專利名稱：一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法。
背景技術(shù)：
餅粕類飼料是指油料籽實(shí)經(jīng)過壓榨或浸出提取大部分油脂后剩余的產(chǎn)品，壓榨提油后剩余的部分叫餅，預(yù)榨浸出提油后剩余的部分叫粕。主要包括大豆餅粕、棉籽餅粕、菜籽餅粕、花生餅粕、亞麻餅粕、油茶籽餅粕、葵花籽餅粕等。近年來，在動物源蛋白供應(yīng)曰趨緊張的形勢下，植物蛋白餅粕類飼料在動物飼料中的應(yīng)用逐漸增加。餅粕類飼料具有蛋白質(zhì)含量豐富，必需氨基酸組成比較平衡、價(jià)格低廉、來源廣泛等特點(diǎn)，但其中也含有多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，如胰蛋白酶抑制劑、植酸、棉酚、硫代葡萄糖苷等，若使用不當(dāng)，會影響動物的生長健康，甚至造成中毒。近年來，用生物技術(shù)特別是微生物發(fā)酵技術(shù)來開發(fā)新型飼料資源、 生產(chǎn)蛋白質(zhì)飼料和新型添加劑越來越受到人們的重視。微生物發(fā)酵技術(shù)改良油料餅粕的飼用效價(jià)具有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢①微生物的代謝產(chǎn)物可以降低餅粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子含量；② 提高蛋白質(zhì)的品質(zhì)，合成活性肽、寡肽等；③產(chǎn)生動物所需的促生長因子；④降低粗纖維含量。亞麻籽餅粕等油料餅粕物料若添加過多的水分混合易造成結(jié)團(tuán)結(jié)塊，從而造成后續(xù)烘干、粉碎的困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供了一種存活率較高、生產(chǎn)成本較低的低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于它包括如下步驟1)菌劑制備將菌株接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收集菌液，離心去上清液，收集得到菌體；將收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心；重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig (100-500)mL(W/V)，將洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比=1 1-1 5 (V/V)，再將菌液加入滅菌的海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，得到混合液；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 2-1 10，用注射器將混合液注入 CaCl2溶液中，固化30-60min，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；2)餅粕基料混合、發(fā)酵按微膠囊菌劑的加入量為油料餅粕重量的0. 5%， 水的加入量為油料餅粕和水的總重量的20% 40%，將微膠囊菌劑、油料餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆?，在室?10-40°C)下靜置發(fā)酵M 96h(進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；
3)采用下述2種方法之一①烘干發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物在50 80°C下烘干(低溫烘干)，使干燥成品含水量維持在10% 20% (質(zhì)量)，得到油料餅粕蛋白飼料；②將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵產(chǎn)物不經(jīng)烘干直接真空包裝，得到油料餅粕蛋白飼料。所述步驟1)中的菌株為枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、醋酸桿菌、 乳酸菌、腸球菌、假單胞菌、釀酒酵母、畢赤酵母、紅酵母、假絲酵母、米曲霉、黑曲霉、里氏木霉、少孢根霉等中的任意一種或任意二種以上(含二種)的混合，任意二種以上(含二種) 混合時(shí)為任意配比；所述步驟1)中的液體培養(yǎng)基如下菌株選用含有枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、 地衣芽孢桿菌、醋酸桿菌或假單胞菌時(shí)，液體培養(yǎng)基采用葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基；菌株選用含有乳酸菌時(shí)，液體培養(yǎng)基采用MRS液體培養(yǎng)基；菌株選用含有腸球菌時(shí)，液體培養(yǎng)基采用營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基；菌株選用含有釀酒酵母、畢赤酵母、紅酵母或假絲酵母時(shí)，液體培養(yǎng)基采用YPD液體培養(yǎng)基；菌株選用含有米曲霉、黑曲霉、里氏木霉或少孢根霉時(shí)，液體培養(yǎng)基采用馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基。葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的組成蛋白胨5.0g，牛肉膏10g，酵母膏5.0g， 葡萄糖 5. 0g, NaCl 5. Og,瓊脂 15. Og,蒸餾水 1. 0L, pH7. 0-7. 2。MRS液體培養(yǎng)基的組成蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母提取物5. 0g，磷酸氫二鉀2. 0g，檸檬酸三銨2. Og,乙酸鈉5. Og,葡萄糖20. Og,吐溫801. 0ml，硫酸鎂0. 58g，硫酸錳 0. 25g，碳酸鈣 5. Og,蒸餾水 1. 0L, ρΗ6· 2-6. 4。營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基的組成蛋白胨5g，牛肉膏30g，氯化鈉5g，蒸餾水1. 0L。YPD液體培養(yǎng)基的組成酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1. 