專利名稱：一種白及種子無菌生產微型種莖的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種白及種子無菌生產微型 種莖的方法。
背景技術：
白及為蘭科植物白及 Bletilla striata(Thunb. ex A. Murray)Rchb. f.的干燥塊莖。又名白芨、連及草、箬蘭、甘根、白根、百笠、紫蕙。白及的藥用歷史悠久，是我國傳統(tǒng)中藥?！渡褶r本草經》載“主治痛腫惡瘡敗疽，傷陰死肌。”《藥性本草》說“治面上，令人肌滑?！薄吨腥A本草》曰治發(fā)背(癰)、瘰癘、撲損、刀箭傷，生肌止痛?！队盟幏ㄏ蟆氛f“止肺血?！睂嶒炑芯孔C明，白及煎劑、散劑均有止血作用，對實驗性胃及十二指腸穿孔有定的作用，傳統(tǒng)上它對肺結核、矽且、肛裂等癥有較好療效，是歷代醫(yī)家治療肺癆的主藥之一。白及也為1977年以后各版《中國藥典》所收載，性微寒、味苦、甘，具有補肺、止血、散風除濕、通竅止痛、消腫排膿、生肌、斂瘡的功能，主要用于治療感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、白帶、肺傷咳血、衄血、金瘡出血、癰疽腫毒、潰瘍疼痛、湯火灼傷、手足皸裂等。然而，白及為野生藥材，家種品極少，市場供應主要靠野生品來維持。近年來，由于人為的過度采挖和天然生境的破壞，其野生自然資源急劇減少，瀕臨滅絕，被國家列為重點保護的野生藥用植物之一。其種子較小，自然條件下需與真菌共生才能萌發(fā)，實生苗的栽培較為困難，而傳統(tǒng)分株、切塊等無性繁殖的方式成活率極低，繁殖難度很大，不可能滿足大規(guī)模生產的需要。白及組織培養(yǎng)和種子繁殖技術研究雖然有不少人涉及，但基本上是走培育成幼苗再移栽到田間的技術路線，由于白及組培苗的離開培養(yǎng)環(huán)境后，栽培成活困難，限制了其在生產上的應用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供了一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，實現利用白及種子有性繁殖大量微型種莖，作為繁殖材料。本發(fā)明一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，其特征在于含有以下步驟a.種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)將白及果實采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用無菌水沖洗，然后進行接種；b.誘導生根將步驟a獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0. 2 O. 4mg/L的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得生根后的白及苗；c.微型種莖的培養(yǎng)將步驟b獲得的小苗，轉接到PH值為5. 8的1/2MS或MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得白及微型種莖。本發(fā)明一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，其特征在于含有以下步驟a.種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)將白及果實采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用無菌水沖洗，然后進行接種；所述的接種方法是十字狀切開果實，將白色粉末狀種子彈到經高溫滅菌過的濾紙上，然后適量接種到培養(yǎng)基上；接種后培養(yǎng)成小苗；該培養(yǎng)基的配方組成為KC+100 200g/L馬鈴薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2 4mg6_BA/L+0. 2 0. 4mgNAA/L, PH 值為 5. 8 6. O ;b.誘導生根將步驟a獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0. 2 O. 4mg/L的生根培養(yǎng)基上；調PH值為5. 8左右，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)得生根后的白及苗；C.微型種莖的培養(yǎng)將步驟b獲得的小苗，轉接到PH值為5. 8的1/2MS或MS培養(yǎng)基上，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001X下培養(yǎng)得白及微型種莖。本發(fā)明一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，其特征在于含有以下步驟a.種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)將白及果實采收后，先用洗衣粉漂洗20分鐘，后置于2%升汞溶液中消毒20分鐘，再用無菌水沖洗5次，然后進行接種；所述的接種方法是十字狀切開果實，將白色粉末狀種子彈到經高溫滅菌過的濾紙上，然后適量接種到培養(yǎng)基上；接種后置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-100天使種 子萌發(fā)并培養(yǎng)成小苗；該培養(yǎng)基的配方組成為KC+100 200g/L馬鈴薯或1/2 MS+10%椰汁或 MS+2 4mg6-BA/L+0. 2 O. 4mgNAA/L, PH 值為 5. 8 6. O ;b.