎn)生的白粉菌和銹菌損害的數(shù)值，來(lái)測(cè)定誘導(dǎo)的系統(tǒng)抗性，對(duì)各種植物進(jìn)行每周一次的觀察。在每株植物最后一次田間觀測(cè)時(shí)確定該處理方法對(duì)生長(zhǎng)速度的作用。除了未處理的對(duì)照物和三株再次感染等級(jí)為3的栽培物BettyPrior外，在為期五周的試驗(yàn)的最后，所有植物都沒(méi)有了白粉菌。沒(méi)有發(fā)現(xiàn)植物毒性。所有植物都有超過(guò)未處理對(duì)照物的新的生長(zhǎng)。對(duì)每一組植物計(jì)算病害控制平均百分率。對(duì)于白粉病有如下結(jié)果JohnLaing，98.3％；BettyPrior，64.3％；RosedeRoi，100％。所有三種玫瑰平均抗白粉病率為90.7％。只對(duì)RosedeRoi評(píng)價(jià)了銹病，抑制率為85.0％。溫室和田間條件下，對(duì)白粉病提供≥70％MPDC有效的殺真菌劑，而對(duì)于銹病是≥65％。用含肉桂醛和碳酸氫鈉的乳液對(duì)盆栽或田間生長(zhǎng)的玫瑰噴施至流溢，并伴隨噴施以皂草苷，保持多至56天沒(méi)有白粉菌和銹菌，而只用水噴施的植物都不是這種情況。處理過(guò)的植物也沒(méi)有了蚜蟲(chóng)。據(jù)報(bào)道，用Rubigon噴施，誘發(fā)了對(duì)玫瑰白粉病的抗性，平均大約20天。用肉桂醛和松柏醛的水溶液或含有碳酸氫鈉和肉桂醛和/或松柏醛的乳液噴灑玫瑰獲得大約70％平均病害控制測(cè)定值。在平行實(shí)驗(yàn)中，Benomyl給出大約80％平均病害控制率。實(shí)施例2用松柏醛處理玫瑰上的真菌和昆蟲(chóng)使用了專用的實(shí)驗(yàn)玫瑰花園中6株受感染的玫瑰。用兩種松柏醛制劑中的一種處理4株Mrs.JohnLaing(雜交常年生)和2株MarchioneseofLondonderry(雜交常年生)。低劑量處理(T1)是含有松柏醛(5g)，吐溫80(10g)，NaHCO3(80g)和905gH2O，共1000g產(chǎn)品的制劑。高劑量處理(T2)的是含100g松柏醛，20g吐溫80，120gNaHCO3和760g水，共1000g產(chǎn)品的松柏醛制劑。參見(jiàn)表1。用Paulus和Nelson(上文)的等級(jí)體系將首先2株Mrs.JohnLaing植物(P1和P2)設(shè)計(jì)為白粉菌病害等級(jí)為3，且銹病等級(jí)為3。Mrs.JohnLaing植物3和4(P3和P4)被設(shè)計(jì)為白粉病和銹病病害等級(jí)分別為4和5，P3和P4也感染了蚜蟲(chóng)，每株植物有＞35個(gè)昆蟲(chóng)。根據(jù)Paulus和Nelson(上文)的等級(jí)體系，兩株MarchioneseofLondonderry(P5和P6)白粉病和銹病等級(jí)為5。兩種處理制劑用于該試驗(yàn)。每株植物(P1至P6)接受了≈100ml下面表1所列制劑的噴施處理。對(duì)照植物只噴灑水。以這里所說(shuō)明的病害控制平均百分率(MPDC)來(lái)計(jì)算處理前到處理后等級(jí)的變化。如下面表2所示，兩種制劑均降低了受感染程度。和只噴灑水的植物相比，處理后降低了最小一個(gè)估價(jià)等級(jí)的值。</tables>P3和P4植株上消滅了蚜蟲(chóng)，表明該制劑有殺昆蟲(chóng)性能。松柏醛和肉桂醛一樣，具有抗微生物性能，并且可以消滅存在于宿主昆蟲(chóng)上的共生細(xì)菌，沒(méi)有這些細(xì)菌，昆蟲(chóng)不能成活。實(shí)施例3處理玫瑰白粉病對(duì)已知易感白粉病的田間生長(zhǎng)玫瑰評(píng)估用肉桂醛制劑，松柏醛制劑，和結(jié)合使用的肉桂醛和松柏醛制劑進(jìn)行的三種處理實(shí)驗(yàn)。這些植物受各種以前的殺真菌劑處理的阻礙，且對(duì)這些植物是隨機(jī)性的。兩個(gè)物種被用于下面描述的三項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中的每一項(xiàng)。在實(shí)驗(yàn)1中，使用了ReichsprasidentvonHindenburg(Bourbon)和OskarCordel(雜交常年生)；在實(shí)驗(yàn)2中，使用了RosaGallicaOfficinalis(Apothecary玫瑰)和DeuildePaulFontaine(HybridMoss)。在實(shí)驗(yàn)3中，使用了ComtedeChambord(Portland)和MadamePierreOger(Boarbon)。實(shí)驗(yàn)1評(píng)價(jià)單獨(dú)使用肉桂醛和結(jié)合吐溫80和/或NaHCO3組分的效果，實(shí)驗(yàn)2評(píng)估單獨(dú)使用松柏醛和結(jié)合吐溫80和/或NaHCO3的效果，實(shí)驗(yàn)3評(píng)估了肉桂醛和松柏醛與吐溫80和/或NaHCO3結(jié)合的效果。在實(shí)驗(yàn)1中試驗(yàn)了9次處理，實(shí)驗(yàn)2中6次，實(shí)驗(yàn)3中6次。參見(jiàn)表3的處理方案；制劑1用于這些實(shí)驗(yàn)。每株植物接受了一次100ml葉噴施，接著用Paulus/Nelson等級(jí)規(guī)格(上文)評(píng)估白粉病。只是在處理前和處理后4天用該等級(jí)規(guī)格對(duì)植物評(píng)估。以這些實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，病害控制平均百分率數(shù)據(jù)表明所有三種混合制劑(即G，M，和Q)提供了超過(guò)70％病害控制率(表4)。處理Q(CNMA和COFA兩者)明顯比所有其它處理，包括苯菌靈(benomyl)要好。而且，肉桂醛，松柏醛，吐溫80和NaHCO3用于食品工業(yè)，可能對(duì)消費(fèi)者或任何以該方法噴施的食品作物或園藝操作者沒(méi)有毒性危險(xiǎn)。類似地，因?yàn)檫@些化學(xué)物質(zhì)沒(méi)有留下毒性殘留物，因此沒(méi)有機(jī)會(huì)對(duì)廣泛的環(huán)境有任何破壞作用。而且其應(yīng)用可能與當(dāng)今生物控制方法相容合。表3處理方案組號(hào)處理組分處理組分的量1制劑1制劑21A肉桂醛(CNMA)5g20g1B吐溫80(T80)10g20g1CNaHCO380g60g1DCNMA+T805g，10g20，60g1ECNMA+NaHCO25g，80g20g，60g1FNaHCO3+T8080g，10g60g，20g1G制劑1(CNMA)A＝5，B＝10g，C=80gA＝20，B＝20，C＝60g1，2，3H+對(duì)照2按制造商說(shuō)明R，S，T21，2，3I-對(duì)照H2OH2O2J松柏醛(COFA)5g20g2KCOFA+T805g，10g20g，20g2LCOFA+NaHCO35g，80g20g，60g2M制劑2(COFA)J＝5g，B＝10g，C＝80gJ＝20g，B＝20g，C＝60g3NCNMA+COFA2.5g，2.5g10g，10g3OCNMA+COFA+T802.5g，2.5g，10g10g，10g，10g3PCNMA+COFA+NaHCO32.5g，2.5g，80g10g，10g，10g3Q制劑3(CNMA+COFA)A＝2.5g，J＝2.5gB＝10g，C＝80gA＝10g，J＝10g，B＝20g，C＝60g</table></tables>1加水至1000g2R＝苯菌靈S＝麻拉松T＝LillyMillerSSKB表4肉桂醛和松柏醛制劑對(duì)玫瑰白粉菌的作用醛肉桂醛松柏醛肉桂醛(2.5g)+添加劑沒(méi)有(5g)(5g)松柏醛(2.5g)病害控制平均百分?jǐn)?shù)None0％50％56％69％T80(10g)0％44％44％69％NaHCO344％56％44％88％T80+NaHCO319％94％81％100％苯菌靈79％NTNTNT實(shí)施例4單獨(dú)使用肉桂醛和/或松柏醛和/或與吐溫80和/或NaHCO3一起處理葡萄瘤蚜取食位置試驗(yàn)生理過(guò)程阻礙導(dǎo)致的死亡率由成蟲(chóng)和蛹死亡率實(shí)驗(yàn)以及由卵孵化實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定。孵化后，新生昆蟲(chóng)必取得一確定的合適的進(jìn)食點(diǎn)。如果昆蟲(chóng)的生命周期要持續(xù)的話，該所做的事情一定要成功。研究表明大約80％的葡萄瘤蚜死亡發(fā)生在此項(xiàng)事情期間。低劑量濃度制劑可以通過(guò)阻礙昆蟲(chóng)“尋找和確定取食點(diǎn)”行為而保護(hù)葡萄的根。用以下方案評(píng)價(jià)所有三個(gè)類型的作用。成蟲(chóng)和蛹死亡率實(shí)驗(yàn)使大約24只葡萄瘤蚜的卵在標(biāo)準(zhǔn)的切除的葡根上生長(zhǎng)至30天。在30天左右，一些昆蟲(chóng)長(zhǎng)成蛹而另一些長(zhǎng)成若蟲(chóng)。在該過(guò)程中移去新生卵。昆蟲(chóng)侵染的根浸入試驗(yàn)制劑中6秒鐘，然后放置于空氣中風(fēng)干。5天后以其生長(zhǎng)，產(chǎn)卵或腳部活動(dòng)來(lái)確定成活昆蟲(chóng)百分率。如果一只昆蟲(chóng)放棄了其取食點(diǎn)，則認(rèn)為它已死亡。在最初的試驗(yàn)中，評(píng)估了有各種添加劑在水中20000ppm肉桂醛(即2％肉桂醛)的劑量。沒(méi)有任何添加劑的肉桂醛產(chǎn)生83.3％的死亡率。添加1％吐溫80，得到91.7％死亡率。向2％肉桂醛溶液中加入6％NaHCO3，得到91.7％死亡率。向2％肉桂醛溶液中加入1％吐溫80和6％NaHCO3，得到100％死亡率。沒(méi)有添加劑的水不產(chǎn)生死亡率，而250ppm水中的馬拉松正控制溶液給出100％死亡率。卵孵化實(shí)驗(yàn)60只混合齡群的葡萄瘤蚜卵置于50×9mm密封的塑料陪替氏培養(yǎng)皿中的濾紙(Whatman#1，5.5cm，圓形)上，用100μl溶液處理。選定濃度的400μl試驗(yàn)制劑加到濾紙皿中，并將培養(yǎng)皿用陪替氏培養(yǎng)皿蓋蓋上，并置于塑料容器箱內(nèi)。6小時(shí)后，將該箱置于24℃黑暗中的保護(hù)室中。10只卵一組。一周后，測(cè)量孵化百分率。在最初的實(shí)驗(yàn)中，用一組卵在每一劑量評(píng)估6％NaHCO3，和2％吐溫80中自0.1至25000ppm肉桂醛劑量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。7天后評(píng)價(jià)該制劑的效果，并以殼內(nèi)死亡(DIS)的蛹數(shù)或未完全孵化(IH)的卵(即完全死亡)來(lái)記分。根據(jù)概率分析來(lái)測(cè)定LD50和LD90。使用5000ppm肉桂醛，所有的蛹死在殼中。使用100ppm，88％死于殼中及還有12％未完全孵化。使用10ppm，殼中沒(méi)有死亡，但100％的卵沒(méi)有完全孵化。向100ppm的制劑中加入0.86ml10°白利糖度皂草苷的水溶液將死在殼中的蛹數(shù)增加至93％。相同劑量范圍的松柏醛(6％NaHCO3，2％吐溫80)有較小效力。但在5000ppm濃度下，仍有10％的蛹死于殼中，在1000ppm下，12％死于殼中且85％未完全孵化。所有只用水處理的葡萄瘤蚜的卵孵化了。用Carbofuran(10ppm)或馬拉松(250ppm)處理的100％葡萄瘤蚜死于殼中。