本發(fā)明屬于標(biāo)本處理技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種病理組織的保存固定液。
背景技術(shù)：
活體組織病理診斷是外科的第一診斷，是金標(biāo)準(zhǔn)。醫(yī)生可以根據(jù)標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果作出正確的診斷，制定疾病下一步的治療計(jì)劃。病理報(bào)告的準(zhǔn)確性在相當(dāng)程度上對(duì)疾病的診斷和治療起決定性作用。而正確處理病理標(biāo)本不僅能給病理診斷及臨床診斷提供有效的保證，而且也維護(hù)了患者身心，杜絕了因不當(dāng)標(biāo)本處理帶來的糾紛?，F(xiàn)有調(diào)查顯示，手術(shù)室現(xiàn)行的標(biāo)本處理方法不能有效防止護(hù)理差錯(cuò)。
病理標(biāo)本處理中最關(guān)鍵的步驟就是病理標(biāo)本的固定和保存。病理樣本離體后，由于微環(huán)境的變化將發(fā)生自溶和(或)腐敗，使其結(jié)構(gòu)破壞，同時(shí)在微觀上，細(xì)胞退化、自溶。處理樣本的目的，就是用各種方法使病理標(biāo)本盡量保持其離體前狀態(tài)。更為關(guān)鍵的是，由于需要顯微鏡觀察，因此，病理組織學(xué)不僅要求離體樣本在宏觀方面(如色澤、體積、軟硬度等)盡量接近離體前狀態(tài)，更要求在細(xì)胞水平的微觀方面要盡量接近活體狀態(tài)。目前，病理標(biāo)本最為普遍的處理劑是甲醛溶液和乙醇溶液，然而上述兩者均存在明顯的缺陷。甲醛易使標(biāo)本機(jī)體發(fā)硬、變形、褪色、不保鮮；甲醛溶液中因含有甲醇易聚合產(chǎn)生沉淀，需經(jīng)常更換；甲醇具有強(qiáng)烈的刺激性氣味，其不僅污染環(huán)境，還會(huì)不同程度地傷害操作者的眼睛和呼吸系統(tǒng)，嚴(yán)重危害人體健康，這對(duì)一線醫(yī)學(xué)工作者來說是非常有害的。而含乙醇的保存液長(zhǎng)期使用后也會(huì)使樣本機(jī)體發(fā)硬，其褪色現(xiàn)象比甲醛更明顯；并且這兩種溶液保存的樣本存在不易造型，運(yùn)輸麻煩的缺陷。
因此，探索低毒、低刺激且效果更好的病理標(biāo)本處理方法具有重要的學(xué)術(shù)意義和現(xiàn)實(shí)意義。
公開號(hào)為CN104365581A的專利公開了一種新型標(biāo)本保存液，其包含山梨酸鉀、納米銀、乙醇、丙三醇、檸檬酸，所述的保存液由山梨酸鉀1-5g，納米銀0.1-1g，乙醇100-300ml，丙三醇1-20ml，檸檬酸10-20g，調(diào)節(jié)pH保持5-6，加純水定容至1000ml組成。該新型標(biāo)本保存液能有效地保持標(biāo)本的原有色澤，各組織肌肉、韌帶的柔軟，維持良好的韌性和彈性，不含有毒有害物質(zhì)，是一種綠色環(huán)保的液體。但是該保存液中含有大量的乙醇，長(zhǎng)期使用易使標(biāo)本失水，固縮，變形。公開號(hào)為CN104798768A的專利公開了一種用于醫(yī)學(xué)研究的離體樣本的保存處理液，由如下質(zhì)量分?jǐn)?shù)的原料制備而成：硼酸7份、良姜13份、金銀花10份、夏枯草4份、丹參5份、野菊花8份、山萸12份、大棗15份、甘草15份。該發(fā)明病理組織學(xué)樣本保存處理液可以代替福爾馬林使用，組織形態(tài)保持良好，染色充分，鏡下細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，結(jié)構(gòu)完整，完全可以滿足病理組織學(xué)對(duì)樣本的保存處理要求。該標(biāo)本保存處理液采用純中藥制備而成，由于中藥成分的復(fù)雜性，所制備處理液的組成不易被掌控，且其性質(zhì)受人為及環(huán)境因素影響較大。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種病理組織的保存固定液，制備簡(jiǎn)單，安全無毒，形態(tài)保存完整，不易固縮、變形。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：
一種病理組織的保存固定液，其組成為：薄荷醇12~15g，甘油10~20g，乙氧基化乙炔二醇5~10ml，綠原酸10~20g，聚乙烯吡咯烷酮30~70g，氯化鈉30~40g，純水補(bǔ)至1000ml。
優(yōu)選地，所述病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇13g，甘油14g，乙氧基化乙炔二醇7ml，綠原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
