專利名稱：一種石花菜的組織培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種石花菜的繁育方法，特別地涉及一種石花菜的組織培養(yǎng)方法。
背景技術：
石花菜屬于多年生藻類。藻體直立，多分枝，下部有假根狀固著器附在淺海海底的巖石上，一般高20 30厘米，紫紅色或深紅色。藻體由表皮細胞、表層和髓構成，表皮細胞排列緊密，皮層和髓比較疏松，細胞里面充滿膠質。石菜花雌雄異株，藻體有雌配子體和雄配子體以及四孢子體，主要是有性繁殖，繁殖過程比較復雜。石花菜的藻體含有大量半乳糖膠的多糖類化合物，是制造瓊膠(俗稱洋菜)的主要原料。由于石花菜的繁殖方式以有性繁殖為主，因此導致人工在野外養(yǎng)殖石花菜時繁育技術復雜且耗時耗力。石花菜的組織培養(yǎng)工作已經起步有一段時間了，但是主要還是處于對組培流程技術上的開發(fā)和創(chuàng)新，例如中國專利申請?zhí)枮?00910231251X的專利申請就公 開了一種石花菜組織培養(yǎng)苗種培育方法。該專利文獻中使用的是常見的海藻培養(yǎng)基PES加富培養(yǎng)基，使用這種培養(yǎng)基要培養(yǎng)出成熟的石花菜需要30 40天，時間相對較長。

發(fā)明內容
針對上述問題，本發(fā)明提供了一種石花菜的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟( I)原材料的準備及消毒取生長情況良好的石花菜主枝或分枝作為原材料，對其進行處理，清洗時使用超聲波清洗儀對石花菜表面進行清洗，然后用清水沖凈，隨后將石花菜切成2 3_大小的塊狀并將其浸泡入O. 1%的升汞溶液中2 3分鐘，隨即用無菌水浸泡3 5次，每次浸泡10分鐘；(2)成苗培養(yǎng)基的配制及接種成苗培養(yǎng)基的配方如下NaCl25 30g/L，MgSO4. 7H20 8 10g/L，EDTA-Fe 20 25mg/L, K2HPO4 70 80mg/L, H3BO3 20 30mg/L, MnCl2 15 20mg/L, ZnCl2 10 12mg/L,Co (NO3) 2. 6H20 I 1. 5mg/L,玉米素1. 5 2. Omg/L, 5-氨基乙酰丙酸 O. 5 1. Omg/L,瓊脂10g/L ；將步驟(I)中所獲得的石花菜小塊接種至成苗培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿中接種2 3塊石花菜小塊；(3)成苗培養(yǎng)將接種完成的愈傷組織培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為1000 11001X，每天光照時間為14小時；6 8天時間石花菜小塊長成幼苗形態(tài)；(4)成體培養(yǎng)基的配制及接種成體培養(yǎng)基的配方如下NaCl25 30g/L，MgSO4. 7H20 8 10g/L，K2S04500 600mg/L, CaCl2. 2H20 300 350mg/L, K2HPO4 200 250mg/L, KI 0. 5 0. 55mg/L, H3BO39 I Omg/L, MnSO4. 4H20 20 25mg/L, ZnSO4. 7H20 5 6mg/L, CuSO4. 5H20 0. 02 0. 03mg/L, CoCl 2. 6H20 0.1 0. 15mg/L ；肌醇10 15mg/L,煙酸 0. 3mg/L,維生素 B6 0· 2 0. 3mg/L,維生素 B1 0· 2 O. 3mg/L ；步驟(3)中獲得的幼苗接入成體培養(yǎng)基中，接入的密度為每200ml培養(yǎng)液接種I株幼苗；(5)成體培養(yǎng)將接種完成的成體培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在25攝氏度，光照強度為2000 22001x，每天光照時間為14小時，培養(yǎng)過程中每天向培養(yǎng)液中充入清潔 無菌空氣I次，17 22天可獲得成體石花菜，石花菜的長度可達15 20厘米。其中，優(yōu)選地，在步驟(I)中增加使用抗生素滅菌的程序，確保藻體的無菌狀態(tài)，該抗生素滅菌的程序是指將經過碘化鉀溶液浸泡的藻體浸泡入含有抗生素的溶液中，其中抗生素的含量為400 μ g/ml的青霉素G, 150 μ g/ml的硫酸鏈霉素,40 μ g/ml的新霉素B。浸泡時間為30分鐘。本發(fā)明提供的這種培養(yǎng)方法由于采用了經過多次實驗總結出來的培養(yǎng)基以及適當的培育溫度以及光照強度，使得石花菜的組培成活率和生長速度有了較大幅度提升。