在實(shí)驗(yàn)室生物分析中用6％NaHCO3，2％吐溫-80中的肉桂醛(CNMA)制劑處理葡萄瘤蚜卵。死亡率以不能完成初次破碎卵殼來(lái)表示。第7天的EC50是115ppmCNMA。7天后根深部處理蛹和成蟲(chóng)的LC50在3000ppm和10000ppm之間。葡萄瘤蚜嚴(yán)重侵襲的一年齡溫室Vitisvinifera栽培物Merlot葡萄的葉使用相同制劑用CNMA處理噴施至流溢。兩周后，所有處理過(guò)的葡萄的根沒(méi)有了昆蟲(chóng)，而用水處理的對(duì)照物仍有昆蟲(chóng)。參見(jiàn)表5。CNMA或其它處理后1，2和5周從植物體上取根樣品置于陪替氏皿生物分析中并用未處理過(guò)的葡萄瘤蚜卵感染。這些卵在來(lái)自水處理過(guò)的對(duì)照植物的根上產(chǎn)生新葡萄瘤蚜群，而在來(lái)自CNMA處理過(guò)的植物的根上沒(méi)有這種情況。該結(jié)果表明該項(xiàng)處理的長(zhǎng)期效力。用CNMA處理或?qū)φ瘴飮娛┰贒avis，CA田間植物生長(zhǎng)地塊中生長(zhǎng)的一年齡Merlot葡萄(表6)和2年齡Chardonnay植物(表7)。兩周后，10000ppm處理與對(duì)照葡萄上昆蟲(chóng)群相比減少95％蟲(chóng)群；1000ppm處理產(chǎn)生92％減少(表8)。這些結(jié)果表明，根部的葡萄瘤蚜也被施與葉的該制劑所控制。如實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)所示，CNMA可能是對(duì)葡萄瘤蚜有直接的毒性，和/或CNMA和/或其代謝產(chǎn)物可能引發(fā)植物生理中荷爾蒙或蠟質(zhì)-愈合變化，該變化不利于葡萄瘤蚜生存。實(shí)施例5葡萄藤葉的化學(xué)物質(zhì)處理控制根部葡萄瘤蚜方案根部葡萄瘤蚜(DaktulosphairaVitifoliaeFitch)是有論證的世界范圍內(nèi)破壞性最強(qiáng)的葡萄害蟲(chóng)。在該試驗(yàn)中，試驗(yàn)了用1％吐溫80配制的肉桂醛控制葡萄瘤蚜的能力。在溫室和花盆的研究中，基礎(chǔ)制劑用各種濃度技術(shù)純的碳酸氫鈉添增。田間處理用加有1％吐溫80的1％肉桂醛，或只用1％吐溫80。也對(duì)類似物和其它物質(zhì)進(jìn)行了試驗(yàn)，包括肉桂醇，肉桂酸甲酯，α-己基肉桂醛，苯丙氨酸中4-乙酰氨基苯酚(98％，AldrichChemicalCo.，Inc.Milwaukee，WI)。表5溫室Merlot植物，1年齡，被生物型(biotype)A侵染日期和10K3K2.5K1K0.3K水200ppm空白剪下的活性1CNMACNMACNMACNMACNMA馬拉松制劑0天，99處理7天0(3)0(3)0.7(3)3.3(3)評(píng)估排放3剪下植物14天0(3)0(3)0(3)0(3)3.0(3)3評(píng)估處理后0(3)0(3)0(3)0.7(3)4.0(3)5周排放9999處理后4.0(3)4.0(3)4.0(3)4.0(3)1天處理后0.3(3)4.0(3)2.3(3)0(3)2天處理后0.3(3)3.3(3)0(2)1.7(3)7天1用6％NaHCO3，和2％吐溫中各濃度CNMA處理至流溢。0-4病害等級(jí)(植株數(shù))。表6Merlot植物，1年齡，被生物型A侵染植物數(shù)日期及活性20K10K10K涂施1K水空白制劑處理242332(5∶30p.m.)處理后7天12*1111處理后14天121221*一種10K植物和空白制劑用木質(zhì)物蓋在盒內(nèi)。表7田間地塊實(shí)驗(yàn)Chardonnay，2年齡，被生物型A侵染植物數(shù)日期和活性10KCNMA1KCNMA水空白制劑0天處理2植物2植物2植物2植物(地塊5)(地塊2)(地塊1)(地塊6)7天評(píng)估1植物1植物1植物1植物14天評(píng)估1植物1植物1植物1植物表8植物根中的葡萄瘤蚜群兩周結(jié)果MerlotChardonnay(2次處理)20K16(98.7％控制)10K96，52，33(94.9％控制)1021K133，72，95(91.5％控制)637水1143，11381048FB12792521如前所述(DeBenedictis和Granett(1992)在切除的V.Vinifera栽培物CabernetSauvignon根片上保留有實(shí)驗(yàn)用群體生物型A和B葡萄瘤蚜。來(lái)自該群體的卵用于侵染溫室和田間田塊植物的毒性研究，并評(píng)估化學(xué)處理植物的宿主適應(yīng)性。類似于Granett和Timper(1987)描述的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)生物分析。各種齡段的卵置于用足夠溶液弄濕的Whatman#1濾紙上，在卵側(cè)一半的地方形成彎液面。帶有卵的濾紙片置于2℃下密封的塑料陪替氏皿中，至其生長(zhǎng)7天，然后計(jì)數(shù)孵育的個(gè)數(shù)。如果蛹自己完全從卵殼中出來(lái)，則認(rèn)為孵育成功了。即使它們部分從卵殼中暴露出來(lái)，昆蟲(chóng)也被認(rèn)為是未孵化的。對(duì)于蛹和成蟲(chóng)試驗(yàn)，將卵置于切除的根片上，根片類似于用于培植目的的那些，將卵和根片密封在陪替氏皿中，并在24℃保持18-25天使昆蟲(chóng)孵育，開(kāi)發(fā)取食點(diǎn)并成長(zhǎng)。大約在此時(shí)，大約一半群體處成蟲(chóng)期。試驗(yàn)前，測(cè)定每一根片上的群體以及每一昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)階段。取出卵。然后將這些根片浸入試驗(yàn)溶液5秒鐘，并在裝回陪替氏皿之前空氣風(fēng)干，密閉，并放回24℃的保溫箱中。5天后測(cè)定死亡率。如果昆蟲(chóng)變黑或脫水，如果從處理前記錄起其沒(méi)有再生長(zhǎng)，且沒(méi)有產(chǎn)卵或產(chǎn)極少新卵，則認(rèn)為昆蟲(chóng)死亡。對(duì)于溫室植物，使用了來(lái)自Davis的加里弗尼亞大學(xué)FoundationPlantMaterialService的一年齡盆栽V.Vinifera栽培merlot植物。這些植物栽于10cm直徑的小盆中，并在處理前5周用葡萄瘤蚜侵染。在噴施時(shí)，將植物小盆置于塑料袋中使從葉噴施中流下的化學(xué)物質(zhì)不滴入土壤中。用普通的1升容積塑料噴灑瓶進(jìn)行噴施至流溢。使植物在室外空氣風(fēng)干后再放回溫室。一段時(shí)間后，從盆混合物中分離出根，并估計(jì)總的葡萄瘤蚜口數(shù)。切碎來(lái)自處理后5周的植物的根，將大約3mm直徑4cm長(zhǎng)的6段根段清除侵染，用于生物分析。為了進(jìn)行該項(xiàng)生物分析，用20只卵接種根段，維持植物根，同時(shí)維持了寄生群體。25天后，計(jì)數(shù)各年齡組中個(gè)體數(shù)目。種植箱是木質(zhì)的，上表面積1.5m×1m，高1.5m。箱中裝入粘土-肥土土壤，在1995年早春種植4株一年齡Merlot植物。1995年5月通過(guò)將大約150只卵放入土壤表面下鄰近根的地方而用生物型A葡萄瘤蚜侵襲植物。每周用薄霧滋潤(rùn)植物。在1995年7月和8月不同時(shí)間用普通1升容量塑料噴霧瓶進(jìn)行處理，噴施至流溢。處理后一周或兩周，從土壤中取出植物根系，估計(jì)總的葡萄瘤蚜口數(shù)。1.用CNMA對(duì)卵進(jìn)行試驗(yàn)；將卵置于CNMA濕潤(rùn)的濾紙上處理24小時(shí)，卵保持在24℃</tables>2.用卵進(jìn)行的類似試驗(yàn)；將卵置于CNMA濕潤(rùn)的濾紙上處理24小時(shí)化合物大約的卵孵化LD50肉桂醛320ppm肉桂醇＞320，＜560ppm肉桂酸甲酯＞320，＜560ppmα-己基肉桂醛在560ppm沒(méi)有孵化失??；快的蛹死亡率，在100ppm有100％4-乙酰氨基苯酚在560ppm沒(méi)有死亡3.蛹/成蟲(chóng)試驗(yàn)水對(duì)照試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)平均減少2％葡萄瘤蚜，表明空白制劑，吐溫80在一定程度上對(duì)蛹和成蟲(chóng)葡萄瘤蚜有毒性。用肉桂醛處理的蛹和成蟲(chóng)死亡率a.溫室Merlot植物，1年齡，實(shí)驗(yàn)1，葉處理(n＝3</tables>b.用處理后5周時(shí)取出的根進(jìn)行再接種試驗(yàn)(第25天生物分析)，每一劑量6段根上葡萄瘤蚜總數(shù)。</tables>c.溫室Merlot植物，1年齡，實(shí)驗(yàn)2，葉處理(n)</tables>d.盆栽植物，一年齡Merlot植物，對(duì)葉CNMA處理至流溢。去除不好的不連續(xù)的根的植物</tables>討論A.直接毒性這些結(jié)果證明當(dāng)表面施用時(shí)CNMA對(duì)葡萄瘤蚜卵，蛹和成蟲(chóng)有直接毒性。對(duì)進(jìn)食階段的毒性水平要比對(duì)卵階段的毒性低得多。當(dāng)卵齡小或接受孵化時(shí)，卵更敏感。這些毒性區(qū)別可能反映吸收特征，解毒酶，或活性點(diǎn)在這些階段的差別。B.系統(tǒng)活性當(dāng)在溫室或田間處理整個(gè)植物的葉時(shí)，活性在兩周內(nèi)轉(zhuǎn)位到根?？梢?jiàn)到未被侵食的位點(diǎn)，而且切除的根在處理后至少5周仍保持對(duì)葡萄瘤蚜再侵襲的抗性，這表明類黃酮醛和/或代謝物易位到根，在根部其直接引起葡萄瘤蚜死亡或空出進(jìn)食點(diǎn)，或者類黃酮醛誘導(dǎo)植物改變其根的化學(xué)成分，使根不能被葡萄瘤蚜取食所接受。任一機(jī)理都是控制葡萄瘤蚜和其它害蟲(chóng)的令人興奮的新的進(jìn)展。常規(guī)系統(tǒng)殺昆蟲(chóng)劑一般是在植物中向上游動(dòng)而不是向下游動(dòng)；因此向下游動(dòng)對(duì)殺昆蟲(chóng)證據(jù)是重要的補(bǔ)充。如果類黃酮醛是誘導(dǎo)宿主植物抗性的刺激物，則其增加了一條處理植物害蟲(chóng)的新途徑。實(shí)施例6處理蚜蟲(chóng)和白蠅的方案如下測(cè)定肉桂醛和/或松柏醛抗黑豆蚜蟲(chóng)，棉葉螨(Tetranychusurticae)，和銀葉白蠅(silverleafwhitefly)，Bemisiaargentifolii的活性1.蚜蟲(chóng)a.陪替氏皿生物分析用溶解于水的特定制劑(例如10-25,000ppm)處理陪替氏皿(60mm)，使空氣風(fēng)干。在每個(gè)皿中放入20只成蟲(chóng)蚜蟲(chóng)(Tetranychusurtcae)(重復(fù)10次)。與處理過(guò)的皿接觸3小時(shí)后，與只用稀釋劑處理的陪替氏皿中蚜蟲(chóng)的死亡率相比較。使用馬拉松(250ppm)為正對(duì)照物。對(duì)在2％吐溫80和6％NaHCO3中指定濃度的肉桂醛進(jìn)行了試驗(yàn)。在2500ppm濃度或高于此濃度下，100％的蚜蟲(chóng)被殺死。在100ppm和10ppm時(shí)，發(fā)現(xiàn)50％和25％的死亡率。而用2％吐溫80和6％NaHCO3(不加入醛)發(fā)現(xiàn)25％的死亡率，用馬拉松(250ppm)能殺死100％的蚜蟲(chóng)。b.植物的葉生物分析植物在溫室中在7.5mm陶土小盆中生長(zhǎng)。使用白蠅對(duì)棉花植物試驗(yàn)，使用蚜蟲(chóng)對(duì)甜菜試驗(yàn)。