一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。包括外植體的制備和光質(zhì)處理，選取成熟、飽滿的紅秋葵種子，先在流水沖洗1.5?2h，用70％酒精消毒30s，0.15％的氯化汞消毒6?8min，無(wú)菌水沖洗5?6次，然后在無(wú)菌水中浸泡12?24h，然后接入1/2MS中，在白光下培養(yǎng)5?7d，切取帶柄子葉為外植體，接入添加了0.05mg/L NAA的MS中培養(yǎng)20d，然后切取兩葉一心的頂芽為外植體，接入添加0.10mg/L NAA和0.05mg/L 6?BA的MS中，然后轉(zhuǎn)入藍(lán)紅綠組合光3:1:1的發(fā)光二極管(LED)光下培養(yǎng)，培養(yǎng)35d。藍(lán)紅綠組合光3:1:1的發(fā)光二極管(LED)光較適合紅秋葵組培苗的生長(zhǎng)。本發(fā)明具有操作簡(jiǎn)單、植株生長(zhǎng)快速健壯，節(jié)省能源環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，將在紅秋葵離體快繁或分子育種的研究中發(fā)揮重要作用，實(shí)際應(yīng)用價(jià)值高。
【專利說(shuō)明】一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法
[0001] -、技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明涉及一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法，屬于植物生物技術(shù)領(lǐng)域。
[0002] 二、【背景技術(shù)】 紅秋葵(Hibiscus coccineus (Medicus) Walt)，是黃秋葵種中的一個(gè)果實(shí)外皮紅色 的品種，為錦葵科秋葵屬一年生草本植物。以采食嫩果為主，紅秋葵的花、種子均可以入藥， 對(duì)胃炎、胃潰瘍等多種疾病有較好療效。性喜溫暖和強(qiáng)光，耐熱，耐旱，對(duì)土壤適應(yīng)性較廣。 秋葵的品種選育主要是引種選育和人工制種的方式。近年來(lái)，為滿足栽培對(duì)雜種種苗的需 要，利用離體快速繁殖技術(shù)來(lái)保存黃秋葵雜種優(yōu)勢(shì)資源成為了關(guān)注的焦點(diǎn)。在植物離體快 繁中，光對(duì)外植體形態(tài)建成起重要作用。藍(lán)光、紅光、黃光、綠光和遠(yuǎn)紅光之所以能引起植株 的一系列生理反應(yīng)是通過(guò)激發(fā)激素信號(hào)途徑來(lái)控制植物的生長(zhǎng)和發(fā)育。植物離體快繁主要 采用熒光燈（日光燈)作為人工光源，其光譜分布含有不符合植物生長(zhǎng)需求的部分，生物能 效極低。近年來(lái)隨著農(nóng)業(yè)科技化水平的提高和組培大規(guī)模的發(fā)展，新型節(jié)能高效光源調(diào)控 措施成為了研究的熱點(diǎn)。一種新型高效的節(jié)能光源LEDs，因其具有壽命長(zhǎng)、體積小、波長(zhǎng)具 體、光質(zhì)和光量可調(diào)、耗能低、發(fā)熱低和可以對(duì)植株近距離照射等優(yōu)點(diǎn)，適合應(yīng)用于可控環(huán) 境的植物培養(yǎng)。
[0003] 本方法探索了紅秋葵組織培養(yǎng)的試驗(yàn)，建立了完整可行的試驗(yàn)方法，操作步驟簡(jiǎn) 單，試驗(yàn)效果穩(wěn)定、清晰，因此無(wú)論是在科研、檢測(cè)以及學(xué)生試驗(yàn)中都能得到很好的應(yīng)用。
[0004] 三、
【發(fā)明內(nèi)容】
技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的在于提供一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法。
[0005] 技術(shù)方案 1、一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟： 1) 外植體的制備:選取成熟、飽滿的紅秋葵種子，先在流水中沖洗1.5-2h，然后在超凈 工作臺(tái)中用70%酒精消毒30s，0.15%的氯化汞消毒6-8min，無(wú)菌水沖洗5-6次，然后將已經(jīng)消 毒的種子在無(wú)菌水中浸泡12_24h，把消毒浸泡后的種子接入1/2MS培養(yǎng)基中，先在熒燈光下 培養(yǎng)5-7d，待子葉展平后，切取帶有1.5-2.0cm下胚軸的帶柄子葉為外植體，接入添加了 0.05 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，切取由帶柄子葉長(zhǎng)出的兩葉一心的頂芽為外植體； 2) 光質(zhì)處理:然后切取由帶柄子葉長(zhǎng)出的兩葉一心的頂芽接入添加0.10 mg/L NAA和 0.05 mg/L 6-BA的MS培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)入藍(lán)紅綠組合光3:1:1的發(fā)光二極管(LED)光下培養(yǎng)，保 持光強(qiáng)為45 μπιο? · m-2 · s-S光周期為12小時(shí)，濕度70±5%，培養(yǎng)溫度24-26°C，培養(yǎng)時(shí)間為 35d； 3) 光源:所述的光照處理的光源是一組T5-28W的發(fā)光二極管(LED)燈管，所述的光強(qiáng)是 通過(guò)調(diào)整燈的數(shù)量和燈到植株冠層的距離來(lái)控制，所述的光周期采用一個(gè)定時(shí)裝置來(lái)控 制。
[0006] 有益效果 本發(fā)明提供了一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的綠秋葵的組織培養(yǎng)方法具有以下 優(yōu)點(diǎn)：1)操作簡(jiǎn)單，效果好;2)節(jié)省能源環(huán)保;3)植株生長(zhǎng)快速健壯。本發(fā)明方法和結(jié)果為開(kāi) 展與紅秋葵快繁有關(guān)的生物學(xué)研究和開(kāi)發(fā)提供了新的途徑和依據(jù)。
