專利名稱：一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種通過茶壺棗無菌短枝扦插方法獲得茶壺棗組培苗的方法。
背景技術(shù)：
:率(ZiziphusjujubeMill)為鼠李科(Rhamnaceae)率屬(ZiziphusMill)植物，是原產(chǎn)于我國的特有經(jīng)濟樹種。棗樹適應(yīng)性強，抗旱，耐鹽堿、耐瘠薄，具有良好的水土保持作用。果實含有非常豐富的糖、Vc、cAMP以及蛋白質(zhì)、脂肪、Vp、B族維生素和Fe、P、Ca、Zn等人類必需的物質(zhì)，具有很高的營養(yǎng)價值和食療價值。棗樹種類繁多，高度雜合，遺傳背景復(fù)雜，具有花小、坐果率低、早期胚敗育等特點，造成去雄和人工授粉困難，不易得到雜種后代，種質(zhì)創(chuàng)新遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他果樹，利用組織培養(yǎng)可以進(jìn)行苗木的快繁、無病毒苗木的培育、種質(zhì)資源的離體保存，同時也為生物技術(shù)育種奠定基礎(chǔ)。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，給果樹育種開辟了全新的道路，進(jìn)行了體細(xì)胞變異的誘導(dǎo)和利用花粉和花藥培養(yǎng)、植物的遺傳轉(zhuǎn)化及與植物遺傳育種相關(guān)的其他分子生物學(xué)技術(shù)。在棗樹生產(chǎn)不斷發(fā)展的同時，國內(nèi)外學(xué)者在花藥培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)方面取得了一定的進(jìn)展，也開展了棗不定芽再生體系的研究，在棗莖段、葉片、體細(xì)胞胚形成和胚挽救等方面取得了很大的進(jìn)展。利用花藥培養(yǎng)、原生質(zhì)體融合及不定芽再生體系進(jìn)行了種質(zhì)創(chuàng)新和新品種選育，這為今后原生質(zhì)體融合、基因工程等現(xiàn)代育種技術(shù)在棗品種改良中的應(yīng)用奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。茶壺棗原產(chǎn)于山東，通常在棗身肩部或近肩部長出一對對角排列的肉質(zhì)突出物，因突出物酷似茶壺的壺嘴、壺把而得名，形狀奇特，艷麗美觀。果皮薄，紫紅色，富光澤鮮艷，果肉綠白色，質(zhì)地粗松略綿，汁液中多，味甜略酸，鮮食品質(zhì)較優(yōu)，是一種有極高的觀賞價值食用為一體的優(yōu)良經(jīng)濟植物。適合于園林、庭院、盆栽或點綴花壇、草坪的新型綠化樹種。利用組織培養(yǎng)的方法，不僅可以建立茶壺棗的脫毒系，同時還可以加速茶壺棗苗木的繁育速度。然而常規(guī)的組織培養(yǎng)方法所獲得的茶壺棗組培苗成活率低，難以大面積的推廣使用
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的所述不足，提供一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法，通過對工藝流程和培養(yǎng)基的選擇和優(yōu)化，使得能夠更加有效、方便的在短時間內(nèi)獲得大量茶壺棗組培苗，所獲得的組培苗成活率高。本發(fā)明實施例提供的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:剪取大田茶壺棗帶芽莖尖，自來水洗凈后，至于酒精中消毒，用升汞滅菌，無菌水沖洗干凈后，接種于啟動培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接至分生培養(yǎng)基，然后轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基，最后在生根培養(yǎng)基中完成整個組培體系的建立。在人工控制的光照、溫度條件下無菌培養(yǎng)，移栽。其中，所述消毒酒精濃度為75%，消毒時間為30s，滅菌使用0.1%的氯化汞，滅菌時間為7min,無菌水沖洗6次。
其中，所述啟動培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L+萘乙酸
0.lmg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖30g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時間為30d。其中，所述繼代培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L+吲哚丁酸0.5mg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖30g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時間為35d。其中，所述繼代培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤2.0mg/L+吲哚丁酸0.5mg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖30g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時間為35d。其中，所述生根培養(yǎng)基配方為改良MS培養(yǎng)基+吲哚丁酸0.4mg/L+聚乙烯吡咯烷酮lg/L+蔗糖20g/L+倍立凝6g/L，pH=6,培養(yǎng)時間為35d。其中，所述大田茶壺棗帶芽莖段的采集地點為北京林業(yè)大學(xué)河北滄州棗樹育種實踐基地，時間為當(dāng)年4月中下旬到5月中旬。

