專利名稱：一種用于棕色蘑菇液體菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基質(zhì)及其配方的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了涉及棕色蘑菇的培養(yǎng)方法，更具體的說是一種用于棕色蘑菇液體菌種培養(yǎng)的麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)及其培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
棕色蘑燕brunnescens Peck),是蘑燕中的珍稀類品種,屬于擔子菌綱(Basidiomycotina)、傘菌目(Agaritales)、蘑燕科(Agaricaceae)、蘑燕屬{garicus)。掠色蘑菇俗稱棕蘑，是波希美亞種。該菌株產(chǎn)量高、菇質(zhì)優(yōu)良、口感鮮嫩，其菇蓋為自然棕褐色，菌柄白色，肉質(zhì)致密緊實?，F(xiàn)在所有的白色雙孢蘑菇品種均為棕色蘑菇的白色變種，也就是說棕色蘑菇是白色雙孢蘑菇的野生祖先。棕色蘑菇，別名白蘑菇、洋菇，屬于擔子菌綱、傘菌目、蘑菇科、蘑菇屬。棕色蘑菇營養(yǎng)豐富、味道鮮美，據(jù)報導鮮蘑菇含蛋白質(zhì)3%—4%,脂肪 0.2% — 0.3%，碳水化合物2.4% — 3.8%，可消化率達70% — 90%，享有“植物肉”之稱。蘑菇的氨基質(zhì)酸組成較全面，尤其富含人體必需的賴氨酸等。棕色蘑菇還含有豐富的鐵、鉀、鈣等礦質(zhì)元素。還含有硫氨素、核黃素、煙酸、抗壞血酸等多種維生素及酶類。由于含有較高的不飽和脂肪酸，故多食用蘑菇對降低血脂有明顯作用，用蘑菇罐頭加工預煮液制成的藥物對醫(yī)治遷延性肝炎、慢性肝炎、肝腫大、早期肝硬化等均有顯著療效。隨著人們追求天然、返璞歸直潮流的到來，棕色蘑菇在市場上受到廣大消費者的追捧，是一個很好的商業(yè)品種。目前，棕色蘑菇菌種培養(yǎng)主要采用固體培養(yǎng)方法，制作周期長，加上其制作時間正值高溫季節(jié)，導致生產(chǎn)成本上升。而液體培養(yǎng)是采用液體基質(zhì)質(zhì)發(fā)酵來進行發(fā)酵培養(yǎng)菌種的生產(chǎn)，其原理是:在發(fā)酵罐或三角瓶中，采用液體培養(yǎng)基質(zhì)，通入無菌空氣加以攪拌或振蕩，增加培養(yǎng)基質(zhì)中的溶氧含量，提供菌絲體呼吸代謝所需要的氧氣，并控制適宜的外界條件，使得菌體在液體深處繁殖發(fā)育，獲得大量的菌絲體或代謝產(chǎn)物?！耙后w-麥粒菌種”是以液體菌種為種源制作的麥粒菌種。一般的麥粒菌種要用麥粒培養(yǎng)物做種源，制種所需時間較長。采用現(xiàn)代發(fā)酵技術(shù)制備液體菌種，能使蘑菇菌絲體細胞迅速分裂，因而制種時間比麥粒菌種要快很多。但是液體菌種不適合直接接種在大批量的堆肥培養(yǎng)料上，因為保存和運輸均不方便。為揚其長而避其短，采用液體菌種作為種源生產(chǎn)麥粒菌種,兼具液體菌種和麥粒菌種的優(yōu)點，能縮短制種時間，菌齡一致，提高了菌種質(zhì)量，且生產(chǎn)成本低，接種簡便，放大容易。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明公開一種用于棕色蘑燕液體菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基質(zhì)，其特征在于它是由麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)(g/L)成分組成:麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2。本發(fā)明所述的培養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)棕色蘑菇菌絲方法，其特征在于:
(I)種子液的制備，取5塊0.5 Cm2新鮮斜面菌種接種于種子培養(yǎng)基質(zhì)(50mL/250mL三角瓶)中，25°C, 150rpm搖床培養(yǎng)3天；其中的斜面培養(yǎng)基質(zhì):草炭土培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):草炭土 600g,葡萄糖20g,麥粒IOOg,硫酸鎂1.5g,磷酸二氫鉀Ig,蛋白胨2g,水IOOOmL ;種子培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):馬鈴薯200、葡萄糖20、蛋白胨2、磷酸二氫鉀2、硫酸鎂l、VBi 0.01，水IOOOmL, pH 自然；