[0007]
【具體實(shí)施方式】
[0008] 下述實(shí)施例中所用方法如無(wú)特別說(shuō)明均為常規(guī)方法，所述百分含量如無(wú)特別說(shuō)明 均為體積百分含量。
[0009] 1.實(shí)施材料： ①紅秋葵種子:常規(guī)品種。
[0010]②光源:發(fā)光二極管(LED)燈管。
[0011] 2.實(shí)施方法： ① 外植體制備:選取成熟、飽滿的紅秋葵種子，先在流水中沖洗1.5-2h，然后在超凈工 作臺(tái)中用70%酒精消毒30s，0.15%的氯化汞消毒6-8min，無(wú)菌水沖洗5-6次，然后將已經(jīng)消毒 的種子在無(wú)菌水中浸泡12_24h，把消毒浸泡后的種子接入1/2MS培養(yǎng)基中，先在熒燈光下培 養(yǎng)5-7d，待子葉展平后，切取帶有1.5-2.0cm下胚軸的帶柄子葉為外植體，接入添加了0.05 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，切取由帶柄子葉長(zhǎng)出的兩葉一心的頂芽為外植體； ② 光照處理:然后切取由帶柄子葉長(zhǎng)出的兩葉一心的頂芽接入添加0.10 mg/L NAA和 0.05 mg/L 6-BA的MS培養(yǎng)基中，然后轉(zhuǎn)入藍(lán)紅綠組合光3:1:1的發(fā)光二極管(LED)光下培 養(yǎng)； ③ 條件控制:光照處理階段保持光強(qiáng)為45 μπιο? · m-2 · s-1，光周期為12小時(shí)，濕度70土 5%，培養(yǎng)溫度24-26 °C，培養(yǎng)時(shí)間為35d; ④ 控制方法：由T5-28W的發(fā)光二極管(LED)燈管提供光源，通過(guò)調(diào)整燈的數(shù)量和燈到植 株冠層的距離來(lái)控制光強(qiáng)，一個(gè)定時(shí)裝置來(lái)控制光周期。
[0012] 3.處理效果： 3.1不同光質(zhì)對(duì)紅秋葵組培苗生長(zhǎng) 表1顯示，各光質(zhì)處理下紅秋葵組培苗的生長(zhǎng)變化趨勢(shì)較一致，鮮重、干重、根長(zhǎng)與株高 均以藍(lán)紅綠組合處理最高。可見(jiàn)，與對(duì)照相比，藍(lán)紅綠組合光3:1:1能顯著促進(jìn)紅秋葵組培 苗的生物量的積累。
[0013] 3.2不同光質(zhì)對(duì)紅秋葵組培苗根系活力的影響
[0014] 根系活力一定程度上可以反映組培苗的生長(zhǎng)狀況。藍(lán)紅綠組合光3:1:1處理下紅 秋葵組培苗的根系活力最大(表2)?？梢?jiàn)，藍(lán)紅綠組合光3:1:1處理均顯著提高了紅秋葵組 培苗的根系活力。 3.3不同光質(zhì)對(duì)紅秋葵組培苗色素含量的影響 植物葉片中的光合色素是進(jìn)行光合作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量和組成通過(guò)直接影響葉片 的光合速率來(lái)影響植株的生長(zhǎng)。如表3顯示，紅秋葵組培苗葉片中葉綠素 a、葉綠素 b、葉綠素 總量和類胡蘿卜素的含量均以藍(lán)紅綠組合3:1:1下最大?？梢?jiàn)，藍(lán)紅綠組合光3:1:1顯著提高 了紅秋葵組培苗葉片光合色素的含量，為促進(jìn)植株生長(zhǎng)奠定了基礎(chǔ)。
[0015] 表1

【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種紅秋葵的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟： 1) 外植體的制備:選取成熟、飽滿的紅秋葵種子，先在流水中沖洗1.5-2h，然后在超凈 工作臺(tái)中用70%酒精消毒30s，0.15%的氯化汞消毒6-8min，無(wú)菌水沖洗5-6次，然后將已經(jīng)消 毒的種子在無(wú)菌水中浸泡12_24h，把消毒浸泡后的種子接入1/2MS培養(yǎng)基中，先在熒燈光下 培養(yǎng)5-7d，待子葉展平后，切取帶有1.5-2.0cm下胚軸的帶柄子葉為外植體，接入添加了 0.05 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)20d，切取由帶柄子葉長(zhǎng)出的兩葉一心的頂芽為外植體； 2) 光質(zhì)處理:然后切取由帶柄子葉長(zhǎng)出的兩葉一心的頂芽接入添加0.10 mg/L NAA和 0.05 mg/L 6-BA的MS培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)入藍(lán)紅綠組合光3:1:1的發(fā)光二極管(LED)光下培養(yǎng)，保 持光強(qiáng)為45 μπιο? · m-2 · s-S光周期為12小時(shí)，濕度70±5%，培養(yǎng)溫度24-26°C，培養(yǎng)時(shí)間為 35d； 3) 光源:所述的光照處理的光源是一組T5-28W的發(fā)光二極管(LED)燈管，所述的光強(qiáng)是 通過(guò)調(diào)整燈的數(shù)量和燈到植株冠層的距離來(lái)控制，所述的光周期采用一個(gè)定時(shí)裝置來(lái)控 制。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紅秋葵的組織培養(yǎng)的方法，其特征在于:所述紅秋葵為常 規(guī)品種。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105830919SQ201610189907
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年3月30日
【發(fā)明人】李慧敏, 周玉麗, 陳杰
【申請(qǐng)人】安徽科技學(xué)院