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作為針對(duì)各種植物病原體的生物控制劑的pseudozymaaphidis的制作方法

文檔序號(hào):202395閱讀:2910來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:作為針對(duì)各種植物病原體的生物控制劑的pseudozyma aphidis的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及源自Pseudozyma aphidis的有效對(duì)抗各種植物病原體的生物控制劑。更具體地,本發(fā)明提供了一種包含源自P. Aphidis的殺細(xì)菌、殺真菌并且殺蟲(chóng)的真菌生物控制劑的組合物,所述組合物還用于增強(qiáng)植物生長(zhǎng)、活力和病原體抗性以及延長(zhǎng)產(chǎn)品和其他有機(jī)產(chǎn)品的壽命或貨架期。本發(fā)明還涉及用于實(shí)現(xiàn)這些的方法。
背景技術(shù)
貫穿本申請(qǐng)?zhí)峒暗乃谐霭嫖锿ㄟ^(guò)引用完全結(jié)合在此,包括在其中引證的所有參考文獻(xiàn)。 植物病原體通過(guò)它們迅速產(chǎn)生農(nóng)藥抗性的能力而對(duì)最大化作物生產(chǎn)量的努力提出了挑戰(zhàn),這種能力可以導(dǎo)致每年巨大的產(chǎn)量損失。如今,主要研究目的之一包括開(kāi)發(fā)控制病原體的新工具。由于環(huán)境問(wèn)題的緣故,真菌生物控制劑已經(jīng)變成化學(xué)品使用的重要替代物??梢酝ㄟ^(guò)以下機(jī)制之一或組合來(lái)實(shí)現(xiàn)生物控制抗生作用、真菌寄生作用、競(jìng)爭(zhēng)以及在宿主中誘導(dǎo)的抗性。這些機(jī)制可以阻礙病原體的生長(zhǎng)和發(fā)育,從而減少病害。生物控制劑的復(fù)雜作用方式降低了病原體產(chǎn)生抗性的能力。生物控制劑的開(kāi)發(fā)始于拮抗劑的發(fā)現(xiàn),隨后是它們的潛在生物控制活性的分離和表征。少數(shù)生物殺真菌產(chǎn)品是在一些國(guó)家可商業(yè)獲得的,例如AQ10,其含有白粉寄生孢(Ampelomyces quisqualis)的分生孢子,以及Sporodex,其為基于酵母絮絨假酶菌(Pseudozymaflocculosa)的分生孢子,二者均用于控制白粉病。也存在一些基于木霉(Trichoderma spp.)的產(chǎn)品,如Throcodex和Thrichopel,它們用來(lái)對(duì)抗灰霉、根腐病和根枯病。然而,生物控制的使用相對(duì)于化學(xué)殺真菌劑的使用仍然僅僅是適度的[Paulitz,T.C.和 Belanger, R. (2001)《植物病理學(xué)年鑒》(Annu. Rev. Phytopathol. ) 39:103-133] 定殖于不同植物表面的附生酵母被認(rèn)為具有生物控制活性并且提供對(duì)抗一些植物病原體的天然屏障[Avis,T. J.和Belanger, R. R. (2001)《應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)》(Appl.Environ. Microbiol. ) 67 (2) : 956-960 ;Urquhart, E. J.和 Punja, Z. K. (2002)《加拿大微生物學(xué)雜志》(Can. J. Microbiol. ) 48 (3) : 219-229]。已經(jīng)證明了酵母和酵母樣真菌對(duì)于采后病害[Spadaro, D.,和Gullino, M. L. (2004)《國(guó)際食品微生物學(xué)雜志》(InternationalJournal of Food Microbiology) 91:185-194]和溫室中的病害[Paulitz, T. C.和Belanger, R. R. (2001)《植物病理學(xué)年鑒》(Annu. Rev. Phytopathol. ) 39 (103-133)]的生物控制活性。Pseudozyma spp.是與黑粉菌目(Ustilaginales)相關(guān)的酵母小群體[Boekhout, T. (1995)《普通與應(yīng)用微生物學(xué)雜志》(General and Applied Microbiology)41(359-366)]。它們大多是附生的(從空氣和雨水中取得水分和養(yǎng)分)或是腐生的(生長(zhǎng)在死亡或腐敗的有機(jī)質(zhì)上并從中取得它們的營(yíng)養(yǎng)),并且它們對(duì)植物和動(dòng)物是不致病的[Avis,T. J.和Belanger, R. R. (2002)《歐洲微生物學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)酵母研究》(FEMS YeastRes) 2 (I) : 5-8]。最近已經(jīng)發(fā)現(xiàn) Pseudozyma rugulosa 和絮絨假酶菌(P. Flocculosa)針對(duì)與它們相關(guān)的不同白粉病顯示出生物活性[Dik,A. J.等人,(1998)《歐洲植物病理學(xué)雜志》(Eur. J. Plant Pathol. ) 104 (413-423]。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)絮絨假酶菌(P. Flocculosa)分泌一種表現(xiàn)出針對(duì)幾種病原體的抗生素活性的特殊脂肪酸(unusual fatty acid) [Avis, T.J.和 Belanger, R. R. (2001) Appl Environ Microbiol67 (2) :956-960 ;Avis, T. J.等人,(2001)《植物病理學(xué)》(Phytopathology) 91 (3) :249-254 ;]。另一方面,Avis 等人[Avis,T. J.等人,(2001)《植物病理學(xué)》(Phytopathology)91(3) :249-254]發(fā)現(xiàn)沒(méi)有白粉病(單絲殼(Sphaerothecafuliginea) (Schlechtend. :Fr. )Pollacci)的菌落崩潰(colonycollapse)以及從姆蟲(chóng)分泌物分離的Pseudozymaaphidis (分離株CBS517. 83)沒(méi)有產(chǎn)生抗真菌脂肪酸。P. aphidis 是 P. rugulosa 的近親[Begerow, D.和 Bauer, R. (2000)My col.Res. 104 (53-60)],其首次從姆蟲(chóng)分泌物分離[Henninger, W和Windisch, S. (1975)《微生物學(xué)文獻(xiàn)集》(Arch. Microbiol. )105(1) :47-48],但是也已經(jīng)在植物表面上發(fā)現(xiàn)[Allen, T.W.等人,(2004)《加拿大微生物學(xué)雜志》(Can. J. Microbiol. ) 50(10) :853-860]。 發(fā)明人最近從草莓葉分離出附生酵母Pseudozyma aphidis (分離株L12)。分離株L12與白粉病菌落崩潰相關(guān)。在此呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)表明,L12分泌在體外抑制幾種真菌性和細(xì)菌性病原體的細(xì)胞外代謝物。另外,將L12孢子施用在分離的番茄葉或溫室中的完整番爺植物上顯著地減少了灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)感染。因此諸位發(fā)明人進(jìn)一步表征P. aphidis的L12分離株,將它開(kāi)發(fā)為對(duì)抗植物病原體的有效生物控制劑。大量生產(chǎn)活性培養(yǎng)物所需要的條件的特征為測(cè)試不同的溫度和培養(yǎng)基并且通過(guò)灰葡萄孢菌生物測(cè)定法監(jiān)測(cè)孢子濃度和活性。使用顯微鏡檢查,測(cè)定了 P. aphidis在宿主植物上的建立和傳播。諸位發(fā)明人還測(cè)定了在體外對(duì)抗各種病原體的L12的分泌部分。另外,將P. aphidis L12孢子施用在溫室中的番茄植物上并且驗(yàn)證它們?cè)隗w內(nèi)控制真菌性和細(xì)菌性病原體的能力。由本發(fā)明提供的新的并且有效的生物控制劑因此可以有助于減少控制病原體所需要的化學(xué)品的量,并且因而可以真正地有益于農(nóng)民、消費(fèi)者和環(huán)境。諸位發(fā)明人在此基于天然存在的真菌開(kāi)發(fā)了 P. aphidis L12作為生物控制劑的實(shí)際應(yīng)用,該生物控制劑增加植物對(duì)真菌、病毒、細(xì)菌和昆蟲(chóng)侵染的抗性并且增強(qiáng)生長(zhǎng)。呈現(xiàn)的結(jié)果證明了 P. aphidis L12用于控制導(dǎo)致作物植物的重大損傷的真菌性和細(xì)菌性植物病原體的高潛力。此外,這種分離株的新穎性在于它容易生產(chǎn)、十分穩(wěn)定并且在低濃度有效。傳統(tǒng)上已經(jīng)用來(lái)控制食用植物病原體的化學(xué)品正在被禁用或不再是有效的,并且不允許有機(jī)農(nóng)場(chǎng)主使用這些化學(xué)品。其他控制策略是不可獲得或不能實(shí)行的。受環(huán)境問(wèn)題和日益增長(zhǎng)的有機(jī)產(chǎn)品需求的推動(dòng),迫切需要開(kāi)發(fā)新的生物防御策略。因此,本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種包含Pseudozyma aphidis細(xì)胞、組分或產(chǎn)物的組合物,從而提供改進(jìn)的針對(duì)病原體感染的植物抗性。而且,本發(fā)明進(jìn)一步提供了用于治療、緩解、抑制或消除已建立的感染或侵染的組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種用于誘導(dǎo)植物免疫應(yīng)答的包含Pseudozymaaphidis細(xì)胞、組分或產(chǎn)物的組合物。本發(fā)明的又另一個(gè)目的是提供一種用于改善植物生長(zhǎng)和產(chǎn)量的包含Pseudozymaaphids細(xì)胞、組分或產(chǎn)物的組合物。本發(fā)明的這些目的和其他目的將隨著描述的繼續(xù)進(jìn)行而變得清楚。發(fā)明概述
諸位發(fā)明人在此證明了 Pseudzyma aphidis及其產(chǎn)物的殺蟲(chóng)和促生長(zhǎng)特性。因此,考慮了本發(fā)明的各個(gè)方面。
在第一方面,本發(fā)明涉及一種包含生物控制劑作為有效成分的農(nóng)藥組合物。該組合物包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。該組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。本發(fā)明的第二方面涉及一種用于在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性的組合物。該組合物包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。這種組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。本發(fā)明在第三方面還提供了一種用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的組合物,其包含一種生物控制劑作為有效成分。該組合物包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。該組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。除了提供用于保護(hù)植物或植物材料免受病害的影響和用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的組合物之外,本發(fā)明還提供了用于實(shí)現(xiàn)相同目的的方法。因此,在一個(gè)另外的方面,本發(fā)明涉及一種治療、防止、緩解、抑制、消除在植物或植物材料中的細(xì)菌、真菌或害蟲(chóng)侵染或延遲其發(fā)作的方法。該方法包括以下步驟將一種生物控制劑或包含該生物控制劑的組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料或施用在該植物或植物材料附近,其中該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;
e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。在另一個(gè)方面,本發(fā)明提供了一種用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的方法,該方法包括以下步驟將一種生物控制劑或包含該生物控制劑的組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料或施用在該植物或植物材料附近。該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphdis 的條件培養(yǎng)基;
d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。諸位發(fā)明人還考慮了根據(jù)本發(fā)明的生物控制劑在制備殺蟲(chóng)并且促生長(zhǎng)的組合物中的用途。因此,在一個(gè)另外的方面,本發(fā)明是針對(duì)生物控制劑在制造用于防止、緩解、抑制、消除害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作的農(nóng)藥組合物中的用途。這種生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。在又一個(gè)另外的方面,本發(fā)明是針對(duì)一種生物控制劑在制造用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的組合物中的用途。該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。借助于以下附圖,本發(fā)明的這些方面和其他方面將變得清楚。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明


圖1A-1BPseudozma aphidis L12 的分離
圖1A :用白粉菌接種之前以蒸餾水(DW)或L12孢子處理的黃瓜子葉。
圖1B :在PDA上生長(zhǎng)的L12分泌粉紅色代謝物至培養(yǎng)基中。圖2采用可用數(shù)據(jù)庫(kù)的P. aphidis序列比對(duì)對(duì)于ITSl 顯示 L12 分離株(由 SEQ ID NO. 5 表示)、P. aphids (由 SEQ ID NO. 6 表不)、P. regulosa (由 SEQ ID NO. 7 表不)和 P. Antarctica (由 SEQ ID NO. 8 表不)的序列比對(duì)。圖3A-3JP. aphidis在PDA平板上和在植物上的生長(zhǎng)圖3A :在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)10天后的P. aphids的光學(xué)顯微鏡圖像。箭頭標(biāo)出分泌物。圖3B :酵母樣生長(zhǎng)形狀顯現(xiàn)在從在PDA上的P. aphidis的上方拍攝的光學(xué)顯微鏡圖像中。圖3C :如在光學(xué)顯微鏡中所見(jiàn)到的在PDA上的P. aphidis的束絲(Synemata)樣外觀。 圖3D :如在SEM中在剖面上看到的在PDA上的P. aphidis菌絲體/酵母樣形式。圖3E :如在SEM中從上方看到的在PDA上的P. aphidis酵母樣形式圖3F :如在光學(xué)顯微鏡中看到的在番茄葉上生長(zhǎng)2天后的P. aphidis。圖3G :在光學(xué)顯微鏡中使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的在PDB上的孢子形狀。圖3H :在光學(xué)顯微鏡中使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器的在YMPD上的孢子形狀。圖31和3J (SEM)在擬南芥(A. thaliana)葉上生長(zhǎng)3天后的P. aphidis :箭頭指不 P.aphidis。圖4P. aphidis在UV暴露下存活使接種到PDA平板上的IO8個(gè)P. aphidi s細(xì)胞暴露于UV持續(xù)不同的時(shí)間量(0、10、20和30分鐘)并且隨后轉(zhuǎn)移至25° C的培養(yǎng)箱中。在3周之后記錄暴露平板的照片??s寫(xiě)Exp. t. UV (分鐘),(暴露于UV的時(shí)間(min))。圖5A-5CP. aphidis 培養(yǎng)優(yōu)化圖5A :顯示PDB培育的P. aphidis菌落直徑作為培養(yǎng)溫度和孵育時(shí)間的函數(shù)。圖5B :顯示PDB培育的P. aphidis菌落分泌物直徑作為培養(yǎng)溫度和孵育時(shí)間的函數(shù)。圖5C :顯示在不同溫度培育21天的PDB培育的P. aphidis的照片??s寫(xiě)Col.Diam. (mm),(菌落直徑(mm) ) ;Secret. Diam. (mm),(分泌物直徑(mm));T.⑷,(時(shí)間(天))。圖6P. aphidis的纖維素分泌生長(zhǎng)在用或不用纖維素膜覆蓋的自來(lái)水瓊脂平板上的P. aphidis。接種后7天記錄細(xì)胞數(shù)。采用標(biāo)準(zhǔn)誤差棒提供10個(gè)樣品的平均數(shù)。*(p〈0. 05 ;t-檢驗(yàn))??s寫(xiě)(M+),(用纖維素膜覆蓋的平板);(M-),(不用纖維素膜覆蓋的平板)圖7A-7C通過(guò)P. aphidis分泌物的植物病原體的體外抑制圖7A :生長(zhǎng)在覆蓋PDA平板的透析管上的L12。10天后,將透析管連同P. aphidis一起取出并且將含有分泌部分的平板用于真菌孢子萌發(fā)試驗(yàn)。顯示使用P. aphidis分泌物的乙酸乙酯提取物對(duì)各種真菌的抑制(以mm半徑表示)。圖7B :使用P. aphidis分泌物的乙酸乙酯提取物對(duì)各種細(xì)菌的抑制(以mm半徑表示)。圖7C :使用P. aphidis分泌物的己烷提取物對(duì)各種細(xì)菌和真菌的抑制(以mm半徑
表示)??s寫(xiě)PG,禾柄銹菌((Pucciniagraminis)) ;AB,(甘藍(lán)鏈格孢菌(Alternariabrassicicola) ) ;PC,禾冠柄鎊菌((Pccinia coronata)) ;UA,(撫頂單胞鎊菌(Uromycesappendiculatus) ) ;BC,(灰葡萄抱菌(Botrytis cinerea) ) ;LT,(軸靼內(nèi)絲白粉菌(Leveillula taurica) ) ;PD,(指狀青霉(Penicillium digitatum) ) ;AT,(根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens) ) ;CM,(密執(zhí)安棍狀桿菌密執(zhí)安亞種(Clavibactermichiganensis subsp. michiganensis) ) ;EA,(角軍淀粉歐文氏菌(Erwinia amyIovora));PST, (丁香假單胞菌番爺致病變種(Pseudomonas syringae pv. tomato) ) ;PSL, (丁香假單胞菌黃瓜致病變種(Pseudomonas syringae pv. lachrymans) ) ;SS,(馬鈴薯瘡痂病菌(Streptomyces scabies) ) ;XCC,(野油菜黃單胞菌野油菜致病變種(Xanthomonascampestris pv. campestris) ;XCV,(野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)致病變種(Xanthomonascampestris pv. vesicatoria) ) ;Inhibit. Sp. Germ. (%),(抱子萌發(fā)抑制率(%) ) ;Inhibit.Hall, (mm),(抑制暈圈(inhibition hallow) (mm))。圖8由P. aphidis散發(fā)的揮發(fā)物的生物活性使P. aphidis在劃區(qū)的PDA皿上生長(zhǎng)10天,之后,將灰葡萄孢菌的菌絲栓添加至劃分的培養(yǎng)皿的另一半。記錄在含有P. aphidis的劃區(qū)培養(yǎng)皿的一半中的灰葡萄孢菌的菌落直徑直至接種后4天,與在另一半不存在P. aphidis的對(duì)照平板上的生長(zhǎng)比較??s寫(xiě)PA+ (含有劃區(qū)的P. aphidis的培養(yǎng)皿);PA-(沒(méi)有P. aphidis的培養(yǎng)皿);Les. Diam. (cm2),(病斑直徑(cm2) ) ;T. P.1noculat.(天),(接種后時(shí)間(天))。圖 9A_9F通過(guò)P. Aphidis在離脫葉中和在植物體內(nèi)的真菌的抑制圖9A :用灰葡萄孢菌(每片小葉7500個(gè)孢子)接種之前,將完整番茄植物或離脫葉用P. aphidis孢子或用水噴灑,并且在接種后5天對(duì)感染進(jìn)行評(píng)分。顯示用IO8個(gè)孢子/ml處理的植物和離脫葉的照片。圖9B :用灰葡萄孢菌(每片小葉5ml ;1500個(gè)孢子/ml)接種之前,將脫離的番茄葉用P. aphidis孢子(IO8個(gè)孢子/ml)接種。圖9C :用灰葡萄孢菌(每片小葉5ml ;1500個(gè)孢子/ml)接種之前,將完整的番茄植物用P. aphidis孢子(IO4或IO8個(gè)孢子/ml)接種。圖9D :用灰葡萄孢菌(每片小葉5ml ;1500個(gè)孢子/ml)接種之前,將完整的番茄植物用IO8個(gè)孢子/ml高壓滅菌或未高壓滅菌的P. aphidis孢子接種。圖9E :用灰葡萄孢菌感染后3天,將離脫番爺葉用P. aphidislO8個(gè)孢子/ml噴灑。顯示了用P. aphidis噴灑10天后離脫葉的照片。圖9F :用單絲殼接種之前3天,將黃瓜苗用P. aphidis孢子(IO8個(gè)孢子/ml)(PA)或用水(對(duì)照)噴灑。接種后11、12和16天對(duì)感染進(jìn)行評(píng)分??s寫(xiě)Leav.(感染的Bf %);%Infect.(感染 %);Cont.(對(duì)照);L12_104 (P. aphidis L12104 個(gè)孢子/ml);L12_108(P. aphidis L12108 個(gè)抱子 /ml) ;autoclave.(高壓滅菌);dH20,(蒸懼水);ffh. Plan,(完整植物);Detac. Leav.(離脫葉);T. P.感染,(d),(感染后時(shí)間(天));PA,(用P. aphidis處理);B. C.(灰葡萄孢菌)。
圖10A-10B
通過(guò)P. aphidis在植物體內(nèi)的細(xì)菌的抑制
圖1OA :用密執(zhí)安棍狀桿菌(0D_約0. 9)接種之前,將完整的番茄植物用P. aphidis孢子(IO8個(gè)孢子/ml) (PA)或用水(對(duì)照)噴灑并且在接種后記錄38天。在接種后38天期間對(duì)癥狀進(jìn)行評(píng)分。
圖1OB :接種后38天對(duì)恢復(fù)進(jìn)行評(píng)分??s寫(xiě)PA+(用P. aphidis處理);PA_(未處理);T. P.感染 (d),(感染后時(shí)間(天));感染 Plan. (%),(感染的植物(%) ) ;D (死亡);1 (感染);R (恢復(fù))。
圖1IA-1ICPseudozyma aphidis應(yīng)用的促生長(zhǎng)作用
圖1lA :將番茄苗用IO8個(gè)P. aphidis孢子以I周至2周間隔噴灑4次,并且在首次施用后在7周生長(zhǎng)期間監(jiān)測(cè)它們的葉數(shù);
圖1lB :在首次施用后在7周生長(zhǎng)期間監(jiān)測(cè)葉高;
圖1lC :在首次施用之后7周監(jiān)測(cè)重量。處理的植物由帶有三角形或白色條的線代表,未處理的植物由帶有正方形或具條紋的條的線代表;星號(hào)表示t-檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)差異p〈0. 05。縮寫(xiě)No.Leav.(葉數(shù));Heigh(cm),(高度(cm));重量(gr),(重量(gr) ) ;D. aft.Appl.(施用后天數(shù));w. 108/ml sp. P. aphidis (用 IO8 個(gè) P. aphidis 孢子 /ml 處理);w/ol08/ml sp. P. aphidis (未用 IO8 個(gè) P. aphidis 抱子 /ml 處理)。
圖12A-12BL12誘導(dǎo)的抗性
圖12A:將番茄植物用IO8個(gè)P. aphidis噴灑,并且在施用后10天,使用半定量PCR監(jiān)測(cè)PRUroFl. 2和PIN2基因表達(dá),與未處理的植物相比較。
圖12B :將擬南芥植物用IO8個(gè)P. aphidis噴灑,并且在施用后10天,使用半定量PCR監(jiān)測(cè)PRl和TOFL 2基因表達(dá),與未處理的植物相比較。縮寫(xiě)Cont.(對(duì)照);Treat.(處理)。
