一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法，所述的方法包括：1)外植體的選取，2)外植體消毒，3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng)，4)增殖培養(yǎng)，5)生根培養(yǎng)，6)煉苗和移栽。采用本方法繁育加拿大紫荊，可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
【專利說(shuō)明】
一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法技術(shù)領(lǐng)域?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]加拿大紫荊(Cercis canadensis)為豆科紫荊屬小喬木。原產(chǎn)美國(guó)，分部于美國(guó)東部、中西部和加拿大安大略省。木材密度大，堅(jiān)硬，條紋細(xì)密，樹(shù)高7-llm，冠幅7.5-10.5米， 主樹(shù)干短，有幾個(gè)主要分枝;花期長(zhǎng)，4-5月開(kāi)花，先花后葉，花有玫瑰粉紅色，淡紅紫色，少有白色;葉片蠟質(zhì);莢果7-8月成熟。長(zhǎng)5cm，中間寬1.4cm，兩端漸尖，莢內(nèi)有4-5粒種子。加拿大紫荊耐寒性強(qiáng)。喜充足的陽(yáng)光，略耐陰，冬春陽(yáng)光充足時(shí)開(kāi)花良好，夏季高溫時(shí)則需適當(dāng)蔽蔭。對(duì)土壤要求不嚴(yán)，酸性土、堿性土或稍黏重的土壤都能生長(zhǎng)。耐一定程度的干旱和水濕，但以濕潤(rùn)而排水良好的土壤為好。
[0003]目前，加拿大紫荊多采用種子繁育來(lái)進(jìn)行生產(chǎn)栽培，這繁育技術(shù)提高品種的純度， 保持了品種特性，但繁殖速度較慢，制約了加拿大紫荊產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。而組織培養(yǎng)育苗技術(shù)既可以保持種的純度和特性，也可以降低生產(chǎn)成本，提高繁殖速度和成活率。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中，尚無(wú)加拿大紫荊的組織培養(yǎng)方法的報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法，可實(shí)現(xiàn)加拿大紫荊快速大量繁殖。
[0006]為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提出下列技術(shù)方案:
[0007]—種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟:
[0008]1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2_5mm的加拿大紫荊幼嫩莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段為外植體，剪去葉片后將莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段剪成2-3cm長(zhǎng)以備用；
[0009]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來(lái)水的20KHZ超聲波清洗機(jī)中保持溫度30-35°C處理30-45min，然后以自來(lái)水沖洗10-20min;隨后在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消毒 25-45秒，0.1 %升汞溶液中處理7-12min，然后以無(wú)菌水沖洗4-5遍，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿備用；
[0010]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后的外植體各剪去2-3mm，外植體基部向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)6-8d 后將其中未污染的外植體轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至新芽長(zhǎng)出； 所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:MS+6-BA0 ? 8-1 ? 2mg/L+NAA0 ? 1-0 ? 3mg/L;[〇〇11]4)增殖培養(yǎng):將步驟3)培養(yǎng)出的新芽剪下并轉(zhuǎn)接到新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期12h/d，溫度25°C±2°C;培養(yǎng)20d后，至新芽長(zhǎng)出并伸長(zhǎng)至Ijlcm以上;所述的新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基組成為MS+6-BA1.2-2.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+ IBAO?3-0?8mg/L+KT0?5-1?2mg/L;
[0012]5)生根培養(yǎng):將步驟4)的培養(yǎng)出的新芽剪下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000LX、光周期12h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)15d后，生出新根;生根培養(yǎng)基的配方為 1/2MS+NAA0?1-0?3mg/L+IBA0?2-0?5mg/L+PVP0?8-2mg/L;
[0013]6)煉苗和移栽:將有生根的加拿大紫荊幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗3-5d 后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽至裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度 70%-80%，適當(dāng)遮蔭即可；
[0014]所述的MS培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸鉀KN〇3 1900mg/L，硝酸銨NH4N031650mg/ L，磷酸二氫鉀KH2PO3 170mg/L，硫酸鎂MgS〇4 ? 7H20 370mg/L;鈣鹽:氯化鈣CaCl2 ? 2H2〇4 40mg/L;微量元素:碘化鉀K1 ? 83mg/L，硼酸H3B0 36 ? 2mg/L，硫酸猛MnS〇4 ? 4H2〇2 2 ? 3mg/L， 硫酸鋅ZnS04 ? 7H20 8.6mg/L，鉬酸鈉Na2Mo〇4 ? 2H200.25mg/L，硫酸銅CuS〇4 ? 5H20 0.025mg/L，氯化鈷CoC12 ? 6H20 0.025mg/L;鐵鹽:乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA 37.25mg/L， 硫酸亞鐵FeS〇4 ? 7H2〇27 ? 85mg/L;有機(jī)酸:肌醇lOOmg/L，甘氨酸2mg/L，鹽酸硫胺素0 ? 5mg/L， 鹽酸吡哆醇0 ? 5mg/L，煙酸0 ? 5mg/L;蔗糖30g/L，瓊脂粉7g/L，pH為5 ? 8;[0〇15] 所述的1/2MS培養(yǎng)基配方為:大量元素:硝酸鉀KN03 950mg/L，硝酸銨NH4N03825mg/ L，磷酸二氫鉀KH2P03 85mg/L，硫酸鎂MgS〇4.7H20 185mg/L;余同上述MS培養(yǎng)基；
[0016]所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤；
[0017]所述的NAA為a-萘乙酸；[〇〇18] 所述的IBA為吲哚-3-丁酸；[〇〇19]所述的KT為激動(dòng)素；[〇〇2〇]所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。[〇〇21] 優(yōu)選的，所述步驟3)中初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L。
