專利名稱：一種瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藻類的繁育方法，特別涉及一種瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法。
背景技術(shù)：
馬尾藻屬褐藻門、馬尾藻科。我國是馬尾藻主要產(chǎn)地之一，有60多種，常見的有裂葉馬尾藻、半葉馬尾藻、匐枝馬尾藻、亨氏馬尾藻、海蒿子、瓦氏馬尾藻等。其中，瓦氏馬尾藻，拉丁名為Sargassum vacheIlianum Greville,是一種集中分布于我國浙江、福建、廣東及香港等地沿海，瓦氏馬尾藻本身因富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、無機(jī)鹽、維生素等而廣泛應(yīng)用到醫(yī)藥、食品、飼料和有機(jī)肥料領(lǐng)域。尤其是有機(jī)肥料領(lǐng)域，已經(jīng)頗受人們的關(guān)注。瓦氏馬尾藻肥相比化肥，有著天然的優(yōu)勢，沒有二次污染，而且對于作物和土壤沒有任何危害，對植物的生長起著顯著的調(diào)節(jié)和促進(jìn)作用。瓦氏馬尾藻植株高大，枝葉繁茂，多生長在潮下帶淺海巖礁上，成片漂浮于水面，是我國東部海底藻場的重要成員之一。海底藻場就如“海底牧場”一樣，能修復(fù)脆弱的海洋生態(tài)環(huán)境。近年來，海洋環(huán)境惡化，海域海水的富營養(yǎng)化程度比較高，氮、磷元素的含量高，容易引發(fā)赤潮等危害，對海洋生物的生長造成了嚴(yán)重影響。而由瓦氏馬尾藻等藻類植物組成的海藻場，能凈化水體環(huán)境，防止海洋環(huán)境的破壞，也為多種門類的海洋生物的棲息生活地，為它們提供了避敵、索餌、產(chǎn)卵的理想場所，從而形成生機(jī)蓬勃、穩(wěn)定變化的生態(tài)系統(tǒng)。瓦氏馬尾藻的快速生長和巨大生物量引起海洋工作者的關(guān)注與興趣，被海洋生態(tài)學(xué)家列為重建海底藻場和實施海洋生態(tài)修復(fù)的重要物種之一。但目前關(guān)于該類海藻的繁殖生物學(xué)和苗種繁育方法幾乎沒有研究，所以，開展室內(nèi)人工促熟成藻，完成有性生殖，獲得受精卵進(jìn)行全人工育苗具有重要意義
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，可實現(xiàn)雌、雄生殖托同步成熟，提高成活率和出苗率。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn):—種瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其步驟包括:(I)將已發(fā)育出圓錐花序狀生殖托雛形的瓦氏馬尾藻作為成藻，在溫度為16_20°C的條件下，于培養(yǎng)液中暫養(yǎng)18-22天，每5-8天更換一半培養(yǎng)液，直至雌、雄生殖托出現(xiàn)為止;(2)取步驟(I)中具有生殖托的成藻側(cè)枝，按照雌、雄生殖托數(shù)量1:1的比例，充氣培養(yǎng)1-5天，每1-3天更換一半培養(yǎng)液，直至受精卵開始脫落沉降為止；充氣培養(yǎng)溫度為21-24°C，光照強(qiáng)度 1500-23001x，光照周期 14L:10D ；(3)收集步驟(2)中的開始脫落沉降的受精卵，在溫度為21-24°c，光照強(qiáng)度為1800-22001X，光照周期14L:10D的條件下，靜置培養(yǎng)18-25天，即可繁育成幼苗；
所述步驟(I)中的暫養(yǎng)條件為，光照強(qiáng)度1500-20001X，光照周期10L:14D。所述步驟(2)中，成藻側(cè)枝的長度為2_6cm，該側(cè)枝上具15_20個生殖托。所述步驟(3)中，收集從成藻側(cè)枝上開始脫落沉降10_14h時的受精卵進(jìn)行培養(yǎng)，該受精卵的培養(yǎng)密度為20-80個/cm2。優(yōu)選的，收集從成藻側(cè)枝上開始脫落沉降12h時的受精卵進(jìn)行培養(yǎng)，該受精卵的培養(yǎng)密度為40-50個/cm2。所述步驟(3)中，幼苗的長度為3_6mm，具有2_4個藻葉。將步驟(3)中得到的幼苗充氣培養(yǎng)10-30天，每3-6天更換一半培養(yǎng)液，培養(yǎng)溫度為20-26°C，光照強(qiáng)度為3000-35001x，光照周期為14L:10D。目的是為了加速幼苗的生長，能更好地進(jìn)行海上增殖和人工栽培。

所述培養(yǎng)液為MES培養(yǎng)基與滅菌海水按照體積比為1: 0.01-0.03的比例混合而成的混合液；所述培養(yǎng)液中還含有濃度為0.5-1.0mg/L的KI。所述MES 培養(yǎng)基的組分為，EDTA.2Na、H3BO3' MnCl2.4H20、FeCl3.6H20、ZnCl2,CoCl2.6H20、檸檬酸鐵、NaNO3、甘油磷酸鈉、三羥甲基氨基甲烷，各組分的相應(yīng)濃度為
