本發(fā)明涉及甘薯試管苗低溫保存領(lǐng)域，尤其涉及一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法。

背景技術(shù)：

隨著現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)品種的廣泛推廣，作物品種日趨單一化并導(dǎo)致了基因資源的迅速縮小和衰竭。廣泛收集種質(zhì)資源，并加以妥善保存和利用，已成為種質(zhì)資源工作的當(dāng)務(wù)之急，也是一項(xiàng)十分重要的基礎(chǔ)工作。

甘薯頂端分生組織經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)脫毒處理之后，如何延長(zhǎng)試管苗的壽命，解決無(wú)性繁殖作物的保種問(wèn)題成為研究熱點(diǎn)，開發(fā)出這樣的保存條件和保存技術(shù)可以為建立甘薯無(wú)毒試管苗貯存提供技術(shù)依據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的，采用以下技術(shù)方案：

一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法，具體步驟為：

(1)甘薯莖尖分生組織處理

剪取甘薯苗頂芽，去掉葉片，用0.1％洗衣粉水浸泡15-20min，接著置于自來(lái)水龍頭下沖洗50min，隨后在超凈工作臺(tái)上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒8-9min，最后用無(wú)菌水沖洗5-10次；

(2)接種培養(yǎng)成苗

在體視顯微鏡下，剝出甘薯分生組織細(xì)胞圓錐體并附帶1-2個(gè)葉原基，切取芽的長(zhǎng)度為0.3-0.35mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％瓊脂固化的培養(yǎng)基上培養(yǎng)10-12天，然后將發(fā)綠后的芽轉(zhuǎn)移到不加激素的ms培養(yǎng)基上培養(yǎng)成苗；

(3)獲取種質(zhì)保存材料

接種培養(yǎng)后的苗培養(yǎng)2-3個(gè)月，莖尖苗成株后，經(jīng)過(guò)切段繁殖，作為種質(zhì)保存材料；

(4)試管苗低溫保存

將種質(zhì)保存材料上的莖尖苗切成單一節(jié)段，接種在加入生長(zhǎng)延緩劑并且經(jīng)過(guò)滅菌處理好的基本培養(yǎng)基ms上培養(yǎng)，基本培養(yǎng)基的ph為5.7-5.8，培養(yǎng)溫度為28℃，光照強(qiáng)度為3000-4000lx，光照時(shí)長(zhǎng)為14-15h/d；然后當(dāng)幼苗長(zhǎng)成3-4片葉，2-3cm高時(shí)，轉(zhuǎn)移到溫度為17-18℃，光照強(qiáng)度為1500lx，光照時(shí)長(zhǎng)為8h/d的條件下作為種質(zhì)長(zhǎng)期保存。

試管苗低溫保存過(guò)程中，加入生長(zhǎng)延緩劑的基本培養(yǎng)基的處理方法是將10ml培養(yǎng)基裝入18×150mm的圓底試管中，用厚度為0.01mm的鋁箔二層封口，經(jīng)高壓滅菌備用。

試管苗低溫保存過(guò)程中，生長(zhǎng)延緩劑為脫落酸、膦甘酸和矮壯素中的一種。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法，通過(guò)在培養(yǎng)基上加入生長(zhǎng)延緩劑，可以將甘薯試管苗保存時(shí)間延長(zhǎng)，存活率提高，為建立甘薯無(wú)毒試管苗貯存提供了技術(shù)依據(jù)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明：

實(shí)施例1：

一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法，具體步驟為：

(1)甘薯莖尖分生組織處理

剪取甘薯苗頂芽，去掉葉片，用0.1％洗衣粉水浸泡15min，接著置于自來(lái)水龍頭下沖洗50min，隨后在超凈工作臺(tái)上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒8min，最后用無(wú)菌水沖洗5次；

(2)接種培養(yǎng)成苗

在體視顯微鏡下，剝出甘薯分生組織細(xì)胞圓錐體并附帶1個(gè)葉原基，切取芽的長(zhǎng)度為0.3mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％瓊脂固化的培養(yǎng)基上培養(yǎng)10天，然后將發(fā)綠后的芽轉(zhuǎn)移到不加激素的ms培養(yǎng)基上培養(yǎng)成苗；

(3)獲取種質(zhì)保存材料

接種培養(yǎng)后的苗培養(yǎng)2個(gè)月，莖尖苗成株后，經(jīng)過(guò)切段繁殖，作為種質(zhì)保存材料；

(4)試管苗低溫保存

將種質(zhì)保存材料上的莖尖苗切成單一節(jié)段，接種在加入脫落酸并且經(jīng)過(guò)滅菌處理好的基本培養(yǎng)基ms上培養(yǎng)，基本培養(yǎng)基的ph為5.7，培養(yǎng)溫度為28℃，光照強(qiáng)度為3000lx，光照時(shí)長(zhǎng)為14h/d；然后當(dāng)幼苗長(zhǎng)成3片葉，2cm高時(shí)，轉(zhuǎn)移到溫度為17℃，光照強(qiáng)度為1500lx，光照時(shí)長(zhǎng)為8h/d的條件下作為種質(zhì)長(zhǎng)期保存。