圖13A-13CL12控制在SA積累和JA信號(hào)傳導(dǎo)方面受損的擬南芥突變體上的灰葡萄孢菌。在接種激素突變體NahG (SA缺陷的)、jarl_l (JA不敏感)、nprl_l (JA不敏感)和WT (PA-)之后24至72小時(shí)測(cè)量灰葡萄孢菌病斑大小,并且將其與用P. aphidis (PA+)噴灑的對(duì)應(yīng)物上的病斑比較。
圖13A :相對(duì)于未噴灑的對(duì)應(yīng)物,用P. aphidis噴灑的擬南芥WT、NahG和jarl_l的記錄照片。
圖13B :相對(duì)于未噴灑的對(duì)應(yīng)物,用P. aphidis噴灑的擬南芥WT、NahG和jarl_l的記錄病斑大小。
圖13C :相對(duì)于未噴灑的對(duì)應(yīng)物,用P. aphidis噴灑的擬南芥WT和nprl_l的記錄
病斑大小??s寫(xiě)PA+ (含有劃區(qū)的P. aphidis的培養(yǎng)皿);PA-(沒(méi)有P. aphidis的培養(yǎng)皿);Les. S1. (cm2),(病斑大小(cm2) );T. P.1noculat. (d),(接種后時(shí)間(天));W.T.(野生型)。本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明涉及一種包含Pseudozyma aphidis細(xì)胞及其任何制備品的生物控制劑和它們?cè)诖龠M(jìn)植物生長(zhǎng)和健康方面的用途。更具體地,本發(fā)明披露了包含來(lái)自Pseudozymaaphidis細(xì)胞或其制備品的成分的殺細(xì)菌、殺真菌、抗病毒、殺蟲(chóng)并且促進(jìn)植物生長(zhǎng)的組合物,用于增強(qiáng)植物對(duì)植物病原體抗性的方法,用于誘導(dǎo)植物中的免疫相關(guān)基因的方法以及使用本發(fā)明的生物控制劑促進(jìn)植物生長(zhǎng)的方法。 因此,在第一方面,本發(fā)明提供了一種包含生物控制劑作為有效成分的農(nóng)藥組合物,該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。應(yīng)當(dāng)注意的是,該組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。該農(nóng)藥組合物因此有效用于保護(hù)和保存以及用于處理感染或受侵襲的植物、人、家畜、經(jīng)濟(jì)作物、農(nóng)場(chǎng)產(chǎn)品和工業(yè)材料。術(shù)語(yǔ)“農(nóng)藥”是指防止、破壞或控制任何害蟲(chóng)的物質(zhì)或物質(zhì)的混合物。特別地,該術(shù)語(yǔ)涉及有效用于治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)相關(guān)或其他害蟲(chóng)相關(guān)感染或侵染、孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)或延遲其發(fā)作的物質(zhì)或混合物。還用作在收獲之前或之后施用至作物以保護(hù)商品在儲(chǔ)存和運(yùn)輸期間免于變質(zhì)的物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)“害蟲(chóng)”在此定義為包括植物、人或家畜疾病的媒介物、不需要的細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)、線蟲(chóng)種類或在食品、農(nóng)業(yè)商品、木材和木制品或動(dòng)物飼料的生產(chǎn)、加工、儲(chǔ)存、運(yùn)輸或銷(xiāo)售過(guò)程中引起損害或干擾上述過(guò)程的任何生物。本發(fā)明因此進(jìn)一步提供了用作農(nóng)藥組合物的生物控制劑。生物控制被定義為通過(guò)天敵減少害蟲(chóng)種群并且典型地涉及主動(dòng)的人類角色。植物疾病的生物控制劑最經(jīng)常地稱為拮抗劑。成功的生物控制降低目標(biāo)種類的群體密度。術(shù)語(yǔ)“生物控制劑”是指源自生物物質(zhì)并且在治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他植物害蟲(chóng)感染或侵染中的至少一項(xiàng)或延遲其發(fā)作以及抑制孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)方面有效的化合物或組合物。應(yīng)當(dāng)理解的是,任何生物控制劑是環(huán)境安全的,即,它有害于目標(biāo)種類,但是基本上不以非特異性方式損傷其他種類。此外,應(yīng)當(dāng)理解的是,術(shù)語(yǔ)“生物控制劑”也包括術(shù)語(yǔ)“生物化學(xué)控制劑”。生物化學(xué)控制劑是吸引、妨礙、破壞害蟲(chóng)或另外地發(fā)揮殺蟲(chóng)活性的天然存在或與天然產(chǎn)物相同的半化學(xué)品,例如,植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、激素、酶、信息素、異種信息素和利它素。包含在本發(fā)明的組合物之內(nèi)的生物控制劑包含Pseudozyma aphidis細(xì)胞?!癙seudozyma aphidis細(xì)胞”是指呈二態(tài)性的P. aphidis,表示它可以采取絲狀和/或酵母形式,包括芽殖和芽生孢子形成。更具體地,菌株P(guān)seudozyma aphidis同義于由Henninger和Windisch詳述的姆梗孢酵母(Sterigmatos aphidis)[《微生物學(xué)文獻(xiàn)集》(Arch.Microbiol. ), 1975, 105,第 49-50 頁(yè)]。該菌株從珊瑚樓(Solanum pseudocapsicum)的葉上的蚜科(Aphididae)的分泌物中分離并且能夠同化肌醇和硝酸鉀兩者。這些真菌可以利用寬廣范圍的碳源,如戊糖、己糖、糖醇、可溶性淀粉、乙醇和有機(jī)酸。尿素酶反應(yīng)呈陽(yáng)性。用重氮藍(lán)B鹽染色也呈陽(yáng)性。在麥芽提取物瓊脂上在28° C的初始生長(zhǎng)顯示常常在一端或兩端變尖的長(zhǎng)形細(xì)胞(1.4-3. 6) X (4. 3-11. 5 iim)。還觀察到長(zhǎng)達(dá)40Am的十分長(zhǎng)的細(xì)胞。在生長(zhǎng)完成之后,瓊脂被薄的氣生菌絲體覆蓋,所述氣生菌絲體由源于短齒狀、擔(dān)子柄樣結(jié)構(gòu)或衰敗菌絲的分支的、向頂?shù)乃笮窝可咦渔溄M成。在顯微鏡下,它顯示分開(kāi)的菌絲,這些菌絲具有在一些細(xì)胞中收縮的細(xì)胞質(zhì)并且具有收縮隔膜(retraction septa)。劃線培養(yǎng)物是不定的,有時(shí)呈粉狀,大多是粗糖和扁平的,帶有粗糖邊緣。顏色是奶油色至黃色。這種真菌是黑粉菌目的無(wú)性型,因?yàn)榕c玉米黑粉菌(Ustilago maydis)26S核糖體DNA的比較將其歸為相同的組[Boekhout,《普通與應(yīng)用微生物學(xué)雜志》(J. Gen. Appl. Microbiol), 1995,41,第 359-366 頁(yè)]。 應(yīng)當(dāng)理解的是,本發(fā)明的組合物可以包含Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體。表述“分離株或突變體”解釋為具有基本上相同的等位互補(bǔ)的任何個(gè)體或同質(zhì)個(gè)體群。應(yīng)當(dāng)理解的是,在異質(zhì)個(gè)體群中存在等位異質(zhì)性,其中一些個(gè)體在它們的一些基因中攜帶突變,如缺失、置換、重復(fù)等等。攜帶這種突變的個(gè)體因此是突變體。從所述異質(zhì)群中取出個(gè)體被稱為分離,其遺傳上基本上一致的子代也是如此。還應(yīng)當(dāng)理解的是,在本發(fā)明背景下,“突變體”和“分離株”涉及在基因中被突變從而賦予可檢測(cè)表型的Pseudozymaaphidis個(gè)體,并且在具體實(shí)施方案中,所述表型與P. aphidis的殺蟲(chóng)或商業(yè)有關(guān)特征相關(guān)。更進(jìn)一步地,本發(fā)明的組合物包含P. aphidis孢子作為生物控制劑。如本發(fā)明考慮,“孢子”是指細(xì)菌或真菌種類(尤其真菌種類)的至少一個(gè)休眠的(在施用時(shí))但有活力的繁殖單位(reproductive unit)。術(shù)語(yǔ)“Pseudozyma aphidis孢子”指圓柱形至梭形的芽生孢子?;钚晕镔|(zhì)可以是孢子、酵母樣形式、絲狀形式或它們的一些或全部的組合。在葉上,可以發(fā)現(xiàn)二態(tài)真菌體,其包括擔(dān)子柄(strigmata)上的芽生孢子,而在液體培養(yǎng)基中,主要發(fā)現(xiàn)酵母樣形式和孢子,并且在固體培養(yǎng)基中,絲狀和孢子形式是常見(jiàn)的??商娲鼗蛄硗獾?,本發(fā)明的組合物可以包含P. aphidis的培養(yǎng)基作為生物控制齊U。術(shù)語(yǔ)“p. aphidis的培養(yǎng)基”或“條件培養(yǎng)基”指其中預(yù)先生長(zhǎng)過(guò)Pseudozyma aphidis并且它們向其中分泌有化合物的培養(yǎng)基或液體載體。培養(yǎng)濾液代謝物是分泌到生長(zhǎng)培養(yǎng)基中的化合物。培養(yǎng)基可以原樣使用或可以借助過(guò)濾、離心和提取的至少一項(xiàng)進(jìn)一步加工。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物可以包含Pseudozyma aphidis的任何制備品或分泌部分作為活性成分?!癙seudozyma aphidis分泌部分”是指從細(xì)胞中產(chǎn)生和分泌的化合物。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步注意的是,所述Pseudozyma aphidis細(xì)胞的任何提取物或制備品可以被本發(fā)明的組合物用作一種生物控制劑。術(shù)語(yǔ)“提取物”是指通過(guò)使用有機(jī)溶劑(例如乙酸乙酯或己燒)提取Pseudozyma aphidis細(xì)胞、孢子、培養(yǎng)物濾液或條件培養(yǎng)基所獲得的任何物質(zhì)。
重要的是,本發(fā)明的組合物可以包含在此所述的Pseudozyma aphidis細(xì)胞、突變體、分離株、提取物或條件培養(yǎng)基的任何組合。應(yīng)當(dāng)理解的是,本發(fā)明的組合物可以任選地進(jìn)一步包含農(nóng)業(yè)上可接受的載體、稀釋劑、乳化劑或分散劑。應(yīng)當(dāng)理解的是,該組合物也有效用于治療、防止、緩解、抑制、減少或消除已建立的細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)感染或侵染,并且有效治療和防止由其所致的病害。如在此所使用的,在本說(shuō)明書(shū)中和以下權(quán)利要求部分中,術(shù)語(yǔ)“治療”(〃treat〃)或“治療”("treating")和它們的衍生形式包括基本上抑制、減緩或逆轉(zhuǎn)病況的進(jìn)展、基本上緩解病況的癥狀或基本上防止病況的癥狀出現(xiàn),所述病況在植物中由植物病原體引起,這些植物病原體包括細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或其他植物害蟲(chóng)、孢子或菌絲。術(shù)語(yǔ)“防止”和該術(shù)語(yǔ)的所有變體旨在表示預(yù)先阻止細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或其他害蟲(chóng)生長(zhǎng)、增殖、侵染、感染、孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)。在這種情況下,應(yīng)當(dāng)理解的是該組合物是在暴露于所述病原體之前施用的。術(shù)語(yǔ)“緩解”("ameliorate")和一緩解|| ("amelioration")涉及由根據(jù)本發(fā)明的組合物和方法引起的所治療的植物病況的改善,其中所述改善可以表現(xiàn)為以下形式抑制真菌菌絲形成和/或部分或完全破壞它、抑制真菌和細(xì)菌孢子萌發(fā)、抑制真菌、細(xì)菌或其他害蟲(chóng)生長(zhǎng)和增殖、誘導(dǎo)植物免疫應(yīng)答以及改善所述感病植物的高度、重量、葉數(shù)和根系。通常,該術(shù)語(yǔ)是指感病植物生理狀態(tài)的改善。應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步指出的是,在治療的受試者是人或家畜的某些實(shí)施方案中,術(shù)語(yǔ)“治療”("treat")或一治療|| ("treating")和它們的衍生形式包括基本上抑制、減緩或逆轉(zhuǎn)病況的進(jìn)展、基本上緩解病況的癥狀或基本上防止病況的癥狀出現(xiàn),所述病況在人或家畜中由人或家畜病原體引起,這些病原體包括細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或其他植物害蟲(chóng)、孢子或菌絲。
術(shù)語(yǔ)“抑制”和該術(shù)語(yǔ)的全部變體旨在包括限制或禁止細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)生長(zhǎng)以及孢子萌發(fā)。術(shù)語(yǔ)“消除”涉及任選地根據(jù)下文描述的本發(fā)明的方法通過(guò)與本發(fā)明的組合物接觸而基本上根除或移除細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)。術(shù)語(yǔ)“延遲”、“延緩”和其全部變體旨在包括減緩細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)生長(zhǎng)以及孢子萌發(fā)的進(jìn)展。表述“延遲發(fā)作”解釋為防止或減緩細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)生長(zhǎng)、侵染、感染、孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)的進(jìn)展持續(xù)一段時(shí)間,使得所述細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)生長(zhǎng)、侵染、感染、孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)在發(fā)展上不會(huì)進(jìn)展到在根據(jù)本發(fā)明的治療不存在時(shí)的程度或出現(xiàn)得更晚。根據(jù)本發(fā)明的農(nóng)藥組合物包含源自Pseudozyma aphidis的材料。它保護(hù)植物或任何其他材料免受微生物如真菌和細(xì)菌(如在實(shí)例7-10中所示)以及病毒、昆蟲(chóng)、線蟲(chóng)和其他害蟲(chóng)的損害作用。而且,根據(jù)本發(fā)明的組合物不僅損害致病生物,它們還增強(qiáng)植物生長(zhǎng)和誘導(dǎo)植物病原體抗性基因,如分別通過(guò)實(shí)例11和12所示。在更具體的實(shí)施方案中,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物是用于治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的殺細(xì)菌組合物。如在此所使用的,“殺細(xì)菌的”涉及在治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌生長(zhǎng)和/或孢子萌發(fā)或延遲其發(fā)作方面特別有效的農(nóng)藥。
本發(fā)明的組合物因此可以充當(dāng)殺細(xì)菌劑,如實(shí)例7和9所示。這些組合物可以作為殺細(xì)菌劑特別地有效用于控制密執(zhí)安棍狀桿菌密執(zhí)安亞種(Clavibacter michiganensissubsp. michiganensis)、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌黃瓜致病變種、丁香假單胞菌番茄致病變種、馬鈴薯瘡痂病菌、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種和野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種。更具體地,應(yīng)當(dāng)理解的是,該組合物有效用于治療、防止、緩解、抑制、減少或消除已建立的細(xì)菌感染,并且有效治療和防止由其所致的病害。根據(jù)其他實(shí)施方案,根據(jù)本發(fā)明的組合物以及方法(在下文所述)在部分或完全地防止、抑制或消除由細(xì)菌引起的植物感染方面是特別有效的,其非限制性實(shí)例包括黃單胞菌屬(Xanthomonas)種類,例如,野油菜黃單胞菌水稻致病變種(Xanthomonas campestrispv. oryzae);假單胞菌屬(Pseudomonas)種類,例如,丁香假單胞菌黃瓜致病變種;歐文氏菌屬(Erwinia)種類,例如,解淀粉歐文氏菌;密執(zhí)安棍狀桿菌、根癌農(nóng)桿菌、馬鈴薯瘡痂病 菌。在更具體的實(shí)施方案中,同樣如實(shí)例7、8和9所展示,根據(jù)本發(fā)明的殺細(xì)菌組合物可以特別適用于其中細(xì)菌感染由以下至少一種細(xì)菌引起的情況密執(zhí)安棍狀桿菌、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌黃瓜致病變種、丁香假單胞菌番茄致病變種、馬鈴薯瘡痂病菌、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種和野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種。在特定的實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物在治療和防止密執(zhí)安棍狀桿菌感染和由其所致的病理狀況方面是特別有效的。密執(zhí)安棍狀桿菌是一種需氧的非胞子形成的革蘭氏陽(yáng)性植物致病菌,當(dāng)前構(gòu)成棍狀桿菌屬(Clavibacter)內(nèi)的唯一種類。密執(zhí)安棍狀桿菌目前具有5個(gè)亞種密執(zhí)安棍狀桿菌詭譎亞種(Clavibacter michiganensis subsp.1nsidiosus)、密執(zhí)安棍狀桿菌密執(zhí)安亞種、密執(zhí)安棍狀桿菌內(nèi)布拉斯加亞種(Clavibactermichiganensis subsp. nebraskensis)、密執(zhí)安棍狀桿菌壞腐亞種(Clavibactermichiganensis subsp. sepedonicus)和密執(zhí)安棍狀桿菌花葉亞種(Cavibactermichiganensis subsp. tesselarius)。密執(zhí)安棍狀桿菌密執(zhí)安亞種是番爺細(xì)菌性潰瘍的致病因子。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的殺細(xì)菌組合物在根癌農(nóng)桿菌感染的情況下是有效的。根癌農(nóng)桿菌(更新學(xué)名放射型根瘤菌(Rhizobium radiobacter))是超過(guò)140個(gè)雙子葉植物種類中冠癭病(形成腫瘤)的致病因子。它是桿狀的革蘭氏陰性土壤細(xì)菌。癥狀由DNA小區(qū)段(稱作T-DNA,用于‘轉(zhuǎn)移DNA ‘)插入至植物細(xì)胞中引起,DNA小區(qū)段在半隨機(jī)位置結(jié)合到植物基因組中。根癌農(nóng)桿菌(或A. tumefaciens)是根瘤菌科(Rhizobiaceae)的a變形菌(alphaproteobacterium),其包括固氮豆科植物共生體。不同于固氮共生體,致瘤農(nóng)桿菌是致病的并且對(duì)植物無(wú)益處。受農(nóng)桿菌侵襲的多種植物引起農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)的極大關(guān)注。在經(jīng)濟(jì)上,根癌農(nóng)桿菌是胡桃、葡萄、核果、堅(jiān)果樹(shù)、甜菜、辣根和大黃的嚴(yán)重病原體。更進(jìn)一步地,本發(fā)明的殺細(xì)菌組合物在解淀粉歐文氏菌感染的情況下是有效的。解淀粉歐文氏菌是腸桿菌科(Enterobacteriaceae)的革蘭氏陰性細(xì)菌并且是造成火疫的原因。火疫是侵襲蘋(píng)果、梨以及薔薇科(Rosaceae)的一些其他成員的接觸性傳染病。它是蘋(píng)果和梨生產(chǎn)者的嚴(yán)重?fù)?dān)憂。在最佳條件下,它可以在單個(gè)生長(zhǎng)季破壞整個(gè)果園。梨是最易感的,但是蘋(píng)果、枇杷、海棠、榲梓、山楂、枸子、火棘、覆盆子以及一些其他薔薇科植物也是易受傷害的。本發(fā)明另一個(gè)實(shí)例的丁香假單胞菌是帶有極生鞭毛的桿狀革蘭氏陰性細(xì)菌。它是可以感染廣泛范圍的植物種類并且以超過(guò)50個(gè)不同致病變種存在的植物病原體。這些致病變種中的許多曾經(jīng)被視為假單胞菌屬內(nèi)的單獨(dú)種類,但是分子生物學(xué)技術(shù)(如DNA雜交)已經(jīng)顯示這些種類實(shí)際上均是丁香假單胞菌種類的一部分。丁香假單胞菌也產(chǎn)生Ina蛋白,這些蛋白質(zhì)造成水在相當(dāng)高的溫度下凍結(jié),導(dǎo)致植物損傷。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物可以在治療馬鈴薯瘡痂病菌感染和由其所致的病理狀況方面是特別有效的。馬鈴薯瘡痂病菌是在馬鈴薯和其他根類作物上引起常見(jiàn)瘡痂病癥狀的三個(gè)鏈霉菌種類中的一個(gè)。馬鈴薯瘡痂病菌存在于世界上所有馬鈴薯種植區(qū)的土壤中并且還侵襲其他肉質(zhì)根作物。馬鈴薯(Solarium tuberosum)是主要經(jīng)濟(jì)宿主,但是其他肉質(zhì)根作物,包括甜菜、蘿卜、蕪菁甘藍(lán)(rutabaga)、蕪菁、胡蘿卜和歐防風(fēng)(parsnip)也受侵襲。本發(fā)明的組合物可以用于治療野油菜黃單胞菌(Xanthomonas campestris)感染。野油菜黃單胞菌是引起多種植物病害的細(xì)菌種類。它是革蘭氏陰性需氧桿菌,并且是侵襲 十字花科植物如蕓苔屬(Brassica)和擬南芥屬的黑腐病的致病因子。癥狀包括葉邊褪綠和維管組織變黑,伴隨廣泛萎蔫和壞死。全葉黃化、萎蔫和壞死隨著病害進(jìn)展而出現(xiàn)。如由實(shí)例7、15和16展示,本發(fā)明的P. aphidis生物控制劑在治療和防止由真菌病原體引起的病害癥狀方面是有效的。因此,在具體實(shí)施方案中,該農(nóng)藥組合物是一種用于治療、防止、緩解、抑制、消除真菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的殺真菌組合物。術(shù)語(yǔ)“殺真菌的”涉及在治療、防止、緩解、抑制、消除真菌生長(zhǎng)和/或孢子萌發(fā)和菌絲形成及生長(zhǎng)或延遲其發(fā)作方面特別有效的農(nóng)藥。本發(fā)明的這些組合物因此可以充當(dāng)殺真菌劑,如實(shí)例7和8所示。這些組合物可以作為殺真菌劑特別有效地用于控制灰葡萄孢菌、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌、疣頂單胞銹菌、韃靼內(nèi)絲白粉菌、核盤(pán)菌和禾冠柄銹菌。應(yīng)當(dāng)理解的是,該組合物也有效用于治療、防止、緩解、抑制或消除已建立的真菌感染,并且有效治療和防止由其所致的病害。根據(jù)本發(fā)明的組合物和方法可以特別適合用于部分或完全地防止、抑制或消除真菌和真菌樣植物病原體,這些病原體的非限制性實(shí)例包括蜜環(huán)菌屬(Armillaria)種類,例如,北方蜜環(huán)菌(Armillaria borealis);座擔(dān)子菌科(Brachybasidiaceae)種類;巴西殼屬(Brasiliomyces)種類;例如像,Brasiliomyces malachrae 赤殼屬(Calonectria)種類,例如像,冬青麗赤殼菌(Calonectria ilicicola);菊花白銹病菌;Conidiosporomyces ;Cryptobasidiaceae ;外擔(dān)子科(Exobasidiaceae);鍵刀菌屬(Fusarium)種類,例如像,尖抱鍵刀菌紅花專化型(Fusarium oxysporum f. sp. carthami);赤霉屬(Gibberella)種類,例如像,Gibberella tricincta ;Gliocladiopsis 種類,例如像,Gliocladiopsis tenuis ;粉座菌科(Graphiolaceae);膠鎊菌屬(Gymnosporangium)種類,例如像,GymnosporangiumIibocedri ;叢赤殼屬(Nectria)種類,例如像,Nectria pseudotrichia ;Pleuroceras ;柄銹菌屬(Puccinia)種類,例如像,錦葵柄銹菌(Puccinia malvacearum);楔孢黑粉菌屬(Thecaphora)種類,例如像,馬鈴薯楔孢黑粉菌(Thecaphora solani);黑星菌屬(Venturia)(屬)和Westea ;真菌樣(卵菌門(mén)(Oomycota))種類,如腐霉屬(Phytium)、疫霉屬(Phytopthora)、白銹菌和白粉菌(霜霉屬(Peronospora)、盤(pán)霜霉屬(Bremia)、指霜霉屬(Peronosclerospora)、軸霜霉屬(Plasmopara)和假霜霉屬(Pseudoperonospora))。