誘導生根將步驟a獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0. 2 O. 4mg/L的生根培養(yǎng)基上；調PH值為5. 8左右，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-60天獲得生根后的白及苗；c.微型種莖的培養(yǎng)將步驟b獲得的小苗，轉接到PH值為5. 8的1/2MS或MS培養(yǎng)基上，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-60天形成原球莖，繼續(xù)培養(yǎng)至倒苗，獲得白及微型種莖；種莖為綠色，圓球狀，直徑O. 3 O. 5cm。本發(fā)明的目的是提供了一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，實現利用白及種子有性繁殖大量微型種莖，作為繁殖材料?？朔俗匀粭l件下白及種子難萌發(fā)的問題，也克服了白及組培和種子無菌繁殖的幼苗移栽成活率低等缺點。本發(fā)明采用白及種子在無菌條件下萌發(fā)和生長直至微型種莖的技術，克服了自然條件下白及種子極少萌發(fā)的困難，也克服了常規(guī)白及組培和種子無菌繁殖的幼苗移栽成活率低，繁殖效率不高等缺點。為利用白及種子進行工廠化快速生產大量種莖，提供了切實可行的實用技術，可緩解白及種源緊缺的現狀，促進白及規(guī)?；斯しN植。本發(fā)明與現有技術比較具有以下優(yōu)點⑴利用無菌條件誘導白及種子萌發(fā)成幼苗，克服了自然條件下，白及繁殖系數低、周期長的困難，同時技術操作簡便，生育周期短，經濟效益高。⑵利用無菌條件生產的實生苗，直接生產微型種莖，減少了煉苗和移栽等煩瑣的步驟，沒有緩苗過程，微型種莖形成效率高，有利于進行規(guī)?；S化常年生產。⑶本發(fā)明所獲得的微型種莖，具有較強的抗逆性，易貯藏和運輸，可以直接大田播種。


附圖I:白及種子萌發(fā)苗；附圖2 :誘導生根后的白及實生苗；附圖3 :白及實生苗培育種莖；附圖4 :白及實生苗無菌生產的微型種莖。
具體實施方式
白及種子采收與消毒，種子萌發(fā)和生根，誘導人工種莖的形成、生長和成熟等技術環(huán)節(jié)。其中⑴種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)將白及果實采收后，先用洗衣粉漂洗20分鐘，后置于2%升汞溶液中消毒20分鐘，再用無菌水沖洗5次，然后進行接種。接種方法是十字狀切開果實，將白色粉末狀種子彈到經高溫滅菌過的濾紙上，然后適量接種到培養(yǎng)基上。接種后置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-100天使種子萌發(fā)并培養(yǎng)成小苗。該培養(yǎng)基的配方組成為KC+100 200g/L馬鈴薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2 4mg6-BA/L+0. 2 O. 4mgNAA/L, PH值為5. 8 6. O。⑵誘導生根將步驟⑴獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0. 2 O. 4mg/L的生根培養(yǎng)基上。調PH值為5. 8左右，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x 下培養(yǎng)，獲得生根后的白及苗。⑶微型種莖的培養(yǎng)將步驟⑵獲得的小苗，轉接到PH值為5. 8的1/2MS或MS培養(yǎng)基上，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-60天形成原球莖，繼續(xù)培養(yǎng)至倒苗，獲得白及微型種莖。種莖為綠色，圓球狀，直徑O. 3 O. 5cm。實施例I本發(fā)明一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，其主要步驟如下(1)種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)采收成熟的白及果實，先用洗衣粉漂洗20分鐘，后置于2%升汞溶液中消毒20分鐘，再用無菌水沖洗5次，然后進行接種。接種方法是十字狀切開果實，將白色粉末狀種子彈到經高溫滅菌過的濾紙上，然后適量接種到培養(yǎng)基上。接種后置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-100天使種子萌發(fā)并培養(yǎng)成小苗。該培養(yǎng)基的配方組成為KC+100 200g/L馬鈴薯，PH值為5. 8 6. O。⑵誘導生根將步驟⑴獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0. 2
O.4mg/L的生根培養(yǎng)基上。調PH值為5. 8左右，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，獲得生根后的白及苗。⑶微型種莖的培養(yǎng)將步驟⑵獲得的小苗，轉接到PH值為5.8的1/2MS培養(yǎng)基上，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-30000Ix下培養(yǎng)，30天-60天形成原球莖，繼續(xù)培養(yǎng)至倒苗，獲得綠色，圓球狀白及微型種莖。實施例2實例2 :根據實施例I中所述的步驟，其中步驟⑴種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)中的培養(yǎng)基為1/2 MS +10%椰汁。其它相同。實施例3根據實施例I中所述的步驟，其中步驟⑴種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)中的培養(yǎng)基為MS+2 4mg6-BA/L+0. 2 O. 4mgNAA/L。其它相同。實例4 :根據實施例I中所述的步驟，其中步驟⑶微型種莖的培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。其它相同。