0L。馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基的組成馬鈴薯200g，蔗糖20g，蒸餾水1. 0L, pH自然。所述步驟1)中海藻酸鈉溶液濃度為1 10% (w/v，表示100ml海藻酸鈉溶液中含海藻酸鈉1 IOg)，氯化鈣溶液濃度為1 10% (w/v，表示100ml氯化鈣溶液中含氯化鈣1 IOg)。所述步驟2)中的油料餅粕為菜籽粕、脫皮冷榨菜籽粕、棉籽粕、大豆粕、亞麻粕、 茶籽粕、花生粕、芝麻粕、向日葵粕等中的任意一種或任意二種以上(含二種)的混合，任意二種以上(含二種)混合時(shí)為任意配比。本發(fā)明的有益效果是1)本發(fā)明使用的廉價(jià)的油料餅粕、麩皮等作為基本原料，制備方法簡單，價(jià)格低， 可降低生產(chǎn)成本；2)本發(fā)明采用低水分固態(tài)發(fā)酵方法生產(chǎn)蛋白飼料，減少了生產(chǎn)所需的用水和干燥時(shí)所需的能量消耗；3)本發(fā)明采用低水分固態(tài)發(fā)酵的方式，菌株在培養(yǎng)中經(jīng)歷了低水分馴化的過程， 從而使菌株在干燥過程中，能保證高存活率(存活率較高)，并減少雜菌污染；4)對如亞麻籽餅粕等易結(jié)團(tuán)結(jié)塊的油料餅粕進(jìn)行低水分發(fā)酵，可有效消除混合攪拌、烘干及粉碎過程的困難。5)油料餅粕經(jīng)低水分發(fā)酵脫毒效果顯著，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。綜上所述，本發(fā)明低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料在工業(yè)化應(yīng)用生產(chǎn)上有明顯優(yōu)勢，適合工業(yè)化生產(chǎn)，適合大面積推廣和應(yīng)用。


圖1是本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實(shí)施例方式為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅僅局限于下面的實(shí)施例。實(shí)施例1 如圖1所示，一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，它包括如下步驟(1)菌劑的制備將枯草芽孢桿菌從斜面上挑取1環(huán)菌落轉(zhuǎn)接于盛有IOOml的葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，然后將三角瓶置于搖床上37°C，160r/ min搖瓶培養(yǎng)1 (6 24h均可)。將搖瓶菌液離心去上清液，收集得到菌體；收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心，重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig IOOmL,洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌含量達(dá)到IO12的菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比=1 1，再將菌液加入滅菌的濃度為5% (w/v)海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢瑁玫交旌弦?；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 2，用注射器將該混合液注入濃度為 4% (w/v)CaCl2溶液中，固化45min，化后用無菌生理鹽水洗滌三次，即得枯草芽孢桿菌菌劑 (微膠囊菌劑)。(2)餅粕基料混合、發(fā)酵按枯草芽孢桿菌菌劑的加入量為菜籽餅粕(即菜籽粕) 重量的5%，水(蒸餾水)的加入量為菜籽餅粕和水的總重量的40%，取IOOg滅菌的菜籽餅粕；將枯草芽孢桿菌菌劑、菜籽餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆?可先將枯草芽孢桿菌菌劑和水混合，再與油料餅粕混合)，在37°C下靜置發(fā)酵7 (24 均可，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；(3)干燥將發(fā)酵好的發(fā)酵產(chǎn)物(低水分固態(tài)培養(yǎng)菜粕)鋪于烘干設(shè)備內(nèi)直接干燥，保持60°C烘干(低溫烘干)，使干燥成品含水量維持在10wt%左右，得到菜籽餅粕益生蛋白飼料(即油料餅粕蛋白飼料)。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC (異硫氰酸酯)含量達(dá)到0. 95mg/g (說明硫甙含量得到有效降解，在飼用安全范圍內(nèi))，粗蛋白含量提高率為6. 37% (蛋白營養(yǎng)品質(zhì)得到提高)， 益生菌(益生菌能促進(jìn)動物的腸胃消化，增加動物采食量)含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例2
—種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，它包括如下步驟(1)菌劑的制備將枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、釀酒酵母、乳酸菌從斜面上挑取菌落分別轉(zhuǎn)接于對應(yīng)盛有葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基、葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基、YPD液體培養(yǎng)基、MRS液體培養(yǎng)基的三角瓶中G個三角瓶)，然后將三角瓶置于搖床上37°C，160r/min搖瓶培養(yǎng)1池(6 241!