在本發(fā)明的組合物的一些實(shí)施方案中,真菌感染由以下至少一項(xiàng)引起灰葡萄孢菌、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌、疣頂單胞銹菌、韃靼內(nèi)絲白粉菌、核盤(pán)菌和禾冠柄銹菌。根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案,本發(fā)明的組合物特別適合用于治療灰葡萄孢菌感染和由其所致的病理狀況?;移咸焰呔乔忠u許多植物種類的腐植真菌,雖然它最值得注意的宿主可以是葡萄。在葡萄栽培中,它常稱作葡萄灰霉病;在園藝學(xué)中,它通常稱作灰霉病(grey mould或gray mold)。這種真菌在葡萄上引起兩種不同類型的感染。第一種,灰霉病(grey rot)因持續(xù)潮濕或濕潤(rùn)條件所致,并且典型地導(dǎo)致受侵襲的葡萄串損失。第二種,貴腐病在較濕潤(rùn)條件后接著較干燥條件時(shí)發(fā)生 ,并且可以導(dǎo)致不同的餐末甜葡萄酒,如蘇太尼葡萄酒(Sauternes)或托卡伊阿蘇葡萄酒(Aszu of Tokaji )。灰葡萄孢菌侵襲許多其他植物。它對(duì)于無(wú)核小水果如草莓和球莖作物在經(jīng)濟(jì)上是重要的。不同于葡萄,受侵襲的草莓是不可食用的并且被丟棄。灰葡萄孢菌是番茄大量損害的熟知病因,并且還侵襲大黃。根據(jù)另一個(gè)具體的實(shí)施方案,本發(fā)明的組合物特別適合用于治療青霉(Penicillium)感染和由其所致的病理狀況。青霉與曲霉屬(Aspergillus)是可比較的。青霉屬屬于散囊菌目(Eurotiales)。在這個(gè)目中,生物在閉囊殼內(nèi)產(chǎn)生子囊。青霉屬經(jīng)常被稱為半知菌綱或不全菌綱真菌。名稱青霉來(lái)自詞語(yǔ)“刷子”;這是指狀青霉中孢子的外觀。青霉真菌是多用途的和機(jī)會(huì)致病性的。它們是采后病原體。青霉屬種類是水果和蔬菜中的真菌性腐敗的最常見(jiàn)原因之一。意大利青霉(Penicillium italicum)和指狀青霉是柑橘果實(shí)的最常見(jiàn)侵襲者,而擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum)已知侵襲蘋(píng)果。指狀青霉通過(guò)產(chǎn)生乙烯以加速成熟而發(fā)揮作用。它用綠色分生孢子覆蓋果實(shí),引起果實(shí)皺縮和變干。意大利青霉引起粘性腐敗病(slimy rot)并且產(chǎn)生藍(lán)綠色分生孢子。這些種類喜好較涼的溫度,這解釋了為何通常在留在冰箱內(nèi)太長(zhǎng)時(shí)間的食物上發(fā)現(xiàn)它們。許多種類產(chǎn)生霉菌毒素;例如,擴(kuò)展青霉產(chǎn)生一種稱作展青霉素的霉菌毒素。這些種類的大部分彼此在顏色特征、腐敗方式和感染癥狀方面相似;它們屬于稱作青霉的一般類目。擴(kuò)展青霉是最有侵襲性的種類之一。這些真菌生活時(shí)間長(zhǎng)并且相當(dāng)持久,甚至在不利條件下也是如此。有時(shí),意大利青霉和擴(kuò)展青霉彼此粘附以產(chǎn)生束絲。束絲也在棒形青霉(Penicillum claviforme)中出現(xiàn)。青霉生長(zhǎng)典型地由于產(chǎn)品中的傷口感染而發(fā)生。最常見(jiàn)的處理是對(duì)收獲的產(chǎn)品使用殺真菌齊U。青霉屬種類不止侵襲水果。例如,撫狀青霉(Penicillium verrucosum)生長(zhǎng)在谷物產(chǎn)品上。根據(jù)另一個(gè)具體的實(shí)施方案,本發(fā)明的組合物特別適合用于治療鏈格孢屬(Alternaria)感染和由其所致的病理狀況。鏈格孢屬由許多常見(jiàn)的腐生性(從死的和/或腐敗的有機(jī)質(zhì)中獲得養(yǎng)分)和植物致病性種類組成。鏈格孢屬孢子可以典型地發(fā)現(xiàn)于空氣、土壤、腐敗的植物材料、木材和食物中。甘藍(lán)鏈格孢菌是普遍存在的植物致病性真菌,但也作為腐生生物而存在。甘藍(lán)鏈格孢菌在幾乎每種重要的栽培蕓苔屬(Brassica)種類(包括綠花椰菜、卷心菜、卡諾拉和芥菜)上引起黑斑病(也稱作黑葉斑病(dark leaf spot))。它具有世界范圍的經(jīng)濟(jì)重要性,有時(shí)在作物如卡諾拉、芥菜或油菜中導(dǎo)致20%-50%的產(chǎn)量下降。根據(jù)另一個(gè)具體的實(shí)施方案,本發(fā)明的組合物特別適合用于治療菜豆黑銹病菌感染和由其所致的病理狀況。常見(jiàn)的菜豆銹病由擔(dān)子菌綱真菌菜豆黑銹病菌(Uromycesappendiculatus) (Pers. :Pers. ) Unger引起。它是不能獨(dú)立于其菜豆宿主生活的專性寄生性真菌。這種真菌不能在實(shí)驗(yàn)室中在人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)。銹病病原體在菜豆宿主上完成其完整的生活周期;因此,這種銹菌是寄生的。常見(jiàn)的菜豆銹病具有世界范圍分布并且它在世界的大多數(shù)干菜豆和食莢菜豆生產(chǎn)地區(qū)存在,并且尤其在其中菜豆生長(zhǎng)季節(jié)期間盛行濕潤(rùn)至中等濕潤(rùn)條件、長(zhǎng)露期和涼爽條件的位置存在。根據(jù)另一個(gè)具體的實(shí)施方案,本發(fā)明的組合物特別適合用于治療韃靼內(nèi)絲白粉菌感染和由其所致的病理狀況。番茄白粉病由真菌韃靼內(nèi)絲白粉菌引起。本疾病可能在商業(yè)種植的番茄中十分具有破壞性,其中產(chǎn)量損失可以在嚴(yán)重感染的田地中超過(guò)50%。損失的程度取決于環(huán)境條件、疾病發(fā)作日期和殺真菌劑控制的有效性。伴有偶爾暴雨的炎熱干燥日有利于病害的發(fā)展。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物特別適合用于治療核盤(pán)菌感染。核盤(pán)菌 是植物致病性真菌并且如果條件適當(dāng),可以引起稱作白霉病的病害。核盤(pán)菌病也稱作棉狀腐病、水浸狀軟腐病(watery soft rot)、莖腐病、枯萎病(drop)、冠腐病(crown rot)和花腐病(blossom blight)。這種病原體的關(guān)鍵特征是其在它感染的植物上產(chǎn)生黑色靜止結(jié)構(gòu)物(稱作菌核)和白色絨毛狀生長(zhǎng)物的能力。這些菌核在春天形成在子囊中產(chǎn)生孢子的子實(shí)體,因而命名為子囊菌(Ascomycetes)。這種病原體可以在許多大陸上出現(xiàn)和具有廣泛的植物宿主范圍。當(dāng)核盤(pán)菌因有利的環(huán)境條件在田間發(fā)生時(shí),損失可能巨大。白霉病侵襲廣泛范圍的宿主。已知它感染408種植物種類。其多樣的宿主范圍和感染處于任何生長(zhǎng)階段的植物的能力使得白霉病是一種十分嚴(yán)重的疾病。這種真菌可以在感染的組織上、在土壤中和在活植物上存活。它侵襲幼苗、成熟植物和田間的或儲(chǔ)存的果實(shí)。白霉病可以在田間在植物之間迅速傳播。它也可以在儲(chǔ)存設(shè)施中傳播遍及收獲的作物。它常侵襲的一些作物是大豆、菜豆、向日葵、卡諾拉和花生。更進(jìn)一步地,本發(fā)明的組合物旨在用于治療禾冠柄銹菌感染。禾冠柄銹菌是燕麥冠銹病和大麥冠銹病的植物病原體和致病因子。這種病原體在全世界存在,感染野生和栽培燕麥。自從1993以來(lái),已經(jīng)在這個(gè)地區(qū)的幾個(gè)地方的大麥和飼草上發(fā)生冠銹病暴發(fā)。未曾確定大麥中由這種病害引起的產(chǎn)量損失的程度。冠銹病對(duì)大麥生產(chǎn)造成威脅,因?yàn)樵诩竟?jié)的早期從局部接種物(local inoculum)發(fā)生在大麥中的首次感染。應(yīng)當(dāng)注意的是,本發(fā)明的殺真菌組合物可以抑制真菌孢子萌發(fā)和菌絲形成的至少一項(xiàng)?!懊劝l(fā)”,在一般意義上,可以意指從微小存在或起源擴(kuò)展成更大的任何事物。如在此提及的,“萌發(fā)”涉及真菌從孢子中出現(xiàn)并且開(kāi)始生長(zhǎng)的過(guò)程。萌發(fā)的實(shí)例是從孢子生長(zhǎng)孢苗。萌發(fā)也可以是指在真菌、藻類和一些植物中從休眠孢子出現(xiàn)細(xì)胞以及從孢子生長(zhǎng)孢苗菌絲或菌體。分生孢子是在特定條件下萌發(fā)的真菌的無(wú)性繁殖孢子。菌絲(復(fù)數(shù)形式“菌絲”)是真菌的長(zhǎng)、分支絲狀結(jié)構(gòu),并且也存在于不相關(guān)的放線菌門(mén)中。在大多數(shù)真菌中,菌絲是主要的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)模式,并且統(tǒng)稱為菌絲體;酵母是不生長(zhǎng)為菌絲的單細(xì)胞真菌。菌絲由管狀細(xì)胞壁包圍的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞組成。在大多數(shù)真菌中,菌絲被稱作“隔膜”((單數(shù)形式隔膜s印turn)的內(nèi)部橫隔分隔成細(xì)胞。一些真菌具有無(wú)隔菌絲,表示它們的菌絲不被隔膜分隔。菌絲生長(zhǎng)在它們的頂端。在頂端生長(zhǎng)期間,通過(guò)細(xì)胞壁組分的外部裝配和聚合和內(nèi)部產(chǎn)生新細(xì)胞膜而延長(zhǎng)細(xì)胞壁。頂體是與頂端生長(zhǎng)相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器。它由含有細(xì)胞壁組分的膜結(jié)合囊泡的聚集體組成。頂體是真菌內(nèi)膜系統(tǒng)的一部分,容納和釋放它從高爾基體接收的囊泡。這些囊泡經(jīng)細(xì)胞骨架行進(jìn)至細(xì)胞膜并且借助胞吐過(guò)程將它們的內(nèi)容物釋放到細(xì)胞的外部,在這里它可以隨后轉(zhuǎn)運(yùn)至需要它的地方。囊泡膜有助于細(xì)胞膜的生長(zhǎng),同時(shí)它們的內(nèi)容物形成新的細(xì)胞壁。頂體沿菌絲束的頂點(diǎn)移動(dòng)并且產(chǎn)生頂端生長(zhǎng)和分支;菌絲束的頂端生長(zhǎng)速率是平行的并且受頂體的移動(dòng)調(diào)節(jié)。隨著菌絲伸長(zhǎng),間隔可以在正在生長(zhǎng)的頂端后面形成以將每一菌絲分隔成單獨(dú)的細(xì)胞。菌絲可以通過(guò)正在生長(zhǎng)的頂端分叉或通過(guò)新的頂端從建立的菌絲中出現(xiàn)而分支。如在此所使用的術(shù)語(yǔ)“菌絲形成”和“菌絲生長(zhǎng)”涉及從孢子長(zhǎng)出菌絲的過(guò)程,還與術(shù)語(yǔ)“孢子萌發(fā)”和正在生長(zhǎng)的菌絲頂端的伸長(zhǎng)和/或分叉的過(guò)程是可互換的。應(yīng)當(dāng)理解的是,用本發(fā)明的組合物處理真菌或細(xì)菌可能以至少大約5%-95%、大約10%-90%、大約15%-85%、大約 20%-80%、大約 25%-75%、大約 30%_70%、大約 35%_65%、大約 40%_60% 或大約45%-55%抑制菌絲形成和生長(zhǎng)。也可能以至少大約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、 30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或大約 100% 抑制所述菌絲形成和生長(zhǎng)。更具體地,如在此所使用的,術(shù)語(yǔ)“抑制”("inhibit")或“抑制”("inhibition")旨在以至少大約1%_100%、大約5%-95%、大約10%-90%、大約15%-85%、大約20%_80%、大約25%-75%、大約30%-70%、大約35%_65%、大約40%_60%或大約45%_55%限制、延遲、減少、降低或削弱某個(gè)過(guò)程、現(xiàn)象或表型。所述限制、延遲、減少、降低或削弱某個(gè)過(guò)程、現(xiàn)象或表型達(dá)也可能是至少大約 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或大約 100%。還應(yīng)當(dāng)指出的是,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物可以另外地充當(dāng)用于治療、防止、緩解、抑制、消除病毒感染或延遲其發(fā)作的抗病毒組合物。植物致病性病毒的非限制性實(shí)例包括彈狀病毒屬(Rhabdovirus),紫花苜蓿耳突病毒(AEV);苜?;ㄈ~病毒屬(苜?;ㄈ~病毒(AMV));黃矮病毒組,菜豆卷葉病毒(BLRV);馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus),菜豆黃花葉病毒(BYMV);黃瓜花葉病毒屬(Cucumovirus),黃瓜花葉病毒(CMV);螺傳病毒屬(Nepovirus),澳洲紫花苜蓿潛隱病毒(LALV);豇豆花葉病毒科(Comoviridae),澳洲紫花苜蓿無(wú)癥病毒(LASV);南方菜豆花葉病毒屬(Sobemovirus),紫花苜蓿短暫條紋病毒(LTSV);香石竹潛隱病毒屬(Carlavirus),豌豆新西蘭線條病毒(PSV);香石竹潛隱病毒屬,紅三葉草葉脈花葉病毒(RCVMV);等軸不穩(wěn)環(huán)斑病毒屬(Ilarvirus),煙草條紋病毒(TSV);煙草蝕紋病毒;馬鈴薯X病毒屬(Potexvirus),白三葉草花葉病毒(WCMV);南芥菜花葉病毒;意大利菊芋潛隱病毒;植原體屬;布拉迪斯拉發(fā)花葉病毒;蠶豆萎蔫病毒;葡萄病毒B ;葡萄扇葉病毒;桃叢簇花葉病毒;碧冬茄星狀花葉病毒;懸鉤子環(huán)斑病毒;藜草花葉病毒;草莓潛隱環(huán)斑病毒;煙草花葉病毒;煙草壞死病毒;煙草環(huán)斑病毒;番茄黑環(huán)病毒;和番茄環(huán)斑病毒。根據(jù)某些實(shí)施方案,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物可以特別適合用于治療、防止、緩解、抑制、消除在人類中的細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)感染或侵染中的至少一項(xiàng)或延遲其發(fā)作。在其他實(shí)施方案中,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物可以特別適合用于治療、防止、緩解、抑制、消除在家畜中的細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)感染或侵染中的至少一項(xiàng)或延遲其發(fā)作。在更具體的實(shí)施方案中,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物可以用于治療、防止、緩解、抑制、消除在人類或家畜中的由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)、葡萄球 菌屬(Staphylococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、志賀菌屬(shigella)、彎曲菌屬(Campylobacter)、洋蔥伯克霍爾德菌(Burkholderiacenocepacia)、鳥(niǎo)分枝桿菌(Mycobacterium avium)和沙門(mén)菌屬(Salmonella)中的至少一種所引起的細(xì)菌感染或延遲其發(fā)作。在其他的具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物可以用于治療、防止、緩解、抑制、消除在人類或家畜中的由假絲酵母屬(Candida)、曲霉屬(Aspergillus)、須霉屬(Phycomyces)、接合菌綱(Zygomyces)、根霉屬(Rhizopus)^ 毛霉屬(Mucor)^ 犁頭霉屬(Absidia)、霍塔毛抱子菌(Piedraia hortae)、白吉利毛抱子菌(Trichosporonbeigelii)、威尼克外瓶霉(Exophiala werneckii)、小孢子菌屬(Microsporum)、分枝孢子菌屬(Cladosporium)、著色真菌屬(Fonsecaea)、鐮刀菌屬(Fusarium)、青霉屬、表皮癬菌屬(Epidermophyton)、小孢子菌屬、毛癬菌屬(Trichophyton)、糠批馬拉色菌(Malasseziafurfur)、花斑癬菌(Pityriasis versicolor)、粗球抱子菌(Coccidioidesimmitis)、莢膜組織胞衆(zhòng)菌(histoplasma capsulatum)、皮炎芽生菌(Blastomycosesdermatitidis)、新型隱球酵母(Cryptococcus neoformans)、申克抱子絲菌(Sporothrixschenckii)中的至少一種所引起的真菌感染或延遲其發(fā)作。在更具體的實(shí)施方案中,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物可以用于治療、防止、緩解、抑制、消除在人類或家畜中的由以下病毒科腺病毒科(Adenoviridae)、小RNA病毒科(Picornaviridae )、痕疫病毒科(Herpesviridae )、嗜肝 DNA 病毒科(Hepadnaviridae )、黃病毒科(Flaviviridae)、逆轉(zhuǎn)錄病毒科(Retroviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副粘病毒科(Paramyxoviridae)、乳多空病毒科(Papovaviridae)、多瘤病毒屬(PoIyomavirus)、彈狀病毒科(Rhabdoviridae)、披膜病毒科(Togaviridae)中的至少一種所引起的病毒感染或延遲其發(fā)作。在另一個(gè)方面,本發(fā)明提供了一種在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性的組合物。該組合物包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;
e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。是組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。根據(jù)本發(fā)明的多種實(shí)施方案,本發(fā)明的這些組合物在處理的植物中賦予抗性。術(shù)語(yǔ)“抗性”涉及植物抵抗細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或其他害蟲(chóng)感染或侵染的能力,即,與未處理的植物相比,所述植物可以在這種感染或侵染期間和之后展示更好的存活率,或與未處理的植物相比,它可以顯示更少的癥狀,或它可以不以如未處理植物那樣高的比率被感染或侵染。例如,用本發(fā)明的組合物處理的植物可以抵抗害蟲(chóng)感染或侵染,并且感染率或侵染率達(dá)將比未處理的植物低大約1%_100%、大約5%-95%、大約10%-90%、大約15%-85%、大約20%-80%、大約 25%-75%、大約 30%_70%、大約 35%_65%、大約 40%_60% 或大約 45%_55%,或者比未處理的植物低至少大約 1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或大約 100%。處理的植物的存活率可以比未處理的植物高大約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或約 100%。與未處理的植物相比,可以抑制或減少由這種感染或侵染引起的病理學(xué)癥狀大約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、 12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或大約 100%。另外,對(duì)處理的植物賦予抗性也可以歸因于誘導(dǎo)促進(jìn)植物免疫應(yīng)答的免疫相關(guān)基因并且因此誘導(dǎo)針對(duì)病原體的抗性。這樣的基因可以包括例如防御素和/或致病相關(guān)基因或任何其他的免疫相關(guān)基因。更具體地,與未處理的植物相比,可能以大約1%_1000%、大約 5%-95%、大約 10%-90%、大約 15%-85%、大約 20%_80%、大約 25%_75%、大約 30%_70%、大約35%-65%、大約40%-60%或大約45%_55%,或與未處理的植物相比,以至少大約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、 63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%、200%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900% 或大約 1000% 誘導(dǎo) PRl 和 PDFl. 2 的至少一種
的表達(dá)。相對(duì)于病害或害蟲(chóng)易感的植物,抵抗病害或害蟲(chóng)的植物常常被定義為在該植物上或該植物中的病原體生長(zhǎng)的減少。因此,與易感植物相比,抗性植物將較少地受到所述病原體不利影響,或甚至對(duì)其有害作用有免疫力。這可以例如通過(guò)誘導(dǎo)植物免疫基因來(lái)實(shí)現(xiàn)。實(shí)際上,在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物上調(diào)或誘導(dǎo)植物免疫相關(guān)基因的表達(dá)。在更具體的實(shí)施方案中,所述植物免疫相關(guān)基因編碼病程相關(guān)蛋白家族和防御素家族的至少一項(xiàng)。通常,當(dāng)使用時(shí),術(shù)語(yǔ)“誘導(dǎo)表達(dá)”或“誘導(dǎo)基因的表達(dá)”涉及引起以下情況至少一項(xiàng)增加轉(zhuǎn)錄速率、翻譯速率、蛋白質(zhì)和/或mRNA穩(wěn)定性、基因產(chǎn)物量和蛋白質(zhì)和/或mRNA成熟。更具體地,當(dāng)誘導(dǎo)所述基因表達(dá)時(shí),與對(duì)照(未處理(未誘導(dǎo))的生物)中的相 應(yīng)速率相比,轉(zhuǎn)錄速率、翻譯速率、蛋白質(zhì)和/或mRNA穩(wěn)定性、基因產(chǎn)物量和蛋白質(zhì)成熟和/或mRNA成熟中的至少一項(xiàng)的增加為以至少大約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、26%、27%、28%、29%、30%、31%、32%、33%、34%、35%、36%、37%、38%、39%、40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%、61%、62%、63%、64%、65%、66%、67%、68%、69%、70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%、200%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900% 或大約 1000% 增加。在一個(gè)具體實(shí)施方案中,病程相關(guān)蛋白家族的成員可以是PRl并且防御素家族的成員可以是I3DFl. 2。PDF1. 2 也稱作 LCR77 ;低分子量半胱氨酸豐富 77 ;MFC16. 8 ;MFC16_8 ;PDF1. 2 ;PDFl. 2A ;植物防御素1. 2和植物防御素1. 2A。PDF1. 2編碼乙烯響應(yīng)和茉莉酸響應(yīng)植物防御素,并且屬于具有以下成員的植物防御素(PDF)家族Atlg75830/PDFl.1、At5g44420/PDFl. 2a、At2g26020/PDF1. 2b、At5g44430/PDF1. 2c、At2g26010/PDF1. 3、Atlgl9610/PDFl. 4、Atlg55010/PDF1. 5、At2g02120/PDF2.1、At2g02100/PDF2. 2、At2g02130/PDF2. 3、Atlg61070/PDF2. 4、At5g63660/PDF2. 5、At2g02140/PDF2. 6、At5g38330/PDF3.1 和At4g30070/PDF3. 2。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物誘導(dǎo)PRl在所述植物中表達(dá)。PRl (病程相關(guān)基因I)也稱作AtPRl ;病程相關(guān)基因I ;病程相關(guān)蛋白I ;PR1 ;PR1 ;T6B13. 15和T6B13_15。在響應(yīng)于多種病原體時(shí)誘導(dǎo)PRl基因表達(dá)。它是對(duì)于SAR應(yīng)答的有用分子標(biāo)記。這種基因的表達(dá)是水楊酸響應(yīng)的(SAR)?!安〕滔嚓P(guān)蛋白(PR)”已經(jīng)定義為“由宿主植物編碼但是僅在病理或相關(guān)情況下誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)”。將被包括在PR之中的一種蛋白質(zhì)必須在感染時(shí)新近表達(dá),但是不必然地在所有病理情況下表達(dá)。病理情況指所有類型的感染狀態(tài),不僅僅指其中PR最常見(jiàn)的抗性、超敏反應(yīng);它們還包括由線蟲(chóng)、昆蟲(chóng)和草食動(dòng)物所致的寄生性侵襲(parasitic attack)。僅借助于非生物性脅迫條件的誘導(dǎo)不是納入作為PR的充分標(biāo)準(zhǔn)。PR組的成員包括例如PRla、PRlb、PRlc、PR2a、PR2b、PR3、PR4、PR5a、PR5b、16kD、Gluc. b、Ch. 32、Ch. 34 和滲透蛋白。