當(dāng)植物生長(zhǎng)至3葉期時(shí)，用60只特定的節(jié)肢動(dòng)物侵染(重復(fù)6次)。讓昆蟲(chóng)定居并進(jìn)食。用含有100至2000pm或0.1至2g/l濃度試驗(yàn)制劑的制劑對(duì)植物噴施至流溢(大約5ml)。用高的塑料箱將植物罩住(箱的規(guī)格是5mm高×10mm直徑)。三天后測(cè)定用試驗(yàn)制劑噴灑的植物上的昆蟲(chóng)死亡率，并與只用水噴灑的植物上昆蟲(chóng)死亡率相比較。2.銀葉白蠅a.陪替氏皿生物測(cè)定用溶解于水的試驗(yàn)制劑(例如10-25000ppm)處理陪替氏皿(60mm)，并使空氣風(fēng)干。每個(gè)皿中放入20只成蟲(chóng)銀葉白蠅，(重復(fù)10次)。三小時(shí)后測(cè)定接觸過(guò)理過(guò)皿的昆蟲(chóng)死亡率，并與只用稀釋劑處理的陪替氏皿中銀葉白蠅的死亡率比較。使用250ppm馬拉松作為正對(duì)照物。對(duì)2％吐溫80和6％NaHCO3中指定濃度的肉桂醛進(jìn)行試驗(yàn)。在2500ppm或高于這一濃度時(shí)，100％銀葉白蠅被殺死。在100ppm和10ppm，分別發(fā)現(xiàn)50％和25％的死亡率。用濃度為2％的吐溫80和6％NaHCO3(不加醛)發(fā)現(xiàn)25％的死亡率，用馬拉松(250ppm)殺死了100％的銀葉白蠅。參見(jiàn)表9。表9肉桂醛和松柏醛制劑對(duì)銀葉白蠅死亡率(百分率)的影響醛肉桂醛松柏醛肉桂醛(10g)+添加劑無(wú)(20g)(20g)松柏醛(10g)死亡百分率無(wú)068.6NTNTT80(10g)14.572.1NTNTNaHCO322.987.3NTNTT80+NaHCO325.0100NTNT皂草苷(1％10brix)NTNTNTNT皂草苷+T80NTNTNTNT皂草苷+NaHCO3NTNTNTNT馬拉松(250ppm)100NTNTNTH2O(負(fù)對(duì)照)26.9NTNTNT實(shí)施例7對(duì)線蟲(chóng)侵害的處理有多種線蟲(chóng)侵害植物組織，包括莖和鱗莖線蟲(chóng)(Ditylenchusdipsaci)和根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogynespp)。用含有肉桂醛的各種制劑處理莖線蟲(chóng)(Ditylenchusdisaci)如下進(jìn)行試驗(yàn)。1.莖線蟲(chóng)從大蒜鱗莖中提取莖線蟲(chóng)，將組織切碎，放入底部有篩網(wǎng)的燒杯中，將該底部有篩網(wǎng)的燒杯置于一盛水的燒杯中。線蟲(chóng)從宿主組織中遷移出并通過(guò)篩網(wǎng)沉降在底部燒杯中。將上清水去除，保留在燒杯中的線蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到表玻璃上并用于下面的處理方法中。清潔的塑料盒分成20mm×20mm×20mm頂端開(kāi)口的小盒。室溫下(19℃)向每一小盒中吸量半毫升自來(lái)水。用粘在解剖針上的睫毛操作每只動(dòng)物，向每個(gè)小盒中放入10只線蟲(chóng)。然后向每一小盒中加入半毫升一種試驗(yàn)溶液。向?qū)φ招『兄屑尤胨Ｓ秒p眼顯微鏡觀察，監(jiān)測(cè)盒中線蟲(chóng)的存活。加入該溶液后1，5，10，20，30和60分鐘記錄存活的動(dòng)物數(shù)目。如果線蟲(chóng)個(gè)體不動(dòng)或?qū)Σ僮鳠o(wú)反應(yīng)，則認(rèn)為該線蟲(chóng)已死亡。該試驗(yàn)重復(fù)三次。2.根線蟲(chóng)a.陪替氏皿分析在一雙盲研究中，對(duì)本發(fā)明醛化合物濃度進(jìn)行抗根結(jié)線蟲(chóng)，Meloidogynejavanica活性的試驗(yàn)。使線蟲(chóng)直接接觸化學(xué)物質(zhì)并以24小時(shí)為間隔，目測(cè)和測(cè)試來(lái)評(píng)估死亡率。用溶液培養(yǎng)來(lái)產(chǎn)生Meloidogynejavanica。收集線蟲(chóng)并在24小時(shí)內(nèi)使用。大約0.07ml水中100只線蟲(chóng)被吸量管移至一syracuse皿(Fisher)中，并立即向每一皿中吸取1ml試驗(yàn)制劑。然后將皿置于塑料袋中保持濕潤(rùn)，防止蒸發(fā)。對(duì)于每一溶液試驗(yàn)制劑使用4個(gè)syracuse皿。七天內(nèi)每24小時(shí)檢查一次溶液，并根據(jù)線蟲(chóng)的形態(tài)完整性及觸摸來(lái)評(píng)價(jià)首先碰到的10只線蟲(chóng)是活是死。能動(dòng)的線蟲(chóng)以成活計(jì)數(shù)。肉桂醛在賦形劑(2％吐溫80，6％NaHCO3)中的濃度是100ppm或更大時(shí)，在24小時(shí)時(shí)100％線蟲(chóng)死亡。在10ppm，0％，15％，17.5％，22.5％，27.5％，52.5％和52.5％濃度時(shí)，線蟲(chóng)分別在24，48，72，96，108，132和156小時(shí)時(shí)死亡。肉桂醛在賦形劑中的濃度為1ppm和0.1ppm時(shí)對(duì)死亡率無(wú)影響。用肉桂醛在賦形劑中的最低濃度0.1ppm來(lái)試驗(yàn)，加入1∶60稀釋度10白利糖度濃度的YuccaShidigera皂草苷在第24小時(shí)產(chǎn)生100％死亡率。但是單獨(dú)使用皂草苷有相同的效果。EtOH(95％)在24小時(shí)時(shí)殺死所有線蟲(chóng)。發(fā)現(xiàn)賦形劑對(duì)死亡的最小的作用是2.5％時(shí)是72小時(shí)，5％時(shí)是108小時(shí)。b.植物葉生物分析對(duì)本發(fā)明制劑測(cè)試減少由根結(jié)，樹(shù)皮，殘根，和卷軸損傷線蟲(chóng)對(duì)葡萄藤侵襲的能力。用2％吐溫80中1000ppm或3000ppm肉桂醛，商售抗線蟲(chóng)劑Namacar，或空白制劑處理葡萄園中的葡萄藤(Harmony根莖)。在處理時(shí)及在處理后30和60天測(cè)定線蟲(chóng)侵襲程度。結(jié)果見(jiàn)表10。表10肉桂醛對(duì)葡萄藤線蟲(chóng)侵襲的作用每250cc土壤中的線蟲(chóng)數(shù)1每克根上的線蟲(chóng)2根結(jié)線蟲(chóng)樹(shù)皮線蟲(chóng)殘根根結(jié)卷軸損傷處理處理后天數(shù)處理后天數(shù)處理后天數(shù)處理后天數(shù)處理后天數(shù)0306003060030600306003060未處理2110.81360276.8117.5151.5179.639.810.844.5393.2130.82500.0201000ppm498.8872204.547.2171.2116813.84536.2310.355.211.82.92.70肉桂醛*3000379.8700269.8540.2322.811270.88.843.524.4125.61.00.56肉桂醛*Nemacur1008568.8139.8181.5317.836.572.4360.40.08空白制劑332.593558.2197.217.236.593.222.81.1*在2％吐溫中1用篩-糖離心提取線蟲(chóng)。2洗凈的根用霧氣滋潤(rùn)5天以提取幼蟲(chóng)。實(shí)施例8處理草莓紅心(PhytophthoraFragariae，草莓疫霉)草莓紅心病是由真菌真菌疫霉Hickman引起的，其借助受侵害殘留物上長(zhǎng)期生長(zhǎng)的卵孢子侵襲的受侵植物材料或土壤而傳播。如下對(duì)含有肉桂醛和/或松柏醛的各種制劑進(jìn)行試驗(yàn)。用草莓疫霉侵染的浸軟的草莓根與受侵害的堆肥充分混合，使之分解4至6星期以產(chǎn)生用于處理的完全腐爛的接種物。將其分成1kg一堆，并與1500ml不同濃度的試驗(yàn)制劑混合。處理10分鐘后，此堆肥在25mm篩上在流水式自來(lái)水下中洗至少5分鐘，以去除試驗(yàn)試劑所有殘存物。然后將堆肥裝入9cm直徑塑料小盆中，每盆栽種4株草莓植物。每次處理使用5個(gè)小盆。植物在控制環(huán)境條件的房中，于15℃和18小時(shí)日長(zhǎng)下生長(zhǎng)；堆肥保持潮濕以有利侵染。將小盆放于格子內(nèi)以防止處理過(guò)程中有交叉感染。9周后，將草莓植根洗凈堆肥并將根縱向切開(kāi)，檢查侵染現(xiàn)象，觀察紅色中柱，和腐爛的或變?yōu)樽厣母?。顯微鏡檢查根碎片存在草莓疫霉卵孢子證明所有的侵染物。實(shí)施例9肉桂醛的穩(wěn)定性測(cè)定有或沒(méi)有抗氧化劑的存在下肉桂醛隨時(shí)間的穩(wěn)定性的方法向有和沒(méi)有加入維生素E的(1％CNMA濃度的生育酚)含有2％吐溫80和6％碳酸氫鈉的制劑中加入2％重量的肉桂醛。該溶液在50℃放置兩周。在這兩周期間以有規(guī)間隔用HPLC/UV分析該溶液的肉桂醛濃度并記錄(即用高效液相色譜紫外檢測(cè))。實(shí)施例10樹(shù)脂蛀孔病樹(shù)脂蛀孔病是由真菌Fusariumsubglutinansf.sp.pini引起的，其特征是受侵染的樹(shù)木的芽，枝，暴露的根和樹(shù)干表面有樹(shù)脂狀流出物。在1986年在加里弗尼亞第一次發(fā)現(xiàn)以來(lái)，樹(shù)脂蛀孔病的宿主和地理范圍大大增加。最近已經(jīng)在墨西哥和日本發(fā)現(xiàn)了該病原體。用不同濃度的肉桂醛和制劑進(jìn)行了雙盲生物分析。生物分析以抑制Fusariumsubglutinansf.sp.pini的擴(kuò)散性生長(zhǎng)為基礎(chǔ)。向200ml(已熔解的2％馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)中用吸量管加入8ml制劑(濃度未知)，將此混合物散布于5個(gè)塑料陪替氏皿(25ml皿)中。對(duì)四個(gè)皿中的每一個(gè)在其中央用從fusariumsubglutinansf.sp.pini生長(zhǎng)的PDA培養(yǎng)基中移取的瓊脂栓(分離物SL-1，UCB)接種，而第五個(gè)皿未被接種，作為對(duì)照物。對(duì)于每一種肉桂醛制劑重復(fù)這些步驟。作為正對(duì)照物，初加有5ppm苯菌靈的四個(gè)PDA皿如所述被接種；負(fù)對(duì)照物是用F.subglutinans接種的四個(gè)未補(bǔ)加的PDA皿。所有已接種的和未接種的皿在18℃孵育5天，然后測(cè)定菌落直徑。表11給出該生物分析的菌落直徑粗略平均值，表12比較有和沒(méi)有皂草苷(0.86mlYuccaschidegira提取物，10°白利糖度)的各種濃度的CNMA對(duì)菌落直徑的影響。表11Fusariumsubglutinansf.sp.pini的擴(kuò)散性生長(zhǎng)(平均數(shù)據(jù))*處理菌落直徑(cm)PDA(未修正的)4.03810ppmCNMA4.363100ppmCNMA4.238100ppmCNMA+皂草苷4.300戊二醛2％3.6635,000ppmCNMA+皂草苷2.91310ppmCNMA+皂草苷3.600H2O3.7382,500ppmCNMA3.5132,500ppmCNMA+皂草苷3.600皂草苷4.1385,000CNMA2.908空白制劑4.38012,500CNMA+皂草苷0.00025,000CNMA0.0005ppm苯菌靈(正對(duì)照物)0.00012,500ppmCNMA0.00025,000CNMA+皂草苷0.000表12F.subglutinansf.sp.pini的擴(kuò)散性生長(zhǎng)處理PGXLPGXLCNMA+皂草苷(.86ml)ppm菌落直徑(cm)菌落直徑(cm)104.363.601004.244.302,5003.513.605,0002.912.9112,5000025,00000對(duì)照物菌落直徑(cm)2％戊二醛3.66H2O3.745ppm苯菌靈0PDA(未修正的)4.04實(shí)施例11用肉桂醛和用吐溫80和/或NaHCO3處理玉米根蠕蟲(chóng)植物葉生物分析植物在陶土7.5mm小盆中在溫室中生長(zhǎng)。