均可)，將各自G個三角瓶)的搖瓶菌液離心去上清液，收集得到菌體(收集4個三角瓶的，即得到混合菌體)；將收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心；重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig 200mL，將洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌含量達(dá)到IO12的菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比=1 2，再將菌液加入滅菌的海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，得到混合液；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 5，用注射器將混合液注入冷卻的 CaCl2溶液中，固化45min，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；所述海藻酸鈉溶液濃度為5% (w/v，表示IOOml海藻酸鈉溶液中含海藻酸鈉5g)， 氯化鈣溶液濃度為4% (w/v)；(2)餅粕基料混合、發(fā)酵按微膠囊菌劑的加入量為菜籽餅粕(即菜籽粕)重量的 0. 2%，水的加入量為菜籽餅粕和水的總重量的40%，取1噸菜籽餅粕；將微膠囊菌劑、菜籽餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆?，在室?25°C )下靜置發(fā)酵72h(進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；(3)干燥將發(fā)酵好的發(fā)酵產(chǎn)物鋪于烘干設(shè)備內(nèi)直接干燥，保持60°C烘干，使干燥成品含水量維持在10wt%左右，得到菜籽餅粕益生蛋白飼料(即油料餅粕蛋白飼料)。經(jīng)檢測，0ZT+ITC含量達(dá)到1. 2%ig/g，粗蛋白含量提高率為9. 56%，益生菌含量達(dá)到108cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例3 一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，它包括如下步驟(1)菌劑的制備將假絲酵母和釀酒酵母從斜面上挑取1環(huán)菌落分別轉(zhuǎn)接于盛有 IOOml的YPD液體培養(yǎng)基(也可采用葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基)的250ml三角瓶中， 然后將三角瓶置于搖床上，160r/min搖瓶培養(yǎng)1 (6 24h均可)，將搖瓶菌液離心去上清液，收集得到菌體；將收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心；重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig 500mL，將洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌含量達(dá)到IO12的菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比=1 5，再將菌液加入滅菌的海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢瑁玫交旌弦?；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 10，用注射器將混合液注入冷卻的 CaCl2溶液中，固化45min，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；所述海藻酸鈉溶液濃度為10% (w/v)，氯化鈣溶液濃度為8% (w/v)；2)餅粕基料混合、發(fā)酵按微膠囊菌劑的加入量為亞麻籽餅粕重量的5%，水的加入量為亞麻籽餅粕和水的總重量的30%，取IOOg滅菌的亞麻籽餅粕(即亞麻粕)；將微膠囊菌劑、亞麻籽餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆颍谑覝?下靜置發(fā)酵72h(M 均可，進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；(3)干燥將發(fā)酵好的發(fā)酵產(chǎn)物(低水分固態(tài)培養(yǎng)亞麻籽餅粕)鋪于烘干設(shè)備內(nèi)直接干燥，保持60°C烘干，使干燥成品含水量維持在10wt%左右，得到亞麻籽餅粕益生蛋白飼料(即油料餅粕蛋白飼料)。經(jīng)檢測，生氰糖苷含量從395mg/kg降解到Mmg/kg，粗蛋白含量提高率為7. 86 %， 益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例4 一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，它包括如下步驟(1)菌劑的制備將納豆芽孢桿菌從斜面上挑取1環(huán)菌落轉(zhuǎn)接于盛有IOOml的葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，然后將三角瓶置于搖床上37°C，160r/ min搖瓶培養(yǎng)1 (6 24h均可)；將搖瓶菌液離心去上清液，收集得到菌體；將收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心；重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig 200mL，將洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌含量達(dá)到IO12的菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比=1 2，再將菌液加入滅菌的海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢瑁玫交旌弦?；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 8，用注射器將混合液注入冷卻的 CaCl2溶液中，固化60min，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；所述海藻酸鈉溶液濃度為10% (w/v)，氯化鈣溶液濃度為10% (w/v)；2)餅粕基料混合、發(fā)酵按微膠囊菌劑的加入量為油料餅粕重量的0. 1%，水的加入量為油料餅粕和水的總重量的20%，將微膠囊菌劑、油料餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆颍谑覝叵蚂o置發(fā)酵Mh (進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；油料餅粕為脫皮冷榨菜籽粕；3)烘干發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物在50°C下烘干，使干燥成品含水量維持在10% (質(zhì)量)，得到油料餅粕蛋白飼料；經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 15mg/g，粗蛋白含量提高率為7. 