(2)液體菌種的制備，以10%(v/v)接種量將種子液移入裝50mL麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2 ;的250mL三角瓶中，25°C，150rpm培養(yǎng)7天，即得棕色蘑菇液體菌種；
(3)發(fā)酵條件:再以10%的接種量轉(zhuǎn)到發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵罐容積7L，裝培養(yǎng)液4 L，培養(yǎng)溫度25 °C，在通風量為100 L/h，攪拌轉(zhuǎn)速為200 r/min, pH值不調(diào)節(jié)，發(fā)酵5天結(jié)束，進行測定；其中的麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2;
(4)稱重:采用細胞干重法:取50mL發(fā)酵培養(yǎng)液，3000r/min離心20min,收集菌絲球，并用蒸餾水洗滌3次后，將菌絲體置于80°C下烘至恒重，稱量，測定菌絲干重。棕色蘑菇的菌絲量由1.543 g/L提高到32.043g/L。發(fā)酵罐驗證試驗中菌絲干重最高達到38.486 g/L0本發(fā)明選用的棕色蘑菇MC441菌株主要優(yōu)特點是:
1.該菌株菇蓋表面為自然棕褐色，菇柄、菌肉白色；菇質(zhì)優(yōu)，子實體圓整，菇蓋厚、結(jié)實，不凹頂；味道鮮美，口感鮮嫩，保鮮期長。菌絲生長速度快。產(chǎn)量高，在相同條件下，比白色蘑菇品種提早2-3天出菇，菇潮整齊，產(chǎn)量達9-10公斤/平方。2.出菇溫度范圍
廣，尤其是低溫結(jié)實能力比常規(guī)白色蘑菇強，在5°C_8°C下，產(chǎn)量比對照2796高70%。培養(yǎng)技術(shù)簡易、 培養(yǎng)原料來源廣。其培養(yǎng)料配方以稻、麥草為主要原料，培養(yǎng)料及堆制發(fā)酵方法與常規(guī)蘑菇相同。為了確定最佳的培養(yǎng)基質(zhì)，本發(fā)明進行了大量的實驗性研究工作，具體如下:
a、通過搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)的優(yōu)化，使棕色蘑菇的菌絲含量由1.657g/L提高到2.693g/
L0b、棕色蘑菇生長最適合的生長條件為轉(zhuǎn)速lOOrpm，裝液量75mL/250mL，接種量12%。通過極差比較，各因素對棕色蘑菇菌絲產(chǎn)量影響是:裝液量>接種量>轉(zhuǎn)速。C、本發(fā)明研究出麩皮對棕色蘑菇生長影響最大，其次是蛋白胨和葡萄糖。即培養(yǎng)基質(zhì)各組分為(g/L):麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2。d、以最優(yōu)化的麩皮培養(yǎng)基質(zhì)為發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)進行發(fā)酵罐驗證試驗，發(fā)酵罐容積7L，裝培養(yǎng)液4L，培養(yǎng)溫度25°C，在通風量為100L/h，攪拌轉(zhuǎn)速為200 r/min, pH值不調(diào)節(jié)，發(fā)酵5天結(jié)束，測定菌絲干重達到34.486g/L。

g、本發(fā)明對篩選出的較好的基質(zhì)礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)-麩皮培養(yǎng)基質(zhì)，采用正交試驗設(shè)計進行了培養(yǎng)基質(zhì)配方和培養(yǎng)條件的優(yōu)化，菌絲干重均有較大幅度提高。確定出最適麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)為(g/L):麩皮120,葡萄糖15,蛋白胨2,最佳培養(yǎng)條件為(g/L):接種齡7d，接種量8%，裝液量100mL/250mL，pH自然。在此條件下，棕色蘑菇的菌絲量由1.543 g/L提高到32.043g/L。發(fā)酵罐驗證試驗中菌絲干重達到38.486g/L0