在又另一個(gè)具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物誘導(dǎo)H3F1. 2在所述植物中表達(dá)。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物誘導(dǎo)PRl和H3F1. 2在所述植物中表達(dá),所述組合物任選地誘導(dǎo)至少一個(gè)另外的免疫相關(guān)基因表達(dá)。在某些實(shí)施方案中,這種基因例如包括擬南芥基因AtBGL2、AtVSPU AtThi2.1、AtLox以及它們?cè)谄渌参锓N類中的等同物。更進(jìn)一步地,這些基因可以是番茄基因蛋白質(zhì)抑制劑I (Pinl)和Pin2。在具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物增強(qiáng)、增加或誘導(dǎo)植物免疫相關(guān)基因的表達(dá),從而增加植物對(duì)害蟲(chóng)(包括真菌、病毒、細(xì)菌、線蟲(chóng)和昆蟲(chóng)的至少一種)感染或侵染的抗性。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物和方法可以適用于賦予針對(duì)由線蟲(chóng) 引起的病理狀況的抗性和/或?qū)ζ溥M(jìn)行治療。植物致病性線蟲(chóng)的非限制性實(shí)例包括鱗球莖莖線蟲(chóng)(Ditylenchus dipsaci)、菊花滑刃線蟲(chóng)(Aphelenchoides ritzemabosi )、抱囊線蟲(chóng)屬(Heterodera spp.)種類、三葉草胞囊線蟲(chóng)(Heterodera trifolii)、甜菜胞囊線蟲(chóng)(Heterodera schachtii)、美洲劍線蟲(chóng)(Xiphinema americanum)、短體屬(Pratylenchus)種類、傷殘短體線蟲(chóng)(Pratylenchus vulnus)、落選短體線蟲(chóng)(Pratylenchus neglectus)、穿剌短體線蟲(chóng)(Pratylenchus penetrans)、長(zhǎng)針屬(Longidorus)種類、針線蟲(chóng)屬(Paratylenchus)種類、鉤針線蟲(chóng)(Paratylenchus hamatus)、腎狀線蟲(chóng)屬(Rotylenchulus)種類、根結(jié)線蟲(chóng)屬(Meloidogyne)種類、花生根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne arenaria)、哥倫比亞根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne chitwoodi)、北方根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne hapla)、南方根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne incognita)、爪卩圭根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne javanica)、螺旋屬(Helicotylenchus)種類、擬毛剌屬(Paratrichodorus)種類、矮化屬(Tylenchorhynchus)種類、長(zhǎng)尾剌線蟲(chóng)(Belonolaimus Iongicaudatus)^ 半穿剌線蟲(chóng)(Tylenchulussemipenetrans)、薄葉小環(huán)線蟲(chóng)(Criconemella xenoPlax)、螺旋屬種類和矮化屬種類。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物和方法可以適用于賦予針對(duì)由昆蟲(chóng)引起的病理狀況的抗性和/或?qū)ζ溥M(jìn)行治療。優(yōu)先于所述植物的植物有害昆蟲(chóng)的非限制性實(shí)例包括:Acalymma、黑頭長(zhǎng)翅卷蛾(Acleris variegana)、非洲粘蟲(chóng)(Africanarmyworm)、非洲化蜂(Africanized bee)、潛妮科(Agromyzidae)、褐切根蟲(chóng)(Agrotismunda)、Agrotis porphyricollis、柑橘黑剌粉風(fēng)(Aleurocanthus woglumi)、甘藍(lán)粉風(fēng)(Aleyrodes proIeteI la)、南瓜緣蟲(chóng)舂(Anasa tristis)、奧地利 M 金龜(Anisopliaaustriaca)、梨花象甲(Anthonomus pomorum)、草莓花象(Anthonomus signatus)、桔紅圓腎盾階(Aonidiella aurantii)、蟲(chóng)牙蟲(chóng)(Aphid)、黑豆蟲(chóng)牙(Aphis fabae)、棉蟲(chóng)牙(Aphisgossypii)、蘋(píng)果實(shí)蠅(Apple maggot)、阿根廷蟻(Argentine ant)、行軍切根蟲(chóng)(Armycutworm)、Arotrophora arcuatalis、咖啡鏈階(Asterolecanium coffeae)、澳洲疫蟲(chóng)皇(Australian plague locust)、馬鈴薯木風(fēng)(Bactericera cockerelli)、果實(shí)妮屬(Bactrocera )、番石植果實(shí)妮(Bactrocera correcta)、稽鋳(Bagrada hi laris)、胡桃天牛(Banded hickry borer)、Banksia Boring Moth、甜菜粘蟲(chóng)(Beet armyworm)、布網(wǎng)夜蛾(Bogong moth)、棉鈴象甲(Boll weevil)、甘藍(lán)姆(Brevicoryne brassicae)、褐飛蟲(chóng)皇(Brown locust)、荼翅椿(Brown marmorated stinkbug)、褐稻風(fēng)(Brown planthopper)、甘藍(lán)夜蛾(Cabbage Moth)、菜青蟲(chóng)(Cabbage worm)、四紋豆象(Callosobruchusmaculatus)、鹿龜(Cane beetle)、胡蘿卜 ^^(Carrotfly)、瘦蚊科(Cecidomyiidae)、地中海實(shí)妮(Ceratitis capitata)、谷物葉甲(Cereal leaf beetle)、麥桿妮(Chloropspumilionis)、柑橘天牛(Citrus long-horned beetle)、咖啡綠階(Coccus viridis)、蘋(píng)果蠹蛾(Codling moth)、咖啡果小蠹(Coffee borer beetle)、科羅拉多馬鈴薯甲蟲(chóng)(Colorado potato beetle)、雜擬谷盜(Confused flour beetle)、草螟屬(Crambus)、黃瓜葉甲(Cucumber beetle)、象鼻蟲(chóng)(Curculio nucum)、切根蟲(chóng)(Cutworm)、歪斜褐夜蛾(Dark Sword-grass)、掠櫚核小蠹(Date stone beetle)、地種蠅屬(Delia)(屬)、蔥地種妮(Delia antiqua)、蘿卜地種妮(Delia floralis)、甘藍(lán)地種妮(Delia radicum)、沙漠幢蟲(chóng)(Desert locus)、根螢葉甲屬(Diabrotica)、小菜蛾(Diamondbackmoth)、瓜絹野螟(Diaphania indica)、黃瓜絹野螟(Diaphania ni tidal is)、柑橘木風(fēng)(Diaphorinacitri )、鹿根非耳象(Diaprepes abbreviatus)、長(zhǎng)額負(fù)幢(Differential grasshopper)、摩洛哥戟紋幢(Dociostaurus maroccanus)、斑翅果蕭(Drosophila suzukii)、尖翅蕉弄蝶(Erionota thrax)、綿蟲(chóng)牙亞科(Eriosomatinae)、甘鹿飛風(fēng)(Eumetopina f Iavipes)、歐洲玉米螟(European CornBorer)、甘藍(lán)菜鋳(Eurydema oleracea)、麥扁盾鋳(Eurygasterintegriceps)、森林蟲(chóng)(Forest bug)、西花薊馬(Frankliniella occidental is)、美東花薊馬(Franklniella tritici)、大錯(cuò)螟(Galleria mellonella)、暗切夜蛾(Garden Dart)、溫室白粉風(fēng)(Greenhouse whitefly)、東方峻蛄(Gryllotalpa orientalis)、野地幡蛑(Gryllus pennsylvanicus)、美國(guó)舞毒蛾(Gypsy moths in the United States)、棉鈴蟲(chóng)(Helicoverpa armigera)、谷實(shí)夜蛾(Helicoverpa zea)、煎二十八星瓢蟲(chóng)(Henosepilachna vigintioctopunctata)、黑森瘦蚊(Hessian fly)、日本金龜(Japanesebeetle)、蟲(chóng)斑皮蠹(Khapra beetle)、亮灰蝶(Lampides boeticus)、大白粉蝶(LargeWhite)、潛葉蟲(chóng)(Leafminer)、Lepidiota consobrina、偷頓盾階(Lepidosaphes ulmi )、Leptoglossus zonatus、Leptopterna dolabrata、小錯(cuò)螟(Lesser wax moth)、潛葉蛾(Leucoptera)(蛾)、咖啡潛葉蛾(Leucoptera caffeina)、蘋(píng)果淺褐卷葉蛾(Light brownapple moth)、淺褐色蘋(píng)果蛾天敵(Light brown apple moth controversy)、稻水象甲(Lissorhoptrus oryzophiIus)、長(zhǎng)尾弄蝶(Long-tailed Skipper)、草盲鋳屬(Lygus)、木權(quán)曼粉階(Maconellicoccus hirsutus)、薔薇剌金龜(Macrodactylus subspinosus)、馬鈴薯姆(Macrosiphum euphorbiae)、玉米象(Maize weevil)、煙草天蛾(Manduca sexta)、大麥莖干癭蚊(Mayetiola hordei)、粉階(Mealybug)、蛾(Moth)、韭菜蛾(Leek moth)、桃蟲(chóng)牙(Myzus persicae)、稻綠蝽(Nezara viridula)、橄欖果蕭(Olivefruitfly)、禾蕭科(Opomyzidae)、達(dá)摩鳳蝶(Papilio demodocus)、木瓜秀粉階(Paracoccus marginatus)、Paratachardina pseudolobata、豌豆姆(Pea aphid)、鋳總科(Pentatomoidea)、馬鈴薯塊莖蛾(Phthorimaea operculella)、f思金龜屬(PhylIophaga)(屬)、根瘤蟲(chóng)牙屬(Phylloxera)、球蟲(chóng)牙總科(Phylloxeroidea)、棉紅鈴蟲(chóng)(Pink bollworm)、蘋(píng)果芽蛾(Platynotaidaeusalis)、梅維象甲(Plum curculio)、暗色粉階(Pseudococcus viburni)、紫斑谷螟(Pyralis farinalis)、外引紅火蟻(Red importedfireant)、赤蟲(chóng)皇(Red locust)、樓桃繞實(shí)蠅(Rhagoletis cerasi)、西部樓桃實(shí)蠅(Rhagoletis indifferens)、越桔繞實(shí)也黽(Rhagoletis mendax)、紅掠象甲(Rhynchophorus ferrugineus)、谷蠹(Rhyzoperthadominica)、米蛾(Rice Moth)、麥雙尾姆(Russian wheat aphid)、梨圓階(San Josescale)、介殼蟲(chóng)(Scale insect)、眼蕈蚊科(Sciaridae)、荼黃薊馬(Scirtothripsdorsalis)、盾疇科(ScuteIIeridae)、蛇形潛葉妮(Serpentine leafminer)、銀葉粉風(fēng)(Silverleaf whitefly)、蜂箱小甲蟲(chóng)(Small hive beetle)、大豆蟲(chóng)牙(Soybean aphid)、圓灰翅夜蛾(Spodoptera cilium)、斜紋夜蛾(Spodoptera litura)、黃瓜十二點(diǎn)葉甲(Spotted cucumber beetle)、南瓜蔓吉丁蟲(chóng)(Squash vine borer)、Stenotus binotatus、胸 _ 亞目(Sternorrhyncha)、向日葵實(shí)妮(Strauzia longipennis)、黃曲條跳甲(Striped flea beetle)、盾疇(Sunn pest)、甘薯褐黃緣疇(Sweetpotato bug)、牧草盲疇(Tarnishedplant bug)、薊馬(Thrips)、掠櫚薊馬(Thrips palmi)、褐色橘姆(Toxopteracitricida)、非洲木風(fēng)(Trioza erytreae)、番爺麥蛾(Tuta absoluta)、小圓皮蠹(Variedcarpet beetle)、石槽小灰蝶(Virachola isocrates)、臘蟲(chóng)(Waxworm)、西方玉米根蟲(chóng)(Western corn rootworm)、麥象甲(Wheat weevi)、冬尺蠖蛾(Winter Moth)和材小蠹(Xyleborus glabratus)。 在一個(gè)具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物有效防止、緩解、抑制、消除在農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品中的害蟲(chóng)感染或侵染、孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)或延遲其發(fā)作。本發(fā)明的組合物從而有效延長(zhǎng)這種產(chǎn)品的貨架期或儲(chǔ)存時(shí)間。應(yīng)當(dāng)注意的是農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品包括植物、植物材料(包括根、鱗莖、塊莖、球莖、葉、花、種子、莖、愈傷組織)、堅(jiān)果、籽粒、果實(shí)(例如,葡萄)、插枝、根莖、接穗)、收獲的作物(包括根、鱗莖、塊莖、球莖、葉、花、種子、莖、愈傷組織、堅(jiān)果、籽粒、果實(shí)、插枝、根莖或接穗)的任一種。此外,因此應(yīng)當(dāng)理解的是,所述農(nóng)藥組合物可以有效防止、緩解、抑制、消除在不是植物材料的農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品(如肉產(chǎn)品和乳制品)以及易感于所述害蟲(chóng)的任何工業(yè)材料中的害蟲(chóng)感染或侵染、孢子萌發(fā)和菌絲生長(zhǎng)或延遲其發(fā)作。術(shù)語(yǔ)“貨架期”被定義為一種產(chǎn)品對(duì)于消費(fèi)者或零售商而言出于感官、營(yíng)養(yǎng)和/或安全性目的保持可接受的時(shí)間的量。本發(fā)明的組合物對(duì)于延長(zhǎng)產(chǎn)品貨架期是特別有用的,如在實(shí)例10中所示,在0° C下2. 5個(gè)月和20° C下3月之后,與對(duì)照葡萄相比,在用所述組合物處理的葡萄中顯示腐敗降低50%。用本發(fā)明的組合物處理的工業(yè)和農(nóng)場(chǎng)產(chǎn)品的貨架期可以延長(zhǎng)至少I(mǎi)天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、15天、20天、25天、30天、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月、6個(gè)月、I年、2年、5年、10年或甚至更長(zhǎng)時(shí)間。在保護(hù)材料時(shí),本發(fā)明的組合物可以用于保護(hù)工業(yè)材料免受所不希望的微生物感染和破壞。在本發(fā)明背景下,工業(yè)材料被理解為表示已經(jīng)為用于工業(yè)中制備好的非生命物質(zhì)。例如,預(yù)期由根據(jù)本發(fā)明的組合物保護(hù)以免受微生物、真菌、病毒或昆蟲(chóng)改變或破壞的工業(yè)材料可以是膠粘劑、漿料、紙和板材、紡織品、羽毛、木材、涂料和塑料制品、冷卻潤(rùn)滑劑以及可以被這類害蟲(chóng)感染或破壞的其他材料。也可以提及在有待保護(hù)的材料范圍內(nèi)可能因微生物增殖受損的生產(chǎn)廠的部件,例如冷卻水回路。應(yīng)當(dāng)理解的是,在某些實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物還可以進(jìn)一步包含農(nóng)業(yè)上可接受的載體。術(shù)語(yǔ)“農(nóng)業(yè)上可接受的載體”旨在包括促進(jìn)本發(fā)明的組合物施用至預(yù)期受試者或促進(jìn)儲(chǔ)存、運(yùn)輸或處置的任何材料,所述受試者可以例如植物、植物材料或設(shè)備。用于施用至植物和植物材料的組合物中的載體優(yōu)選地是無(wú)植物毒性的或僅僅是輕微植物毒性的。取決于所希望的制劑,適合的載體可以是固體、液體或氣體。在一個(gè)實(shí)施方案中,優(yōu)選的載體包括極性液體載體如水、礦物油和植物油。 如在此所使用的,術(shù)語(yǔ)“受試者”旨在包括可以將本發(fā)明的化合物或組合物施用到其上的任何目標(biāo)表面,例如施用到植物、植物材料(包括根、鱗莖、塊莖、球莖、葉、花、種子、莖、愈傷組織、堅(jiān)果、籽粒、果實(shí)、插枝、根莖、接穗)、收獲的作物(包括根、鱗莖、塊莖、球莖、葉、花、種子、莖、愈傷組織、堅(jiān)果、籽粒、果實(shí)、插枝、根莖、接穗),或包括可能接觸收獲作物的任何表面,包括采收設(shè)備、包裝設(shè)備和包裝材料。因此通常配制用于農(nóng)業(yè)和工業(yè)目的像這樣使用的組合物、以及如下文描述用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的組合物??梢栽诙栊暂d體中使用如在此所述的有效成分形成根據(jù)本發(fā)明的抗微生物、抗真菌、殺蟲(chóng)的并且促進(jìn)植物生長(zhǎng)的組合物。如果配制為固體,則這些成分可以與這樣的典型的載體(如漂白土、高嶺土、二氧化硅或其他可濕性無(wú)機(jī)稀釋劑)混合。也可以通過(guò)將干的有效成分與精細(xì)分散的固體如滑石、娃藻土(kieselguhr)、葉臘石、粘土、娃藻土(diatomaceous earth)等組合來(lái)使用自由流動(dòng)的粉劑。 散劑也可以作為混懸劑或溶液劑應(yīng)用,這取決于在液體載體中的溶解度??梢允褂没钚猿煞址稚⒂诘头悬c(diǎn)分散溶劑載體中的加壓噴霧劑,典型地是氣溶膠。重量百分比可以根據(jù)其中組合物有待施用和制劑有待使用的方式而變化。通常,活性成分將包含抗微生物組合物中按重量計(jì)0. 005%至95%的活性成分。生物控制組合物可以與其他成分一起施用,其他成分包括生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、殺蟲(chóng)劑、除草劑、肥料等等。有助于適用性、便利、處置、維持化學(xué)穩(wěn)定性和增加有效性的活性成分制劑可能需要添加各種材料??梢曰谟绊懟钚猿煞值娜芙舛取⒅鹞kU(xiǎn)及閃點(diǎn)、乳化性、比重和經(jīng)濟(jì)考慮來(lái)選擇溶劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案,可以添加任何輔助劑來(lái)增強(qiáng)活性成分,并且可以包括呈陰離子、陽(yáng)離子或非離子的表面活性劑。穩(wěn)定劑和防凍復(fù)合物將延長(zhǎng)儲(chǔ)存。另外地,可以添加增效劑、粘著劑、涂布劑(spreader)和除臭復(fù)合物(deodorant compound)來(lái)改善商品制劑的處理特性。也可以使用本發(fā)明的農(nóng)藥組合物作為抗微生物劑,用于抑制在活宿主的表面上或在活宿主外部的介質(zhì)中存在的微生物的生長(zhǎng)或根除在這些位置的微生物。可以使用本發(fā)明的組合物例如作為易受微生物生長(zhǎng)影響的多種固體和液體培養(yǎng)基的消毒劑??梢酝ㄟ^(guò)熟練的技術(shù)人員已知的方法來(lái)確定本發(fā)明組合物的適合量??梢园慈魏我阎姆绞街苽溥@些組合物,例如通過(guò)用農(nóng)業(yè)可接受的載體、輔料或稀釋劑(如溶劑、乳化劑和分散劑或表面活性劑)補(bǔ)足活性成分來(lái)制備。適合用于本發(fā)明及其多種產(chǎn)物中的溶劑包括但不限于芳香族化合物,例如二甲苯;氯化的芳香化合物,例如氯苯;石蠟,例如礦物油餾分;醇,例如甲醇及丁醇;酮,例如環(huán)己酮;胺,例如乙醇胺及二甲基甲酰胺;和水,優(yōu)選地是去離子的。當(dāng)使用水時(shí),也可以使用其他有機(jī)溶劑作為共溶劑。適用于本發(fā)明及其產(chǎn)物中的載體包括但不限于研磨的天然或合成礦物,例如,高嶺土、粘土、滑石、白堊、二氧化硅、硅酸鹽等。適合用于本發(fā)明的組合物中的乳化劑包括但不限于非離子型和陰離子型乳化劑,例如,聚氧乙烯脂肪醇醚、烷基磺酸鹽、芳基磺酸鹽,等等。適合用于本發(fā)明的組合物中的分散劑包括但不限于木質(zhì)素亞硫酸鹽廢液(lignosulfite waste liquor)和甲基纖維素,等等。
適合的表面活性劑包括但不限于木質(zhì)素-苯酚-(ligno-phenol-)、萘-和二丁基萘磺酸、脂肪酸、烷基-和烷芳基磺酸鹽、烷基月桂基醚和脂肪醇硫酸鹽、硫酸化十六烷醇、十七烷醇和十八烷醇的鹽和脂肪醇乙二醇醚的鹽、磺化萘及其衍生物與甲醛的縮合物、萘或萘磺酸與苯酚和甲醛的縮合物、聚氧乙烯辛基酚醚、乙氧基化異辛基_、辛基-或壬基苯酚、烷基酚聚乙二醇醚、三丁基苯基聚乙二醇醚、烷基月桂基聚醚醇、異三癸醇、脂肪醇/氧化乙烯縮合物、乙氧基化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚或聚氧丙烯烷基醚、月桂醇聚乙二醇醚乙酸酯(lauryl alcohol polyglycol ether acetate)、山梨醇酯、木質(zhì)素亞硫酸鹽廢液或甲基纖維素。出于本申請(qǐng)的目的,可以將混懸劑形式的本發(fā)明組合物直接使用或配制為適合于噴霧、霧化、噴灑、撒布或傾倒的組合物。例如,可以將組合物配制為待噴霧的溶液劑、粉劑、混懸劑、高度濃縮的水性、油性或其他混懸劑或分散體、乳劑、油分散體、糊劑、噴粉劑或顆粒劑。無(wú)毒的含水組合物也可以含有各種添加劑,如抗氧化劑、防腐劑、pH中和劑和/或
澄清劑。在使用時(shí),將無(wú)毒含水組合物稀釋并且噴灑或噴霧到侵染的宿主上。在一些情況下,可能需要重復(fù)施用。為了增強(qiáng)施用的效率,本發(fā)明的農(nóng)藥組合物,具體而言,殺真菌/殺細(xì)菌/抗病毒組合物并且促進(jìn)植物生長(zhǎng)的組合物也可以包含其他活性成分,如除草劑、殺蟲(chóng)劑、生長(zhǎng)刺激齊L1、肥料等等。另外地,可以將液體形式的組合物置于擦拭巾(wipe)上或包埋于其中,所述擦拭巾優(yōu)選地由紙或布制成或?qū)⑵涮峁┳鳛橛糜谛l(wèi)生的清潔劑。根據(jù)本發(fā)明的組合物也適合用于增加作物的產(chǎn)量。而且,它具有降低的毒性并且被植物良好耐受。這種組合物在控制植物病害所需的濃度被植物良好耐受的事實(shí)(如在實(shí)例6中所示)允許處理植物的地上部分、繁殖站木(propagation stock)和種子、以及土壤。評(píng)定本發(fā)明的組合物或包含另外農(nóng)用藥劑如另外殺真菌劑或隨其一起遞送的本發(fā)明組合物可以包括評(píng)定(I)在不刺激所不希望的非目標(biāo)微生物生長(zhǎng)或不損害有益生物的情況下的目標(biāo)微生物的控制程度。(2)控制的耐久性。(3)在部分或整個(gè)生長(zhǎng)季期間反復(fù)使用時(shí)對(duì)植物發(fā)育的植物毒性和影響程度。(4)與產(chǎn)業(yè)中所使用的其他控制產(chǎn)品的相容性。在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物是輕微植物毒性的并且優(yōu)選地該組合物是沒(méi)有植物毒性的。如在此所使用的,術(shù)語(yǔ)“輕微植物毒性的”旨在表示該植物毒性水平基本上不影響植物產(chǎn)量或品質(zhì),并且優(yōu)選地表示本發(fā)明的組合物可以在植物葉上引起小污損(5-15mm2),并且可以引起壞死或褪綠斑(> 15_2)和葉扭曲,但是優(yōu)選地不應(yīng)當(dāng)殺死在施用本發(fā)明的組合物的植物上的多于30%、優(yōu)選地不多于20%的葉。術(shù)語(yǔ)“植物產(chǎn)量”是指植物或植物群體的產(chǎn)品產(chǎn)量。在一個(gè)實(shí)施方案中,該產(chǎn)量可以是產(chǎn)品的產(chǎn)量,所述產(chǎn)品包括但不限于完整植物或植物部分如根、鱗莖、球莖、塊莖、葉、插枝、花、莖、果實(shí)和種子或其他繁殖材料中的一種或多種。在第三方面,本發(fā)明提供了用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的組合物。本發(fā)明的組合物包含一種生物控制劑作為活性成分,該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;