其中，所述人工控制的光照、溫度條件為光照強度20001x±1001x，光照時間14h/d，溫度 25±1°C。優(yōu)選的，本發(fā)明中的茶壺棗選自山東茶壺棗。所述MS基本培養(yǎng)基為本領(lǐng)域常見的MS培養(yǎng)基，其實例包括但不限于(Murashigeand Skoog, 1962)所列舉的配方:
權(quán)利要求
1.一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟:剪取大田茶壺棗帶芽莖尖，自來水洗凈后，置于酒精中消毒，用升汞滅菌，無菌水沖洗干凈后，接種于啟動培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接至分生培養(yǎng)基，然后轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基，最后在生根培養(yǎng)基中完成整個組培體系的建立，在人工控制的光照、溫度條件下無菌培養(yǎng)，移栽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述消毒酒精濃度為70-80%，消毒時間為25-35s，滅菌使用0.05-0.15%的氯化汞，滅菌時間為5_9min，無菌水沖洗4次以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述啟動培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤1.0-3.0mg/L+萘乙酸0.05-0.15mg/L+聚乙烯吡咯烷酮 0.8-1.2g/L+ 蔗糖 20-40g/L+ 倍立凝 4_8g/L，pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時間為 25-35 天。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述分生培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤3.0-5.0mg/L+萘乙酸0.05-0.15mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.8-1.2g/L+ 蔗糖 20-40g/L+ 倍立凝 4_8g/L，pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時間為 30_40d。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述繼代培養(yǎng)基配方為MS基本培養(yǎng)基+6-芐氨基腺嘌呤1.5-2.5mg/L+吲哚丁酸0.4-0.6mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.8-1.2g/L+ 蔗糖 20-40g/L+ 倍立凝 4_8g/L，pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時間為 30_40d。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基配方為改良MS培養(yǎng)基+吲哚丁酸0.3-0.5mg/L+聚乙烯吡咯烷酮0.8-1.2g/L+蔗糖15_25g/L+4-8g/L, pH=5.5-6.5，培養(yǎng)時間為 30_40d。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述大田茶壺棗帶芽莖段的采集時間為當(dāng)年4月中下旬到5月中旬。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述人工控制的光照、溫度條件為光照強度2 0001X ± 1001X，光照時間14 ± 2h/d，溫度25 ± 2 °C。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的茶壺棗組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述改良MS培養(yǎng)基的配方如下表所示:
全文摘要
本發(fā)明公開了一種茶壺棗組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟剪取大田茶壺棗帶芽莖尖，自來水洗凈后，置于酒精中消毒，用升汞滅菌，無菌水沖洗干凈后，接種于啟動培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)接至分生培養(yǎng)基，然后轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基，最后在生根培養(yǎng)基中完成整個組培體系的建立，在人工控制的光照、溫度條件下無菌培養(yǎng)，移栽。按本發(fā)明實施例進(jìn)行的茶壺棗的離體快速繁殖，從接種至生根僅需要70天，即可下地移栽至育苗床，誘導(dǎo)成活率高達(dá)97％，增值倍數(shù)為10倍，移栽生根率也高達(dá)95％。
文檔編號A01H4/00GK103190347SQ20131014957
公開日2013年7月10日 申請日期2013年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月26日
發(fā)明者李穎岳, 金琪, 龐曉明, 王巖, 續(xù)九如 申請人:北京林業(yè)大學(xué)