[0022]優(yōu)選的，所述步驟4)中新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:MS + 6-BA2mg/L + NAA0.2mg/L+IBA0.5mg/L+KTl.0mg/L〇
[0023]優(yōu)選的，所述步驟5)中生根培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 4mg/L+PVPlmg/L。
[0024]采用本發(fā)明繁殖加拿大紫荊，可實(shí)現(xiàn)加拿大紫荊組培苗的大量組織培養(yǎng)，為加拿大紫荊生產(chǎn)栽培和品種改良奠定基礎(chǔ)。[〇〇25]為了更好的闡述技術(shù)方案，下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但本發(fā)明所要求的保護(hù)范圍不限于下列實(shí)施例。【具體實(shí)施方式】
[0026]實(shí)施例1
[0027]1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2_5mm的加拿大紫荊幼嫩莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段為外植體，剪去葉片后將莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段莖段剪成2-3cm長(zhǎng)以備用； [〇〇28]2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來(lái)水的20KHz超聲波清洗中保持溫度30 °C處理30min，然后以自來(lái)水沖洗10min;隨后在超凈工作臺(tái)上以75%的酒精消毒25秒，0.1 % 升汞溶液中處理7min，然后以無(wú)菌水沖洗4遍，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿備用；
[0029]3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后外植體各剪去2-3_，外植體基部向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)8d后將其中未污染的外植體轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)18d至新芽長(zhǎng)出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:MS+6-BA0 ? 8mg/L+NAA0 ? lmg/L;
[0030]4)增殖培養(yǎng):將步驟3)新芽剪下并轉(zhuǎn)接到新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期10h/d，溫度25°C±2°C;培養(yǎng)20d后，至新芽長(zhǎng)出并伸長(zhǎng)到lcm以上；所述的培養(yǎng)基組成 MS+6-BA1 ? 2mg/L+NAA0 ? lmg/L+IBAO ? 3mg/L+KT0 ? 5mg/L;[0031 ] 5)生根培養(yǎng):將步驟4)的新芽剪下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000Lx、光周期12h/d，溫度25°C±2°C;培養(yǎng)15d后，生出新根；生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS+ NAA0.lmg/L+IBA0.2mg/L+PVP0.8mg/L；
[0032]6)煉苗和移栽:將有生根的加拿大紫荊幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗3d后，取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20_25°C，濕度70%-80%，適當(dāng)遮蔭即可。[〇〇33]經(jīng)試驗(yàn)，采用本實(shí)施例所育試管苗的苗床移栽成活率為88.6%。[〇〇34] 實(shí)施例2
[0035]1)外植體的選取:1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2-5_的加拿大紫荊幼嫩莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段為外植體，剪去葉片后將莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段剪成2-3cm 長(zhǎng)以備用；[〇〇36] 2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來(lái)水的20KHz超聲波清洗機(jī)中保持溫度35 °(:處理451^11，然后以自來(lái)水沖洗2〇111111;隨后在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消毒45秒， 0.1 %升汞溶液中處理12min，，然后以無(wú)菌水沖洗5遍，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿備用；
[0037] 3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后的外植體各剪去2_3mm，外植體基部向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)6d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12d至新芽長(zhǎng)出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:MS+6-BAl ? 2mg/L+NAA0 ? 3mg/L;
[0038]4)增殖培養(yǎng):將步驟3)培養(yǎng)出的新芽剪下并轉(zhuǎn)接到新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期12h/d，溫度25°C±2°C;培養(yǎng)20d后，至新芽長(zhǎng)出并伸長(zhǎng)至ljlcm以上;所述的新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基組成為MS+6-BA2 ? 2mg/L+NAA0 ? 3mg/L+IBAl ? 2mg/ L+KT1.2mg/L；
[0039] 5)生根培養(yǎng):將步驟4)的培養(yǎng)出的新芽剪下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000LX、光周期12h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)15d后，生出新根;生根培養(yǎng)基的配方為 1/2MS+NAA0.3mg/L+IBA0.5mg/L+PVP2mg/L；
[0040]6)煉苗和移栽:將有生根的加拿大紫荊幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗5d后， 取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽至裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25 °C，濕度70 % -80%，適當(dāng)遮蔭即可；[〇〇41 ]經(jīng)試驗(yàn)，采用本實(shí)施例所育試管苗的苗床移栽成活率為90.7 %。[〇〇42] 實(shí)施例3