c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合;所述組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。術(shù)語(yǔ)“促進(jìn)生長(zhǎng)”是指以下事實(shí)在處理足夠時(shí)間后,與未處理的對(duì)照植物相比,在用該組合物處理的植物中的至少一個(gè)植物部分的質(zhì)量是顯著更大的。更具體地,根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案,該組合物誘導(dǎo)以下至少一項(xiàng)的增加植物重量、植物高度、植物葉數(shù)、根系、植物粗度和植物生物量。應(yīng)當(dāng)理解的是,該組合物可以在各個(gè)植物部分中促進(jìn)植物生長(zhǎng)。如在此提及的術(shù)語(yǔ)“植物部分”是針對(duì)以下任何一項(xiàng)葉盤(pán)、根、莖、嫩枝、葉、花粉、種子、胚、子葉、下胚軸、大配子體、愈傷組織、分生組織以及各種形式的細(xì)胞和培養(yǎng)物如單細(xì)胞、原生質(zhì)體、胚和愈傷組織。植物組織可以處于植物中或處于器官、組織或細(xì)胞培養(yǎng)物中。在一個(gè)實(shí)施方案中,質(zhì)量增加的部分是對(duì)植物商業(yè)產(chǎn)量有影響的部分(果實(shí)、籽粒、根、花和葉)。應(yīng)當(dāng)?shù)睦斫馐?,本發(fā)明的組合物可以增加木本植物的粗度、生物量和剛性并且因此可以適用于造紙工業(yè)中。具體而言,增強(qiáng)植物生長(zhǎng)的組合物可能以大約1%至大約99. 9%之間,更具體地以至少大約1%、大約3%、大約5%、大約7%、大約9%、大約11%、大約13%、大約15%、大約17%、大約19%、大約20%、大約21%、大約23%、大約25%、大約27%、大約29%、大約30%、大約31%、大約33%、大約35%、大約37%、大約39%、大約41%、大約43%、大約45%、大約47%、大約49%、大約51%、大約53%、大約55%、大約57%或大約60%增加植物的高度。更具體地,處理可能以至少大約15%至大約25%增加植物的高度。此外,該組合物可能以大約1%至大約99. 9%之間,更具體地以至少大約1%、大約3%、大約5%、大約7%、大約9%、大約11%、大約13%、大約15%、大約17%、大約19%、大約21%、大約23%、大約25%、大約27%、大約29%、大約30%、大約31%、大約33%、大約35%、大約37%、大約39%、大約41%、大約43%、大約45%、大約47%、大約49%、大約51%、大約53%、大約55%、大約57%或大約60%增加植物的重量。更具體地,處理可能以至少大約25%至大約35%增加植物的重量。就每株植物的葉數(shù)而言,該組合物可能以大約1%至大約99. 9%之間,更具體地以至少大約1%、大約3%、大約5%、大約7%、大約9%、大約11%、大約13%、大約15%、大約17%、大約19%、大約20%、大約21%、大約23%、大約24%、大約25%、大約26%、大約27%、大約29%、大約30%、大約31%、大約33%、大約35%、大約37%、大約39%、大約41%、大約43%、大約45%、大約47%、大約49%、大約51%、大約53%、大約55%、大約57%或大約60%增加所述數(shù)目。更具體地,處理可能以至少大約20%至大約30%增加植物葉數(shù)??梢栽趯?shí)例11和
圖11A-11C中找到這樣的增強(qiáng)的實(shí)例。該組合物也可以增強(qiáng)植物根系,表示為所述植物的地下部分的重量的增加。在一些實(shí)施方案中,所述植物的地下部分的重量增加大約1%至大約99. 9%之間,更具體地至少大約1%、大約3%、大約5%、大約7%、大約9%、大約11% >、大約13%、大約15%、大約17%、大約19%、大約20%、大約21%、大約23%、大約24%、大約25%、大約26%、大約27%、大約29%、大約30%、大約31%、大約33%、大約35%、大約37%、大約39%、大約41%、大約43%、大約45%、大約47%、大約49%、大約51%、大約53%、大約55%、大約57%或大約60%。該組合物也可以增加植物莖(stalk)粗度。在一些實(shí)施方案中,所述植物的莖粗度增加大約1%至大約99. 9%之間,更具體地至少大約1%、大約3%、大約5%、大約7%、大約9%、 大約11%、大約13%、大約15%、大約17%、大約19%、大約20%、大約21%、大約23%、大約24%、大約25%、大約26%、大約27%、大約29%、大約30%、大約31%、大約33%、大約35%、大約37%、大約39%、大約41%、大約43%、大約45%、大約47%、大約49%、大約51%、大約53%、大約55%、大約57%、大約60%、大約70%、大約80%、大約90%和大約100%。此外,本發(fā)明的組合物還使得植物更為木質(zhì)(挺直),反映為在植物和垂線(垂直于地面)之間的角度減小。這種減小可以是至少大約0. 1°、大約0.2°、大約0.4°、大約0.8°、大約1.0°、大約2.0°、大約3.0°、大約4.0°、大約5.0°、大約6.0°、大約8. 0°、大約10°、大約12°、大約14°、大約16°、大約18°、大約20°、大約22°、大約24°、大約28°、大約30°或大約35°。該組合物可能以大約1%至大約99. 9%之間,更具體地以至少大約1%、大約3%、大約5%、大約7%、大約9%、大約11%、大約13%、大約15%、大約17%、大約19%、大約20%、大約21%、大約23%、大約24%、大約25%、大約26%、大約27%、大約29%、大約30%、大約31%、大約33%、大約35%、大約37%、大約39%、大約41%、大約43%、大約45%、大約47%、大約49%、大約51%、大約53%、大約55%、大約57%或大約60%增加植物的生物量。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含另外的選自下組的農(nóng)用藥齊U,該組由以下各項(xiàng)組成除草劑、殺蟲(chóng)劑、生長(zhǎng)刺激劑和肥料。除草劑,也稱作除莠劑,是用來(lái)殺死不想要的植物的農(nóng)藥類型。選擇性除草劑殺死特定的目標(biāo),同時(shí)保留所希望的作物相對(duì)不受傷害。這些除草劑中的一些通過(guò)干擾雜草生長(zhǎng)發(fā)揮作用并且常常是植物激素的合成模擬物。用來(lái)清理廢棄荒地、工業(yè)地點(diǎn)、鐵路和鐵路路堤的除草劑是非選擇性的并且殺死與它們接觸的所有植物材料。較小的量用于林業(yè)、牧場(chǎng)系統(tǒng)和劃歸為野生動(dòng)物棲息地的區(qū)域的管理。除草劑可以按活性、用途、化學(xué)家族、作用方式或所控制的植被類型而分組。按照活性,除草劑可以是僅破壞與這種化學(xué)品接觸的植物組織的接觸性除草劑或從葉施用下至根或從土壤施用上達(dá)葉而轉(zhuǎn)運(yùn)遍及植物的全身性除草劑。按照用途,可以在種植前摻入除草劑,S卩,將它們?cè)诜N植之前施用到土壤并且機(jī)械地?fù)饺胪寥乐?。摻入的目的是防止因光分解作用?或揮發(fā)性而消散。它們可以是在作物出苗之前施用到土壤并且防止雜草種子的萌發(fā)或早期生長(zhǎng)的苗前除草劑,或它們可以是在作物已經(jīng)出苗后施用的苗后除草劑。
它們按作用機(jī)制(MOA)的分類指示了施用后在植物中受到影響的關(guān)鍵酶(firstenzyme)、蛋白質(zhì)或生物化學(xué)步驟。主要作用機(jī)制是ACC酶抑制劑是殺草的化合物。乙酰輔酶A羧化酶(ACCase)是脂質(zhì)合成的第一步驟的部分。因此,ACC酶抑制劑影響草植株的分生組織中的細(xì)胞膜產(chǎn)生。草的ACC酶對(duì)這些除草劑是敏感的,而雙子葉植物的ACC酶不敏感。ALS抑制劑乙酰乳酸合成酶(ALS)(也稱作乙酰羥酸合成酶,或AHAS)是支鏈氨基酸(纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸)合成中的第一步驟。這些除草劑緩慢地使受侵襲的植物缺乏這些氨基酸,最終導(dǎo)致DNA合成的抑制。它們以同樣的方式影響草類和雙子葉植物。ALS抑制劑家族包括磺酰脲類(SU)、咪唑啉酮類(MI)、三唑并嘧啶類(TP)、氧基苯甲酸嘧唳酯類(pyrimidinyl oxybenzoates) (POB)和磺酰氨基羰基三唑啉酮類(SCT)。ALS是僅存在于植物中而在動(dòng)物中不存在的生物途徑,因此使得ALS抑制劑屬于安全除草劑。EPSPS抑制劑烯醇丙酮莽草酸3-磷酸合成酶EPSPS用于氨基酸色氨酸、苯丙氨酸 和酪氨酸的合成中。它們以同樣的方式影響草類和雙子葉植物。草甘膦(Roundup)是內(nèi)吸性EPSPS抑制劑但是因接觸土壤而失活。合成植物生長(zhǎng)素開(kāi)創(chuàng)了有機(jī)除草劑時(shí)代。在長(zhǎng)期研究植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑一植物生長(zhǎng)素后,在20世紀(jì)40年代發(fā)現(xiàn)它們。合成植物生長(zhǎng)素模擬這種植物激素。它們?cè)诩?xì)胞膜上具有幾個(gè)作用點(diǎn),并且在控制雙子葉植物中是有效的。2,4-D是合成植物生長(zhǎng)素除草劑。光系統(tǒng)II抑制劑在光合作用中在光化學(xué)步驟減少?gòu)乃罭ADPH2+的電子流。它們與Dl蛋白上的Qb位點(diǎn)結(jié)合并且阻止醌與這個(gè)位點(diǎn)結(jié)合。因此,這組化合物引起電子在葉綠素分子上積累。因此,發(fā)生比通常被細(xì)胞耐受的那些氧化反應(yīng)過(guò)度的氧化反應(yīng),并且植物死亡。三嗪除草劑(包括莠去津(Atrazine))和脲衍生物(敵草隆(diuron))是光系統(tǒng)II抑制劑。光系統(tǒng)I抑制劑通過(guò)FeS - Fdx-NADP從正常途徑竊取電子,導(dǎo)致電子在氧上直接放電。因此,產(chǎn)生ROS (活性氧簇)并且發(fā)生比通常被細(xì)胞耐受的那些氧化反應(yīng)過(guò)度的氧化反應(yīng),導(dǎo)致植物死亡。除草劑的實(shí)例包括但不限于I虧草酮(tralkoxydim)、喹禾靈(quizalofop)、禾草靈酸(diclofop)、炔草酸(clodinafop)、稀禾定(sethoxydim)、精惡唑禾草靈(fenoxyprop)、烯草酮(clethodim)、野燕枯(difenzoquat)、野麥畏(triallate)、二甲戍靈(pendimethalin)、氟樂(lè)靈(trifluralin)、乙丁烯氟靈(ethalfluralin)、咪草酯(imazamethabenz)、橫酸橫隆(sulfesulfuron)、氟酮橫隆(flucarbazone)、甲磺隆(metsulfuron)、醚苯石黃隆(triasulfuron)、苯磺隆(tribenuron)、氯磺隆(chlorsulfuron)、噻橫隆(thifensulfuron)、氟橫隆(prosulfuron)、甲咪唑煙酸(imazapic)、咪草煙(imazathapyr)、甲氧咪草煙(imazamox)、草甘膦、草硫膦(sulfosate)、百草枯(paraquat)、麥草畏(dicamba)、二氯卩比唳酸(clopyralid) 2, 4-D、二氯喹啉酸(quinclorac)、氯氟批氧乙酸(f Iuoxypyr)、二氯卩比唳酸、毒莠定(picloram)、咕草特(pyridate)和溴苯臆(bromoxynil)。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的組合物還進(jìn)一步包含殺蟲(chóng)劑作為另外的活性劑。殺蟲(chóng)劑是針對(duì)昆蟲(chóng)使用的農(nóng)藥。它們包括分別針對(duì)昆蟲(chóng)的卵和幼蟲(chóng)所用的殺卵劑和殺幼蟲(chóng)劑。殺蟲(chóng)劑用于農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)和家庭。殺蟲(chóng)劑的用途被認(rèn)為是20世紀(jì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)率增加背后的主要因素之一。內(nèi)吸殺蟲(chóng)劑被處理的植物結(jié)合。昆蟲(chóng)在釆食植物的同時(shí)攝入殺蟲(chóng)劑。接觸性殺蟲(chóng)劑毒殺直接接觸的昆蟲(chóng)。功效常常與殺蟲(chóng)劑施用的量相關(guān),小液滴(如氣溶膠)常常改善性能。天然殺蟲(chóng)劑,如煙堿、除蟲(chóng)菊和印楝提取物,由植物產(chǎn)生作為針對(duì)昆蟲(chóng)的防御物。自2001年以來(lái),在美國(guó)已經(jīng)禁用基于煙堿的殺蟲(chóng)劑以防殘留物污染食物。含保護(hù)劑成分植物(PIP)是由基因修飾后的植物產(chǎn)生的殺昆蟲(chóng)物質(zhì)。例如,將編碼特定的蘇云金芽孢桿菌(Baccillus thuringiensis)殺生物蛋白的基因?qū)胱魑镏参锏倪z傳物質(zhì)中。然后,植物制造這種蛋白質(zhì)。由于殺生物劑結(jié)合到該植物中,至少不需要另外施用相同的化合物。無(wú)機(jī)殺蟲(chóng)劑用金屬制造的并且包括現(xiàn)在很少使用的砷酸鹽、銅化合物和氟化合物以及常用的硫。有機(jī)殺蟲(chóng)劑是合成化學(xué)品,它們包括許多可供如今使用的農(nóng)藥。殺蟲(chóng)劑的實(shí)例包括但不限于(E)-7_十二烯基乙酸酯/(E)-S-十二烯基乙酸酯/(Z)-8-十二烯基乙酸鹽、(E,E)-8,10十二碳二烯-1-醇、1,3 二氯丙烯、3⑶甲基-6-異丙烯基-9-十二碳二烯-1-基-乙酸酯、阿巴美丁(abamectin)、乙酰甲胺磷(acephate)、P定蟲(chóng)脈(acetamiprid)、涕滅威(aldicarb)、大蒜(Allium sativum)、順式氯氰菊酯(alpha cypermethrin)、磷化銀、雙甲脒(amitraz)、印楝素(azadirachtin)、保棉磷(azinphos methyl)、蘇云金芽胞桿菌以色列亞種(Bacillus thuringiensissubspisraelensis)、蘇云金芽抱桿菌舍占澤變種(Bacillus thuringiensis var aiziwai)、蘇云金芽抱桿菌庫(kù)斯塔變種(Bacillus thuringiensis var kurstaki)、球抱白僵菌(Beauveria bassiana)、丙硫克百威(benfuracarb)、高效氟氯氰菊酉旨(beta-cyf luthrin)、高效氯氰菊酯(3 -cypermethrin)、聯(lián)苯菊酯 / 腈菌唑(bifenthin/myclobutanil )、聯(lián)苯菊酯(bifenthrin)、硼砂、大豆慢生根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)、大隆(brodifacoum)、溴螨酯(bromopropylate)、噻嗪酮(buprofenzin)、硫線憐(cadusafos)、卡諾拉油/大蒜提取物/除蟲(chóng)菊(pyrethrum)、甲萘威(carbaryl)、克百威(carbofuran)、二氧化碳/環(huán)氧乙焼、丁硫克百威(carbosulfan)、鹽酸殺螟丹(cartaphydrochloride)、溴蟲(chóng)清(chlorphenapy)、毒死蜱(Chlorpyrifos)、香茅油、四螨嗪(clofentezine)、可得蒙(codlimone) (E,E-8,10-十二碳二烯-1-醇)、可得蒙(codlimone) [ (E, E)_8,10-十二碳二烯-7-醇]、銅、王銅/硫磺、殺鼠醚(coumatetralyl)、蘋(píng)果異形小卷蛾(Cryptophlebialeucotreta)、殺螟腈(cyanophos)、氟氯氰菊酯(cyfluthrin)、三環(huán)錫(cyhexatin)、氯氰菊酯(cypermethrin)、滅蕭胺(cyromazine)、右旋丙烯菊酯(d-allethrin)、棉隆(dazomet)、溴氰菊酯(deltamethrin)、滅賜松(demeton-S-methyl)、地亞農(nóng)(diazinon)、敵敵畏(dichlorvos)、三氯殺螨醇(dicofol)、鼠得克(difenacoum)、除蟲(chóng)脲(dif Iubenzuron )、樂(lè)果(dimethoate)、滅幼服(Dimi I in)、乙拌憐(disulfoton)、右旋苯醚菊酯 / 胺菊酯((d-phenothrin/tetramethrin)、E, E-8,10-十二碳二烯-1-醇 / 十二 碳二烯醇/十四醇、Ej E-8,10-十二碳二烯-1-醇、EDB、?,斁?emamectin)、硫丹(611(108111£311)、順式氰戊菊酯(68£6鮮316以丨6)、丙線磷(6丨110卩1'0卩1108)、二溴乙焼、依殺螨(etoxazole)、苯線憐(fenamiphos)、喹螨醚(fenazaquin)、苯丁錫(fenbutatin)、殺螟硫憐(fenitrohion)、苯氧威(fenoxycarb)、唑螨酯(fenpyroximate)、倍硫憐(fenthion)、氰戊菊酯(fenvalerate)、EDTA鐵鈉、氟蟲(chóng)腈(fipronil)、氟蟲(chóng)脲(flufenoxuron)、氟氯苯菊酯(f lumethr in)、伐蟲(chóng)脈(formetanate)、噻唑憐(f osthiazate )、夫馬潔林(fumagi 11 in)、糠醒、Y -BHC、高效氯氟氰菊酯(Y -cyhalothrin)、大蒜提取物、伏蟻腙(hydramethylnon)、批蟲(chóng)啉(imidacloprid)、高效氟氯氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、異戊烯酸薰衣草酯(lavandulyl senecioate)、風(fēng)螨脲(lufenuron)、磷化鎂、代森猛鋅(mancozeb)、槭樹(shù)內(nèi)酯(maple lactone)、馬拉硫憐(mercaptothion)、四聚乙醒(metaldehyde)、威百畝(metam-sodium)、金龜子綠僵菌蟲(chóng)皇變種(Metarhizium anisopliae var acridium)分離株 IMI330189、威百畝(metham-sodium)、對(duì)甲胺憐(methamidophos)、殺撲憐(methidathion)、甲硫威(methiocarb)、滅多威(methomyl)、甲基溴、速滅憐(mevinphos)、彌拜菌素(milbemectin)、礦物油、雙苯氟脲(novaluron)、氧樂(lè)果(omethoate)、鄰苯基苯酪、殺線威(oxamyl)、砜吸磷(oxydemeton-methyl )、淡紫擬青霉(Paecilomyces Iilacinus)菌株 251、對(duì)硫憐(parathion)、氯菊酯(permethrin)、稻豐散(phenothoate)、甲拌磷(phorate)、抗姆威(pirimicarb)、多硫化硫(polysulphide sulphur)、脂肪酸鉀鹽、丙溴磷(profenofos)、炔螨特(propargite)、丙硫磷(prothiofos)、除蟲(chóng)菊素(口7代也1';[11)、卩比丙醚(口71^口1'017€611)、喹硫磷(911;[1^1口1108)、菜籽油、豌豆根瘤菌菜豆生物型(Rhizobium leguminosarum biovar phaseoli)、魚(yú)藤酮(rotenone)、氟娃酸鈉、艾克敵(Spinosad)、螺螨酯(spirodiclofen)、硫磺、吐酒石(tartar emetic)、氟胺氰菊酯(tau-f luvalinate)、蟲(chóng)酸餅(tebufenozide)、雙硫憐(temephos)、特丁硫憐(terbufos)、殺蟲(chóng)畏(tetrachlorvinphos)、乙酸十四烯酯(tetradecenyl acetate)、三氯殺螨諷(tetradifon)、噻蟲(chóng)啉(thiacloprid)、噻蟲(chóng)嗪(thiamethoxam)、硫雙威(thiodicarb)、福美雙(thiram)、敵百蟲(chóng)(trichlorfon)、哈茨木霉(Trichoderma harzianum)、殺鈴服(triflumuron)、地中海實(shí)蠅引誘劑(trimedlure)、Z_8_十二烯-1-基乙酸酯/E-8-十二烯-1-基乙酸酯/Z-8-十二烯-1-醇以及磷化鋅。更進(jìn)一步地,本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含生長(zhǎng)剌激劑作為另外的活性劑。如在此所使用的,術(shù)語(yǔ)“生長(zhǎng)剌激劑”或“植物生長(zhǎng)剌激劑”涉及引起植物生物量、根系分叉和長(zhǎng)度、植物重量、葉數(shù)、莖粗度、植物高度和花數(shù)和/或果實(shí)數(shù)中的至少一項(xiàng)增加的物質(zhì)。所述剌激劑可以是生物來(lái)源、有機(jī)來(lái)源或無(wú)機(jī)來(lái)源并且可以是固體或液體。這類剌激劑的非限制性實(shí)例包括Bov-A-MuraC (可噴灑的可溶性糞肥)、FeRROMEC 、Launeh Biostimulant (含有冷水海帶提取物的植物激素連同腐植酸和黃腐酸)、Solu-Cal (用專有有機(jī)酸浸潰的研磨制粒的碳酸鈣(38%))、VigaROOT 剌激劑(螯合鐵、螯合錳、螯合鋅、天然腐植物質(zhì)、海草提取物、絲蘭(yucca)和天然糖、維生素、氨基酸及有益細(xì)菌的專有共混物的干燥可溶組合)、Sprint 330FE Iron (10%完全螯合的DTPA鐵)。本發(fā)明的組合物可以進(jìn)一步包含肥料。術(shù)語(yǔ)“肥料”涉及添加至土壤以供應(yīng)植物生長(zhǎng)必需的一種或多種植物養(yǎng)分的天然或合成來(lái)源的任何有機(jī)或無(wú)機(jī)物質(zhì)(除了石灰質(zhì)材料之外)。最近的評(píng)定發(fā)現(xiàn)大約40至60%的作物產(chǎn)量歸功于使用商品肥料。礦質(zhì)無(wú)機(jī)肥料已經(jīng)使用多個(gè)世紀(jì),而僅在工業(yè)革命期間才廣泛地開(kāi)發(fā)化學(xué)合成的無(wú)機(jī)肥料。無(wú)機(jī)肥料使用還顯著地支持了全球人口增長(zhǎng)-據(jù)估計(jì)地球上幾乎一半的人口目前因使用合成氮肥而得以供給食物。有機(jī)肥料包括天然存在的有機(jī)物質(zhì)(例如,糞肥、蚯蚓糞、堆肥、海草、海鳥(niǎo)糞)或天然存在的礦物沉積物(例如,硝石)。典型地肥料按以下變化的比例提供六種大量元素養(yǎng)分氮(N)、磷(P)、鉀(K)、鈣(Ca)、鎂(Mg)、和硫(S);和六種微量元素養(yǎng)分硼(B)、氯(Cl)、銅(Cu)、鐵(Fe)、錳(Mn)、鑰(Mo)和鋅(Zn)。肥料的非限制性實(shí)例包括硝酸銨33. 5%N、銨21%N、硫酸硝酸銨26%N、硝酸鈣銨(CAN)27%、硝酸鈣15. 5%N、硝酸鈉(天然智利硝石)16%N、尿素46%N、低縮二脲尿素、堿性爐渣10%P205、磷礦石30/32%P205、單過(guò)磷酸鈣18/20%P205(粉末/顆粒狀)、重過(guò)磷酸鈣46%P205顆粒狀43% (水溶性)、氯化鉀肥60%K20、硫酸鉀肥48/52%K20、磷酸氫二銨(DAP) 18-46-0,磷酸一銨(MAP) 12-52-0、苜蓿粉、蝙蝠和海鳥(niǎo)糞、血粉、骨粉、雞糞、魚(yú)粉、海草(液體)、蚯蚓糞/蚯蚓堆肥、棉籽粉以及其他。 在另一個(gè)方面,本發(fā)明涉及一種治療、防止、緩解、抑制、消除在植物或植物材料中的細(xì)菌、真菌或害蟲(chóng)侵染或延遲其發(fā)作的方法。本發(fā)明的方法包括以下步驟將一種生物控制劑或包含該生物控制劑的組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料或施用在處理的植物或植物材料附近。在一個(gè)具體實(shí)施方案中,該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。應(yīng)當(dāng)理解的是,本發(fā)明的方法適用于處理和防止任何植物病原體的感染或侵染和由其所致的任何病理狀況。如本文所用,術(shù)語(yǔ)“疾病或病狀”指其中存在擾動(dòng)正常功能的狀態(tài)。“疾病”是植物的任何異常狀況,其引起功能障礙或損害所述植物的味道、香味、外觀或質(zhì)地。應(yīng)當(dāng)注意的是,在本文中等同地使用術(shù)語(yǔ)“病害”、“失調(diào)”和“狀況”。在特定情況下,病害是由病原體引起的,病原體包括細(xì)菌、真菌、病毒、線蟲(chóng)、昆蟲(chóng)或其他害蟲(chóng)。如在此所使用的術(shù)語(yǔ)“防止”或“預(yù)防”是指阻止植物病理出現(xiàn),不論有無(wú)癥狀。