1、麩皮培養(yǎng)基質(zhì)更有利于棕色蘑菇菌絲的生長，在發(fā)酵過程中也可觀察到麩皮培養(yǎng)基質(zhì)中棕色蘑菇的生長速度更快，絮狀菌絲和菌絲球出現(xiàn)的時間均早于菜園土培養(yǎng)基質(zhì)。所以確定麩皮培養(yǎng)基質(zhì)為液體菌種的最適培養(yǎng)基質(zhì)。
本發(fā)明公開的用于棕色蘑燕液體菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基質(zhì)及其培養(yǎng)方法與現(xiàn)有技術(shù)相比所具有的積極效果在于:
(O菌種更純，液體菌種生產(chǎn)經(jīng)過篩選、提純，屬純菌種。(2)周期更短，采用液體菌種從制種到菌絲長滿栽培袋只需30天。(3)污染更少,采用液體菌種接種后24小時萌發(fā),菌種萌發(fā)速度超過雜菌生長速度。(4)出菇整齊上市早，采用液體菌種種植的棕色蘑菇，出菇整齊，能夠提前2個月上市。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例說明本發(fā)明，這里所述實施例的方案，不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域的專業(yè)人員按照本發(fā)明的精神可 以對其進行改進和變化，所述的這些改進和變化都應(yīng)視為在本發(fā)明的范圍內(nèi)，本發(fā)明的范圍和實質(zhì)由權(quán)利要求來限定。其中棕色蘑菇MC441引自福建省蘑菇菌種對外有售。實施例1
1.試驗材料與方法 供試菌株:
棕色蘑菇MC441引自福建省蘑菇菌種研究推廣站，對外有售。供試培養(yǎng)基質(zhì):
(I)斜面培養(yǎng)基質(zhì):草炭土培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):草炭土 600g,葡萄糖20g,麥粒IOOg,硫酸鎂1.5g，磷酸二氫鉀lg，蛋白胨2g，水lOOOmL。(2)種子培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):馬鈴薯200、葡萄糖20、蛋白胨2、磷酸二氫鉀2、硫酸鎂UVB1 0.01，水 lOOOmL，pH 自然。(3)基質(zhì)礎(chǔ)發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì):
A.PDA培養(yǎng)基質(zhì):馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水I 000 mL。B.麥粒培養(yǎng)基質(zhì)1:馬鈴薯100 g，七水硫酸鎂1.5 g，磷酸二氫鉀I g，蛋白胨
2g,水 I 000 mL。C.麥粒培養(yǎng)基質(zhì)I1:麥粒200 g，七水硫酸鎂1.5 g，磷酸二氫鉀I g，蛋白胨2g,水 I 000 mL。d.草炭土培養(yǎng)基質(zhì):草炭土 600 g,麥粒100 g,七水硫酸鎂1.5 g,磷酸二氫鉀I g,蛋白胨2 g,葡萄糖20 g,七水硫酸鎂1.5 goe.玉米粉培養(yǎng)基質(zhì)1:玉米粉24 g，葡萄糖20 g，七水硫酸鎂I g，磷酸二氫鉀I g，蛋白胨 I g，水 I 000 mL。f.玉米粉培養(yǎng)基質(zhì)I1:玉米粉40 g，葡萄糖20 g，七水硫酸鎂I g，磷酸二氫鉀I g，蛋白胨 I g，水 I 000 mL。g.馬鈴薯玉米粉培養(yǎng)基質(zhì):馬鈴薯200 g，玉米粉20 g，七水硫酸鎂1.5 g，磷酸二氫鉀1.5 g,蛋白胨I g，葡萄糖20 g,水I 000 mL。h.麩皮培養(yǎng)基質(zhì):麩皮100 g,葡萄糖20 g,蛋白胨2 g,七水硫酸鎂1.5 g,磷酸二氫鉀 1.5 g，水 I 000 mL。
液體菌種的制備
(I)種子液的制備，取5塊0.5 Cm2新鮮斜面菌種接種于種子培養(yǎng)基質(zhì)(50mL/250mL三角瓶)中，25°C，150rpm搖床培養(yǎng)3天。(2)液體菌種的制備，以10% (v/v)接種量將種子液移入裝50mL發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)的250mL三角瓶中，25°C，150rpm培養(yǎng)7天，即得棕色蘑菇液體菌種。發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)成分根據(jù)試驗方案逐次改變。菌絲干重的測量
