本發(fā)明涉及一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，特別是一種增殖率高的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
：鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤(rùn)喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內(nèi)障等方面均有良好療效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鐵皮石斛對(duì)非特異性及特異性免疫均有增強(qiáng)作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內(nèi)障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學(xué)成分較復(fù)雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯(lián)芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。石斛堿型倍半萜類生物堿為石斛屬植物特有，其中石斛堿是最早發(fā)現(xiàn)，研究最多的生物堿；金釵石斛堿與非甾體類抗炎藥藥理作用相似，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、擴(kuò)張血管等作用。目前，利用組培技術(shù)對(duì)鐵皮石斛在種質(zhì)保存和快速繁殖方面已取得一定成就，但優(yōu)良品種經(jīng)數(shù)次繼代或因激素使用不當(dāng)、培養(yǎng)環(huán)境等因素，增殖率及低。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的，是提供一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，本發(fā)明方法對(duì)鐵皮石斛進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，增殖率高達(dá)358.5％，幼苗長(zhǎng)勢(shì)好。本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的。一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)50-60天，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述生根培養(yǎng)基按重量份計(jì)算主要由黃蓮5-15份、白芍10-20份、血竭5-15份、三七10-20份、生姜5-15份、茯苓5-15份、蛋白胨1-10份、土豆1-10份、馬鈴薯1-5份和黃豆5-15份制成。前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述生根培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由黃蓮10份、白芍15份、血竭10份、三七15份、生姜10份、茯苓10份、蛋白胨5份、土豆5份、馬鈴薯3份和黃豆10份制成。前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述生根培養(yǎng)基按下述步驟進(jìn)行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16-18倍量水煎煮5-6h后，過(guò)濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入5-6倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌5-10min后，冷卻至5-10℃，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述幼苗培養(yǎng)基按重量份計(jì)算主要由熟玉米泥10-20份、山藥泥10-20份、芋頭泥10-20份、瓊脂1-5份和中藥渣20-30份混勻，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述幼苗培養(yǎng)基按重量份計(jì)算，主要由熟玉米泥15份、山藥泥15份、芋頭泥15份、瓊脂3份和中藥渣25份混勻，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述中藥渣主要由按重量份計(jì)算的葛根50-60份、威靈仙30-40份、夏枯草20-30份、合歡皮10-20份、穿心蓮1-10份和蒼術(shù)20-30份按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術(shù)加5-6倍量水，煎煮2-3h，過(guò)濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。前述的鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，所述中藥渣主要由按重量份計(jì)算的葛根55份、威靈仙35份、夏枯草25份、合歡皮15份、穿心蓮5份和蒼術(shù)25份按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術(shù)加5.5倍量水，煎煮2.5h，過(guò)濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。申請(qǐng)人對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究，部分實(shí)驗(yàn)如下：實(shí)驗(yàn)例.1方法設(shè)置2個(gè)處理組，即本發(fā)明組和對(duì)比組。本發(fā)明組：按實(shí)施例1進(jìn)行組織培養(yǎng)；對(duì)比組：組織培養(yǎng)方法同實(shí)施例1，但所述生根培養(yǎng)基中不含黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，所述幼苗培養(yǎng)基中不含中藥渣。60d后觀察，統(tǒng)計(jì)組培苗的生長(zhǎng)情況。統(tǒng)計(jì)方法：生長(zhǎng)值(cm)＝統(tǒng)計(jì)時(shí)平均株高-繼代時(shí)平均株高；增殖率(％)＝(統(tǒng)計(jì)時(shí)苗總數(shù)一繼代時(shí)苗總數(shù))/初始苗總數(shù)×100％。2結(jié)果2.1對(duì)鐵皮石斛組培苗生長(zhǎng)的影響經(jīng)50d培養(yǎng)后的生長(zhǎng)情況見表1。表1對(duì)組培苗生長(zhǎng)的影響組別生長(zhǎng)值/cm增殖率/％對(duì)比組1.43253.6本發(fā)明組1.85358.5由表可知，本發(fā)明組生長(zhǎng)值和增值率均高于對(duì)比組。與現(xiàn)有技術(shù)相比，用本發(fā)明方進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，組培苗生長(zhǎng)好，生長(zhǎng)值和增殖率高,且培養(yǎng)基中不含激素。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法對(duì)鐵皮石斛進(jìn)行組織培養(yǎng)時(shí)，增殖率高達(dá)358.5％，幼苗長(zhǎng)勢(shì)好。具體實(shí)施方式實(shí)施例1。一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)50-60天，即得。所述生根培養(yǎng)基配方：黃蓮10kg、白芍15kg、血竭10kg、三七15kg、生姜10kg、茯苓10kg、蛋白胨5kg、土豆5kg、馬鈴薯3kg和黃豆10kg。所述生根培養(yǎng)基按下述步驟進(jìn)行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加17倍量水煎煮5.5h后，過(guò)濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入5.5倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌8min后，冷卻至5-10℃，即得。所述中藥渣由葛根55kg、威靈仙35kg、夏枯草25kg、合歡皮15kg、穿心蓮5kg和蒼術(shù)25kg按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術(shù)加4倍量水，煎煮2.5h，過(guò)濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。實(shí)施例2.一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60天，即得。所述生根培養(yǎng)基配方：黃蓮15kg、白芍20kg、血竭15kg、三七20kg、生姜15kg、茯苓15kg、蛋白胨10kg、土豆10kg、馬鈴薯5kg和黃豆15kg。所述生根培養(yǎng)基按下述步驟進(jìn)行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加18倍量水煎煮6h后，過(guò)濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入6倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌10min后，冷卻至5-10℃，即得。所述中藥渣由葛根60kg、威靈仙40kg、夏枯草30kg、合歡皮20kg、穿心蓮10kg和蒼術(shù)30kg按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術(shù)加6倍量水，煎煮3h，過(guò)濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。實(shí)施例3.一種鐵皮石斛的組織培養(yǎng)方法，取鐵皮石斛原球莖，于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養(yǎng)基中，培養(yǎng)50天，即得。所述生根培養(yǎng)基配方：黃蓮5kg、白芍10kg、血竭5kg、三七10kg、生姜5kg、茯苓5kg、蛋白胨1kg、土豆1kg、馬鈴薯1kg和黃豆5kg。所述生根培養(yǎng)基按下述步驟進(jìn)行制備：(1)取黃蓮、白芍、血竭、三七、生姜和茯苓，加16倍量水煎煮5h后，過(guò)濾，濾渣棄去，收集濾液，得a品；(2)取土豆和馬鈴薯，加入5倍量水，打成漿，得b品；(3)取黃豆，粉碎成粉末，得c品；(4)a品、b品混合，加熱至50-60℃，加入c品和蛋白胨，攪拌5min后，冷卻至5-10℃，即得。所述中藥渣由葛根50kg、威靈仙30kg、夏枯草20kg、合歡皮10kg、穿心蓮1kg和蒼術(shù)20kg按下述方法制備：取葛根、威靈仙、夏枯草、合歡皮、穿心蓮和蒼術(shù)加5倍量水，煎煮2h，過(guò)濾，濾渣干燥，粉碎成粗顆粒，即得。當(dāng)前第1頁(yè)12