[0043]1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2_5mm的加拿大紫荊幼嫩莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段為外植體，剪去葉片后將莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段剪成2-3cm長(zhǎng)以備用；[〇〇44] 2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來(lái)水的20KHz超聲波清洗機(jī)中保持溫度35 °(:處理351^11，然后以自來(lái)水沖洗15111111;隨后在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消毒35秒， 0.1 %升萊溶液中處理lOmin，然后以無(wú)菌水沖洗5遍，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿備用；
[0045] 3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后的外植體各剪去2_3mm，外植體基部向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000Lx、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)7d后將其中未污染的外植體莖段轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)15d至新芽長(zhǎng)出；所述的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:MS+6-BAl ? Omg/L+NAAO ? 2mg/L;
[0046]4)增殖培養(yǎng):將步驟3)培養(yǎng)出的新芽剪下并轉(zhuǎn)接到新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期12h/d，溫度25°C±2°C;培養(yǎng)20d后，至新芽長(zhǎng)出并伸長(zhǎng)至Ijlcm以上;所述的新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基組成為MS+6-BA2mg/L+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 5mg/L+ KT1.0mg/L；
[0047]5)生根培養(yǎng):將步驟4)的培養(yǎng)出的新芽剪下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000LX、光周期12h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)15d后，生出新根;生根培養(yǎng)基的配方為 1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA0.4mg/L+PVPlmg/L；
[0048]6)煉苗和移栽:將有生根的加拿大紫荊幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗5d后， 取出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽至裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25 °C，濕度70 % -80%，適當(dāng)遮蔭即可；
[0049]經(jīng)試驗(yàn)，采用本實(shí)施例所育試管苗的苗床移栽成活率為94.5%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述的方法包括以下步驟:1)外植體的選取:取當(dāng)年生直徑2-5mm的加拿大紫荊幼嫩莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖 段為外植體，剪去葉片后將莖尖或至少帶一個(gè)單芽的莖段剪成2-3cm長(zhǎng)以備用；2)外植體消毒:將上述莖段放入盛有自來(lái)水的20KHz超聲波清洗機(jī)中保持溫度30-35 °C 處理30-45min，然后以自來(lái)水沖洗10-20min;隨后在超凈工作臺(tái)上用75%的酒精消毒25-45 秒，0.1 %升汞溶液中處理7-12min，然后以無(wú)菌水沖洗4-5遍，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿備用；3)初始誘導(dǎo)培養(yǎng):將滅菌后的外植體各剪去2-3mm，外植體基部向下插入初始誘導(dǎo)培養(yǎng) 基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)1500-2000LX、光周期10-14h/d，溫度25°C ± 2°C ;培養(yǎng)6-8d后將 其中未污染的外植體轉(zhuǎn)接到新的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，并繼續(xù)培養(yǎng)12-18d至新芽長(zhǎng)出；所述 的初始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:MS+6-BA0 ? 8-1 ? 2mg/L+NAA0 ? 1-0 ? 3mg/L;4)增殖培養(yǎng):將步驟3)培養(yǎng)出的新芽剪下并轉(zhuǎn)接到新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條 件為光強(qiáng)1800-2500LX、光周期12h/d，溫度25°C±2°C;培養(yǎng)20d后，至新芽長(zhǎng)出并伸長(zhǎng)到lcm 以上；所述的新芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)基組成為MS+6-BA1.2-2.2mg/L+NAA0.1-0.3mg/L+ IBAO?3-0?8mg/L+KT0?5-1?2mg/L;5)生根培養(yǎng):將步驟4)的培養(yǎng)出的新芽剪下，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光強(qiáng) 1500-2000LX、光周期12h/d，溫度25°C±2°C;培養(yǎng)15d后，生出新根;生根培養(yǎng)基的配方為: 1/2MS+NAA0?1-0?3mg/L+IBA0?2-0?5mg/L+PVP0?8-2mg/L;6)煉苗和移栽:將有生根的加拿大紫荊幼苗的培養(yǎng)基瓶蓋打開(kāi)，室溫下煉苗3-5d后，取 出幼苗，洗去根部培養(yǎng)基，移栽至裝有河沙基質(zhì)的苗床上，保持溫度20-25°C，濕度70%-80%，適當(dāng)遮蔭即可；所述的6-BA為6-芐氨基嘌呤；所述的NAA為a-萘乙酸；所述的IBA為吲哚-3-丁酸；所述的KT為激動(dòng)素；所述的PVP為聚乙烯吡咯烷酮。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述步驟3)中初 始誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為:MS+6-BAl ? 0mg/L+NAA0 ? 2mg/L。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述步驟4)中新 芽伸長(zhǎng)和增殖培養(yǎng)用培養(yǎng)基為:MS+6-BA2mg/L+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 5mg/L+KTl ? Omg/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種加拿大紫荊組織培養(yǎng)的方法，其特征在于所述步驟5)中生 根培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA0 ? 2mg/L+IBA0 ? 4mg/L+PVPlmg/L。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105993942SQ201610339784
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月20日
【發(fā)明人】戴勤, 王冬梅, 李慧珍
【申請(qǐng)人】蕪湖歐標(biāo)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司