用玉米植物進(jìn)行玉米根蠕蟲(chóng)試驗(yàn)。當(dāng)植物長(zhǎng)至3葉期時(shí)，用60只特定的節(jié)肢動(dòng)物侵襲(重復(fù)6次)。使玉米根蠕蟲(chóng)定居并取食。用含有100至2000ppm，或0.1至2g/l濃度的試驗(yàn)制劑的制劑對(duì)植物噴灑至流溢(大約5ml)，將植物用塑料罩披蓋以防止制劑接觸土壤。用試驗(yàn)制劑噴灑植物后第3，5和7天，測(cè)定蠕蟲(chóng)死亡率，并與只用水和/或空白制劑噴灑的植物上蠕蟲(chóng)的死亡率相比較。實(shí)施例12用肉桂醛和用吐溫80和/或NaHCO3處理俄羅斯小麥蚜蟲(chóng)植物葉生物分析植物在陶土7.5mm小盆中在溫室中生長(zhǎng)。用小麥植物(Kansas品種)對(duì)俄羅斯小麥蚜蟲(chóng)進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)植物長(zhǎng)至3葉期時(shí)，用60只特定節(jié)肢動(dòng)物侵染(重復(fù)6次)。使昆蟲(chóng)定居并取食。用含有100至10000ppm，或0.1至10g/l濃度試驗(yàn)制劑的制劑對(duì)植物噴灑至流溢(大約5ml)。植物披蓋上塑料罩以防止制劑接觸土壤。在用試驗(yàn)化合物噴灑植物后第36小時(shí)，5天，和第7天，測(cè)定昆蟲(chóng)的死亡率，并與只用水和/或空白制劑噴灑的植物上昆蟲(chóng)的死亡率相比較。實(shí)施例13用肉桂醛和用吐溫80和/或NaHCO3處理纓翅目植物在陶土7.5mm小盆中在溫室中生長(zhǎng)。用各種品種的玫瑰植物對(duì)蚜蟲(chóng)進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)植物長(zhǎng)至3葉期時(shí)，用60只特定節(jié)肢動(dòng)物侵染(重復(fù)6次)。使昆蟲(chóng)定居并取食。用含有100至10000ppm，或0.1至10g/l濃度試驗(yàn)制劑的制劑對(duì)植物噴灑至流溢(大約5m1)。將植物披蓋上塑料罩以防止制劑接觸土壤。用試驗(yàn)制劑對(duì)植物噴施后36小時(shí)，5天和7天時(shí)測(cè)定昆蟲(chóng)死亡率，并與只用水和/或空白制劑噴灑的植物上的昆蟲(chóng)死亡率相比較。實(shí)施例14對(duì)草皮藻類侵害的處理草皮藻類侵害最常嚴(yán)重地發(fā)生于經(jīng)營(yíng)草皮(例如高爾夫場(chǎng))。使控制藻類侵害很困難。應(yīng)用一小塊受害草皮進(jìn)行試驗(yàn)藻類侵害控制的實(shí)驗(yàn)。用5種試驗(yàn)制劑和一種空白制劑處理受害草皮，重復(fù)5次。在第2，第3和第5周評(píng)價(jià)處理效果。實(shí)施例15用肉桂醛處理瓜蚜植物葉生物分析如下進(jìn)行對(duì)瓜蚜(AphisgossypiiGlover)的處理。使用菊花(C.morifolum)進(jìn)行瓜蚜植物葉生物分析。植物在裝有栽培土壤的7.5mm小盆中在溫室中生長(zhǎng)。使開(kāi)花植物遭受蟲(chóng)害，并對(duì)每株植物事先計(jì)量群體大小，并計(jì)算每片葉的平均蚜蟲(chóng)蛹數(shù)。用含有1000ppm，3000ppm和10000ppm濃度肉桂醛的水溶液制劑對(duì)植物噴灑至流溢(大約5ml)，負(fù)對(duì)照物只含有水。36小時(shí)后測(cè)定施用了試驗(yàn)制劑的葉上的昆蟲(chóng)數(shù)，并與只噴灑了負(fù)對(duì)照物的葉上的昆蟲(chóng)數(shù)相比較。與預(yù)先記數(shù)的平均大約60只昆蟲(chóng)相比，對(duì)于每一種肉桂醛濃度，測(cè)定的每葉平均蚜蛹少于10只。參見(jiàn)表13。實(shí)施例16處理晚疫病(Phytophthorainfectans)晚疫病(LateBlight)影響蕃茄，馬鈴薯，茄子，和其它薯類植物當(dāng)真菌孢子在溫和溫度期間落在濕的植物表面上時(shí)，開(kāi)始發(fā)生晚疫病。用馬鈴薯籽苗在溫室中進(jìn)行試驗(yàn)控制phytophthorainfestans的實(shí)驗(yàn)。用病原體分離物在溫室中對(duì)植物噴灑接種。在接種前或接種后處理植物，在第2和第3周評(píng)估處理效果。表13用肉桂醛處理瓜蚜制劑每葉蚜蛹平均數(shù)CNMA(ppm)1,0006±33,0004±310,0001±1對(duì)照H2O33±11預(yù)先計(jì)數(shù)60*CNMA＝H2O中的肉桂醛(ppm)實(shí)施例17處理胡蜂科昆蟲(chóng)為測(cè)定該制劑的接觸活性，直接對(duì)試驗(yàn)昆蟲(chóng)噴施該制劑。移取處理昆蟲(chóng)并放于末處理陪替氏皿或管瓶中。試驗(yàn)了5種制劑和一種空白制劑，對(duì)于每種制劑和昆蟲(chóng)重復(fù)5次。在24和48小時(shí)記數(shù)死亡昆蟲(chóng)數(shù)。實(shí)施例18處理Dermoptera-歐洲蠼螋(Fofticulaaureculatia)為了測(cè)定該制劑的接觸活性，直接對(duì)試驗(yàn)蠼螋噴施本制劑。移取處理過(guò)的昆蟲(chóng)并放入未處理的陪替氏皿或管瓶中。試驗(yàn)使用了5種制劑和一種空白制劑，和一種負(fù)對(duì)照物(水)，對(duì)于每種制劑重復(fù)5次。在24和48小時(shí)記數(shù)死亡蠼螋數(shù)。實(shí)施例19肉桂醛和α-己基肉桂醛的殘留活性兩種不同實(shí)驗(yàn)表明肉桂醛(CNMA)和α-己基肉桂醛(AHCNMA)有殘留活性。在第一種實(shí)驗(yàn)中，將2ml兩種濃度的CNMA(0.3和1％)噴灑在濾紙上(Whatman)。作為負(fù)對(duì)照，也將2ml水噴灑在濾紙上。24小時(shí)后，將2ml水噴灑在處理和對(duì)照濾紙上，然后干燥30分鐘。大約引入了30只薊馬昆蟲(chóng)(Frankliniellaoccidentalis，苜蓿薊馬。1小時(shí)后觀察F.occidentalis數(shù)。對(duì)于每次處理計(jì)算平均死亡率。72小時(shí)后，翻動(dòng)處理濾紙，只對(duì)負(fù)對(duì)照濾紙和用1％CNMA處理過(guò)的濾紙噴灑2ml水，并使干燥30分鐘。向兩個(gè)處理過(guò)的濾紙引入大約30只薊馬，并觀察1小時(shí)后死亡的F.cocidentalis數(shù)，并對(duì)每次處理計(jì)算平均死亡率。用α-己基肉桂醛進(jìn)行類似分析。與未再水化的濾紙相比，隨時(shí)間的進(jìn)行，再水化濾紙的平均死亡率較高。這些實(shí)驗(yàn)證明再水化作用在接觸薊馬的處理過(guò)的濾紙的持續(xù)致死作用中起作用。連續(xù)暴露試驗(yàn)為了進(jìn)一步測(cè)定CNMA和AHCNMA的殘留活性，使昆蟲(chóng)宿居在兩片有代表性的表面。用玻璃代表無(wú)孔表面，用濾紙代表有孔表面。向?yàn)V紙皿(9cm)直徑的底部加入2ml每種活性成分五種不同濃度的制劑。作為對(duì)照，在試驗(yàn)前使沉積物干燥24小時(shí)。在實(shí)驗(yàn)第7，14，28和56天間隔時(shí)，用2ml水將一套皿和濾紙?jiān)偎?，而平行的一套未被水化。然后使昆蟲(chóng)持續(xù)地限制在沉積物處，并有序地記錄由沉積物殺死的昆蟲(chóng)數(shù)。如果沉積物在48小時(shí)間沒(méi)有殺死昆蟲(chóng)，這些處理就不用再進(jìn)行研究了。實(shí)施例20苜蓿薊馬評(píng)估了CNMA制劑抗苜蓿薊馬，F(xiàn)rankliniellaoccidentalis的劑量-致死率關(guān)系。三種不同劑量水平的CNMA制劑與只用水處理的情況相比較。用含有小型玫瑰葉的500ml通風(fēng)的紙板內(nèi)實(shí)驗(yàn)區(qū)進(jìn)行試驗(yàn)。F.occidentalis種群居留在菊花上，小型玫瑰是用于研究的薊馬的來(lái)源(U.C.Davis，DeportmentofEntomogy)。用實(shí)驗(yàn)室噴霧塔噴施三種活性成分劑量(0.1，0.3和1.0％)，校正到田間噴霧相當(dāng)于每英畝用所需劑量的113L。重復(fù)4次(每次處理有4種觀察值)，并比較各劑量。對(duì)于每次試驗(yàn)，處理紙片受到處理并保持在室溫下。觀察每次處理F.occidentalis隨時(shí)間的平均死亡率，并計(jì)算平均死亡率。表14給出了平均死亡率處理數(shù)據(jù)。實(shí)施例21處理長(zhǎng)角葉甲(DiabroticaLongicornis/D.virgifaris)這些玉米根蠕蟲(chóng)是北美玉米最具破壞性的昆蟲(chóng)害蟲(chóng)。在處理前用玉米根蠕蟲(chóng)侵襲來(lái)自Hebraska大學(xué)的栽于10cm直徑小盆中的溫室玉米植物。在噴灑藥物時(shí)，將植物小盆置于塑料袋中，從而使從葉噴灑流下來(lái)的化學(xué)物質(zhì)不浸入土壤中。用普通一升容積噴霧瓶噴灑至流溢。使植物在室外空氣風(fēng)干后再返回溫室。此后以周為時(shí)間間隔，從盆混合物中分離出根，并估計(jì)全部根蠕蟲(chóng)口數(shù)。表14肉桂醛(CNMA)濃度對(duì)薊馬隨時(shí)間的影響1時(shí)間2平均薊馬死亡率A3BCD16150.790.260.13016450.820.280.17017150.780.280.17018450.840.370.19022150.840.400.2501/向小容器中加入Whatmans紙加玫瑰葉。每次處理用2ml。在加入活薊馬前等5分鐘。2/記錄給樣品時(shí)間。3/A＝1.0％CNMAB＝0.3％CNMAC＝0.1％CNMAD＝對(duì)照物(只有水)實(shí)施例22控制棉鈴象甲(AnthonomusgrandisBoheman)為了測(cè)定本制劑的接觸活性，直接對(duì)棉鈴象甲噴施本制劑。移取處理過(guò)的昆蟲(chóng)并置于無(wú)菌的未處理的陪替氏皿或管瓶中。在試驗(yàn)處理中使用5種制劑和一種空白制劑。每種制劑重復(fù)5次試驗(yàn)。在24和48小時(shí)時(shí)計(jì)數(shù)死亡棉鈴象甲數(shù)。實(shí)施例23收獲后處理剪下的花1.處理剪下的花，使其在花瓶中的壽命延長(zhǎng)使用有表面活性劑的肉桂醛和α-己基肉桂醛的四種制劑的兩種濃度評(píng)估延長(zhǎng)收獲后剪下的花在花瓶中的壽命的效力。對(duì)剪下的玫瑰試驗(yàn)對(duì)細(xì)菌和生物孢塞的收獲后控制。將50枝剛剪摘的花分成處理和對(duì)照組(負(fù)對(duì)照和正對(duì)照)。負(fù)對(duì)照物是平行試驗(yàn)使用的去離子水，正對(duì)照物是OasisTM花保鮮劑。