具體實施例方式實施例1采取以下步驟對石花菜進行組織培養(yǎng)( I)原材料的準備及消毒取生長情況良好的石花菜主枝或分枝作為原材料，對其進行處理，清洗時使用超聲波清洗儀對石花菜表面進行清洗，然后用清水沖凈，隨后將石花菜切成2_大小的塊狀并將其浸泡入O. 1%的升汞溶液中2分鐘，之后使用抗生素滅菌程序，再用無菌水浸泡5次，每次浸泡10分鐘，；(2)成苗培養(yǎng)基的配制及接種成苗培養(yǎng)基的配方如下NaCl30g/L, MgSO4. 7H20 10g/L, EDTA_Fe25mg/L，K2HPO480mg/L, H3BO3 30mg/L, MnCl2 20mg/L, ZnCl212mg/L, Co (NO3)2. 6H201. 5mg/L,玉米素 2. Omg/L，5-氨基乙酰丙酸1. Omg/L,瓊脂lOg/L ；將步驟(I)中所獲得的石花菜小塊接種至成苗培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿中接種2塊石花菜小塊；(3)成苗培養(yǎng)將接種完成的愈傷組織培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為ΙΟΟΟΙχ，每天光照時間為14小時；(4)成體培養(yǎng)基的配制及接種成體培養(yǎng)基的配方如下NaCl25g/L, MgSO4. 7H20 8g/L, K2SO4 500mg/L, CaCl
2.2H20 300mg/L, K2HPO4 200mg/L, KI 0. 5mg/L, H3BO3 9mg/L, MnSO4. 4H20 20mg/L, ZnSO4. 7H205mg/L, CuSO4. 5H20 0. 02mg/L, CoCl2. 6H20 0. lmg/L ；
肌醇 I Omg/L,煙酸 O. 3mg/L,維生素 B6 O. 2mg/L,維生素 B1 O. 2mg/L ；步驟(3)中獲得的幼苗接入成體培養(yǎng)基中，接入的密度為每200ml培養(yǎng)液接種I株幼苗；(5)成體培養(yǎng)將接種完成的成體培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在25攝氏度，光照強度為20001x，每天光照時間為14小時，培養(yǎng)過程中每天向培養(yǎng)液中充入清潔無菌空氣I次。經過8天時間石花菜小塊長成幼苗形態(tài)，成苗培養(yǎng)的成苗比例達到80. 1%，20天可獲得成體石花菜，石花菜的平均長度為15. 9厘米。實施例2
采取以下步驟對石花菜進行組織培養(yǎng)( I)原材料的準備及消毒取生長情況良好的石花菜主枝或分枝作為原材料，對其進行處理，清洗時使用超聲波清洗儀對石花菜表面進行清洗，然后用清水沖凈，隨后將石花菜切成3_大小的塊狀并將其浸泡入O. 1%的升汞溶液中3分鐘，之后使用抗生素滅菌程序，再用無菌水浸泡5次，每次浸泡10分鐘，；(2)成苗培養(yǎng)基的配制及接種成苗培養(yǎng)基的配方如下NaCl25g/L，MgSO4. 7H20 8g/L，EDTA_Fe20mg/L，K2HPO470mg/L, H3BO3 20mg/L, MnCl2 15mg/L, ZnCl210mg/L, Co (NO3)2. 6H20 lmg/L,玉米素1. 5mg/L,5-氨基乙酰丙酸0. 5mg/L,瓊脂lOg/L ；將步驟(I)中所獲得的石花菜小塊接種至成苗培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿中接種3塊石花菜小塊；(3)成苗培養(yǎng)將接種完成的愈傷組織培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為llOOlx，每天光照時間為14小時；(4)成體培養(yǎng)基的配制及接種成體培養(yǎng)基的配方如下=NaCl30g/L, MgSO4. 7H20 10g/L, K2SO4 600mg/L,CaCl2. 2H20 350mg/L, K2HPO4 250mg/L, KI 0. 55mg/L, H3BO3 I Omg/L, MnSO4. 4H20 25mg/L,ZnSO4. 7H20 6mg/L, CuSO4. 5H20 0. 03mg/L, CoCl2. 6H20 0. 15mg/L ；肌醇15mg/L,煙酸 0. 3mg/L,維生素 B6 0. 3mg/L,維生素 B1 0. 