07%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例5 一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，它包括如下步驟(1)菌劑的制備將地衣芽孢桿菌從斜面上挑取1環(huán)菌落轉(zhuǎn)接于盛有IOOml的葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，然后將三角瓶置于搖床上37°C，160r/ min搖瓶培養(yǎng)1 (6 24h均可)；將搖瓶菌液離心去上清液，收集得到菌體；將收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心；重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig 200mL，將洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌含量達(dá)到IO12的菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比=1 2，再將菌液加入滅菌的海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，得到混合液；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 8，用注射器將混合液注入冷卻的 CaCl2溶液中，固化50min，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；所述海藻酸鈉溶液濃度為(w/v)，氯化鈣溶液濃度為10% (w/v)；
2)餅粕基料混合、發(fā)酵按微膠囊菌劑的加入量為油料餅粕重量的0. 1%，水的加入量為油料餅粕和水的總重量的40%，將微膠囊菌劑、油料餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆?，在室溫下靜置發(fā)酵96h(進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；油料餅粕為棉籽粕；烘干發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物在80°C下烘干，使干燥成品含水量維持在20% (質(zhì)量)，得到油料餅粕蛋白飼料；經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 3;3mg/g，粗蛋白含量提高率為6. 81 %，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例6 一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，它包括如下步驟(1)菌劑的制備將腸球菌從斜面上挑取1環(huán)菌落轉(zhuǎn)接于盛有IOOml的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，然后將三角瓶置于搖床上37°C，160r/min搖瓶培養(yǎng)1 (6 24h 均可)；將搖瓶菌液離心去上清液，收集得到菌體；將收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心；重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig 200mL，將洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌含量達(dá)到IO12的菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比=1 2，再將菌液加入滅菌的海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，得到混合液；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 8，用注射器將混合液注入冷卻的 CaCl2溶液中，固化50min，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；所述海藻酸鈉溶液濃度為(w/v)，氯化鈣溶液濃度為(w/v)；2)餅粕基料混合、發(fā)酵按微膠囊菌劑的加入量為油料餅粕重量的5%，水的加入量為油料餅粕和水的總重量的20%，將微膠囊菌劑、油料餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆?，在室溫下靜置發(fā)酵Mh (進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵)，得到發(fā)酵產(chǎn)物；油料餅粕為大豆粕(大豆餅粕)；3)將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵產(chǎn)物不經(jīng)烘干直接真空包裝，得到油料餅粕蛋白飼料。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 5%ig/g，粗蛋白含量提高率為6. 64%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例7 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“畢赤酵母”替換，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“YPD液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC (異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 82mg/g,粗蛋白含量提高率為6. 15%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例8 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“紅酵母”替換，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“YPD液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 76mg/g，粗蛋白含量提高率為7. 03%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例9:與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“假絲酵母”替換，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“YPD液體培養(yǎng)基”替換。