將各個(gè)處理過(guò)的或未處理的花置于有無(wú)菌瓶襯的Platex240ml小瓶中。在三周內(nèi)對(duì)花的質(zhì)量評(píng)級(jí)莖直度，莖強(qiáng)度，花大小，瓶中壽命，成熟均勻性。所有級(jí)別都是產(chǎn)業(yè)可接受標(biāo)準(zhǔn)。2.對(duì)剪下的花收獲后控制灰色葡萄孢(Botrytiscinerea)由BotrytiscinereaPersFr.引起的葡萄孢花期枯萎病是對(duì)于溫室生長(zhǎng)的玫瑰以及很多其它供剪花用植物和葡萄的一種分布廣泛且具破壞力的病害。將玫瑰花(RosaHybridL.)浸入處理溶液2-3秒，然后輕輕抖動(dòng)去除多余的溶液并使風(fēng)干。然后用分生孢子懸浮液(B.cinerea)用chromist噴霧裝置(GelmanScience，AnnArbor，MI)對(duì)花噴霧至流溢。未接種的花用去離子水噴灑，監(jiān)測(cè)自然感染。接種后，將玫瑰置于2℃的潮濕的貯存室中。接種后貯存7天后從室中取出玫瑰，并以每株花產(chǎn)生的損傷數(shù)來(lái)確定病害發(fā)生的數(shù)量。接著，在模擬消費(fèi)者的環(huán)境下，在21℃，每天用冷-白熒光燈(PAR＝32μE.M-2.S-1)照射12小時(shí)，進(jìn)行10天對(duì)玫瑰的評(píng)估(花瓶期壽命評(píng)估)。每天記錄鮮重和目測(cè)觀察。在10天期間如果B.Cinerea浸化了整個(gè)容器，使其破壞了莖，或者引起花瓣脫落，則放棄該玫瑰。實(shí)施例24控制蘋(píng)果蠹蛾，Cydiapomonella不同蘋(píng)果蠹蛾生長(zhǎng)期對(duì)類黃酮醛的靈敏性三種生長(zhǎng)期的蘋(píng)果蠹蛾在田間大致通過(guò)接觸或表面處理用殺昆蟲(chóng)劑處理進(jìn)入果實(shí)前的成蟲(chóng)，卵和新生幼蟲(chóng)。為優(yōu)化田間施用的時(shí)間，研究出這些生長(zhǎng)期的靈敏性曲線。A.卵的靈敏性1.殘留毒性在Potter噴霧塔中用不同濃度類黃酮醛制劑處理?xiàng)l狀粘附性塑料片(5×10cm)。殘留物干燥后使處理過(guò)的塑料長(zhǎng)片暴露于盒中的10-15對(duì)蠹蛾，使其產(chǎn)卵。24至48小時(shí)后，取出帶卵的長(zhǎng)片，保持25℃和60-70％相對(duì)濕度，在卵已在未處理的對(duì)照物中孵化以后評(píng)估卵的死亡率。該試驗(yàn)也可以用天然底物進(jìn)行，以測(cè)定果實(shí)(蘋(píng)果)或葉上的毒性。2.表面毒性在Potter噴霧塔中用不同濃度的類黃酮醛制劑處理塑料長(zhǎng)片或果實(shí)(蘋(píng)果)上的卵。如上評(píng)估卵的死亡率。用幼卵(白色階段)和接近孵化的卵(黑頭階段)進(jìn)行試驗(yàn)。B.新生幼蟲(chóng)的靈敏性使用Riedl等((1986)Agric.Ecosyst.Enuiron.16189-202)描述的幼蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)。在Potter噴霧塔中用不同濃度的類黃酮醛制劑處理蘋(píng)果。小明膠盒用蜂蠟固定在處理過(guò)的果實(shí)表面。然后將一個(gè)新生幼蟲(chóng)放到一個(gè)明膠小盒中。載有關(guān)入盒中的幼蟲(chóng)的蘋(píng)果在25℃和60-70％相對(duì)濕度下保存。7天后，取出小盒，評(píng)估幼蟲(chóng)死亡率和對(duì)果實(shí)的傷害(進(jìn)入，刺進(jìn))。用塑料陪替氏皿分析也能試驗(yàn)對(duì)新生幼蟲(chóng)的接觸活性。小陪替氏皿的內(nèi)表面在噴霧塔中被處理。在各種生長(zhǎng)期間將幼蟲(chóng)暴露給殘留物，然后轉(zhuǎn)移到未處理的人工喂食的小杯中。10天后測(cè)定死亡率。C.對(duì)成蟲(chóng)的毒性和亞致死作用在噴霧塔中用不同濃度的醛處理CO2麻醉的成蟲(chóng)。將處理過(guò)的雌雄對(duì)蛾放在小產(chǎn)卵盒中。比較處理過(guò)的和未處理的成蟲(chóng)產(chǎn)生的卵的生長(zhǎng)。另外，每24小時(shí)觀察處理過(guò)的和未處理的成蟲(chóng)死亡率，直到所有蛾死亡。實(shí)施例25控制SanJoseScale為了測(cè)定類黃酮醛制劑的接觸活性，直接對(duì)試驗(yàn)介殼蟲(chóng)噴施制劑。移取處理過(guò)的昆蟲(chóng)放入無(wú)菌的未處理過(guò)的陪替氏皿或管瓶中。在試驗(yàn)處理中使用五種制劑濃度和一種空白制劑，每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)5次。在24和48小時(shí)計(jì)數(shù)死亡昆蟲(chóng)數(shù)。實(shí)施例26控制粉蚧為了測(cè)定類黃酮醛制劑的接觸活性，直接對(duì)粉蚧噴施本制劑。移取處理過(guò)的昆蟲(chóng)放入無(wú)菌的未處理過(guò)的陪替氏皿或管形瓶中。在試驗(yàn)處理中使用五種制劑濃度和一種空白制劑，以于每種制劑重復(fù)五次試驗(yàn)。在24和48小時(shí)計(jì)數(shù)死亡昆蟲(chóng)數(shù)。實(shí)施例27含肉桂醛和皂草苷制劑的植物毒性和生物測(cè)定A.植物毒性試驗(yàn)對(duì)三種溫室植物進(jìn)行植物毒性試驗(yàn)，以測(cè)定用皂草苷作為表面活性助劑代替多乙氧基醚(例如吐溫)與CNMA的互容性。下面總結(jié)了測(cè)定結(jié)果1.Mini玫瑰(Sunburst)用三種處理應(yīng)用的每一種處理四株盆栽的minirose植物(Sunburst)0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷和只有水的對(duì)照物。在實(shí)驗(yàn)室中用噴霧塔對(duì)植物噴灑，所有植物噴灑至流溢。噴灑后，對(duì)植物觀察五天。2.菊花用0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷，或只用水對(duì)照物處理三株盆栽菊花的每一株。如上所述對(duì)植物噴灑。五天觀察期后，在葉或花瓣上沒(méi)有發(fā)現(xiàn)植物毒性，證明這些比例對(duì)于應(yīng)用來(lái)說(shuō)是安全的。3.一品紅用0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷，或只用水對(duì)照物處理兩株盆栽一品紅的每一株。五天觀察期后，高施用比例(0.5％CNMA，0.05％皂草苷)新長(zhǎng)的葉上觀察到植物毒性。較低比例(0.25％CNMA，0.025％皂草苷)新長(zhǎng)的葉上沒(méi)有觀察到癥狀，表明較低比例對(duì)于應(yīng)用是安全的。B.害蟲(chóng)生物測(cè)定1.棉紅蜘蛛將被大約相等數(shù)目的棉紅蜘蛛侵染的玫瑰葉置于底部放有Whatman紙的陪替氏皿中來(lái)測(cè)定棉紅蜘蛛。對(duì)于三種處理的每一種，對(duì)于有棉紅蜘蛛的四個(gè)陪替氏皿，對(duì)葉的兩面噴施本制劑0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷，和只有水的對(duì)照物。使處理過(guò)的棉紅蜘蛛放置24小時(shí)，然后數(shù)一數(shù)成活棉紅蜘蛛數(shù)并記錄。結(jié)果如下對(duì)照陪替氏皿(只用水)，53.25±15.57(平均值±SE)；0.25％CNMA，6.75±1.18；0.5％CNMA，0.75±0.48。這些結(jié)果表明CNMA加皂草苷對(duì)于直接噴施應(yīng)用具有高的抗棉紅蜘蛛效力。2.苜蓿薊馬將被大約相等數(shù)目薊馬侵染的玫瑰葉置于底部放有Whatman紙的陪替氏皿中來(lái)測(cè)定薊馬。對(duì)于三種處理的每一種，對(duì)有薊馬的四個(gè)陪替氏皿，對(duì)葉的兩面噴施0.5％CNMA加0.05％皂草苷，0.25％CNMA加0.025％皂草苷和只有水的對(duì)照物。使處理過(guò)的薊馬放置6小時(shí)，然后數(shù)一數(shù)死亡的薊馬數(shù)并記錄。結(jié)果如下對(duì)照陪替氏皿(只用水)，1.4％±0.85％(平均值±SE)；0.25％CNMA，53.2％±11.8；和0.5％CNMA，87.2％±2.79。這些結(jié)果表明，CNMA加皂草苷對(duì)于直接噴施應(yīng)用有高度抗薊馬效力。3.瓜蚜使用整株的未開(kāi)化的盆栽菊花植物測(cè)定瓜蚜。每種處理方案處理了兩株植物，取兩片葉作樣品，一片葉來(lái)自植物頂部，一片葉來(lái)自植物底部，來(lái)測(cè)定活的和死的瓜蚜數(shù)。使用的三種處理方案是1.0％CNMA加0.5％皂草苷，0.5％CNMA加0.25％皂草苷，和只有0.5％皂草苷。對(duì)整株植物噴藥使葉的正面和底面部接受了藥劑。結(jié)果以蚜蟲(chóng)死亡比例表示。結(jié)果如下對(duì)照植物(只用0.5％皂草苷)，14.8％±4.5；0.5％CNMA48.3±16.1；1.0％CNMA72.0％±11.2。這些結(jié)果表明CNMA在直接施用情況下能高度殺死蚜蟲(chóng)。實(shí)施例28控制草皮核盤(pán)菌屬元點(diǎn)病材料和方法在TexasAgriculturalExperimentStation-Dallas，Texas的苗圃草地上測(cè)定病害嚴(yán)重度數(shù)據(jù)。葦草草地由沙/泥土混合物(90∶10)組成。草地保持在0.4cm刈整高度，中等肥力和日照射量。在田間接種前大約2星期通過(guò)使S.homoecarpa在高壓滅菌的黑麥種上的強(qiáng)毒分離物生長(zhǎng)而制備種菌(SH-03)。在一隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)中選擇地塊，重復(fù)三次，大小為2.5×18ft(45ft2)。以大約20/ft2的密度手工播種感染的黑麥種子。以一周為時(shí)間間隔田間施用肉桂醛制劑A，B，和C，共施用4周(表15)。但是因?yàn)椴萜ぶ参锒拘苑磻?yīng)，將制劑D只施用1次。在田間接種感染黑麥種子之前施用制劑A，B，C和D。使用CO2壓力噴霧器(30psi)，噴施體積為7加侖/1000ft2。接種后對(duì)實(shí)驗(yàn)地塊全面澆水，不要刈草，使真菌定居。每一實(shí)驗(yàn)的接種區(qū)蓋以塑料薄膜以保持高濕度以利于加快病害的發(fā)展。接種后兩天通過(guò)目測(cè)真菌菌絲體自感染的黑麥種上的生長(zhǎng)而評(píng)價(jià)病害(0-4最大值)。每周也記錄一次所有田間地塊表現(xiàn)的目測(cè)病害等級(jí)，從最初施藥3周半開(kāi)始，持續(xù)到最后施藥后第4天。記錄地塊中自然病害發(fā)生的等級(jí)(0＝植物毒性；4＝?jīng)]有病害)，也記錄任何制劑的使用引起的植物毒性；0＝植物毒性，1＝嚴(yán)重病害，2＝中等病害，3＝輕微病害，4＝無(wú)病害。將數(shù)據(jù)用SASANOVA程序進(jìn)行ANOVA分析，以評(píng)價(jià)處理方法的統(tǒng)計(jì)含義(1)。當(dāng)測(cè)定到不同結(jié)果時(shí)，用Duncan多范圍比較試驗(yàn)(p＞.05)得處理的平均值。表15制劑TurfKeyCNMA1T802A1.00.2B0.50.1C0.10.1D2.00.31CNMA＝肉桂醛(％)。2T80＝吐溫80(％)。