專利名稱：一種小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
小花蜘蛛抱蛋，為百合科植物小花蜘蛛抱蛋(Aspidistra minutiflora Stapf inJourn.Linn.)。多年生常綠草本，根狀莖直徑約6毫米，具密節(jié)和鱗片。分布于我國亞熱帶地區(qū)廣西、廣東和貴州三省，以廣西分布最多。生于路旁或山腰之花崗巖或石灰?guī)r上。辛、苦，寒。肺、肝二經(jīng)。有清熱止咳，續(xù)傷接骨的功效?？捎糜谔禑峥人?，用于跌撲閃挫，金瘡，損傷溺骨等證。小花蜘蛛抱蛋花色褐紫色或淡綠色，具有較高的園林觀賞和一定的藥用價值，近年來其資源遭到了嚴(yán)重破 壞，且對生長環(huán)境要求十分苛刻，一般僅正常出現(xiàn)在保存較好的原生林內(nèi)，對群落植物、光線、濕度、土壤和地被層均有不同程度的特殊要求。隨著市場需求量的不斷增加，野生小花蜘蛛抱蛋資源瀕臨枯竭了，生產(chǎn)上難以實現(xiàn)大面積栽培。采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高小花蜘蛛抱蛋種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實現(xiàn)小花蜘蛛抱蛋優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn)上的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良小花蜘蛛抱蛋種苗。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的:一種小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:(I)外植體的選擇與消毒:取小花蜘蛛抱蛋側(cè)芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-15min、線狀自來水沖洗10_20min、添加了 2-3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水，(2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(I)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26° C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L 的 6-BA、1.0-2.0mg/L 的 NAA、25_30g/L 蔗糖和 3.8-4.8g/L 的瓊脂，培養(yǎng)基的 pH值為 5.8，(3)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26° C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的6_BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，(4)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26° C，光照強(qiáng)度1400-20001UX，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，(5)煉苗與移栽:步驟(4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25° C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到通風(fēng)良好且弱光的沙土壤中，在沙土壤中生長一個半月后移栽大田。移栽后一個星期內(nèi)，每天早8點到晚6點噴霧3-5次，每次lOmin，此后每天早8點、晚6點各噴霧I次，每次IOmin ;移栽時的溫度條件為20-28° C，相對濕度75_80%，遮陽率為70%。本發(fā)明的突出優(yōu)點在于:( I)本發(fā)明通過生物技術(shù)對小花蜘蛛抱蛋進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，在短時間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的小花蜘蛛抱蛋幼苗，顯著提高了小花蜘蛛抱蛋種苗的繁殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。(2)在MS繁殖培養(yǎng)基中添加1.0-2.0mg/L的6_芐基腺嘌呤6-BA和0.1-0.4mg/L的激動素KT可促進(jìn)叢生芽的分化；添加濃度為0.5-1.5mg/L的生長激素萘乙酸NAA可促進(jìn)叢生芽的生長；在MS壯苗培養(yǎng)基中添加濃度為1.5mg/L的6-BA和0.2-0.6mg/L的吲哚乙酸IAA可促進(jìn)叢生芽葉片的展開；在MS生根培養(yǎng)基上組合使用濃度為2.0mg/L的吲哚丁酸IBA和1.0mg/L的生長素IAA，可獲得帶根的完整植株，這些植株經(jīng)煉苗后可直接移栽沙床。(3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法，得到的單芽增殖系數(shù)達(dá)到5-8倍，獲得的組培苗生根率在95%以上，每株平均帶 3-4個根，根長為3-5厘米，移栽沙床成活率在98%以上；快速、便捷、高效地進(jìn)行小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)，實現(xiàn)小花蜘蛛抱蛋組培種苗的規(guī)?；a(chǎn)。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說明。一種小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:(I)外植體的選擇與消毒:取小花蜘蛛抱蛋側(cè)芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-15min、線狀自來水沖洗10_20min、添加了 2-3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水，(2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖:將步驟(I)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26° C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時間為10_12h/d的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得大量叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中添加不同濃度的KT、6-BA和IAA，詳見表l，30g/L蔗糖和4.0g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，KT和IAA對小花蜘蛛抱蛋叢生芽增殖倍率具有顯著影響，根據(jù)生長率指標(biāo)確定的最適培養(yǎng)基激素濃度為0.2mg/L 的 KT2.0mg/L 的 6-BA 和 1.5mg/L 的 NAA。表I不同激素對小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)快速繁殖效果的影響
權(quán)利要求
1.一種小花蜘蛛抱蛋組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒:取小花蜘蛛抱蛋側(cè)芽作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5-15min、線狀自來水沖洗10_20min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙吸去表面水分，得到外植體，其中無菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水， (2)側(cè)芽分化獲得叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(I)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-26° C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)30天，側(cè)芽分化后獲得叢生芽，其中MS培養(yǎng)基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的6-BA、1.0-2.0mg/L 的 NAA、25_30g/L 蔗糖和 3.8-4.8g/L 的瓊脂，培養(yǎng)基的 pH 值為 5.8， (3)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26° C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的6_BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25_30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8， (4)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(3)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-26° C，光照強(qiáng)度1400-20001ux，光照時間為10-12小時/天的條件下培養(yǎng)40天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8， (5)煉苗與移栽:步驟(4)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25。C的室內(nèi)打開瓶蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到通風(fēng)良好且弱光沙土壤中，在沙 土壤中生長一個半月后移栽大田。
全文摘要
一種小花蜘蛛抱蛋的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟(1)取小花蜘蛛抱蛋側(cè)芽作為外植體進(jìn)行消毒；(2)將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)得到叢生芽；(3)將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；(4)將所述健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗；(5)取完整的帶根苗進(jìn)行煉苗后移植于沙土壤生長一個半月，再移栽至大田。采用本發(fā)明所述方法得到的種苗健壯、成活率高，可在短期內(nèi)提供大量小花蜘蛛抱蛋的優(yōu)質(zhì)種苗，有效解決了蜘蛛抱蛋的規(guī)?；鐔栴}。
文檔編號A01H4/00GK103168686SQ20131008799
公開日2013年6月26日 申請日期2013年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月30日
發(fā)明者張占江, 李翠, 韋坤華, 繆劍華, 李林軒, 韋瑩, 凌征柱 申請人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園