0.3-0.8g/L、0.4-0.6g/L、0.05-0.09g/L、0.01-0.03g/L、0.002-0.007g/L、0.001-0.003g/L、0.01-0.03g/L、l-4g/L、0.2-0.6g/L、2_7g/L，該 MES 培養(yǎng)基的 pH 值為 7-8。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于:1、本發(fā)明方法是在人工控制條件下，暫養(yǎng)并促熟瓦氏馬尾藻的雌雄親藻，使有性生殖過程中的卵子和精子同步放散，完成配子接合，不僅可以有效地控制和延長有性繁殖時間，而且可以確保較高的受精率和幼苗成活率，受精率達(dá)到95%以上。2、本發(fā)明方法不受自然條件、氣候變化的影響，在相對較長的時間段內(nèi)，可根據(jù)需要通過控制成藻的成熟度，進(jìn)行采苗和育苗，獲得成批的人工苗種，用于海上增殖或人工栽培。3、本發(fā)明方法采用充氣培養(yǎng)獲取受精卵后轉(zhuǎn)為靜置培養(yǎng)，避免了瓦氏馬尾藻幼孢子體假根的互相粘連，保證了幼苗的正常生長。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明:培養(yǎng)液的配制:將3.0g EDTA.2Na、2.5g H3BO3>0.35g MnCl2 *4H20,2mL FeCl3.6Η20溶液(62.5mg/mL)、2mL ZnCl2 溶液(12.5mg/mL)、2mL CoCl2.6Η20 溶液(5mg/mL)、2mL 梓樣酸鐵溶液(30mg/mL)混合，用蒸餾水定容至lOOOmL，配成MPII溶液然后再取200mL MP II溶液與2.8gNaN03、0.4g甘油磷酸鈉、4.0g三輕甲基氨基甲燒和700mL蒸懼水混合,定容至IOOOmL,配成MES培養(yǎng)基，該MES培養(yǎng)基的pH值為7.6，然后將MES培養(yǎng)基高壓滅菌后保存于冰箱；在IL滅菌海水中加入20mL的MES培養(yǎng)基組成瓦氏馬尾藻的培養(yǎng)液，為了更好地提供瓦氏馬尾藻所需的營養(yǎng)兀素碘，在培養(yǎng)液中再加入KI,使得培養(yǎng)液中的KI濃度為Img/L0實施例(I)成藻的選擇:采集生長于自然海區(qū)潮下帶的，已發(fā)育出圓錐花序狀生殖托雛形、尚無法區(qū)分雌雄個體的，附生生物較少的，健康狀況良好的瓦氏馬尾藻作為成藻。(2)成藻的暫養(yǎng):成藻用滅菌海水暫養(yǎng)于放有培養(yǎng)液的培養(yǎng)桶內(nèi)，每7天更換一半海水，暫養(yǎng)20天。暫養(yǎng)條件:溫度18°C，光照強(qiáng)度1500-20001x，光照周期10L:14D。(3)生殖托促熟:將步驟(2)中的暫養(yǎng)的成藻剪下具有生殖托的側(cè)枝，每個側(cè)枝長3_5cm，其上具有15-20個生殖托，按照雌、雄生殖托1:1的比例，充氣培養(yǎng)于同一充氣瓶內(nèi)(用氣泵充空氣)，充氣培養(yǎng)2-3天，每天更換一半培養(yǎng)液。培養(yǎng)條件:溫度21-24°C，光照強(qiáng)度20001x，光照周期 14L:10D。(4)幼苗的培育:受精卵開始脫落沉降后12h時收集受精卵，此時受精卵剛剛發(fā)育至長出4-8個假根芽的幼孢子體，彼此之間不會粘連成塊，易實現(xiàn)均勻分散，靜置培養(yǎng)20天，受精卵的培養(yǎng)密度為40-50個/cm2，每天更換一半培養(yǎng)液，培養(yǎng)條件，溫度21-24°C，光照強(qiáng)度20001x，光照周期14L: 10D，即可 完成幼苗的培養(yǎng)。為了加速幼苗的生長，能更好地進(jìn)行海上增殖和人工栽培，將上述幼苗進(jìn)一步進(jìn)行充氣培養(yǎng)，具體步驟為，將靜止培養(yǎng)20天的幼苗，長度約5_，具有2-4個藻葉，充氣培養(yǎng)20天，每5天更換一半培養(yǎng)液。培養(yǎng)條件:溫度21-24°C，光照強(qiáng)度3000-35001X，光照周期14L:10D。本實施例中的瓦氏馬尾藻的受精卵的受精率在95%以上，大大提高了瓦氏馬尾藻