像這樣,本發(fā)明的方法可以用來(lái)防止出現(xiàn)有害植物病原體介導(dǎo)的狀況,并且可以因此用來(lái)改善或穩(wěn)定任何植物的健康。為了防止細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)、線蟲(chóng)或任何其他害蟲(chóng)感染或侵染或處理建立的感染或侵染,可以單次或多次施用本發(fā)明的生物控制劑或其任何組合物至植物或任何植物部分、組織或細(xì)胞培養(yǎng)物,并且可以在延長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行。例如,在本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施方案中,可以將本發(fā)明的生物控制劑或其任何組合物至少大約每隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、60、90、120、150或180天施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中,可以將生物控制劑或其組合物大約每隔I天至大約每隔7天、大約每隔I天至大約每隔14天、大約每隔I天至大約每隔21天、大約每隔I天至大約每隔28天或大約每隔I天至大約每隔35天施用。在一個(gè)實(shí)施方案中,可以將生物控制劑或其組合物大約每隔I天至大約每隔30天、大約每隔I天至大約每隔60天或大約每隔I天至大約每隔90天施用。在另一個(gè)實(shí)施方案中,可以將生物控制劑或其組合物大約每隔I天至大約每隔7天、大約每隔7天至大約每隔14天、大約每隔14天至大約每隔21天、大約每隔21天至大約每隔28天或大約每隔28天至大約每隔35天施用。事實(shí)上,可以將生物控制劑或其組合物定期施用持續(xù)植物的一生,或甚至超過(guò)所處理的植物的生活周期而定期施用至植物的附近。將本發(fā)明的生物控制劑或其任何組合物施用至植物上或植物材料上。應(yīng)當(dāng)注意的是,在此所使用的術(shù)語(yǔ)“植物材料”包括包括根、鱗莖、塊莖、球莖、葉、花、種子、莖、愈傷組織、堅(jiān)果、籽粒、果實(shí)、插枝、根莖、接穗、收獲的作物(包括根、鱗莖、塊莖、球·莖、葉、花、種子、莖、愈傷組織、堅(jiān)果、籽粒、果實(shí)、插枝、根莖、接穗),或包括可能接觸收獲作物的任何表面,包括采收設(shè)備、包裝設(shè)備和包裝材料。在其他實(shí)施方案中,可以在處理的植物或植物材料的附近施用本發(fā)明的生物控制劑或其任何組合物。表述“在處理的植物或植物材料的附近”涉及圍繞根據(jù)本發(fā)明的組合物可以施用到其上的所述植物或植物材料的周邊,以便處理或防止植物或植物材料感染或侵染。因此,應(yīng)當(dāng)理解的是,“所述植物或植物材料的附近”包括在直到所述植物或植物材料的至少大約 I cm、2cm、3cm、4cm、5cm、6cm、7cm、8m、9m、10cm、20cm、30cm、40cm、50cm、60cm、70cm、80cm、90cm、lm、2m、3m、4m、5m、6m、7m、8m、9m、10m、11m、12m、13m、14m、15m、16m、17m、18m、19m、20m,30m,40m或甚至50m范圍內(nèi)存在的所有物體。術(shù)語(yǔ)“所述植物或植物材料的附近”還涉及這樣的物體,其中在處理的植物或植物材料的所述范圍內(nèi)安置這些物體之前,向其施用本發(fā)明的組合物。例如,在施用至所述植物之前,可以用本發(fā)明的組合物來(lái)增強(qiáng)肥料或任何其他補(bǔ)充物。應(yīng)當(dāng)理解的是,本發(fā)明的組合物特別適合用于處理和防止植物病害,并且因此可以用于保護(hù)作物和商業(yè)上重要的其他植物或任何其他植物。在一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法用于治療、抑制、消除細(xì)菌感染或侵染或延遲其發(fā)作。應(yīng)當(dāng)理解的是,所述細(xì)菌感染由以下至少一項(xiàng)引起密執(zhí)安棍狀桿菌、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌黃瓜致病變種、丁香假單胞菌番茄致病變種、馬鈴薯瘡痂病菌、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種和野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種。植物細(xì)菌病及其激發(fā)者的非限制性實(shí)例包括細(xì)菌性葉斑病(野油菜黃單胞菌苜猜致病變種(Xanthomonas campestrispv. alfalfae));細(xì)菌性芽腐病(菊歐文氏菌菊花致病變種(Erwinia chrysanthemipv. chrysanthemi ));細(xì)菌性枯萎病(密執(zhí)安棍狀桿菌詭譎亞種);冠癭(根癌農(nóng)桿菌);冠和根腐病復(fù)合征(綠黃假單胞菌(Pseudomonas viridiflava));矮化(苛養(yǎng)木桿菌(Xylella fastidiosa));丁香葉斑病(丁香假單胞菌丁香致病變種(Pseudomonas syringaepv. syringae));細(xì)菌性潰瘍(密執(zhí)安棍狀桿菌密執(zhí)安亞種);和細(xì)菌枯萎病(茄科雷爾氏菌(Ralstonia solanacearum))。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法可以用于治療密執(zhí)安棍狀桿菌相關(guān)性病理狀況,例如,番茄細(xì)菌性潰瘍。在又另一個(gè)具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法可以用于治療超過(guò)140個(gè)雙子葉植物種類中的冠癭病(腫瘤形成),一種由根癌農(nóng)桿菌引起的病害。另一個(gè)實(shí)施方案涉及用于治療由解淀粉歐文氏菌引起的火疫的本發(fā)明方法?;鹨呤乔忠u蘋(píng)果、梨和薔薇科(Rosaceae)的一些其他成員的接觸性傳染病。它是蘋(píng)果和梨生產(chǎn)者的嚴(yán)重?fù)?dān)憂。在最佳條件下,它可以在單個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)破壞整個(gè)果園。更進(jìn)一步地,本發(fā)明的方法可以適用于治療丁香假單胞菌相關(guān)性病理狀況,例如,由所述病原體產(chǎn)生Ina蛋白,引起水在相當(dāng)高的溫度凍結(jié),導(dǎo)致植物損傷。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法適用于治療馬鈴薯瘡痂病菌相關(guān)性病理狀況,例如在馬鈴薯和其他根類作物上的瘡痂病癥狀。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法可以適用于治療由野油菜黃單胞菌引起的植物病害。更具體地,所述病害的癥狀包括葉邊褪綠和維管組織變黑,伴隨廣泛枯萎和壞死。隨著病害的進(jìn)展出現(xiàn)全葉黃化、枯萎和壞死。在更具體的實(shí)施方案中,所述方法可以適用于治療、抑制、消除真菌感染或延遲其發(fā)作。 在這樣的實(shí)施方案中,真菌感染可以由以下至少一項(xiàng)引起灰葡萄孢菌、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌、疣頂單胞銹菌、韃靼內(nèi)絲白粉菌、核盤(pán)菌和禾冠柄銹菌。植物真菌病及其激發(fā)者的非限制性實(shí)例包括Acrocalymma 根和冠腐病(Acrocalymma medicaginis、Massarina walkeri);炭疽病(車(chē)軸草剌盤(pán)孢(Colletotrichum trifolii));絲囊霉(Aphanomyces)根腐病(根腐絲囊霉(Aphanomyces euteiches));黑斑病(豆類絲核菌(Rhizoctonia Ieguminicola));黑根腐病(根串珠霉(Thielaviopsis basicola)、雅致暗內(nèi)孢(Chalara elegans));花腐病(blossom blight)(灰葡萄孢菌、富氏葡萄孢盤(pán)菌(Botryotinia fuckeliana)、核盤(pán)菌);褐根腐病(Phoma sclerotioides);冠和根腐病復(fù)合征(銳頂鐮刀菌(Fusarium acuminatum)、Gibberella acuminata、燕麥德刀菌(Fusarium avenaceum)、燕麥赤霉(Gibberellaavenacea)、木賊德刀菌(Fusarium equiseti)、尖抱德刀菌(Fusarium oxysporum)、接骨木德刀菌(Fusarium sambucinum)、煎病德刀菌、血紅叢赤殼(Nectriahaematococca)、鐮刀菌屬種類、苜猜莖點(diǎn)霉(Phoma medicaginis)、腐霉屬(Pythium)種類、立枯絲核菌(Rhizoctonia soIani)、瓜亡革菌(Thanatephorus cucumeris)、根串珠霉(Thielaviopsisbasicola)、雅致暗內(nèi)孢);炭腐病(菜豆殼球孢菌(Macrophomina phaseolina));普通葉斑病(苜猜假盤(pán)菌(Pseudopeziza medicaginis));木栓化根腐病(炭角菌屬(Xylaria)種類);冠癭病(苜猜節(jié)壺菌(Physoderma alfalfae));柱孢根腐病(Cylindrocarponmagnusianum、Nectria ramulariae);帚梗柱孢霉根和冠腐病(野百合帚梗柱孢霉(Cylindrocladium crotalariae)、野百合 _ 赤殼屬(Calonectria crotalariae));粹倒病(銳頂?shù)碌毒?Fusarium acuminatum)、Gibberella acuminata、褐紅壞死病菌(Mycoleptodiscus terrestris)、苜猜疫霉根腐病菌(Phy tophthora medicaginis)、大雄疫霉苜猜專化型(Phytophthora megaspermaf. sp. medicaginis)、腐霉屬(Pythium)種類、德巴利腐霉(Pythium debaryanum)、畸雌腐霉(Pythium irregulare)、華_腐霉(Pythiumsplendens)、終極腐霉(Pythiumultimum)、立枯絲核菌(Rhizoctonia soIani)、瓜亡革菌(Thanatephorus cucumeris));霜霉病(車(chē)軸草霜霉(Peronospora trifoliorum));德刀菌枯萎病(尖孢鐮刀菌苜猜?;?Fusarium oxysporum f. sp. medicaginis));小光殼葉斑病(Lepto leaf spot) (Leptosphaerulina trifolii);小皮傘根腐病(小皮傘屬(Marasmius)種類);MycoIeptodiscus (褐紅壞死病菌(Mycoleptodiscus terrestris));漆斑菌(Myrothecium)根腐病(露濕漆斑菌(Myrothecium roridum)>撫孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria));瘤梗抱根腐病(多主瘤梗單抱霉菌(Phymatotrichopsisomnivore))、疫霉根腐病(苜蓿疫霉根腐病菌、大雄疫霉苜蓿?;?;白粉病(豌豆白粉菌(Erysiphe pisi)、軸靼內(nèi)絲白粉菌(Leveillula taurica));絲核菌根腐病和莖疫病(立枯絲核菌、瓜亡革菌);根霉芽腐病(葡枝根霉(Rhizopus stolonifer));銹病(條紋單胞銹菌(Uromyces striatus));核盤(pán)菌冠和莖腐病(三葉草核盤(pán)菌(Sclerotinia trifoliorum)、核盤(pán)菌);白絹病(齊整小核菌(Sclerotium rolfsii)、羅氏阿太菌(Athelia rolfsii));春季黑莖和葉斑病(苜猜莖點(diǎn)霉(Phoma medicaginis));殼多胞菌(Stagonospora)葉斑病和根腐病(草木樨殼多孢(Stagonospora meliloti)、草木樨莖點(diǎn)霉(Phoma meliloti)、草地小球腔菌(Leptosphaeria pratensis));匍柄霉(Stemphylium)葉斑病(格孢腔菌屬(Pleospora)種類、Pleospora alfalfae> 苜猜匍柄霉(Stemphyliumalfalfae)、族孢匍柄霉(Stemphylium botryosum)、遲熟格孢腔菌(Pleospora tarda)、小球匍柄霉(Stemphylium globulifeum)、 Stemphylium herbarum、枯葉格抱腔菌(Pleosporaherbarum)、膨脹匍柄霉(Stemphylium vesicarium)種類復(fù)合體);夏季黑莖和葉斑病(苜猜尾抱(Cercospora medicaginis));黃萎病(黑白輪枝抱(Verticillium albo-atrum)、大 _ 輪枝抱(Verticillium dahliae));紫根腐病(Helicobasidium brebissoni1、紫紋羽絲核菌(Rhizoctonia crocorum));冬季冠腐病(鬼傘(Coprinus psychromorbidus));Black shoulder (鏈格抱);和黃葉斑枯病(苜猜黃斑病菌(Leptotrochila medicaginis)、Sporonema phacidioides)。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案,本發(fā)明的方法適用于治療灰葡萄孢菌相關(guān)病理狀況。例如,這種真菌在葡萄上產(chǎn)生兩種不同的感染,第一種為灰腐病,因持續(xù)潮濕或濕潤(rùn)條件所致,并且典型地導(dǎo)致受侵襲的葡萄串損失。第二種為貴腐病,在較濕潤(rùn)條件后接著較干燥條件時(shí)發(fā)生,并且可以導(dǎo)致不同的餐末甜葡萄酒,如蘇太尼葡萄酒或托卡伊阿蘇葡萄酒?;移咸焰呔忠u許多其他植物。它對(duì)于無(wú)核小水果如草莓和球莖作物在經(jīng)濟(jì)上是重要的。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案,本發(fā)明的方法可以適合用于治療水果和蔬菜中的真菌性腐敗以及由意大利青霉、指狀青霉、擴(kuò)展青霉引起的任何其他病理狀況。例如,粘性腐敗病和藍(lán)綠色分生孢子的產(chǎn)生和霉菌毒素(例如,擴(kuò)展青霉產(chǎn)生一種稱為展青霉素的霉菌毒素)的產(chǎn)生。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案,本發(fā)明的方法可以用于治療在幾乎每種重要的栽培蕓苔屬種類(包括綠花椰菜、卷心菜、卡諾拉和芥菜)上的黑斑病(也稱為黑葉斑病)以及由鏈格孢屬引起的任何其他病理狀況。更進(jìn)一步地,本發(fā)明的方法可以適用于治療由擔(dān)子菌綱真菌疣頂單胞銹菌(Uromyces appendiculatus) (Pers. :Pers. )Unger 引起的菜豆鎊病。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法可以用于治療由真菌韃靼內(nèi)絲白粉菌引起的番茄白粉病。另一個(gè)實(shí)施方案涉及用于治療由核盤(pán)菌引起的白霉病的本發(fā)明方法。根據(jù)某些實(shí)施方案,本發(fā)明的方法可以用于治療由禾冠柄銹菌引起的燕麥冠銹病和大麥冠銹病。
這種抗真菌方法可以特別適合于抑制孢子萌發(fā)和菌絲形成的至少一項(xiàng)。
在某些實(shí)施方案中,本發(fā)明的方法可以適用于治療線蟲(chóng)相關(guān)狀況。植物線蟲(chóng)病及其激發(fā)者的非限制性實(shí)例包括鱗球莖莖線蟲(chóng)(Ditylenchus dipsci);菊花滑刃線蟲(chóng)(Aphelenchoides ritzemabosi );抱囊線蟲(chóng)(三葉草胞囊線蟲(chóng)(Heterodera trifolii );劍線蟲(chóng)(美洲劍線蟲(chóng)(Xiphinema americanum));腐線蟲(chóng)(短體屬(Pratylenchus)種類,落選短體線蟲(chóng)(Pratylenchus neglectus)、穿刺短體線蟲(chóng)(Pratylenchus penetrans));針線蟲(chóng)(長(zhǎng)針屬(Longidorus)種類;釘線蟲(chóng)(針線蟲(chóng)屬(Paratylenchus)種類、鉤針線蟲(chóng)(Paratylenchus hamatus));腎形線蟲(chóng)(腎狀線蟲(chóng)屬(Rotylenchulus)種類);根結(jié)線蟲(chóng)(根結(jié)線蟲(chóng)屬(Meloidogyne)種類,花生根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne arenaria)、哥倫比亞根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne chitwoodi )、北方根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne hapla)、南方根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne incognita)、爪睡根結(jié)線蟲(chóng)(Meloidogyne javanica);螺旋線蟲(chóng)(螺旋屬(Helicotylenchus)種類);短粗根線蟲(chóng)(擬毛刺屬(Paratrichodorus)種類);矮化線蟲(chóng)(矮化屬(Tylenchorhynchus)種類)。更進(jìn)一步地,本發(fā)明的方法和組合物可以用于治療由病毒性病原體引起的病理狀況。植物病毒病及其激發(fā)者的非限制性實(shí)例包括苜蓿耳突病(彈狀病毒屬,苜蓿耳突病毒(AEV));苜?;ㄈ~病(苜?;ㄈ~病毒屬,苜?;ㄈ~病毒(AMV));菜豆卷葉病(黃矮病毒組,菜豆卷葉病毒(BLRV));菜豆黃花葉病(馬鈴薯Y病毒屬,菜豆黃花葉病毒(BYMV));黃瓜花葉病(黃瓜花葉病毒屬,黃瓜花葉病毒(CMV));澳洲紫花苜蓿潛伏病(蠕傳病毒屬(Nepovirus)、澳洲紫花苜蓿潛隱病毒(LALV));澳洲紫花苜蓿無(wú)癥狀病(豇豆花葉病毒科,澳洲紫花苜蓿無(wú)癥狀病毒(LASV));紫花苜蓿短暫條紋病(南方菜豆花葉病毒屬,紫花苜蓿短暫條紋病毒(LTSV));豌豆條紋病(香石竹潛隱病毒屬,豌豆新西蘭線條病毒(PSV));紅三葉草葉脈花葉病(香石竹潛隱病毒屬,紅三葉草葉脈花葉病毒(RCVMV));煙草條紋病(等軸不穩(wěn)環(huán)斑病毒屬,煙草條紋病毒(TSV));煙草蝕紋病(Tomato etch)(煙草蝕紋病毒);和白三葉草花葉病(馬鈴薯X病毒屬,白三葉草花葉病毒(WCMV))。根據(jù)某些實(shí)施方案,本發(fā)明的方法通過(guò)在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性而保護(hù)植物免受病原體影響。更具體地,本發(fā)明的方法包括以下步驟將一種生物控制劑或包含所述生物控制劑的一種組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料上或施用在所述植物或植物材料附近。在具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。根據(jù)本發(fā)明的各種實(shí)施方案,本發(fā)明的方法在處理的植物中賦予抗性。術(shù)語(yǔ)“抗性”涉及植物抵抗細(xì)菌、真菌、病毒、昆蟲(chóng)或其他害蟲(chóng)感染或侵染的能力,即,與未處理的植物相比,所述植物可以在這種感染或侵染期間和之后展示更好的存活率,或與未處理的植物相比,它可以顯示更少的癥狀,或它可以不以如未處理植物那樣高的比率被感染或侵染。有待使用的本發(fā)明的組合物和方法的生物控制劑的濃度根據(jù)目標(biāo)作物、使用方法、制品形式、施用量、施用時(shí)間、有害病原體種類等等的差異而變化,而不必定義。
在一個(gè)實(shí)施方案中,所述方法上調(diào)或誘導(dǎo)植物免疫相關(guān)基因的表達(dá)。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中,所述植物免疫相關(guān)基因編碼病程相關(guān)蛋白家族和防御素家族的至少一項(xiàng)。本發(fā)明的農(nóng)藥組合物在治療、改善、防止、消除、延遲病原體或賦予病原體抗性方面是有效的,病原體包括但不限于病毒或類病毒、細(xì)菌、昆蟲(chóng)、線蟲(chóng)、真菌等。病毒包括任何植物病毒,例如,煙草或黃瓜花葉病毒、環(huán)斑病毒、壞死病毒、玉米矮化花葉病毒,等等。主要作物的特定真菌、真菌樣和病毒病原體包括大豆大雄疫霉大豆?;?Phytophthora megasperma sp. glycinea)、菜顯殼球抱菌(Macrophomina phaseolina)、立枯絲核菌(Rhizoctonia soIani )、核盤(pán)菌(Sclerot inia sclerotiorum)、尖抱德刀菌(Fusarium oxysporum)、菜豆間座殼大豆變種(Diaporthe phaseolorum var. sojae)(大豆擬莖點(diǎn)霉(Phomopsis sojae))、大豆北方莖潰痕病菌(Diaporthe phaseolorum var.caulivora)、齊整小核菌(Sclerotium rolfsii)、菊池尾抱(Cercospora kikuchii)、大豆尾孢菌(Cercospora sojina)、東北霜霉(Peronospora manshurica)、束狀剌盤(pán)孢(Colletotrichum dematium) (Colletotichum truncatum)、山扁豆生棒抱(Corynesporacassiicola)、大顯掲紋殼針抱(Septoria glycines)、Phyllosticta sojicola、鏈格孢(Alternaria alternata)、丁香假單胞菌大豆致病變種(細(xì)交鏈孢菌(Alternariaalternata)、Pseudomonas syringae p. v. glycinea)、野油菜黃單胞菌菜豆致病變種(Xanthomonas campestris p.v. phaseoliMicrosphaera diffusa、半裸德刀菌(Fusarium semi tectum)、大豆莖褐腐病菌(Phialophora gregata)、大豆花葉病毒、大豆小叢殼(Glomerella glycines)、煙草環(huán)斑病毒、煙草條紋病毒、豆薯層銹菌(Phakopsorapachyrhizi)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、終極腐霉(Pythium ultimum)、德巴利腐霉(Pythium debaryanum)、番煎斑萎病毒、大豆孢囊線蟲(chóng)(Heterodera glycines)、煎病鐮刀菌(Fusarium solani);卡諾拉白銹菌(Albugo Candida)、蕓苔鏈格孢(Alternaria brass icae)、十字花科小球腔菌(Leptosphaeria maculans)、立枯絲核菌、核盤(pán)菌、蕓苔生球腔菌(Mycosphaerella brassiccola)、終極腐霉、寄生霜霉(Peronosporaparasitica)、粉紅鐮刀菌(Fusarium roseum)、鏈格孢;苜猜密執(zhí)安棍狀桿菌詭譎亞種、終極腐霉、畸雌腐霉、華麗腐霉、德巴利腐霉、瓜果腐霉、大雄疫霉、車(chē)軸草霜霉、苜蓿莖點(diǎn)霉苜蓿變種、苜蓿尾孢、苜蓿假盤(pán)菌、苜蓿黃斑病菌、鐮刀菌屬、野油菜黃單胞菌苜蓿致病變種、根腐絲囊霉、Stemphylium herbarum、苜猜匍柄霉(Stemphylium alfalfae);小麥丁香假單胞菌致黑致病變種(Pseudomonas syringaep. v. atrofaciens)、冰草條黑粉菌(Urocystis agropyri)、野油菜黃單胞菌小麥致病變種(Xanthomonas campestrisp. V. translucens)、丁香假單胞菌丁香致病變種(Pseudomonas syringae p. v. syringae)、鏈格抱(Alternaria alternata)、草本支抱霉(Cladosporium herbarum)、禾谷德刀菌(Fusarium graminearum)、燕麥鐮刀菌、黃色鐮刀菌(Fusarium culmorum)、小麥黑粉菌(Ustilago tritici)、小麥殼二胞(Ascochyta tritici)、禾谷頭抱霉(Cephalosporiumgramineum)、禾生炭疽菌(Collotetrichum graminicola)、禾白粉菌小麥?;?Erysiphegraminisf. sp. tritici )、禾柄鎊菌小麥專化型(Puccinia graminis f. sp. tritici )、隱匿柄鎊菌小麥?;?Puccinia recondita f. sp. tritici)、條形柄鎊菌(Pucciniastriiformis)、偃麥草核腔菌(Pyrenophora tritic1-repentis)、穎枯殼針抱(Septorianodorum)、小麥殼針孢(Septoria tritici)、燕麥殼針孢(Septoria avenae)、鋪毛擬小尾抱(Pseudocercosporella herpotrichoides)、立枯絲核菌、禾谷絲核菌(Rhizoctoniacerealis)、禾丁頁(yè)囊殼小麥變種(Gaeumannomyces