試管苗低溫保存過(guò)程中，加入脫落酸的基本培養(yǎng)基的處理方法是將10ml培養(yǎng)基裝入18×150mm的圓底試管中，用厚度為0.01mm的鋁箔二層封口，經(jīng)高壓滅菌備用。

實(shí)施例2：

一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法，具體步驟為：

(1)甘薯莖尖分生組織處理

剪取甘薯苗頂芽，去掉葉片，用0.1％洗衣粉水浸泡20min，接著置于自來(lái)水龍頭下沖洗50min，隨后在超凈工作臺(tái)上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒9min，最后用無(wú)菌水沖洗10次；

(2)接種培養(yǎng)成苗

在體視顯微鏡下，剝出甘薯分生組織細(xì)胞圓錐體并附帶2個(gè)葉原基，切取芽的長(zhǎng)度為0.35mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％瓊脂固化的培養(yǎng)基上培養(yǎng)12天，然后將發(fā)綠后的芽轉(zhuǎn)移到不加激素的ms培養(yǎng)基上培養(yǎng)成苗；

(3)獲取種質(zhì)保存材料

接種培養(yǎng)后的苗培養(yǎng)3個(gè)月，莖尖苗成株后，經(jīng)過(guò)切段繁殖，作為種質(zhì)保存材料；

(4)試管苗低溫保存

將種質(zhì)保存材料上的莖尖苗切成單一節(jié)段，接種在加入膦甘酸并且經(jīng)過(guò)滅菌處理好的基本培養(yǎng)基ms上培養(yǎng)，基本培養(yǎng)基的ph為5.8，培養(yǎng)溫度為28℃，光照強(qiáng)度為4000lx，光照時(shí)長(zhǎng)為15h/d；然后當(dāng)幼苗長(zhǎng)成4片葉，3cm高時(shí)，轉(zhuǎn)移到溫度為18℃，光照強(qiáng)度為1500lx，光照時(shí)長(zhǎng)為8h/d的條件下作為種質(zhì)長(zhǎng)期保存。

試管苗低溫保存過(guò)程中，加入膦甘酸的基本培養(yǎng)基的處理方法是將10ml培養(yǎng)基裝入18×150mm的圓底試管中，用厚度為0.01mm的鋁箔二層封口，經(jīng)高壓滅菌備用。

實(shí)施例3：

一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法，具體步驟為：

(1)甘薯莖尖分生組織處理

剪取甘薯苗頂芽，去掉葉片，用0.1％洗衣粉水浸泡18min，接著置于自來(lái)水龍頭下沖洗50min，隨后在超凈工作臺(tái)上用70％乙醇浸泡20s，用5％安替福尼溶液消毒9min，最后用無(wú)菌水沖洗8次；

(2)接種培養(yǎng)成苗

在體視顯微鏡下，剝出甘薯分生組織細(xì)胞圓錐體并附帶2個(gè)葉原基，切取芽的長(zhǎng)度為0.3mm，放在ms+kt2mg/l+iaa0.5mg/l+0.5％瓊脂固化的培養(yǎng)基上培養(yǎng)11天，然后將發(fā)綠后的芽轉(zhuǎn)移到不加激素的ms培養(yǎng)基上培養(yǎng)成苗；

(3)獲取種質(zhì)保存材料

接種培養(yǎng)后的苗培養(yǎng)3個(gè)月，莖尖苗成株后，經(jīng)過(guò)切段繁殖，作為種質(zhì)保存材料；

(4)試管苗低溫保存

將種質(zhì)保存材料上的莖尖苗切成單一節(jié)段，接種在加入矮壯素并且經(jīng)過(guò)滅菌處理好的基本培養(yǎng)基ms上培養(yǎng)，基本培養(yǎng)基的ph為5.8，培養(yǎng)溫度為28℃，光照強(qiáng)度為3500lx，光照時(shí)長(zhǎng)為15h/d；然后當(dāng)幼苗長(zhǎng)成3片葉，3cm高時(shí)，轉(zhuǎn)移到溫度為18℃，光照強(qiáng)度為1500lx，光照時(shí)長(zhǎng)為8h/d的條件下作為種質(zhì)長(zhǎng)期保存。

試管苗低溫保存過(guò)程中，加入矮壯素的基本培養(yǎng)基的處理方法是將10ml培養(yǎng)基裝入18×150mm的圓底試管中，用厚度為0.01mm的鋁箔二層封口，經(jīng)高壓滅菌備用。

本發(fā)明提供了一種甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)及試管苗低溫保存的方法，通過(guò)在培養(yǎng)基上加入生長(zhǎng)延緩劑，可以將甘薯試管苗保存時(shí)間延長(zhǎng)，存活率提高，為建立甘薯無(wú)毒試管苗貯存提供了技術(shù)依據(jù)。

上面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了示例性描述，顯然本發(fā)明具體實(shí)現(xiàn)并不受上述方式的限制，只要采用了本發(fā)明的方法構(gòu)思和技術(shù)方案進(jìn)行的各種改進(jìn)，或未經(jīng)改進(jìn)直接應(yīng)用于其它場(chǎng)合的，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。