權利要求
1.一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，其特征在于含有以下步驟 a.種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)將白及果實采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用無菌水沖洗，然后進行接種； b.誘導生根將步驟a獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0.2 O. 4mg/L的生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得生根后的白及苗； c.微型種莖的培養(yǎng)將步驟b獲得的小苗，轉接到PH值為5.8的1/2MS或MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得白及微型種莖。
2.按照權利要求I一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，其特征在于含有以下步驟 a.種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)將白及果實采收后，先用洗衣粉漂洗，后置于2%升汞溶液中消毒，再用無菌水沖洗，然后進行接種；所述的接種方法是十字狀切開果實，將白色粉末狀種子彈到經高溫滅菌過的濾紙上，然后適量接種到培養(yǎng)基上；接種后培養(yǎng)成小苗；該培養(yǎng)基的配方組成為KC+100 200g/L馬鈴薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2 4mg6_BA/L+0. 2 O. 4mgNAA/L, PH 值為 5. 8 6. O ; b.誘導生根將步驟a獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0.2 O. 4mg/L的生根培養(yǎng)基上；調PH值為5. 8左右，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000_300001χ下培養(yǎng)得生根后的白及苗； c.微型種莖的培養(yǎng)將步驟b獲得的小苗，轉接到PH值為5.8的1/2MS或MS培養(yǎng)基上，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)得白及微型種莖。
3.按照權利要求I一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，其特征在于含有以下步驟 a.種子萌發(fā)與無菌苗培養(yǎng)將白及果實采收后，先用洗衣粉漂洗20分鐘，后置于2%升汞溶液中消毒20分鐘，再用無菌水沖洗5次，然后進行接種；所述的接種方法是十字狀切開果實，將白色粉末狀種子彈到經高溫滅菌過的濾紙上，然后適量接種到培養(yǎng)基上；接種后置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-100天使種子萌發(fā)并培養(yǎng)成小苗；該培養(yǎng)基的配方組成為KC+100 200g/L馬鈴薯或1/2 MS+10%椰汁或MS+2 4mg6-BA/L+0. 2 O. 4mgNAA/L, PH 值為 5. 8 6. O ; b.誘導生根將步驟a獲得的小苗，轉接到配方為1/2MS+NAA0.2 O. 4mg/L的生根培養(yǎng)基上；調PH值為5. 8左右，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000_300001χ下培養(yǎng)，30天-60天獲得生根后的白及苗； c.微型種莖的培養(yǎng)將步驟b獲得的小苗，轉接到PH值為5.8的1/2MS或MS培養(yǎng)基上，置24±2°C，每天光照10小時，光照強度為20000-300001x下培養(yǎng)，30天-60天形成原球莖，繼續(xù)培養(yǎng)至倒苗，獲得白及微型種莖；種莖為綠色，圓球狀，直徑O. 3 O. 5cm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種白及種子無菌生產微型種莖的方法，該方法包括白及種子消毒，種子在萌發(fā)培養(yǎng)基上發(fā)芽，誘導生根，誘導人工種莖的形成、生長和成熟等步驟。本發(fā)明優(yōu)化、提出了白及從種子萌發(fā)到形成成熟種莖的技術路線和關鍵技術，能簡化白及組織培養(yǎng)技術，實現從白及種子直接規(guī)?；嘤蜕a白及種莖。其有胚種子萌發(fā)率達到95%以上，且80%以上組培苗能形成成熟的微型種莖。本發(fā)明克服了自然條件下白及種子極少萌發(fā)的困難，也克服了常規(guī)白及組培和種子無菌繁殖的幼苗移栽成活率低等缺點。為利用白及種子進行工廠化快速生產大量種莖，提供了切實可行的實用技術，可緩解白及種源緊缺的現狀，促進白及規(guī)?；斯しN植。
文檔編號A01H4/00GK102907323SQ20121043214
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月1日 優(yōu)先權日2012年11月1日
發(fā)明者謝玲玲 申請人:建始縣頤泰生物科技有限公司