的繁育率。因為瓦氏馬尾藻幼孢子體長出的假根粘性很大，所以本實施例中，先采用充氣培養(yǎng)的方式培養(yǎng)獲取的受精卵，然后再轉(zhuǎn)為靜置培養(yǎng)，得到的幼孢子體避免了假根的互相粘連，保證了幼苗的正常生長，提高了出苗率?，F(xiàn)有技術(shù)中，將受精卵采用充氣培養(yǎng)的方式繁育成幼苗，不經(jīng)過靜置培養(yǎng)的步驟，造成幼孢子體的假根互相粘連成團(tuán)的現(xiàn)象發(fā)生，出苗率明顯減低。以上所述為本發(fā)明的較佳實施例而已，但本發(fā)明不應(yīng)該局限于該實施例所公開的內(nèi)容。所以凡是不脫離本發(fā)明所公開的精神下完成的等效或修改，都落入本發(fā)明保護(hù)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其步驟包括: (1)將已發(fā)育出圓錐花序狀生殖托雛形的瓦氏馬尾藻作為成藻，在溫度為16-20°c的條件下，于培養(yǎng)液中暫養(yǎng)18-22天，每5-8天更換一半培養(yǎng)液，直至雌、雄生殖托出現(xiàn)為止； (2)取步驟(I)中具有生殖托的成藻側(cè)枝，按照雌、雄生殖托數(shù)量1:1的比例，充氣培養(yǎng)1-5天，每1-3天更換一半培養(yǎng)液，直至受精卵開始脫落沉降為止；充氣培養(yǎng)溫度為21-24°C，光照強(qiáng)度 1500-23001x，光照周期 14L:10D ； (3)收集步驟(2)中的開始脫落沉降的受精卵，在溫度為21-24°C，光照強(qiáng)度為1800-22001x，光照周期14L:10D的條件下，靜置培養(yǎng)18-25天，即可繁育成幼苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:所述步驟(I)中的暫養(yǎng)條件為，光照強(qiáng)度1500-20001X，光照周期10L:14D。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:所述步驟(2)中，成藻側(cè)枝的長度為2_6cm,該側(cè)枝上具15-20個生殖托。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:所述步驟(3)中，收集從成藻側(cè)枝上開始脫落沉降10-14h時的受精卵進(jìn)行培養(yǎng)，該受精卵的培養(yǎng)密度為.20-80 個/cm2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:所述步驟(3)中，收集從成藻側(cè)枝上開始脫落沉降12h時的受精卵進(jìn)行培養(yǎng)，該受精卵的培養(yǎng)密度為.40-50 個 /cm2。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:所述步驟(3)中，幼苗的長度為3-6mm，具有2-4個藻葉。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:將步驟(3)得到的幼苗充氣培養(yǎng)10-30天，每3-6天更換一半培養(yǎng)液，培養(yǎng)溫度為20-26°C，光照強(qiáng)度為.3000-35001x，光照周期為 14L:10D。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:所述培養(yǎng)液為MES培養(yǎng)基與滅菌海水按照體積比為1:0.01-0.03的比例混合而成的混合液；所述培養(yǎng)液中還含有濃度為0.5-1.0mg/L的KI。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，其特征在于:所述MES培養(yǎng)基的組分為，EDTA.2Na、H3BO3' MnCl2.4H20、FeCl3.6H20、ZnCl2, CoCl2.6H20、檸檬酸鐵、NaNO3、甘油磷酸鈉、三羥甲基氨基甲烷，各組分的相應(yīng)濃度為0.3-0.8g/L、0.4-0.6g/L、.0.05-0.09g/L、0.01-0.03g/L、0.002-0.007g/L、0.001-0.003g/L、0.01-0.03g/L、l_4g/L、.0.2-0.6g/L、2-7g/L，該 MES 培養(yǎng)基的 pH 值為 7-8。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種藻類的繁育方法，特別涉及一種瓦氏馬尾藻人工苗種的繁育方法，將瓦氏馬尾藻的成藻，在溫度為16-20℃的條件下，于培養(yǎng)液中暫養(yǎng)18-22天，每5-8天更換一半培養(yǎng)液，直至雌、雄生殖托出現(xiàn)為止；按照雌、雄生殖托數(shù)量1:1的比例，充氣培養(yǎng)1-5天，每1-3天更換一半培養(yǎng)液，直至受精卵開始脫落沉降為止；收集開始脫落沉降的受精卵，在溫度為21-24℃，光照強(qiáng)度為1800-2200lx，光照周期14L:10D的條件下，靜置培養(yǎng)18-25天，即可。本方法不僅有效地控制和延長有性繁殖時間，且可確保較高的受精率和幼苗成活率，受精率達(dá)到95%以上，而且不受自然條件和氣候變化的影響。
文檔編號A01G33/00GK103202214SQ20131014877
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月26日
發(fā)明者嚴(yán)興洪, 張婧 申請人:上海海洋大學(xué)