graminis var. tritici)、瓜果腐霉、強(qiáng)雄腐霉(Pythium arrhenomanes)、終極腐霉、禾草離螺抱(Bipolaris sorokiniana)、大麥黃矮病毒、雀麥花葉病毒、土傳小麥花葉病毒、小麥條紋花葉病毒、小麥梭條花葉病毒(Wheat Spindle Streak Virus)、美洲小麥條點(diǎn)病毒(American Wheat StriateVirus)、麥角菌(Claviceps purpurea)、小麥腥黑粉菌(TiIletia tritici)、小麥光腥黑粉菌(Tilletia Iaevis)、小麥黑粉菌(Ustilago tritici)、印度腥黑粉菌(Tilletiaindica)、立枯絲核菌(Rhizoctonia solani )、強(qiáng)雄腐霉、禾生腐霉(Pythium gramicola)、瓜果腐霉、高原病毒、歐洲小麥條點(diǎn)病毒(European wheat striate virus);向日葵霍爾斯單軸霉(Plasmophora halstedii)、核盤(pán)菌、紫斃黃化病(Aster Yellows)、向日葵殼針抱(Septoria helianthi)、向日葵擬莖點(diǎn)霉(Phomopsis helianthi)、向日葵鏈格抱(Alternaria helianthi)、百日草鏈格抱菌(Alternaria zinniae)、灰葡萄抱菌、麥?zhǔn)锨o點(diǎn)霉(Phoma macdonaldii)、桑樹(shù)內(nèi)生真菌(Macrophomina phaseolina)、 Erysiphe dehor acearum、米根霉(Rhizopus oryzae)、少根根霉(Rhizopus arrhizus)、葡枝根霉(Rhizopus stolonifer)、向日葵柄銹菌屬(Puccinia helianthi )、大麗輪枝孢(Verticillium dahliae)、胡蘿卜軟腐歐文氏菌胡蘿卜致病變種(Erwinia carotovorump. v. carotovora)、丁頁(yè)頭抱霉(Cephalosporium acremonium)、隱地疫霉(Phytophthoracryptogea)、婆羅門(mén)參白銹菌(Albugo tragopogonis);玉米串珠鐮刀菌亞粘團(tuán)變種(Fusarium moniliforme var. subglutinans)、斯氏歐文氏菌(Erwinia stewartii)、輪枝樣德刀菌(Fusarium verticil Ioides )、串珠德刀菌(Fusarium moni liforme)、玉蜀黍赤霉(禾谷鐮刀菌)、玉米狹殼柱孢(Stenocarpella maydis)(玉蜀黍殼色單隔孢(Diplodiamaydis))、畸雌腐霉、德巴利腐霉、禾生腐霉(Pythium graminicola)、華麗腐霉、終極腐霉、瓜果腐霉、黃曲霉(Aspergillusflavus)、玉蜀黍平臍螺孢(Bipolaris maydis) O、T (異方定抱腔菌(Cochliobolus heterostrophus))、炭色長(zhǎng)螺抱(Helminthosporium carbonum)1、II 和 II (炭色旋孢腔菌(Cochliobolus carbonum))、大斑凸臍螺孢菌(Exserohilumturcicum)1、II 和 II1、Helminthosporium pedicellatum、玉蜀黍節(jié)壺菌(Physodermamaydis)、玉蜀黍葉點(diǎn)霉(Phyllosticta maydis)、玉蜀黍球梗抱(Kabatiella maydis)、高粱尾孢(Cercospora sorghi)、玉米黑粉菌、高粱柄銹菌(Puccinia sorghi)、多堆柄鎊菌(Puccinia po Iysora )、菜豆殼球抱菌、草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)、稻黑孢(Nigrospora oryzae)、草本支孢霉、新月彎孢菌(Curvularia lunata)、不等彎孢(Curvularia inaequalis)、蒼白彎抱(Curvularia palIescens)、密執(zhí)安棒形桿菌尼布拉斯加亞種(Clavibacter michiganense subsp. nebraskense)、綠色木霉(Trichodermaviride)、玉米矮化花葉病毒A和B、小麥條紋花葉病毒、玉米褪綠矮縮病毒(MaizeChlorotic Dwarf Virus)、高梁麥角菌(Claviceps sorghi)、燕麥假單胞菌(Pseudomonasavenae)、菊歐文氏菌玉蜀黍致病變種(Erwinia chrysanthemi pv.zea)、胡蘿卜軟腐歐文氏菌(Erwinia carotovora)、谷物矮小螺原體、大抱殼色單隔抱(DiplodiamacrosPora)、大?旨疫霉(Sclerophthora macrospora)、高梁宇旨霜霉(Peronosclerospora sorghi )、菲律賓宇旨霜霉(Peronosclerospora philippinensis)、玉蜀泰 J旨霜霉(PeronosclerosPoramaydis)、甘鹿指霜霉(PeronosclerosPora sacchari)、絲軸黑粉菌(Sphacelothecareiliana)、玉米殼鎊菌(Physopella zeae)、玉蜀黍頭抱霉(Cephalosporium maydis)、頂頭抱霉(Cephalosporium acremonium)、玉米裡綠斑駁病毒(Maize Chlorotic MottleVirus)、高原病毒、玉米花葉病毒、玉米雷亞多非納病毒(Maize Rayado Fino Virus)、玉米條紋病毒、玉米斑紋病毒(Maize Stripe Virus)、玉米粗矮縮病毒(Maize Rough DwarfVirus);高粱大斑凸臍螺孢(Exserohilum turcicum)、禾生朿Ij 盤(pán)孢(Colletotrichumgraminicola)(禾生小叢殼(Glomerella graminicola))、高粱尾孢、高粱膠尾孢(Gloeocercospora sorghi )、高梁粗斑殼二抱(Ascochyta sorghina)、丁香假單胞菌丁香致病變種、野油菜黃單胞菌棲域毛草致病變種(Xanthomonas campestrisp. v. holcicola)、須芒草假單胞菌(Pseudomonas andropogonis)、紫柄鎊菌(Puccinia purpurea)、菜豆殼球孢菌、高粱黑蔥花霉(Periconia circinata)、串珠鐮刀菌、鏈格孢、高粱平臍螺孢(Bipolaris sorghicola)、高梁長(zhǎng)螺抱(Helminthosporium sorghicola)、新月彎抱菌(Curvularia lunata)、高粱莖點(diǎn)霉(Phoma insidiosa)、燕麥假單胞菌(金狗尾草葉斑假單胞菌(Pseudomonas alboprecipitans))、高梁座枝抱(Ramulispora sorghi)、高梁生座 枝抱(Ramulispora sorghicola)、甘鹿黑癒菌(Phyllachara sacchari)、絲抱堆黑粉菌(Sporisorium reilianum)(絲軸黑粉菌)、高梁軸黑粉菌(Sphacelotheca cruenta)、高梁堅(jiān)孢堆黑粉菌(Sporisorium sorghi)、甘鹿花葉病毒H、玉米矮化花葉病毒A和B、高粱麥角菌、立枯絲核菌、占枝頂孢霉(Acremonium strictum)、大孢指疫霉、高粱指霜霉、菲律賓指霜霉、禾生指梗霜霉(Sclerospora graminicola)、禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、強(qiáng)雄腐霉、禾生腐霉;水稻稻梨孢(Magnaporthe grisea)、立枯絲核菌等。還應(yīng)當(dāng)注意的是,本發(fā)明的方法有效用于防止、緩解、抑制、消除在農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品中的害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作,從而延長(zhǎng)所述產(chǎn)品的貨架期或儲(chǔ)存時(shí)間。在第五個(gè)方面,本發(fā)明是針對(duì)一種用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的方法。本發(fā)明的方法包括以下步驟將一種生物控制劑或包含該生物控制劑的組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料或施用在所述植物或植物材料附近。在具體實(shí)施方案中,本發(fā)明的生物控制劑包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子;c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。在一個(gè)具體實(shí)施方案中,這種方法導(dǎo)致以下至少一項(xiàng)的增加植物重量、植物高度、植物葉數(shù)、根系、植物粗度和植物生物量。應(yīng)當(dāng)注意的是,本發(fā)明的所有方法涉及施用至一種植物中或施用在處理的植物附近。該方法可以適當(dāng)?shù)厣婕皩⒈景l(fā)明的組合物施用至在其中存在所述植物或植物材料的區(qū)域內(nèi)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,如土壤、泥炭、砂或水。例如,可以將組合物施用至其中將栽種植物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基如土壤、泥炭、砂或水或與之混合,或可以將其施用至其中已經(jīng)栽種植物的生長(zhǎng)培養(yǎng)基如土壤、泥炭、砂或水或與之混合,尤其當(dāng)這些植物是易受在此所述的病害影響的那些植物時(shí)。該組合物可以例如通過(guò)灌溉、噴灑、在栽種所述植物之前直接施用至所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中并且通過(guò)在它們用于接觸有待保護(hù)的植物或植物材料之前以所述組合物浸潰毛巾、擦拭物、組織等而施用。在第六個(gè)方面,本發(fā)明提供了一種生物控制劑在制造用于防止、緩解、抑制、消除害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作的農(nóng)藥組合物中的用途。本發(fā)明的生物控制劑可以包含以下至少一項(xiàng)a. Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b. Pseudozyma aphidis 抱子; c. Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基;d 來(lái)自 Pseudozyma aphidis 的分泌化合物;e. (a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。在一些實(shí)施方案中,本發(fā)明的生物控制劑可以用于制備用于治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的農(nóng)藥組合物,特別地是殺細(xì)菌組合物。這些細(xì)菌感染可以由以下至少一項(xiàng)引起密執(zhí)安棍狀桿菌、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌黃瓜致病變種、丁香假單胞菌番茄致病變種、馬鈴薯瘡痂病菌、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種和野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種。在又另一個(gè)實(shí)施方案中,由本發(fā)明提供的生物控制劑的用途產(chǎn)生用于治療、防止、緩解、抑制、消除真菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的殺真菌組合物。這種殺真菌組合物可以特別適用于治療由以下至少一項(xiàng)引起的真菌感染灰葡萄孢菌、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌、疣頂單胞銹菌、韃靼內(nèi)絲白粉菌、核盤(pán)菌和禾冠柄銹菌。不僅僅是對(duì)植物病原體起作用,使用生物控制劑產(chǎn)生的農(nóng)藥組合物在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性。本發(fā)明進(jìn)一步提供了本發(fā)明的生物控制劑在制備任何農(nóng)藥組合物例如抗病毒組合物、抗線蟲(chóng)組合物或可以用于治療昆蟲(chóng)相關(guān)病理狀況的任何組合物中的用途。在一個(gè)實(shí)施方案中,使用該生物控制劑產(chǎn)生的農(nóng)藥組合物上調(diào)或誘導(dǎo)植物免疫相關(guān)基因的表達(dá)。在更具體的實(shí)施方案中,所述植物免疫相關(guān)基因編碼病程相關(guān)蛋白家族和防御素家族的至少一項(xiàng)。在更具體的實(shí)施方案中,這些植物免疫相關(guān)基因編碼病程相關(guān)蛋白家族和防御素家族的至少一項(xiàng)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中,病程相關(guān)蛋白家族的成員可以是PRl并且防御素家族的成員可以是I3DFl. 2。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中,該農(nóng)藥組合物誘導(dǎo)PRl在所述植物中表達(dá)。在又另一個(gè)具體實(shí)施方案中,農(nóng)藥組合物誘導(dǎo)I3DFl. 2在所述植物中表達(dá)。在進(jìn)一步的具體實(shí)施方案中,該農(nóng)藥組合物誘導(dǎo)PRl和TOFL 2在所述植物中表達(dá),所述組合物任選地誘導(dǎo)至少一個(gè)另外的免疫相關(guān)基因表達(dá)。此外,這種組合物適合用于防止、緩解、抑制、消除在農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品中的害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作,從而延長(zhǎng)所述產(chǎn)品的貨架期或儲(chǔ)存時(shí)間。另外,在一些實(shí)施方案中,根據(jù)本發(fā)明的用途是用于制備促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的組合物。更進(jìn)一步地,本發(fā)明提供了如由本發(fā)明定義的一種生物控制劑,用于治療、防止、改善、抑制、消除害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作。確切地說(shuō),用于治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌、真菌或病毒感染或侵染或延遲其發(fā)作。在一些實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了如由本發(fā)明定義的一種生物控制劑,用于在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性。在其他實(shí)施方案中,本發(fā)明提供了如由本發(fā)明定義的一種生物控制劑,用于防止、緩解、抑制、消除在農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品中的害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作,從而延長(zhǎng)所述產(chǎn)品的貨架期或儲(chǔ)存時(shí)間。 更進(jìn)一步地,本發(fā)明提供了如由本發(fā)明定義的一種生物控制劑,用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)。本發(fā)明的一個(gè)另外的方面涉及一種用于治療、防止、緩解、抑制、消除在植物或植物材料中的細(xì)菌、真菌或害蟲(chóng)侵染或延遲其發(fā)作的組合物。在此披露和描述了本發(fā)明,應(yīng)當(dāng)理解的是本發(fā)明不限于在此披露的具體實(shí)例、方法步驟和組合物,因?yàn)檫@類方法步驟和組合物可以稍有變化。還應(yīng)當(dāng)理解的是,在此所使用的術(shù)語(yǔ)用于以下目的僅描述具體實(shí)施方案并且不旨在是限制性的,因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅由所附的權(quán)利要求書(shū)及其等同物限定。必須注意的是,如在本說(shuō)明書(shū)和所附權(quán)利要求書(shū)中所使用的,單數(shù)形式“一個(gè)/ 一種”(〃a〃)、“一個(gè)/ 一種”("an")和“該(the) ”包括復(fù)數(shù)指示物,除非另外清楚地說(shuō)明該內(nèi)容。貫穿本說(shuō)明書(shū)和后續(xù)的實(shí)例和權(quán)利要求書(shū),除非上下文另外要求,詞語(yǔ)“包含”("comprise")及其變化形式如“包含”("comprises")及“包含”("comprising")應(yīng)當(dāng)理解為表示包括所陳述的整體或步驟或者所陳述的整體或步驟的組,但不排除任何其它整體或步驟或任何其它整體或步驟的組。實(shí)例現(xiàn)在參考以下實(shí)例,連同上文描述一起,以非限制性的方式展示本發(fā)明的一些實(shí)施方案。通常,再是所使用的命名和本發(fā)明中所用的實(shí)驗(yàn)室程序包括分子技術(shù)、生物化學(xué)技術(shù)、微生物學(xué)技術(shù)和重組DNA技術(shù)。文獻(xiàn)中透徹地解釋了這些技術(shù)。參見(jiàn),例如,《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》〃Molecular Cloning:A laboratory Manual〃Sambrook 等人,(1989);《現(xiàn)代分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)》〃Current Protocols in Molecular Biology〃第1-1II卷,Ausubel, R. M.編著(1994) ;Ausubel等人,《現(xiàn)代分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)》〃CurrentProtocols in Molecular Biology^, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1989);Perbal,《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》〃A Practical Guide to Molecular Cloning", JohnWiley ;Sons, New York(1988) ;Watson 等人,《重組 DNA》"Recombinant DNA^, ScientificAmerican Books,紐約(New York) ;Birren等人(編著)《基因組分析實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)系列》〃Genome Analysis:A Laboratory Manual Series",第 1-4 卷,冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press),紐約(1998).《核酸雜交》〃 NucleicAcid Hybridization^Hames, B. D.和 Higgins S. J.編著(1985);《轉(zhuǎn)錄和翻譯》"Transcription and Tran si at ion ^Hames, B. D.和 Higgins S. J.編著(1984);《固定細(xì)胞和酶》〃Immobilized Cells And Enzymes^IRL Press, (1986);《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》"APractical Guide to Molecular Cloning"Perbal, B.,(1984)和《酶學(xué)方法》〃Methods inEnzymology〃第1-317卷,學(xué)術(shù)出版社(Academic Press) ;《PCR方案方法和應(yīng)用指南》"PCR Protocols:A Guide To Methods And Applications〃,學(xué)術(shù)出版社,圣地亞哥(SanDiego),加利福尼亞州(1990) ;Marshak等人.,《蛋白質(zhì)純化和表征策略-實(shí)驗(yàn)過(guò)程指南》"Strategies for Protein Purification And Characterization-A Laboratory CourseManual^CSHL出版社(1996);所有文獻(xiàn)通過(guò)引用結(jié)合,如同在此完全陳述那樣。貫穿本文件提供了其他的一般參考文獻(xiàn)。將其中的程序被認(rèn)為是本領(lǐng)域熟知的并且被提供以方便讀者。包含在其中的全部信息通過(guò)引用結(jié)合在此。材料
馬鈴薯葡萄糖瓊脂(Difco) 馬鈴薯葡萄糖肉湯(Difco)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(Difco)設(shè)備和試劑盒EZ真菌DNA提取試劑盒(Eisenberg Bros有限公司,以色列)Qiangen RNeasy試劑盒(英杰公司,圣地亞哥,加利福尼亞州)EZ-第一鏈cDNA合成試劑盒(生物工業(yè)公司,以色列}Multigen 發(fā)酵罐(新布朗斯維克(New Brunswick))Biolog SF-N平板(Biolog,海沃德(Hayward),加利福尼亞州,美國(guó))Sep-Pak C18 盒(Waters)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(步琪(Buchi), Flawil,瑞士)E5150濺射鍍膜儀(Polaron設(shè)備有限公司,沃特福德(赫特福德郡)WDl(War-fordHertfordshire WDl),英國(guó))掃描電子顯微鏡(JSM-5410LV ;日本電子株式會(huì)社(JEOL Ltd),東京,日本)實(shí)驗(yàn)程序P. aphidis 培養(yǎng)將P. aphidis分離株L12在26° C保持在馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)上的固體培養(yǎng)中并且每月轉(zhuǎn)移至新鮮的培養(yǎng)基。將液體培養(yǎng)物在26° C在設(shè)定于150轉(zhuǎn)/分鐘的旋轉(zhuǎn)振蕩器上在馬鈴薯葡萄糖肉湯(PDB)中保持7-10天。在液體培養(yǎng)物中10天之后,獲得IO8個(gè)分生孢子/ml。DNA 提取將細(xì)胞在26° C旋轉(zhuǎn)振蕩器(150轉(zhuǎn)/分鐘)上在TOB中培養(yǎng)。將真菌生物質(zhì)以10,000轉(zhuǎn)/分鐘離心20分鐘,并且棄去培養(yǎng)基。將真菌細(xì)胞用無(wú)菌蒸餾水洗滌兩次并且以10,000轉(zhuǎn)/分鐘離心另外的20分鐘。棄去水,并且將真菌生物質(zhì)轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的1. 5-ml艾本德微量離心管并凍干。使用EZ真菌DNA提取試劑盒根據(jù)制造商的說(shuō)明,從凍干的IOmg真菌材料中制備基因組DNA。DNA 序列