經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 57mg/g，粗蛋白含量提高率為7. 11%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例10 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“釀酒酵母”替換，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“YPD液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 37mg/g，粗蛋白含量提高率為6. 81 %，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例11 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“米曲霉”替換，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC (異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 63mg/g,粗蛋白含量提高率為6. 23%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例12 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“黑曲霉”替換，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 59mg/g，粗蛋白含量提高率為6. 68%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例13:與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“里氏木霉”替換，“葡萄
糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC(異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 7ang/g，粗蛋白含量提高率為6. 05%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例14:與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“少孢根霉”替換，“葡萄
糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC (異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 60mg/g,粗蛋白含量提高率為6. 34%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例15 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“枯草芽孢桿菌”由“乳酸菌”替換，“葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基”由“MRS液體培養(yǎng)基”替換。經(jīng)檢測，OZT (噁唑硫酮)+ITC (異硫氰酸酯)含量達(dá)到1. 75mg/g (說明硫甙含量得到有效降解，在飼用安全范圍內(nèi))，粗蛋白含量提高率為5. 27% (蛋白營養(yǎng)品質(zhì)得到提高)， 益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例16 與實(shí)施例2基本相同，不同之處在于“菜籽餅粕(即菜籽粕)”由“棉籽粕”替換。經(jīng)檢測，棉酚含量從65. 43mg/kg降低到8. 44mg/kg,粗蛋白含量提高率為3. 25 %， 益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例17 與實(shí)施例2基本相同，不同之處在于“菜籽餅粕(即菜籽粕)”由“油茶粕”替換。
經(jīng)檢測，粗纖維含量由24. 89%降解到15. 88%，粗蛋白含量提高率為12. 36%，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例18 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“菜籽餅粕(即菜籽粕)”由“芝麻粕”替換。經(jīng)檢測，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例19 與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“菜籽餅粕(即菜籽粕)”由“向日葵粕”替換。經(jīng)檢測，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。實(shí)施例20:與實(shí)施例1基本相同，不同之處在于“菜籽餅粕(即菜籽粕)”由“棉籽粕、大豆粕、亞麻粕、茶籽粕和花生粕”替換，棉籽粕、大豆粕、亞麻粕、茶籽粕和花生粕各20g(共計(jì) IOOg)。經(jīng)檢測，益生菌含量達(dá)到109cfu/g，說明存活率較高。本發(fā)明所列舉的各原料，以及本發(fā)明各原料的上下限、區(qū)間取值，以及工藝參數(shù) (如溫度、時(shí)間等)的上下限、區(qū)間取值都能實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，在此不一一列舉實(shí)施例。
權(quán)利要求