結(jié)論使用兩種不同方法評(píng)估處理地塊元點(diǎn)病的抑制情況。評(píng)估方法包括1)自然病害突發(fā)方法，和2)田間接種方法。田間接種技術(shù)被認(rèn)為是病害壓力的嚴(yán)重形式。進(jìn)行田間接種至大約病害的自然狀況，考慮到自然病害突發(fā)感染的自然接種輸入。使用田間接種法評(píng)估殺真菌劑Daconil2787。使用該方法每日接種，連續(xù)10天，施用殺真菌劑后檢測(cè)8天殺真菌劑。該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定氣候條件和培植條件如肥力水平，草地剪切情況，包括剪刈高度和頻度等怎樣快或慢地對(duì)殺真菌噴霧方案施以“非”的影響。對(duì)于兩種評(píng)價(jià)方法，與未處理的對(duì)照面積相比較，觀察到用所有試驗(yàn)制劑(A，B，C和D)的病害控制。對(duì)元點(diǎn)病自然突發(fā)的控制在用于評(píng)估自然病害抑制的試驗(yàn)地塊中觀察所有試驗(yàn)制劑對(duì)元點(diǎn)病病害的控制。實(shí)驗(yàn)評(píng)估期始終在未處理對(duì)照地塊發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重病害壓力。用肉桂醛制劑D處理給出最初的植物毒性反應(yīng)，這由應(yīng)用處理48小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)的整個(gè)葉片輕微變黃的癥狀所證實(shí)。在評(píng)估的每一日期，試驗(yàn)制劑肉桂醛制劑A，B，C和D對(duì)病害的控制要比未處理的對(duì)照地塊要好。對(duì)人工接種后發(fā)生的元點(diǎn)病的控制觀察所有用于評(píng)估人工接種試驗(yàn)地塊的試驗(yàn)肉桂醛制劑對(duì)元點(diǎn)病的控制(參見(jiàn)表16)。實(shí)驗(yàn)始終，未處理的接種的對(duì)照地塊給出嚴(yán)重病害等級(jí)，接種后48小時(shí)自接種點(diǎn)的平均菌絲體生長(zhǎng)為2.0cm直徑或更大。肉桂醛制劑D證明了元點(diǎn)病的控制，但其應(yīng)用是不持續(xù)的以避免對(duì)實(shí)驗(yàn)葦草草地的任何永久性植物毒性損傷。出人意料的是11月8日后評(píng)估的結(jié)果受天氣變冷的影響。32次每周平均病害等級(jí)處理的統(tǒng)計(jì)釋析表明試驗(yàn)制劑A，B和C比未處理對(duì)照物優(yōu)越，且在不冷氣候日期極少發(fā)生害病。制劑A，B和C處理在所有四個(gè)觀察日所有統(tǒng)計(jì)結(jié)果相同。上述結(jié)果表明，試驗(yàn)制劑A，B和C在田間地塊接種條件下，在存在自然病害突發(fā)的地方，對(duì)抗元點(diǎn)病葉枯萎有效。對(duì)于控制元點(diǎn)病自然入侵的另外的觀察也證明所有四種試驗(yàn)制劑A，B，C和D控制病害。這些結(jié)果出人意料地給出肉桂醛制劑控制元點(diǎn)病病害的水平和持久性。表16對(duì)于“Penncross”葦草草地上核盤(pán)菌元點(diǎn)病的制劑草皮施藥時(shí)間間隔和病害控制測(cè)定a/使用手動(dòng)噴桿，用CO2壓力噴霧器30psi，每周一次進(jìn)行噴藥。b/所有施藥都是每周一次，只有制劑D除外，其由于草皮植物毒性而只施藥一次。c/以直觀的等級(jí)將病害觀測(cè)分為等級(jí)0-4；0＝無(wú)病害，1＝真菌開(kāi)始生長(zhǎng)，2＝真菌生長(zhǎng)0.5cm，3＝真菌生長(zhǎng)出1cm，4＝真菌生長(zhǎng)出＞1cm。d/后面接有相同字母的每一欄內(nèi)的平均值不是明顯不同的(p＞0.05；DuncansNewMultipleRangeTest)。e/對(duì)于制劑情況參見(jiàn)表15實(shí)施例29地草皮腐霉屬枯萎病的控制用環(huán)境艙研究測(cè)定病害嚴(yán)重度數(shù)據(jù)，從位于TexasAgriculturalExperimentStation-Dallas，Texas的葦草草地取一塊草皮(7cm直徑)進(jìn)行研究。該葦草草地由沙/泥土(90∶10)組成，并保持在0.4cm剪刈高度，中度肥力和日照射，在隨機(jī)地塊設(shè)計(jì)中選定地塊，重復(fù)三次，大小為2.5×13ft(32.5ft2)。用田間地塊(7cm直徑)對(duì)環(huán)境艙接種前4天施用肉桂醛制劑A，B，C和D(表15)和正對(duì)照物AleietteTM(4oz)。用CO2加壓的噴霧器(30psi)施加制劑，以根據(jù)廠商說(shuō)明的比例以7加侖/1000ft2的體積施藥。菌種P#24在無(wú)菌水瓊脂上生長(zhǎng)3天用于環(huán)境艙的研究。環(huán)境艙研究使用3次用在水瓊脂上生長(zhǎng)的病原體P#24接種的葦草塊。每一葦草塊用含病原體的1cm水瓊脂孢塞在其中央接種。在病害測(cè)定之前葦草塊放入光照入的環(huán)境艙中，在28℃保持4天。對(duì)草塊每日澆水保證最佳病害壓力所需的高濕度環(huán)境。4天后對(duì)環(huán)境艙研究進(jìn)行病害測(cè)定，通過(guò)菌絲體擴(kuò)散(cm，直徑)來(lái)確定病害傳播。使用SASANOVA程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA分析，以評(píng)估處理方法的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。如果檢測(cè)到明顯不同，則用Duncan多范圍比較試驗(yàn)(p＞0.05)來(lái)釋析處理平均值。每一種肉桂醛制劑A，B，C和D在環(huán)境艙中都控制了腐霉屬枯萎病(表17)。相反，未處理的接種的對(duì)照物在實(shí)驗(yàn)始終都有嚴(yán)重病害等級(jí)，接種后48小時(shí)自接種點(diǎn)的平均菌絲體生長(zhǎng)出5.0cm或更大(表17)。一次施用肉桂醛制劑D呈現(xiàn)出對(duì)處理過(guò)的葦草的植物毒性，有葉子變黃的癥狀且阻礙生長(zhǎng)，因此只施用一次制劑D。上述結(jié)果表明肉桂醛制劑A，B和C在處理后有效4周。這些結(jié)果出人意料地給出了病害控制的水平和持久性，特別是與在四星期研究期間每周噴施標(biāo)準(zhǔn)殺真菌劑Aliette和oz的情況相比較的時(shí)候。表17對(duì)于“Penncross”葦草草地上環(huán)境艙接種的腐霉枯萎病的制劑草皮施藥時(shí)間間隔和病害控制測(cè)定a/使用手動(dòng)噴桿，用CO2加壓的噴霧器(30psi)進(jìn)行噴藥。b/所有應(yīng)用都是每周噴藥一次，只有ProGuardD除外，其因?yàn)橛胁萜ぶ参锒拘苑磻?yīng)而只噴一次。c/以直觀的0-4等級(jí)將在以cm記的方圓7cm直徑大小的草皮塊中測(cè)得的病害觀察分為等綠；0＝無(wú)病害，1＝真菌開(kāi)始生長(zhǎng)，2＝真菌生長(zhǎng)0.5cm，3＝真菌長(zhǎng)出1cm，4＝真菌長(zhǎng)出＞1cm。d/后面接有相同字母的每一欄內(nèi)的平均值不是明顯不同(p＞0.05)；DuncansNewMultipleRangeTest)。e/制劑組成參見(jiàn)表15。實(shí)施例30對(duì)草皮絲核菌枯萎病的控制在TexasAgriculturalExperimentStation-Dallas，Texas的苗圃草地上測(cè)定病害嚴(yán)重性數(shù)據(jù)。葦草草地由砂/泥土混合物(90∶10)組成。草地保持在0.4cm剪刈高度，中等肥力和日照量。在田間接種前大約5天使茄屬絲核菌(Rhizoctoniasolani)在高壓滅菌的黑麥種上的強(qiáng)毒分離物生長(zhǎng)而制備菌種(R#31)。在一隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)中選擇地塊，重復(fù)三次，大小為2.5×18ft(45ft2)。以大約20粒/ft2的密度手工播種感染的黑麥種。開(kāi)始田間施周每種殺真菌劑并持續(xù)3周。根據(jù)廠商說(shuō)明確定Daconil6.0oz正對(duì)照物的噴施間隔。肉桂醛A，B，C和D制劑(參見(jiàn)表15)是每周施用一次(只有D是共施用一次)，而Daconil6.0oz是每14天施用一次。所有制劑是在田間接種感染黑麥種之前4天施用。用CO2加壓的噴霧器(30psi)對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)全面澆水，不要刈草，使真菌定居。每一實(shí)驗(yàn)的接種區(qū)蓋以塑料薄膜以保證高濕度以利于加快病害發(fā)展。接種后兩天，通過(guò)目測(cè)真菌菌絲體自感染的黑麥種上生長(zhǎng)而進(jìn)行病害測(cè)定(0-4最大值)；0＝無(wú)病害，1＝菌絲體開(kāi)始生長(zhǎng)，2＝0.5cm生長(zhǎng)，3＝1cm生長(zhǎng)，4＝＞1cm的生長(zhǎng)。用SASANOVA程度使數(shù)據(jù)進(jìn)行ANOVA分析以評(píng)價(jià)處理方法的統(tǒng)計(jì)結(jié)果。如果檢測(cè)到不同，則用Duncan多范圍比較試驗(yàn)(p＞0.05)釋析處理平均值。觀察用所有試驗(yàn)肉桂醛制劑在用于病害抑制評(píng)估的接種試驗(yàn)小區(qū)中對(duì)絲核菌枯萎病的控制(參見(jiàn)表18)。未處理的接種的對(duì)照物在實(shí)驗(yàn)始終都顯現(xiàn)嚴(yán)重的病害等級(jí)。接種后48小時(shí)自接種點(diǎn)生長(zhǎng)出的平均菌絲體大小為2.8cm直徑或更大。一次施用制劑D后觀察到植物毒性，因此其施藥是不連續(xù)的。上面的結(jié)果證明制劑B和C無(wú)植物毒性，并且在接種田間試驗(yàn)中，其有與Daconil6oz可比的控制葦草絲核菌枯萎病的活性。這些結(jié)果出人意料地給出觀察到的制劑B和C控制病害的水平和持久性，其至少與Danonil6.0oz相當(dāng)。表18對(duì)于“Penncross”葦草絲核菌枯萎病的制劑草皮施藥間隔和病害控制測(cè)定</tables>a/用手動(dòng)噴桿用CO2加壓的噴霧器(30psi)進(jìn)行噴藥。b/以7天間隔在第7天施藥，共施藥4次。以14天間隔在第14天施藥，共施藥2次。*指處理對(duì)草皮有植物毒性，只施藥一次。c/以直觀的0-4等級(jí)將病害測(cè)定分為等級(jí)；0＝無(wú)病害，1＝真菌開(kāi)始生長(zhǎng)，2＝真菌長(zhǎng)出0.5cm，3＝真菌長(zhǎng)出1cm，4＝真菌長(zhǎng)出＞1cm。d/后面接有相同字母的每一欄中的平均值不是明顯不同的(p＞0.05；DuncansNewMultipleRangeTest)。e/每制劑組成參見(jiàn)表15。實(shí)施例31在轉(zhuǎn)基因植物中大量生產(chǎn)類黃酮醛從產(chǎn)生肉桂醛的植物組織中制備20μg聚腺苷酸化RNA，并合成出cDNA。其中一部分克隆到λ-ZAPII載體(這是一種可商購(gòu)的克隆載體)中，用寡核苷酸探針篩選至少500000個(gè)重組體，所用探針從由基因庫(kù)中的克隆的CA4H和CAD的保守序列設(shè)計(jì)，或者從來(lái)自想要的宿主植物的純化的蛋白質(zhì)的肽序列設(shè)計(jì)。選擇強(qiáng)雜交克隆，并用來(lái)再篩選cDNA庫(kù)。