一種巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【專利摘要】一種巖黃連的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：（1）取巖黃連側(cè)芽作為外植體進(jìn)行消毒；（2）將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)得到叢生芽；（3）將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；（4）將所述健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗；（5）取完整的帶根苗進(jìn)行煉苗后移植于沙土壤生長(zhǎng)一個(gè)半月，再移栽至大田。采用本發(fā)明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量巖黃連的優(yōu)質(zhì)種苗，有效解決了巖黃連的規(guī)模化育苗問(wèn)題。
【專利說(shuō)明】一種巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]巖黃連(Corydalis saxicola Bunting)亦名石生黃堇,為紫堇科紫堇屬多年生草本植物。全草含脫氫卡維丁(巖黃連堿)等活性成分；具有顯著的抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛和強(qiáng)安定作用，并觀察到有抑制腫瘤細(xì)胞作用；主治瘡癤腫毒、肝炎、肝硬化、肝癌等癥。巖黃連植物分布局限于石灰?guī)r山區(qū)，屬石山特有種。由于生境條件惡劣，其自然繁殖率很低，種群發(fā)展困難，資源蘊(yùn)藏量十分有限。而巖黃連藥材隨著人們認(rèn)識(shí)的不斷提高，用量逐年增加。在桂西北山區(qū)，它已成為當(dāng)?shù)孛癖娪糜谙字雇?、拔毒、治療疥瘡腫毒以及治療肝炎、肝硬化等疾病的常用中草藥；巖黃連總生物堿注射劑和片劑等中藥制劑和產(chǎn)品也已由相關(guān)單位研制出來(lái)，并批量投產(chǎn)。多年來(lái)由于人們大量采挖和收購(gòu)，導(dǎo)致了野生資源的供不應(yīng)求，野生巖黃連資源瀕臨枯竭。
[0003]在，巖黃連主要依靠種子進(jìn)行繁育，但種子發(fā)芽率低，生產(chǎn)上難以實(shí)現(xiàn)大面積栽培。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為了解決巖黃連在自然條件下種子發(fā)芽率低，生產(chǎn)上難以實(shí)現(xiàn)大面積栽培的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖方法，采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，能夠快速有效快速地提高巖黃連種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)巖黃連優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。
[0005]本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的:一種巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:`
[0006](I)外植體的選擇與消毒:取巖黃連側(cè)芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-15min、線狀自來(lái)水沖洗10_20min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0007](2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26°C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、
0.1-0.5mg/L 的 NAA、0.1-0.5mg/L 的 KT、25_30g/L 蔗糖和 3.8-4.8g/L 的瓊脂，培養(yǎng)基的 pH值為5.8，
[0008](3)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26°C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的6_BA、0.1-0.5mg/L的IAA、25_30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;[0009](4)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26°C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的IAA、0.5-1.5mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0010](5)煉苗與移栽:步驟(4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到通風(fēng)良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生長(zhǎng)一個(gè)半月后移栽大田。移栽后一個(gè)星期內(nèi)，每天早8點(diǎn)到晚6點(diǎn)噴霧3-5次，每次lOmin，此后每天早8點(diǎn)、晚6點(diǎn)各噴霧I次，每次IOmin ;移栽時(shí)的溫度條件為20_28°C，相對(duì)濕度75-80%，遮陽(yáng)率為75%。
[0011]本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于:
[0012](I)通過(guò)生物技術(shù)對(duì)巖黃連進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的巖黃連幼苗，顯著提高了巖黃連種苗的繁殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0013](2)在MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.5-1.5mg/L的6_芐基腺嘌呤6-BA和0.1-0.5mg/L的激動(dòng)素KT可促進(jìn)叢生芽的分化；添加濃度為0.1-0.5mg/L的生長(zhǎng)激素萘乙酸NAA可促進(jìn)叢生芽的生長(zhǎng)；
[0014]在MS壯苗培養(yǎng)基中添加濃度為1.0mg/L的6-BA和0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA可促進(jìn)叢生芽葉片的展開(kāi)；
[0015]在1/2MS生根培養(yǎng)基上組合使用濃度為1.0mg/L的吲哚丁酸IBA和0.1-0.5mg/L的生長(zhǎng)素IAA，可獲得帶根的完整植株，這些植株經(jīng)煉苗后可直接移栽沙床。
[0016](3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法，得到的單芽增殖系數(shù)達(dá)到5-8倍，獲得的組培苗生根率在95%以上，每株平`均帶3-4個(gè)根，根長(zhǎng)為3-5厘米，移栽沙床成活率在98%以上；快速、便捷、高效地進(jìn)行巖黃連組織培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)巖黃連組培種苗的規(guī)模化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說(shuō)明。
[0018]本發(fā)明所述的巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0019](I)外植體的選擇與消毒:取巖黃連側(cè)芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-15min、線狀自來(lái)水沖洗10_20min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0020](2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26°C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時(shí)間為10_12h/d的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得大量叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的6-BA、NAA和KT (表1)，30g/L蔗糖和4.0g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，6-BA對(duì)巖黃連叢生芽增殖倍率具有極顯著影響，NAA對(duì)巖黃連叢生芽增殖倍率具有顯著影響，根據(jù)繁殖倍率指標(biāo)確定的最適培養(yǎng)基激素濃度為1.0mg/L的6-BA、0.lmg/L的NAA和0.2mg/L的KT ；
[0021]表1不同激素對(duì)巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖效果的影響[0022]
【權(quán)利要求】
1.一種巖黃連組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (O外植體的選擇與消毒:取巖黃連側(cè)芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-15min，線狀自來(lái)水沖洗10_20min，添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min，無(wú)菌水沖洗3_5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水； (2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26°C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的6_BA、0.1-0.5mg/L的NAA,0.1-0.5mg/L 的 KT、25_30g/L 蔗糖和 3.8-4.8g/L 的瓊脂，培養(yǎng)基的 pH 值為 5.8 ； (3)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-260C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的6_BA、0.1-0.5mg/L的IAA、25_30g/L蔗糖和`3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (4)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26°C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時(shí)間為10-12小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的IAA、0.5-1.5mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (5)煉苗與移栽:步驟(4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25。的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到通風(fēng)良好且弱光沙土壤中，在沙土壤中生長(zhǎng)一個(gè)半月后移栽大田。``
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103548695SQ201310537770
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】李林軒, 韋坤華, 繆劍華, 李翠, 韋瑩 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園