3mg/L ；步驟(3)中獲得的幼苗接入成體培養(yǎng)基中，接入的密度為每200ml培養(yǎng)液接種I株幼苗；(5)成體培養(yǎng)將接種完成的成體培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在25攝氏度，光照強度為22001x，每天光照時間為14小時，培養(yǎng)過程中每天向培養(yǎng)液中充入清潔無菌空氣I次。經過7天時間石花菜小塊長成幼苗形態(tài)，成苗培養(yǎng)的成苗比例達到82. 4%，18天可獲得成體石花菜，石花菜的平均長度為16. 3厘米。本領域技術人員可以根據本發(fā)明公開的內容和所掌握的本領域技術對本發(fā)明內容作出替換或變型，但是這些替換或變型都不應視為脫離本發(fā)明構思的，這些替換或變型均在本發(fā)明要求保護的 權利范圍內。
權利要求
1.一種石花菜的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟(1)原材料的準備及消毒取生長情況良好的花石菜主枝或分枝作為原材料，對其進行處理，清洗時使用超聲波清洗儀對石花菜表面進行清洗，然后用清水沖凈，隨后將石花菜切成2 3_大小的塊狀并將其浸泡入O. 1%的升汞溶液中2 3分鐘，隨即用無菌水浸泡3 5次，每次浸泡10分鐘；(2)成苗培養(yǎng)基的配制及接種成苗培養(yǎng)基的配方如下NaCl 25 30g/L，MgSO4. 7H20 8 10g/L，EDTA-Fe 20 25mg/L, K2HPO4 70 80mg/L, H3BO3 20 30mg/L, MnCl2 15 20mg/L, ZnCl2 10 12mg/L,Co (NO3) 2. 6H20 I 1. 5mg/L,玉米素1. 5 2. Omg/L, 5-氨基乙酰丙酸 O. 5 1. Omg/L,瓊脂10g/L ；將步驟(I)中所獲得的石花菜小塊接種至成苗培養(yǎng)基上，每個培養(yǎng)皿中接種2 3塊石花菜小塊；(3)成苗培養(yǎng)將接種完成的愈傷組織培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在20攝氏度，光照強度為10000 llOOlx，每天光照時間為14小時；6 8天時間石花菜小塊長成幼苗形態(tài)；(4)成體培養(yǎng)基的配制及接種成體培養(yǎng)基的配方如下NaCl 25 30g/L，MgSO4. 7H20 8 10g/L，K2S04500 600mg/L, CaCl2. 2H20 300 350mg/L, K2HPO4 200 250mg/L，KI 0· 5 0. 55mg/L, H3BO3 9 IOmg/L, MnSO4. 4H20 20 25mg/L, ZnSO4. 7H20 5 6mg/L, CuSO4. 5H20 0. 02 0. 03mg/L, CoCl2. 6H20 0.1 0. 15mg/L ；肌醇 10 15mg/L,煙酸 0. 3mg/L,維生素 B6 0· 2 O. 3mg/L,維生素 B1 0· 2 O. 3mg/L ；步驟(3)中獲得的幼苗接入成體培養(yǎng)基中，接入的密度為每200ml培養(yǎng)液接種I株幼苗；(5)成體培養(yǎng)將接種完成的成體培養(yǎng)基放置在恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱的溫度保持在25攝氏度,光照強度為2000 22001x，每天光照時間為14小時，培養(yǎng)過程中每天向培養(yǎng)液中充入清潔無菌空氣I次，17 22天可獲得成體石花菜，石花菜的長度可達15 20厘米。
2.權利要求1中所述的石花菜的組織培養(yǎng)方法，其特征在于在步驟(I)中增加使用抗生素滅菌的程序，確保藻體的無菌狀態(tài)，該抗生素滅菌的程序是指將經過碘化鉀溶液浸泡的藻體浸泡入含有抗生素的溶液中，其中抗生素的含量為400μ g/ml的青霉素G，150 μ g/ml的硫酸鏈霉素,40 μ g/ml的新霉素B。浸泡時間為30分鐘。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種石花菜的組織培養(yǎng)方法。該方法主要包括原材料的選取準備及消毒，成苗培養(yǎng)，成體培養(yǎng)。并且公開了成苗培養(yǎng)基和成體培養(yǎng)基的具體配方，以及在成苗培養(yǎng)和成體培養(yǎng)時的培養(yǎng)條件。
文檔編號A01H4/00GK102986529SQ20121048415
公開日2013年3月27日 申請日期2012年11月25日 優(yōu)先權日2012年11月25日
發(fā)明者彭江晨, 芮旭婷 申請人:溧陽市天目湖保健品有限公司