優(yōu)選地，所述病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇14g，甘油16g，乙氧基化乙炔二醇8ml，綠原酸15g，聚乙烯吡咯烷酮50g，氯化鈉35g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法為：分別稱取薄荷醇12~15g、甘油10~20g、乙氧基化乙炔二醇5~10ml、綠原酸10~20g、聚乙烯吡咯烷酮30~70g和氯化鈉30~40g；首先將氯化鈉用500ml純水完全溶解，得氯化鈉溶液；然后在其中依次加入甘油、薄荷醇、綠原酸和乙氧基化乙炔二醇，攪拌混合10~15分鐘；最后加入聚乙烯吡咯烷酮，邊攪拌邊加純水到混合物體積為1000ml，繼續(xù)攪拌至所述混合物狀態(tài)均一，即得。
優(yōu)選地，所述繼續(xù)攪拌的轉(zhuǎn)速為2000~3000rpm/min。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：
本發(fā)明病理組織采用全新的固定液，其中：薄荷醇：為薄荷精油中的主要成分，以游離和酯的狀態(tài)存在，具有薄荷香氣，掩蓋不良?xì)馕?，醫(yī)學(xué)上具有止癢、止痛、防腐、刺激、麻醉、清涼和抗炎作用；甘油：是無色無臭的液體，能與水和乙醇任意混合，其所形成的溶液較穩(wěn)定，吸濕性高，起到防干燥的作用，使組織保持柔軟狀態(tài)；乙氧基化乙炔二醇：為一種非離子型潤(rùn)濕劑，具有超強(qiáng)的潤(rùn)濕作用，能夠促進(jìn)甘油、綠原酸等成分快速地流動(dòng)并潤(rùn)濕病理組織，進(jìn)而起到快速地固定作用；綠原酸：具有較廣泛的抗菌作用，醫(yī)學(xué)上具有抗菌、抗病毒、抗氧化、消炎等作用，通過對(duì)加入量的控制，能夠有效避免其致敏作用，使其發(fā)揮抗菌、抗氧化等作用；聚乙烯吡咯烷酮：具有親水性、易流動(dòng)的白色或近乎白色的粉末，具有膠體保護(hù)作用、成膜性、粘結(jié)性、吸濕性、增溶或凝聚作用，與甘油、乙氧基化乙炔二醇等成分配合快速在病理組織的表面及內(nèi)部成膜，凝聚，輔助強(qiáng)化固定效果。該固定液中各組分組配合理，效果明顯，具有防止組織和細(xì)胞自溶、滲透、殺菌、防腐等作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該固定液能夠完全替代甲醛溶液，而且性質(zhì)穩(wěn)定，無毒副作用，病理標(biāo)本經(jīng)固定處理后軟硬度適中，無明顯收縮發(fā)硬現(xiàn)象，韌性良好，無明顯變形和褪色；固定過程中，固定液無混濁或沉淀現(xiàn)象發(fā)生。采用本發(fā)明固定液進(jìn)行病理組織的固定不但可以避免被動(dòng)吸入甲醛的危害，還可避免甲醛保存液易揮發(fā)、聚合沉淀多需定期更新和補(bǔ)充的麻煩和費(fèi)用。此外，本發(fā)明固定液在室溫條件下，活性持久，不易發(fā)霉，能夠作為病理標(biāo)本的保存液長(zhǎng)期使用。
具體實(shí)施方式
為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步清楚闡述本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容不僅僅局限于下面的實(shí)施例。在下文的描述中，給出了大量具體的細(xì)節(jié)以便提供對(duì)本發(fā)明更為徹底的理解。
本發(fā)明所涉及的病理組織是指有病變的組織或臟器，并不限定于某一特定組織，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)普遍知識(shí)能夠常規(guī)選擇將某一病理組織采用本發(fā)明方法進(jìn)行處理，并獲得預(yù)期的效果。
實(shí)施例1
一種病理組織的保存固定液，其組成為：薄荷醇13g，甘油14g，乙氧基化乙炔二醇7ml，綠原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法為：分別稱取上述重量的薄荷醇、甘油、乙氧基化乙炔二醇、綠原酸、聚乙烯吡咯烷酮和氯化鈉；首先將氯化鈉用500ml純水完全溶解，得氯化鈉溶液；然后在其中依次加入甘油、薄荷醇、綠原酸和乙氧基化乙炔二醇，攪拌混合12分鐘；最后加入聚乙烯吡咯烷酮，邊攪拌邊加純水到混合物體積為1000ml，2000rpm/min繼續(xù)攪拌至所述混合物狀態(tài)均一，即得。
為理解本發(fā)明病理組織保存固定液的應(yīng)用，舉例說明一種病理組織保存固定液的使用方法：首先，按照上述病理組織的保存固定液的制備方法獲得保存固定液；然后，將取材后的病理組織浸入上述保存固定液中密封保存，根據(jù)病理組織的使用目的不同，設(shè)定不同時(shí)長(zhǎng)的保存期限。
實(shí)施例2
一種病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇14g，甘油16g，乙氧基化乙炔二醇8ml，綠原酸15g，聚乙烯吡咯烷酮50g，氯化鈉35g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法為：分別稱取上述重量的薄荷醇、甘油、乙氧基化乙炔二醇、綠原酸、聚乙烯吡咯烷酮和氯化鈉；首先將氯化鈉用500ml純水完全溶解，得氯化鈉溶液；然后在其中依次加入甘油、薄荷醇、綠原酸和乙氧基化乙炔二醇，攪拌混合15分鐘；最后加入聚乙烯吡咯烷酮，邊攪拌邊加純水到混合物體積為1000ml，2500rpm/min繼續(xù)攪拌至所述混合物狀態(tài)均一，即得。