對(duì)所得克隆進(jìn)行序列測(cè)定，以使在有義或反義方面向植物表達(dá)彈夾引入適合的基因序列。根據(jù)已公開(kāi)的方法，通過(guò)直接轉(zhuǎn)化將反義和有義構(gòu)建引入到根癌土壤桿菌LBA4404中。用已經(jīng)完整建立起的公開(kāi)的方法(Horsch等(1985)，科學(xué)，2271229-1231轉(zhuǎn)化煙草(N.tabacum變種Samsun)葉片。包含CA4H或CAD構(gòu)建的植物用PCR或雜交鑒定，并挑選出來(lái)用作進(jìn)一步分析。來(lái)自轉(zhuǎn)化的各未轉(zhuǎn)化的對(duì)照植物的植物材料被用來(lái)用已經(jīng)完整建立起的公開(kāi)的方法測(cè)定CA4H和CAD酶活性。CA4H或CAD的活性已減小到少于對(duì)照植物活性的20％的植物被挑選出來(lái)用于進(jìn)一步分析。挑選的具有低CA4H活性的植物與具有低CAD活性的植物雜交，且用PCR選擇遺傳兩個(gè)基因構(gòu)建的子代。用標(biāo)準(zhǔn)的公開(kāi)的方法對(duì)有抑制的CA4H和抑制的CAD活性的植物進(jìn)行類黃酮產(chǎn)生的分析。實(shí)施例32在微生物體系中產(chǎn)生類黃酮醛用從六周齡煙草莖中提取的RNA產(chǎn)生cDNA庫(kù)。制備20μg聚腺苷酸化RNA并合成出cDNA。其中一部分亞克隆到λ-ZAPII載體(一種可商購(gòu)克隆載體)中。用寡核苷酸探針篩選至少500000個(gè)重組體，所用探針由用Goffner等，植物生理(1994)106625中的方法從六周齡煙草莖組織中純化出的CCoAr蛋白的肽序列設(shè)計(jì)。挑選強(qiáng)雜交克隆，并用來(lái)再次篩選cDNA庫(kù)。對(duì)所得克隆序列測(cè)定，使能鑒別全長(zhǎng)cDNA插入物并將合適的CCoAR基因序列引入到酵母表達(dá)載體pMTL8110中(Faulkner等，(1994)，基因，14313-20)。類似地將類酵母紅冬孢(Rhodosporidiumtoruloides苯丙氨酸解氨酶的編碼序列(PAL；基因庫(kù)位置RHDPAL)和歐芹4-香豆酯CoAl連接酶的編碼序列(4CL；基因庫(kù)位置PC4CL1AA)引入到相同的酵母表達(dá)載體中。用PAL，4CL和CCoAR構(gòu)建，用已建立的公開(kāi)的方法通過(guò)電穿孔轉(zhuǎn)化啤酒糖酵母(Saccharomycescerevisiae)菌株(Becker和Guarente，酶學(xué)方法(MethodsinEnzymology)194182-187，1991；Simon，(1993)，酶學(xué)方法217478-483)。在沒(méi)有亮氨酸的少量培養(yǎng)基上選擇轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。用PCR鑒定攜有所有三種基因構(gòu)建的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物菌株，并挑選出來(lái)用作進(jìn)一步分析。用轉(zhuǎn)化的和未轉(zhuǎn)化的對(duì)照菌株的提取物，用已完整建立的公開(kāi)的分析方法，測(cè)定PAL，4CL和CCoAR酶活性。選擇那些PAL，4CL和CCoAR活性明顯大于在對(duì)照菌株中檢測(cè)到的背景活性的菌株進(jìn)行進(jìn)一步的分析。用標(biāo)準(zhǔn)的公開(kāi)的方法對(duì)選擇的菌株分析類黃酮醛的產(chǎn)生。選擇那些產(chǎn)生明顯量的肉桂醛的菌株作為優(yōu)化的發(fā)酵條件。實(shí)施例33構(gòu)建產(chǎn)生HCA的酵母菌株如下構(gòu)建含有肉桂醛(CNMA)生物合成所必需的酶的酵母菌株，如啤酒糖酵母。首先按照Faulkener等(1994)基因14313020的說(shuō)明將菌株經(jīng)基因工程處理為高水平表達(dá)PAL。植物肉桂酸4-羥基酶基因也被操作連接到合適的調(diào)控信號(hào)上，并插入到菌株中(參見(jiàn)Urban等，(1994)，歐洲生物化學(xué)雜志(Eur.J.Biochem.222843-850)。通過(guò)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)基因克隆技術(shù)獲得肉桂醛CoA還原酶(CCoAR)來(lái)分離用作探針(從已經(jīng)由幾種植物源中純化和部分表征的純化的蛋白質(zhì)部分氨基酸序列衍生的核苷酸序列)的cDNA克隆。該CCoAR基因也連接到在酵母中可操作的調(diào)控信號(hào)上，并插入到酵母菌株中。然后如下克隆催化CNMA至HCA轉(zhuǎn)化的酶的編碼基因。在酵母表達(dá)載體中用從稻植物得到的mRNA構(gòu)建cDNA庫(kù)。然后將該cDNA庫(kù)轉(zhuǎn)化到事先已構(gòu)建的酵母菌株中，并用存在于表達(dá)載體上的選擇標(biāo)記選擇轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。為了鑒定那些產(chǎn)生HCA的酵母菌株，將轉(zhuǎn)化物轉(zhuǎn)移到含有酵母生長(zhǎng)培養(yǎng)瓊脂的微量滴定孔中。然后將微量滴定平板放在含有蚤的艙中，蚤對(duì)HCA敏感而對(duì)CNMA不敏感。將來(lái)自與含未處理對(duì)照酵母菌株的孔相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)上明顯更多死亡蚤數(shù)目的孔中的酵母菌株稀釋，并再放入微量滴定板上，此值重復(fù)篩選過(guò)程，得到自單一轉(zhuǎn)化酵母細(xì)胞衍生的菌落。對(duì)具有提高的蚤死亡率的單一細(xì)胞衍生的菌落，通過(guò)氣液層析(GLC)，使用一個(gè)30米非極性聚二甲基硅氧烷毛細(xì)柱(例如HP-1，Hewlett-Packard，或SPB-1，Sapelco)和火焰電離檢測(cè)器，分析HCA的產(chǎn)生。使用氦氣作為載體氣體(8ml/分鐘)，柱溫大約240℃，(E)-順式異構(gòu)體(主成分)保留時(shí)間大約為6.0分鐘，(Z)-反式異構(gòu)體(小成分)保留時(shí)間大約為6.3分鐘。從產(chǎn)生HCA的菌落分離表達(dá)載體DNA，并對(duì)插入物測(cè)序，得到核苷酸序列，并推導(dǎo)出催化CNMA轉(zhuǎn)化為HCA的酶的氨基酸序列。實(shí)施例34構(gòu)建產(chǎn)生HCA的轉(zhuǎn)基因植物通過(guò)轉(zhuǎn)座子突變從稻植物克隆催化肉桂醛(CNMA)轉(zhuǎn)化為α-己基肉桂醛(HCA)的酶的編碼基因。用克隆載體轉(zhuǎn)化稻原生質(zhì)體，該克隆載體含有插入到潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(hygB)基因中從而破壞hygB基因編碼序列的玉米AC轉(zhuǎn)座子因子(參見(jiàn)，例如，Izawa等，(1991)Mol.Gen.Genet.227391-396；Murai等，(1991)，核酸研究(Nucl.Acids.Res.19617-622)。轉(zhuǎn)化的原生質(zhì)體置于含有足夠量的潮霉素B以防止非潮霉素抗性原生質(zhì)體再生的生長(zhǎng)培養(yǎng)基瓊脂板上。其中AC轉(zhuǎn)座子因子已從hygB基因跳躍到稻基因組中的原生質(zhì)體對(duì)潮霉素B有抗性，因此再生生成胼胝體組織。植物從潮霉素抗性胼胝體組織再生(參見(jiàn)Izawa等，上文)。如前面實(shí)施例說(shuō)明的對(duì)再生的稻植物分析存在或不存在CNMA和HCA。產(chǎn)生CNMA但不產(chǎn)生HCA的植物可能帶有插入到HCA生物合成基因中的AC轉(zhuǎn)座子。從CNMA+/HCA-突變體分離基因組DNA并與標(biāo)記的轉(zhuǎn)座子DNA雜交。與轉(zhuǎn)座子DNA探針雜交的片段亞克隆到合適的克隆載體用于制圖和序列分析。該HCA生物合成基因鑒定為因插入已知序列的AC轉(zhuǎn)座子而被破壞的開(kāi)放讀框。該基因的一個(gè)片段被用來(lái)探測(cè)分離相應(yīng)的cDNA的cDNA庫(kù)。HCA生物合成酶的cDNA被插入到表達(dá)載體中，與強(qiáng)表達(dá)的啟動(dòng)子操作連接，該啟動(dòng)子在植物中起作用，該植物希望對(duì)害蟲(chóng)有抗性。該表達(dá)載體用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的轉(zhuǎn)化方法被插入到所述植物中。按照上文實(shí)施例33的說(shuō)明對(duì)轉(zhuǎn)基因植物分析HCA的產(chǎn)生和/或排斥力或抗害蟲(chóng)的除害蟲(chóng)活性。這些實(shí)施例證明本發(fā)明類黃酮醛制劑和方法對(duì)于處理和/或防止植物被多種害蟲(chóng)生物侵襲是有用的。例如，這些實(shí)驗(yàn)證明，這些制劑能有效處理玫瑰白粉病，銹病，和蚜蟲(chóng)侵害，有效處理葡萄的葡萄瘤蚜侵害(該制劑在葡萄瘤蚜的卵、蛹和成蟲(chóng)生長(zhǎng)期有效)。這些制劑也顯示出抗害蟲(chóng)的有效性，如棉紅蜘蛛，蚜蟲(chóng)，白蠅，線蟲(chóng)，和薊馬。該制劑也對(duì)抗真菌病原體有效，如Fusariumsubglutinans，灰色葡萄孢，對(duì)草皮病原體有效，如核盤(pán)菌元點(diǎn)病，絲核菌枯萎病，腐霉菌枯萎病。本說(shuō)明書(shū)中提到的所有出版物和專利申請(qǐng)表明與本發(fā)明有關(guān)的本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平。盡管每一出版物或?qū)＠暾?qǐng)具體地個(gè)別地指明作為參考，所有出版物和專利申請(qǐng)?jiān)谶@里同樣引入作為參考。已經(jīng)完整地描述了本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)顯然可以在不超出后面的權(quán)利要求書(shū)的精神或范圍的情況下作出很多變化和改變。權(quán)利要求書(shū)按照條約第19條的修改1.一種控制病原生物體在植物上生長(zhǎng)的方法，其中對(duì)植物表面提供有效病原生物體生長(zhǎng)控制量的至少一種根據(jù)下面結(jié)構(gòu)式的化合物其是R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，和R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，其中所述量對(duì)所述植物無(wú)植物毒性，并且其中除式(2)化合物外沒(méi)有其它的抗氧化劑。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述植物與含有0.01-50g/L一種或幾種權(quán)利要求1的化合物的水制劑相接觸。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中R1代表-CHO，R2代表-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，和R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。4.