采用針對(duì)完整ITS(ITSlf5’-CTTGGTCAITTAGAGGAAGTAA-3’(也由 SEQ ID NO. 5 表示)和 ITS4r5’ -TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’,(也由 SEQ ID NO. 6 表示)的特異性引物,將提取的DNA用于PCR。以25 ill的體積和I U I的模板DNA,通過(guò)Readymix Taq DNA聚合酶系統(tǒng)(西格瑪)進(jìn)行PCR反應(yīng)。擴(kuò)增在熱循環(huán)儀(伯樂(lè)公司(BioRad Inc.),赫拉克勒斯(Hercules),加利福尼亞州)中進(jìn)行,其中所述熱循環(huán)儀如下編程初始變性步驟在95° C持續(xù)3分鐘,在92° C持續(xù)30秒,35個(gè)循環(huán),在58° C (ITS)或52° C (nSSU)持續(xù)30秒,和在72° C持續(xù)I分鐘。以72° ClO分鐘終末延長(zhǎng)完成擴(kuò)增。將擴(kuò)增的條帶送交測(cè)序并且將序列與數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)。序列呈現(xiàn)在圖2中并且表示為SEQ ID NO. :7、8、9和10,分別對(duì)應(yīng)于 L12、P. aphidis、P.rogulosa和 P. Antarctica。RNA分離和RT-PCR分析用Qiangen RNeasy試劑盒根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū),從未處理的番爺或擬南芥植物中并且從用IO8個(gè)P. aphidis孢子/ml處理后10天的植物中分離總RNA。根據(jù)制造商 的說(shuō)明書(shū)(英杰公司,圣地亞哥,加利福尼亞州),在RNeasy Qiagen柱上進(jìn)行DNA酶處理。用EZ-第一鏈cDNA合成試劑盒逆轉(zhuǎn)錄IugS RNA。使用如下熱循環(huán)程序進(jìn)行RT-PCR 96° C持續(xù)2分鐘;27-33個(gè)以下循環(huán)95° C持續(xù)15秒,55° C持續(xù)20秒以及72° C持續(xù) 30 秒。引物如下LePRlF-5’ TCTTGTGAGGCCCAAAATTC3’ (表示為 SEQ ID NO. :1) ;LePRlR-5’ATAGTCTGGCCTCTCGGACA3’(表示為 SEQ ID NO. :2) ;LeActineF-5’AGGCACACAGGTGTTATGGT3’ (表示為 SEQ ID NO. :3)和 LeActineR-5’AGCAACTCGAAGCTCATTGT3’ (表示為 SEQ ID NO. :4) ;LePINlF-5,CTT CTTCCAACTTCCTTT G3’(表示為 SEQ ID NO. :11)和LePINlR-5’ TGTTTTCCTTCGCACATC3’ (表示為 SEQ ID NO. : 12) ;AtPRlF_5’ GCCCACAAGATTATCTAAGGG3’(表示為 SEQ ID NO. : 13)和 AtPRlR-5’ACCTCCTGCATATGATGCTCCT3’(表示為 SEQID NO. :14) ;AtPDFl. 2F-TCATGGCTAAGITTGCTTCC(表示為 SEQ ID NO. : 15)和 PDF1.2R_5’AATACACACGATTTAGCACC3’ (表示為 SEQ ID NO. : 16)。用于體外抑制測(cè)定的P. aphidis分泌部分的分離將P. aphidis置于PDA上,用透析管覆蓋并且在26° C孵育10天。然后移出含有真菌的透析管并且將帶有P. aphidis分泌部分的平板用于具有不同真菌病原體的抑制測(cè)定。將平板用不同的病原體接種,在它們的最佳溫度孵育并且將它們的孢子萌發(fā)和菌絲線性生長(zhǎng)測(cè)量幾天。另外,使用乙酸乙酯和己烷從PDB培養(yǎng)物濾液提取代謝物。更具體地,使P. aphidis在26。C在埃倫邁厄(Erlenmeyer)燒瓶中以150轉(zhuǎn)/分鐘的恒定攪拌在F1DB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)10天。將真菌細(xì)胞旋轉(zhuǎn)離心下來(lái)(以10,000轉(zhuǎn)/分鐘,20分鐘)。將上清液(由培養(yǎng)物濾液組成)使用IN HCl滴定至pH2. 0并且使用分液漏斗以等體積的乙酸乙酯提取。收集乙酸乙酯部分并且在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中在42° C蒸發(fā)[Paz,Z.等人,(2007)《應(yīng)用微生物學(xué)雜志》(J. Appl. Microbiol. ) 103(6) :2570-2579]。在使用己烷的情況下,收集的乙酸乙酯部分用己烷再提取并且如上文所示在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中在42° C蒸發(fā)。將干燥部分在甲醇中復(fù)原并且在施用于華特門(mén)(Whatman)濾紙片(6mm直徑)上之后用于體外實(shí)驗(yàn)。將濾紙片置于用不同細(xì)菌接種的PDA平板的中心。棺物和病原體的繁殖使灰葡萄孢菌(B05. 10)、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌和核盤(pán)菌在22° C_27 ° C在每日12小時(shí)光照下在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。將韃靼內(nèi)絲白粉菌在25° C在辣椒植物上保持。在25° C分別將禾柄銹菌(Puccinia graminis)和撫頂單胞銹菌(Uromycesappendiculatus)在小麥植物和菜豆植物上保持。在完全黑暗下在28° C_37° C使密執(zhí)安棍狀桿菌密執(zhí)安亞種(CMM44)、野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種(Xanthomonas campestris pv. vesicatoria)、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種(X. campestris pv. campestris)、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌番爺致病變種、丁香假單胞菌黃瓜角斑病致病變種(P. syringae pv.1achrymans)和馬鈴薯瘡痂病菌在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA)上生·長(zhǎng)。所有病原體均來(lái)自本地保藏中心。在溫室中在25 ° C和40%相對(duì)濕度下使番爺植物(番爺(Lycopersiconesculentum),生態(tài)型 870)生長(zhǎng)。番茄植物上的灰葡萄孢菌的抑制為了檢驗(yàn)對(duì)離脫葉上和完整植物上灰葡萄孢菌的抑制,將番茄葉/植物用不同濃度(IO4和IO8個(gè)孢子/ml)的P. aphidis噴灑至流動(dòng),并且被允許在葉/植物上建立3日。然后用病原體(總計(jì)15,000個(gè)孢子)接種植物并且監(jiān)測(cè)處理的植物中以及用水處理的對(duì)照植物中的病害癥狀。番茄植物上的密執(zhí)安棍狀桿菌的抑制將番爺植物用不同濃度(IO4和IO8個(gè)孢子/ml)的P. aphidis噴灑。允許P. aphidis在植物上建立2-3天,此后通過(guò)使用在細(xì)菌懸液(0D_約0. 9)中浸過(guò)的剪刀切下第一葉而用密執(zhí)安棍狀桿菌接種這些植物。監(jiān)測(cè)處理的植物中和用水噴灑的對(duì)照植物中的病害癥狀。一些實(shí)驗(yàn)涉及如在實(shí)例6中所述那樣接種密執(zhí)安棍狀桿菌后另外施用P. aphidis。黃瓜棺物上的單絲殼的抑制用單絲殼接種之前3天,將黃瓜苗(黃瓜(Cucumis sativus)栽培品種’ Saphi’)用P. aphidis孢子(IO8個(gè)孢子/ml)或用水噴灑(每個(gè)處理10株苗),并且在接種后11、12和16天對(duì)感染進(jìn)行評(píng)分。為接種,將源自攜帶接種物的供體植物中的孢子從四面直接吹到健康籽苗上。通過(guò)使用比例1%-5%、5%-25%、25%-50%和50%_100%確定被白粉病癥狀覆蓋的葉的百分比而對(duì)感染進(jìn)行評(píng)分。采收后葡萄上的腐敗的抑制收獲來(lái)自Moshav Lachis的Yuval葡萄園的湯普森無(wú)籽葡萄并且按來(lái)自3串的1. 25kg包裝(32個(gè)重復(fù))。一天后,將葡萄用水或P. aphidis (IO6或IO8個(gè)孢子/ml)噴灑并且轉(zhuǎn)移至0° C儲(chǔ)存。2.5個(gè)月后,將葡萄轉(zhuǎn)移至20° C持續(xù)3日并且監(jiān)測(cè)腐敗。測(cè)定每個(gè)重復(fù)的腐敗葡萄的量(表示為克)。由于樣品變異性,將兩個(gè)連續(xù)重復(fù)的結(jié)果合并在一起以產(chǎn)生2. 5kg樣本大小。確定平均腐敗并且使用Instat用Student-Newman Keuls事后檢驗(yàn)以P值0.01計(jì)算顯著性。電子晶微鏡檢杳為了保存和檢驗(yàn)擬南芥葉上的真菌孢子和菌絲,在這項(xiàng)研究中采用稍有改變的如Kim,(2007)中所述的蒸氣固定程序[Kim,K. W. (2007),《植物病理學(xué)雜志》(J. Phytopathology) 156:125-128]。在用P. aphidis處理4天之后,將擬南芥葉在良好通風(fēng)的通風(fēng)柜中附接至小鉛瓶(vial lead)。使標(biāo)本在封閉的小瓶中暴露于2%(w/v)四氧化鋨蒸氣至少2小時(shí)并且然后在通風(fēng)柜中保留過(guò)夜。然后使用剃須刀片,切出用鋨酸浸潰的葉方塊(每個(gè)5 X 5mm2)并且將其安裝在金屬樁(metal stub)上(直徑10mm)。使用E5150派射鍍膜儀,將它們用金進(jìn)行濺射鍍膜(大約30nm厚)并且用掃描電子顯微鏡以20kV加速電壓進(jìn)行檢查。散發(fā)的揮發(fā)物的生物學(xué)活性測(cè)定使P. aphidis在商業(yè)生產(chǎn)的劃區(qū)培養(yǎng)皿的一半中的PDA上在25。C生長(zhǎng)10天,之后,在劃區(qū)的培養(yǎng)皿的另一半添加灰葡萄孢菌的菌絲栓。記錄灰葡萄孢菌的菌落直徑直至接種后4天并且將其與P. aphidis不存在的情況下對(duì)照平板上的生長(zhǎng)比較。纖維素7舌性使P. aphidis在高壓滅菌的纖維素膜覆蓋的自來(lái)水瓊脂平板(8%)上生長(zhǎng)。接種后7天記錄細(xì)胞數(shù)。P. aphidis 暴露于 UVPDA平板用10個(gè)P. aphidis細(xì)胞接種并且使其經(jīng)受UV暴露持續(xù)不同的時(shí)間(O、10、20和30分鐘)。然后將平板轉(zhuǎn)移至25° C的培養(yǎng)箱中并且在72小時(shí)之后用數(shù)字?jǐn)z像機(jī)記錄。實(shí)例IP. aphidis 的分離諸位發(fā)明人從草莓葉分離出P. aphidis菌株(分離株L12)。L12分離株與
圖1A 上看到的白粉病菌落崩潰相關(guān)。使用針對(duì)內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列(ITSl)的完整rDNA區(qū)域和針對(duì)線粒體大亞基(mtLSU)和胞核小亞基(nSSU)的部分序列的特異性引物,如上文實(shí)驗(yàn)程序中所述,將L12分離株鑒定為P.aphidis[AVis,T.J.等人,(2001)《植物病理學(xué)》(Phytopathology)91 (3) : 249-254]。序列顯示與 P. aphidis 的 100% 一致性,如在表 I 和圖2中所示。表1:P. aphidis 序列鑒定
權(quán)利要求
1.一種包含生物控制劑作為有效成分的農(nóng)藥組合物,該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng) a.Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b.Pseudozyma aphidis 抱子; c.Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基; d.來(lái)自Pseudozymaaphids的分泌化合物; e.(a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和 f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合;所述組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物,其中所述農(nóng)藥組合物是用于治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的殺細(xì)菌組合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物,其中所述細(xì)菌感染由以下至少一項(xiàng)引起密執(zhí)安棍狀桿菌、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌黃瓜致病變種、丁香假單胞菌番茄致病變種、馬鈴薯瘡痂病菌、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種和野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物,其中農(nóng)藥組合物是用于治療、防止、緩解、抑制、消除真菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的殺真菌組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物,其中所述真菌感染由以下至少一項(xiàng)引起灰葡萄孢菌、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌、疣頂單胞銹菌、韃靼內(nèi)絲白粉菌、核盤(pán)菌和禾冠柄銹菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物,其中所述組合物抑制真菌孢子萌發(fā)和菌絲形成中的至少一項(xiàng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物,其中所述農(nóng)藥組合物是用于治療、防止、緩解、抑制、消除病毒感染或侵染或延遲其發(fā)作的抗病毒組合物。
8.一種用于在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性的組合物,其包含一種生物控制劑作為有效成分,該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng) a.Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b.Pseudozyma aphidis 抱子; c.Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基; d.來(lái)自Pseudozymaaphidis的分泌化合物; e.(a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和 f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合;所述組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物,其中所述組合物上調(diào)或誘導(dǎo)植物免疫相關(guān)基因的表達(dá)。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物,其中所述植物免疫相關(guān)基因編碼病程相關(guān)蛋白家族和防御素家族的至少一項(xiàng)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物,用于在農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品中防止、緩解、抑制、消除害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作,從而延長(zhǎng)所述產(chǎn)品的貨架期或儲(chǔ)存時(shí)間。
12.一種用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的組合物,其包含一種生物控制劑作為有效成分,該生物控制劑包含以下至少一項(xiàng) a.Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體; b.Pseudozyma aphidis 抱子; c.Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基; d.來(lái)自Pseudozymaaphidis的分泌化合物; e.(a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和 f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合;所述組合物任選地進(jìn)一步包含載體、稀釋劑和賦形劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物,其中所述組合物誘導(dǎo)以下至少一項(xiàng)的增加植物重量、植物高度、植物葉數(shù)、根系、植物粗度和植物生物量。
14.根據(jù)權(quán)利要求1、8和12中任一項(xiàng)所述的組合物,其中所述組合物進(jìn)一步包含另外的農(nóng)用藥劑,其選自下組,該組由以下各項(xiàng)組成除草劑、殺蟲(chóng)劑、生長(zhǎng)刺激劑和肥料。
15.一種治療、防止、緩解、抑制、消除在植物或植物材料中的細(xì)菌、真菌或害蟲(chóng)侵染或延遲其發(fā)作的方法,包括以下步驟將一種生物控制劑或包含該生物控制劑的組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料或施用在所述植物或植物材料附近,所述生物控制劑包含以下至少一項(xiàng) a.Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體; b.Pseudozyma aphidis 抱子; c.Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基; d.來(lái)自Pseudozymaaphidis的分泌化合物; e.(a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和 f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其中所述方法用于治療、抑制、消除細(xì)菌感染或侵染或延遲其發(fā)作。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法,其中所述細(xì)菌感染由以下至少一項(xiàng)引起密執(zhí)安棍狀桿菌、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌黃瓜致病變種、丁香假單胞菌番茄致病變種、馬鈴薯瘡痂病菌、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種和野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,其中所述方法用于治療、抑制、消除真菌感染或延遲其發(fā)作。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法,其中所述真菌感染由以下至少一項(xiàng)引起灰葡萄孢菌、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌、疣頂單胞銹菌、韃靼內(nèi)絲白粉菌、核盤(pán)菌和禾冠柄銹菌。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法,其中所述方法抑制孢子萌發(fā)和菌絲形成的至少一項(xiàng)。
21.用于在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性的方法,所述方法包括以下步驟將一種生物控制劑或包含該生物控制劑的組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料或施用在所述植物或植物材料附近,所述生物控制劑包含以下至少一項(xiàng) a.Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體; b.Pseudozyma aphidis 抱子;c.Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基; d.來(lái)自Pseudozymaaphidis的分泌化合物; e.(a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和 f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法,其中所述方法上調(diào)或誘導(dǎo)植物免疫相關(guān)基因的表達(dá)。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法,其中所述植物免疫相關(guān)基因編碼病程相關(guān)蛋白家族和防御素家族的至少一項(xiàng)。
24.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法,用于防止、緩解、抑制、消除在農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品中的害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作,從而延長(zhǎng)所述產(chǎn)品的貨架期或儲(chǔ)存時(shí)間。
25.一種用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的方法,其包括以下步驟將一種生物控制劑或包含該生物控制劑的組合物施用至一種植物上、施用至一種植物材料或施用在所述植物或植物材料附近,所述生物控制劑包含以下至少一項(xiàng) a.Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b.Pseudozyma aphidis 抱子; c.Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基; d.來(lái)自Pseudozymaaphidis的分泌化合物; e.(a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和 f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法,其中所述方法導(dǎo)致以下至少一項(xiàng)的增加植物重量、植物高度、植物葉數(shù)、根系、植物粗度和植物生物量。
27.—種生物控制劑在制造用于防止、緩解、抑制、消除害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作的農(nóng)藥組合物中的用途,所述生物控制劑包含以下至少一項(xiàng) a.Pseudozyma aphidis細(xì)胞或其任何分離株或突變體;b.Pseudozyma aphidis 抱子; c.Pseudozyma aphidis 的條件培養(yǎng)基; d.來(lái)自Pseudozymaaphidis的分泌化合物; e.(a)至(d)中任一項(xiàng)的任何提取物或制備品;和 f.在(a)至(e)中定義的生物控制劑的至少兩種的組合。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的用途,其中所述農(nóng)藥組合物是用于治療、防止、緩解、抑制、消除細(xì)菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的殺細(xì)菌組合物。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的用途,其中所述細(xì)菌感染由以下至少一項(xiàng)引起密執(zhí)安棍狀桿菌、根癌農(nóng)桿菌、解淀粉歐文氏菌、丁香假單胞菌黃瓜致病變種、丁香假單胞菌番茄致病變種、馬鈴薯瘡痂病菌、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種和野油菜黃單胞菌辣椒斑點(diǎn)病致病變種。
30.根據(jù)權(quán)利要求27所述的用途,其中所述農(nóng)藥組合物是用于治療、防止、緩解、抑制、消除真菌感染或侵染或延遲其發(fā)作的殺真菌組合物。
31.根據(jù)權(quán)利要求30所述的用途,其中所述真菌感染由以下至少一項(xiàng)引起灰葡萄孢菌、指狀青霉、甘藍(lán)鏈格孢菌、疣頂單胞銹菌、韃靼內(nèi)絲白粉菌、核盤(pán)菌和禾冠柄銹菌。
32.根據(jù)權(quán)利要求27所述的用途,其中所述組合物在植物中針對(duì)害蟲(chóng)感染或侵染賦予抗性。
33.根據(jù)權(quán)利要求27所述的用途,其中所述組合物用于防止、緩解、抑制、消除在農(nóng)場(chǎng)和工業(yè)產(chǎn)品中的害蟲(chóng)感染或侵染或延遲其發(fā)作,從而延長(zhǎng)所述產(chǎn)品的貨架期或儲(chǔ)存時(shí)間。
34.根據(jù)權(quán)利要求27所述的用途,其中所述組合物用于促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)。
全文摘要
在此提供了生物控制劑,其保護(hù)植物和植物材料免受害蟲(chóng)和病原體的影響并且促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。還提供了包含這種生物控制劑的組合物、用于保護(hù)植物和植物材料并且促進(jìn)在植物中的生長(zhǎng)的方法、以及所述生物控制劑在制備農(nóng)藥組合物和生長(zhǎng)促進(jìn)組合物中的用途。
文檔編號(hào)A01P3/00GK103025170SQ201180034560
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2011年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月1日
發(fā)明者馬格尼特·萊維, 阿維娃·加夫尼 申請(qǐng)人:耶路撒冷希伯來(lái)大學(xué)伊森姆研究發(fā)展有限公司
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