實(shí)施例3
一種病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇12g，甘油10g，乙氧基化乙炔二醇5ml，綠原酸10g，聚乙烯吡咯烷酮30g，氯化鈉30g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法為：分別稱取上述重量的薄荷醇、甘油、乙氧基化乙炔二醇、綠原酸、聚乙烯吡咯烷酮和氯化鈉；首先將氯化鈉用500ml純水完全溶解，得氯化鈉溶液；然后在其中依次加入甘油、薄荷醇、綠原酸和乙氧基化乙炔二醇，攪拌混合10分鐘；最后加入聚乙烯吡咯烷酮，邊攪拌邊加純水到混合物體積為1000ml，3000rpm/min繼續(xù)攪拌至所述混合物狀態(tài)均一，即得。
實(shí)施例4
一種病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇15g，甘油20g，乙氧基化乙炔二醇10ml，綠原酸20g，聚乙烯吡咯烷酮70g，氯化鈉40g，純水補(bǔ)至1000ml。
實(shí)施例5
一種病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇13g，甘油12g，乙氧基化乙炔二醇7ml，綠原酸14g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
實(shí)施例6
一種病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇14g，甘油16g，乙氧基化乙炔二醇9ml，綠原酸18g，聚乙烯吡咯烷酮60g，氯化鈉36g，純水補(bǔ)至1000ml
實(shí)施例7
一種病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇14g，甘油18g，乙氧基化乙炔二醇8ml，綠原酸15g，聚乙烯吡咯烷酮55g，氯化鈉35g，純水補(bǔ)至1000ml。
實(shí)施例8
一種病理組織的保存固定液的組成為：薄荷醇15g，甘油19g，乙氧基化乙炔二醇8ml，綠原酸16g，聚乙烯吡咯烷酮65g，氯化鈉38g，純水補(bǔ)至1000ml。
對(duì)比例1
一種病理組織的保存固定液，其組成與實(shí)施例1相同，所不同的是，其制備方法采用下述步驟：分別稱取上述重量的薄荷醇、甘油、乙氧基化乙炔二醇、綠原酸、聚乙烯吡咯烷酮和氯化鈉；量取500ml純水，依次將氯化鈉、甘油、薄荷醇、綠原酸、乙氧基化乙炔二醇和聚乙烯吡咯烷酮加入純水中，攪拌混合12分鐘后，加純水到混合物體積為1000ml，2000rpm/min繼續(xù)攪拌至所述混合物狀態(tài)均一，即得。
對(duì)比例2
一種病理組織的保存固定液，其組成為：薄荷醇13g，乙醇14g，乙氧基化乙炔二醇7ml，綠原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法參閱實(shí)施例1，不再贅述。
對(duì)比例3
一種病理組織的保存固定液，其組成為：薄荷醇13g，甘油14g，乙氧基化乙炔二醇7ml，檸檬酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法參閱實(shí)施例1，不再贅述。
對(duì)比例4
一種病理組織的保存固定液，其組成為：薄荷醇13g，甘油14g，綠原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法參閱實(shí)施例1，不再贅述。
對(duì)比例5
一種病理組織的保存固定液，其組成為：薄荷醇13g，甘油14g，綠原酸13g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法參閱實(shí)施例1，不再贅述。
對(duì)比例6
一種病理組織的保存固定液，其組成為：山梨酸鉀20g，甘油14g，乙氧基化乙炔二醇7ml，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，純水補(bǔ)至1000ml。
上述病理組織的保存固定液的制備方法參閱實(shí)施例1，不再贅述。
對(duì)比例7
一種病理組織的保存固定液，其組成為：體積濃度為20%的甲醛。
效果評(píng)價(jià)
①抑菌實(shí)驗(yàn)：取本發(fā)明實(shí)施例1~4、對(duì)比例1~7所得保存固定液，精確稱重后置于無菌錐形瓶中作為樣品組，并按上述方法制備不加保存固定液的對(duì)照樣品組，將十組分別加入70毫升的磷酸鹽緩沖液（0.03moL/L）和5mL銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌的菌液，在25℃、200rpm/min條件下，振蕩培養(yǎng)1小時(shí)，分別于1小時(shí)取樣，計(jì)算細(xì)菌數(shù)量變化。每批實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次，計(jì)算平均抑菌率。
