專(zhuān)利名稱：一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌及其制劑，該海洋細(xì)菌為從紅樹(shù)植物-老鼠簕(J can thus i licifolius)葉片內(nèi)分離獲得的解淀粉芽孢桿菌iBaci Ilusamyloli quefaci ens )。該菌株在NA培養(yǎng)基上菌落呈淺黃色,不透明,表面粗糙干燥，邊緣不整齊，直桿狀，革蘭氏染色陽(yáng)性，產(chǎn)芽孢，芽孢橢圓形，中生或近中生。菌株生長(zhǎng)溫度范圍為15-50°C，生長(zhǎng)的pH范圍為5. 0-9. O,能耐受10. 0%的氯化鈉。該菌株可在香蕉體內(nèi)及根土壤中定殖，并可分泌產(chǎn)生抑制多種植物病原真菌的抗菌蛋白；
液體菌劑制備將BaL3菌株接種于PBY培養(yǎng)基(牛肉膏5. O g，蛋白胨10.0 g，NaCl5. O g，酵母膏 5.0 g，葡萄糖 10.0 g，pH 7.5，水 1000 mL)上，25_28°C下 180_200r/min 振蕩發(fā)酵培養(yǎng)48-36小時(shí)，其活菌總濃度為I X IO9-1 X 1010cfu/ml ；
固體菌劑制備取上述海洋細(xì)菌BaL3菌株液體菌劑，按10-20% (V/W)的接菌量于固體培養(yǎng)基[貝殼粉92-96%、米糠1-3%、麩皮3-5%、5-10%、石灰水5-20% (V/W)]中，25-28°C下發(fā)酵培養(yǎng)24-48小時(shí)，然后干燥后制成固體菌劑，固體菌劑成品中活菌總濃度為lX109-lX1012cfu/g。實(shí)施例2
海洋細(xì)菌BaL3菌株在香蕉體內(nèi)及根際土壤中的定殖
取BaL3菌株培養(yǎng)液，用澆灌法將菌液澆灌于香蕉苗根部，分離結(jié)果表明，處理30天后可從香蕉假莖內(nèi)、根表及其根際土壤中均分離到該菌株，說(shuō)明該菌株可在香蕉假莖內(nèi)、根表及其根際土壤中定殖存活30天以上。實(shí)施例3
海洋細(xì)菌BaL3菌株制劑對(duì)室內(nèi)盆栽香蕉枯萎病的防治和對(duì)香蕉的促生作用選取6-7片葉健壯的香蕉組培苗，移栽至裝有滅菌土的圓盆缽(160X220 mm)中，分別按如下6組進(jìn)行處理(A)移栽后立即用BaL3菌株液體制劑(濃度為IO8 cfu/mL)灌根(50mL/株)，20 d重復(fù)處理一次；(B)移栽前用BaL3菌株液體制劑噴葉、移栽時(shí)用BaL3菌株液體制劑浸根2 h ；(C) (A)+ (B)處理；(D)移栽前用BaL3菌株固體制劑與土壤攪拌處理(100 g/株)，之后按處理(A)進(jìn)行處理；CK1 :清水對(duì)照；CK2 :病原菌處理對(duì)照。每處理10盆(株)，于移栽后第7、15和30 d灌根接種香蕉枯萎病菌孢子懸浮液(濃度為IO7個(gè)/mL)，接種量為100 mL/株。防病作用調(diào)查結(jié)果表明(表1)，接種病原菌2個(gè)月后，單獨(dú)接種香蕉枯萎病原菌處理(CK2)開(kāi)始出現(xiàn)病株，而制劑處理均未見(jiàn)發(fā)??；接種病原菌4個(gè)月和6個(gè)月后CK2發(fā)病率為60%和100%，而同期AiL3菌株處理的香蕉苗發(fā)病度均在10%和20%以下，其中噴葉和浸根再灌根處理(C)均未見(jiàn)發(fā)病。
權(quán)利要求
1.一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑，其特征在于該制劑所利用的海洋細(xì)菌BaL3菌株為從紅樹(shù)植物-老鼠簕葉片內(nèi)分離獲得的解淀粉芽孢桿菌amyloliquefaciens，2Q\2^\QH 29日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No. 6718。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑，其特征在于該菌劑的使用方法是于香蕉移栽時(shí)將菌株固體菌劑施入根部土壤，用量80-120Kg/畝，或用菌株液體菌劑，稀釋10-50倍灌根，然后每間隔30-60天用菌株液體菌劑灌根，或?qū)⒕旯腆w菌劑施入根部土壤。
3.權(quán)利要求1所述海洋細(xì)菌BaL3菌株及其制備的生物制劑。
4.權(quán)利要求2所述生物制劑在防治香蕉枯萎病等方面的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述的一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑液體菌劑的制備方法，其特征在于 將海洋細(xì)菌BaL3菌株接種于PBY培養(yǎng)基牛肉膏5.0 g，蛋白胨10.0 g，NaCl 5.0 g，酵母膏 5.0 g，葡萄糖 10.0 g，pH 7. 5，水 1000 mL，25_28°C下 180_200r/min 振蕩發(fā)酵培養(yǎng)48-36小時(shí)，其活菌總濃度為lX109-lX101Qcfu/ml。
6.權(quán)利要求1所述的一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑固體菌劑的制備方法，其特征在于 將權(quán)利要求5所述的海洋細(xì)菌BaL3菌株液體菌劑，按10-20% (V/W)接菌量接種于固體培養(yǎng)基中，25-28°C下發(fā)酵培養(yǎng)24-48小時(shí)，干燥后制成固體菌劑，固體成品中活菌總濃度為 lX109-lX1012cfu/go
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑固體菌劑的制備方法，其特征在于所述的菌株固體培養(yǎng)基的配方為 60-100目貝殼粉 70-80% 米糠10-15% 麩皮5-15% 5-15% 的石灰水 5-15% (V/W)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治香蕉枯萎病的海洋細(xì)菌制劑，屬于植物保護(hù)領(lǐng)域。該海洋細(xì)菌BaL3菌株為解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。將該菌接種于PBY培養(yǎng)基25-28℃下180-200r/min振蕩培養(yǎng)36-48小時(shí)，即得液體菌劑，其活菌總濃度為1×109-1×1010cfu/ml。取菌株液體菌劑接種于固體培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)24-48小時(shí)，干燥后制成固體菌劑，其活菌總濃度為1×109-1×1012cfu/g。制劑對(duì)香蕉枯萎病溫室防效80-100%，田間防效46.4%-72.3%，并可促進(jìn)香蕉假莖增粗，葉片增綠，提早抽蕾。該制劑可灌根或噴霧防病使用，也可作為生物肥料使用。
文檔編號(hào)A01N63/02GK103004886SQ20121052893
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月11日
發(fā)明者何紅 申請(qǐng)人:廣東海洋大學(xué)