采用細胞干重法:取50 mL發(fā)酵培養(yǎng)液，3000r/min離心20 min,收集菌絲球,并用蒸懼水洗滌3次后，將菌絲體置于80°C下烘至恒重，稱量。麩皮培養(yǎng)基質(zhì)正交試驗設(shè)計
以麩皮、葡萄糖、蛋白胨為試驗因素，設(shè)計L9 (34 )正交試驗，以菌絲體干重為指標，每組2個重復。

表I麩皮培養(yǎng)基質(zhì)碳、氮源正交試驗設(shè)計表(g/L)
權(quán)利要求
1.一種用于棕色蘑菇液體菌種培養(yǎng)的麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)，其特征在于它是由麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)(g/L)成分組成:麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2。
2.一種采用權(quán)利要求1所述培養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)棕色蘑菇菌絲的方法，其特征在于: (O種子液的制備，取5塊0.5 cm2新鮮斜面菌種接種于種子培養(yǎng)基質(zhì)(50mL/250mL三角瓶)中，25°C, 150rpm搖床培養(yǎng)3天；其中的斜面培養(yǎng)基質(zhì):草炭土培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):草炭土 600g,葡萄糖20g,麥粒IOOg,硫酸鎂1.5g,磷酸二氫鉀Ig,蛋白胨2g,水IOOOmL ;種子培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):馬鈴薯200、葡萄糖20、蛋白胨2、磷酸二氫鉀2、硫酸鎂1、VB1 0.01，水IOOOmL, pH 自然； (2)液體菌種的制備，以10%(v/v)接種量將種子液移入裝50mL麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2 ;的250mL三角瓶中，25°C，150rpm培養(yǎng)7天，即得棕色蘑菇液體菌種； (3)發(fā)酵條件:再以10%的接種量轉(zhuǎn)到發(fā)酵罐培養(yǎng)，發(fā)酵罐容積7L，裝培養(yǎng)液4 L，培養(yǎng)溫度25 °C，在通風量為100 L/h，攪拌轉(zhuǎn)速為200 r/min, pH值不調(diào)節(jié)，發(fā)酵5天結(jié)束，進行測定；其中的麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)(g/L):麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2; (4)稱重:采用細胞干重法:取50mL發(fā)酵培養(yǎng)液，3000r/min離心20min,收集菌絲球，并用蒸餾水洗滌3次后，將菌 絲體置于80°C下烘至恒重，稱量，測定菌絲干重。
全文摘要
本發(fā)明提供了用于棕色蘑菇液體菌種培養(yǎng)的培養(yǎng)基質(zhì)及其培養(yǎng)的方法,其特征在于它是由麩皮發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)(g/L)成分組成麩皮120，葡萄糖15，蛋白胨2。采用本發(fā)明的培養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)的棕色蘑菇液體菌種的菌絲量由1.543g/L提高到32.043g/L，發(fā)酵罐驗證試驗中菌絲干重達到38.486g/L；本發(fā)明的方法滿足了人們和市場對新菇種與食用菌新技術(shù)的需求，如能得到廣泛應(yīng)用必將產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟效益與社會效益。
文檔編號A01G1/04GK103155787SQ20111040870
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月9日
發(fā)明者班立桐, 黃亮, 王玉, 楊麗維, 孫茜, 孫建成 申請人:天津市金三農(nóng)農(nóng)業(yè)科技開發(fā)有限公司