抑菌率的計(jì)算：依據(jù)公式X=（A-B）/A×100%，X為抑菌率；A為試驗(yàn)樣品振蕩前平均菌落數(shù)；B為試驗(yàn)樣品振蕩后平均菌落數(shù)。判斷標(biāo)準(zhǔn)：不加樣片組振蕩前后的菌落數(shù)差值要在10以內(nèi)，試驗(yàn)樣品抑菌率與對(duì)照組樣品抑菌率之差＞26%，可判定該產(chǎn)品有抗菌作用。
②穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：將本發(fā)明實(shí)施例1~4、對(duì)比例1~7所得保存固定液置于4℃、無菌條件下貯存，6個(gè)月后重做抑菌實(shí)驗(yàn)，觀察其抑菌效果，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌環(huán)直徑并記錄，抑菌圈直徑＞7mm，判定為有抑菌作用；抑菌環(huán)直徑小于或等于7mm，判為無抑菌作用；每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)4次。
其中，銅綠假單胞菌(ATCC 27853)、金黃色葡萄球菌(ATCC 25923)、白色念珠菌（ATCC 10231）均購自中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。
本發(fā)明實(shí)施例1~4、對(duì)比例1~7的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
表1 抑菌及其穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
注：表中的數(shù)據(jù)均為實(shí)驗(yàn)均值。
由表1可以看出，本發(fā)明制得病理組織的保存固定液對(duì)常見的細(xì)菌具有顯著的抑制作用，經(jīng)歷6個(gè)月的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)后依然保持很強(qiáng)的抑菌效果。與采用甲醛進(jìn)行保存固定的效果相當(dāng)。而對(duì)比例1采用不同的制備方法所得保存固定液抑菌效果明顯不穩(wěn)定；對(duì)比例2具有較強(qiáng)的抑菌及持久抑菌效果；對(duì)比例3的短時(shí)抑菌效果較好，持久性較差；對(duì)比例4具有持久抑菌效果，但是效果一般；對(duì)比例5沒有持久抑菌效果；對(duì)比例6具有較弱的持久抑菌效果；實(shí)施例7的持久抑菌效果顯著。
③氣味、形態(tài)、刺激性調(diào)查：臨床采集乳腺癌組織樣本50份，隨機(jī)分成10組，每組5份，分別采用實(shí)施例1~4、對(duì)比例1~7的保存固定液對(duì)上述樣本進(jìn)行固定。由醫(yī)護(hù)人員對(duì)上述保存固定液的氣味及刺激性進(jìn)行評(píng)分；由病理專家對(duì)樣本的12小時(shí)、2個(gè)月、6個(gè)月的保存形態(tài)及其觸感進(jìn)行評(píng)分；上述各項(xiàng)目的評(píng)分區(qū)間為1分至5分，按照各指標(biāo)的強(qiáng)弱程度或優(yōu)良級(jí)別進(jìn)行打分，分?jǐn)?shù)越高代表該指標(biāo)越優(yōu)，分?jǐn)?shù)越低則表明該指標(biāo)越差，1分、2分、3分、4分、5分依次代表差、一般、較好、良好、優(yōu)異。上述指標(biāo)的評(píng)分結(jié)果見表2所示。
表2指標(biāo)評(píng)價(jià)結(jié)果
由表2可以看出，本發(fā)明保存固定液進(jìn)行病理組織的保存固定，氣味小，刺激性小，安全性高；適宜長(zhǎng)期保存，形態(tài)變化小，即不發(fā)生明顯的固縮或膨脹；觸感接近原始狀態(tài)，無明顯硬化或軟化現(xiàn)象。對(duì)比例1與本發(fā)明采用相同的配方，制備方法不同對(duì)其試劑的性質(zhì)有明顯的影響。對(duì)比例2經(jīng)歷2個(gè)月的保存后形態(tài)變化及其觸感即發(fā)生明顯改變。對(duì)比例2經(jīng)歷6個(gè)月的保存后形態(tài)變化及其觸感發(fā)生明顯改變。對(duì)比例3~6舍棄或替換部分組成本發(fā)明的原料，發(fā)現(xiàn)對(duì)其長(zhǎng)期保存來說有明顯的不利影響。對(duì)比例7采用甲醛作為保存固定液，12小時(shí)效果顯著，但是長(zhǎng)期保存無益。
最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案所做的其他修改或者等同替換，只要不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。