權(quán)利要求1或2的方法，其中R1代表-CHO，R2和R3代表H，和R4代表-(CH2)5-CH3。5.根據(jù)前面的權(quán)利要求的任一方法，其中植物物種是玫瑰，葡萄，蘋(píng)果，桃，草皮，松樹(shù)或棉花物種。6.權(quán)利要求1-5的任一方法，其中病原生物體包括至少一種真菌，細(xì)菌，線蟲(chóng)，藻，昆蟲(chóng)和蜘蛛綱動(dòng)物。7.權(quán)利要求5和6的方法，其中病原生物體是引起白粉病，銹病，葡萄孢，pitchcanker，核盤(pán)菌元點(diǎn)病，腐霉菌枯萎病，和絲核菌枯萎病的真菌。8.權(quán)利要求1-6的任一方法，其中病原生物體是至少一種蚜蟲(chóng)，葉蟬，卷葉蟲(chóng)，莖和鱗莖線蟲(chóng)，葡萄瘤蚜，蘭-綠草藻，蘋(píng)果蠹蛾和薊馬。9.權(quán)利要求1-3，和5-8的任一方法，其中至少一種化合物是肉桂醛或松柏醛。10.一種用于前述權(quán)利要求的任一方法中的含水組合物，含有0.0150g/L一種或幾種下式化合物其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表氫或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，所述組合物除該結(jié)構(gòu)化合物外不含其它抗氧化劑。11.權(quán)利要求10的組合物，其中R1代表-CHO，R2和R3代表H，R4代表-(CH2)5-CH3。12.權(quán)利要求10的組合物，其中R1代表-CHO，R2代表-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表-H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。13.權(quán)利要求10的組合物，其中至少一種化合物是肉桂醛或松柏醛。14.權(quán)利要求10-13的任一組合物控制病原生物體在植物上生長(zhǎng)的用途。15.一種誘發(fā)植物對(duì)病原生物體抗性的方法，其中所述植物與一定量的至少一種下式化合物接觸其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，其中所述量足以誘發(fā)對(duì)所述病原生物體的系統(tǒng)抗性。16.一種用于權(quán)利要求15的方法中的組合物，包括含有至少一種下式化合物的含水制劑其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含有1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，其中該化合物的含量是誘發(fā)所述系統(tǒng)抗性的有效量，而且所述制劑除該式化合物外沒(méi)有其它抗氧化劑。17.權(quán)利要求10-13或16的組合物在誘發(fā)植物抗病原生物體系統(tǒng)抗性中的用途。18.一種含有病原體生長(zhǎng)調(diào)節(jié)量的一種或幾種下式化合物的組合物其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含有1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，該組合物含有農(nóng)業(yè)可容性載體，所述組合物提供大約70％或更高的抗至少一種定居在一種或幾種植物表面上的病原生物體的平均病害抗性。19.權(quán)利要求18的組合物，其中所述農(nóng)業(yè)可容性載體是一種含水乳液。20.權(quán)利要求19的組合物，其中所述乳液是用足夠量的一種表面活性劑來(lái)生成所述乳液而制備的。21.權(quán)利要求20的組合物，其中所述表面活性劑是皂草苷。22.權(quán)利要求10-13，16或18的組合物提供大約70％或更高抗至少一種定居在一種或幾種植物表面上的病原生物體的平均病害抗性的用途。23.用權(quán)利要求1-9的任一方法獲得的基本上無(wú)真菌的種子和植物。24.通過(guò)使所述種子和植物與權(quán)利要求18的組合物接觸而得到的基本上沒(méi)有真菌的種子和植物。25.一種篩選植物病原體對(duì)于下式真菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)自然產(chǎn)物的敏感性的方法其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH，或含1-10碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，所述方法包括使所述植物病原體與真菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)自然產(chǎn)物接觸；并測(cè)定所述天然產(chǎn)物作為真菌病原體的效力。權(quán)利要求1.一種控制病原生物體在植物上生長(zhǎng)的方法，其中對(duì)植物表面提供病原生物體生長(zhǎng)控制有效量的至少一種根據(jù)下面結(jié)構(gòu)式的化合物其是R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，其中所述量對(duì)所述植物無(wú)植物毒性，并且其中除式(I)化合物外沒(méi)有其它的抗氧化劑。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述植物與含有0.01-50g/L一種或幾種權(quán)利要求1的化合物的水制劑相接觸。3.權(quán)利要求1或2的方法，其中R1代表-CHO，R2代表-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，和R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。4.權(quán)利要求1或2的方法，其中R1代表-CHO，R2和R3代表H，和R4代表-(CH2)5-CH3。5.根據(jù)前面的權(quán)利要求的任一方法，其中植物物種是玫瑰，葡萄，蘋(píng)果，桃，草皮，松樹(shù)或棉花物種。6.權(quán)利要求1-5的任一方法，其中病原生物體包括至少一種真菌，細(xì)菌，線蟲(chóng)，藻，昆蟲(chóng)和蜘蛛綱動(dòng)物。7.權(quán)利要求5和6的方法，其中病原生物體是引起白粉病，銹病，葡萄孢，pitchcanker，核盤(pán)菌元點(diǎn)病，腐霉菌枯萎病，和絲核菌枯萎病的真菌。8.權(quán)利要求1-6的任一方法，其中病原生物體是至少一種蚜蟲(chóng)，葉蟬，卷葉蟲(chóng)，莖和鱗莖線蟲(chóng)，葡萄瘤蚜，蘭-綠草藻，蘋(píng)果蠹蛾和薊馬。9.權(quán)利要求1-3，和5-8的任一方法，其中至少一種化合物是肉桂醛或松柏醛。10.一種用于前述權(quán)利要求的任一方法中的含水組合物，含有0.01-50g/L一種或幾種下式化合物其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表氫或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，所述組合物除該結(jié)構(gòu)化合物外不含其它抗氧化劑。11.權(quán)利要求10的組合物，其中R1代表-CHO，R2和R3代表H，R4代表-(CH2)5-CH3。12.權(quán)利要求10的組合物，其中R1代表-CHO，R2代表-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表-H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基。13.權(quán)利要求10的組合物，其中至少一種化合物是肉桂醛或松柏醛。14.權(quán)利要求10-13的任一組合物控制病原生物體在植物上生長(zhǎng)的用途。15.一種誘發(fā)植物對(duì)病原生物體抗性的方法，其中所述植物與一定量的至少一種下式化合物接觸其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，其中所述量足以誘發(fā)對(duì)所述病原生物體的系統(tǒng)抗性。16.一種用于權(quán)利要求15的方法中的組合物，包括含有至少一種下式化合物的含水制劑其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含有1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，其中該化合物的含量是誘發(fā)所述系統(tǒng)抗性的有效量，而且所述制劑除該式化合物外沒(méi)有其它抗氧化劑。17.權(quán)利要求10-13或16的組合物在誘發(fā)植物抗病原生物體系統(tǒng)抗性中的用途。18.一種含有病原體生長(zhǎng)調(diào)節(jié)量的一種或幾種下式化合物的組合物其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH或含有1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，該組合物含有農(nóng)業(yè)可容性載體，所述組合物提供大約70％或更高的抗至少一種定居在一種或幾種植物表面上的病原生物體的平均病害抗性。19.權(quán)利要求18的組合物，其中所述農(nóng)業(yè)可容性載體是一種含水乳液。20.權(quán)利要求19的組合物，其中所述乳液是用足夠量的一種表面活性劑來(lái)生成所述乳液而制備的。21.權(quán)利要求20的組合物，其中所述表面活性劑是皂草苷。22.權(quán)利要求10-13，16或18的組合物提供大約70％或更高抗至少一種定居在一種或幾種植物表面上的病原生物體的平均病害抗性的用途。23.用權(quán)利要求1-9的任一方法獲得的基本上無(wú)真菌的種子和植物。24.通過(guò)使所述種子和植物與權(quán)利要求18的組合物接觸而得到的基本上沒(méi)有真菌的種子和植物。25.一種篩選植物病原體對(duì)于下式真菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)自然產(chǎn)物的敏感性的方法其中R1代表-CHO，R2代表H，-OH，或含1-10碳原子的有機(jī)取代基，R3代表H，-O-CH3或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，R4代表H或含1-10個(gè)碳原子的有機(jī)取代基，所述方法包括使所述植物病原體與真菌生長(zhǎng)調(diào)節(jié)自然產(chǎn)物接觸；并測(cè)定所述天然產(chǎn)物作為真菌病原體的效力。全文摘要提供了以天然類黃酮醛類為基礎(chǔ)的方法和組合物,包括肉桂醛,α－己基肉桂醛,和松柏醛,發(fā)現(xiàn)了其作為農(nóng)藥的用途。該組合物在對(duì)所處理的宿主植物無(wú)植物毒性的濃度下有效抗病原性真菌,蜘蛛綱和昆蟲(chóng)?？梢蕴幚砀鞣N植物部分的侵染,包括對(duì)葉、種子、籽苗、果實(shí)、花和根的侵害。敏感的生物體包括銹菌,白粉菌,葡萄孢,葡萄瘤蚜,薊馬,蘋(píng)果蠹蟲(chóng),線蟲(chóng)和葉蟬。文檔編號(hào)A01N35/02GK1176576SQ95197715公開(kāi)日1998年3月18日申請(qǐng)日期1995年12月29日優(yōu)先權(quán)日1994年12月30日發(fā)明者R·W·愛(ài)默生,小·B·G·克蘭德?tīng)柹暾?qǐng)人:普羅嘉德公司