1.一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于它包括如下步驟1)菌劑制備將菌株接種于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，收集菌液，離心去上清液，收集得到菌體；將收集到的菌體用無菌生理鹽水洗滌，再次離心；重復(fù)洗滌、離心三次，得到洗滌和離心后的菌體；按洗滌和離心后的菌體與無菌生理鹽水的體積比=Ig (100-500)mL，將洗滌和離心后的菌體用無菌生理鹽水重新懸浮菌體，得到菌液；按菌液與海藻酸鈉溶液的體積比= 1:1-1: 5，再將菌液加入滅菌的海藻酸鈉溶液，充分?jǐn)嚢?，得到混合液；按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比=1 2-1 10，用注射器將混合液注入CaCl2 溶液中，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；2)餅粕基料混合、發(fā)酵按微膠囊菌劑的加入量為油料餅粕重量的0. 5%，水的加入量為油料餅粕和水的總重量的20% 40%，將微膠囊菌劑、油料餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆?，在室溫下靜置發(fā)酵M 96h，得到發(fā)酵產(chǎn)物；3)采用下述2種方法之一①烘干發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物在50 80°C下烘干，使干燥成品含水量的質(zhì)量維持在10% 20%，得到油料餅粕蛋白飼料；②將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵產(chǎn)物直接真空包裝，得到油料餅粕蛋白飼料。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于所述步驟1)中的菌株為枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、醋酸桿菌、 乳酸菌、腸球菌、假單胞菌、釀酒酵母、畢赤酵母、紅酵母、假絲酵母、米曲霉、黑曲霉、里氏木霉、少孢根霉等中的任意一種或任意二種以上的混合，任意二種以上混合時(shí)為任意配比；所述步驟1)中的液體培養(yǎng)基如下菌株選用含有枯草芽孢桿菌、納豆芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、醋酸桿菌或假單胞菌時(shí)，液體培養(yǎng)基采用葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基； 菌株選用含有乳酸菌時(shí)，液體培養(yǎng)基采用MRS液體培養(yǎng)基； 菌株選用含有腸球菌時(shí)，液體培養(yǎng)基采用營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基；菌株選用含有釀酒酵母、畢赤酵母、紅酵母或假絲酵母時(shí)，液體培養(yǎng)基采用YPD液體培養(yǎng)基；菌株選用含有米曲霉、黑曲霉、里氏木霉或少孢根霉時(shí)，液體培養(yǎng)基采用馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于葡萄糖牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的組成蛋白胨5. 0g，牛肉膏10g，酵母膏5. 0g，葡萄糖 5. 0g, NaCl 5. Og,瓊脂 15. Og,蒸餾水 1. 0L, ρΗ7· 0-7. 2。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于MRS液體培養(yǎng)基的組成蛋白胨10. 0g，牛肉膏10. 0g，酵母提取物5. 0g，磷酸氫二鉀 2. Og,檸檬酸三銨2. Og,乙酸鈉5. Og,葡萄糖20. Og,吐溫801. 0ml，硫酸鎂0. 58g，硫酸錳 0. 25g，碳酸鈣 5. Og,蒸餾水 1. 0L, ρΗ6· 2-6. 4。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基的組成蛋白胨5g，牛肉膏30g，氯化鈉5g，蒸餾水1. 0L。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于YPD液體培養(yǎng)基的組成酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，蒸餾水1. 0L。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于馬鈴薯蔗糖液體培養(yǎng)基的組成馬鈴薯200g，蔗糖20g，蒸餾水1. 0L, pH自然。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于所述步驟1)中海藻酸鈉溶液濃度為1 10% (w/v)，氯化鈣溶液濃度為1 10% (w/V) O
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于所述步驟2)中的油料餅粕為菜籽粕、脫皮冷榨菜籽粕、棉籽粕、大豆粕、亞麻粕、茶籽粕、花生粕、芝麻粕、向日葵粕等中的任意一種或任意二種以上的混合，任意二種以上混合時(shí)為任意配比。
全文摘要
本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種采用低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法。一種低水分固態(tài)發(fā)酵制備油料餅粕蛋白飼料的方法，其特征在于它包括如下步驟1)菌劑制備按海藻酸鈉溶液與CaCl2溶液的體積比＝1∶2-1∶10，用注射器將混合液(菌液+海藻酸鈉溶液)注入CaCl2溶液中，固化后用無菌生理鹽水洗滌三次，得到微膠囊菌劑；2)餅粕基料混合、發(fā)酵將微膠囊菌劑、油料餅粕和水?dāng)嚢杌旌暇鶆颍谑覝叵蚂o置發(fā)酵24～96h，得到發(fā)酵產(chǎn)物；3)采用下述2種方法之一①烘干發(fā)酵結(jié)束后，將發(fā)酵產(chǎn)物烘干，得到油料餅粕蛋白飼料；②將發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵產(chǎn)物直接真空包裝，得到油料餅粕蛋白飼料。本發(fā)明具有存活率較高、生產(chǎn)成本較低的特點(diǎn)。
文檔編號A23K1/14GK102318732SQ20111023179
公開日2012年1月18日 申請日期2011年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月15日
發(fā)明者萬楚筠, 周浩宇, 李文林, 江木蘭, 胡雙喜, 鄧乾春, 鈕琰星, 黃鳳洪, 黃慶德, 黃茜 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所