專(zhuān)利名稱(chēng)：紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體為紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
紅葉南天竹為小檗科Berberidaceae南天竹屬Nandirm的一個(gè)栽培新品種，是浙 江森禾種業(yè)股份有限公司從南天竹栽培群體中選育出來(lái)的。紅葉南天竹為常綠灌木，植株 高約80cm，叢生而少分枝，枝葉濃密，樹(shù)形緊湊；節(jié)間特短，只有普通南天竹的1/10，10個(gè)莖 節(jié)的長(zhǎng)度約5cm，而普通南天竹一節(jié)約8-lOcm ；葉片為二回三小葉復(fù)葉，葉片先端鈍尖，基 部楔形，全緣，薄革質(zhì)，長(zhǎng)3-5cm，寬1. 5-2cm，總?cè)~柄1. 5-3cm。紅葉南天竹喜半蔭，強(qiáng)光下 也能正常生長(zhǎng)，喜溫暖氣候，肥沃、濕潤(rùn)排水良好的土壤；冬季陽(yáng)光直射到的葉片全部變紅， 秋天稍遇冷空氣，葉色便由綠色轉(zhuǎn)為鮮紅色，持續(xù)至翌年初春。紅葉南天竹冬季整株葉色呈現(xiàn)鮮艷的中國(guó)紅，具興旺發(fā)達(dá)之寓意；春、夏、秋三季 葉色深綠色，和諧舒適。是優(yōu)良的觀(guān)葉地被和色塊樹(shù)種，觀(guān)賞效果醒目。適于華東地區(qū)應(yīng) 用，該區(qū)域冬季可觀(guān)賞的露地栽培樹(shù)種比較少，色彩艷麗的耐寒樹(shù)種更少，紅葉南天竹是理 想的新選擇，市場(chǎng)開(kāi)發(fā)潛力巨大。常規(guī)的扦插育苗法，繁殖周期長(zhǎng)、繁殖率極低，由于株型緊 湊、莖節(jié)短縮、枝葉密集，可用的扦插莖段十分有限，繁殖技術(shù)成為南天竹廣泛應(yīng)用的巨大 障礙。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)南天竹組織培養(yǎng)再生植株方面的報(bào)道很少，紅葉南天竹組培未見(jiàn)報(bào)道， 這樣在一定程度上限制了紅葉南天竹的大面積推廣。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種紅葉南天竹 的組織培養(yǎng)方法的技術(shù)方案，該培養(yǎng)方法成活率高、繁殖速度快。所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括以下步驟
1)從紅葉南天竹實(shí)生苗中選取健康、觀(guān)賞性狀表現(xiàn)典型的植株作為材料；在晴天的上 午，剪取新枝，去除羽狀復(fù)葉，清洗備用；
2)在超凈工作臺(tái)上，將清洗干凈的枝條依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并沖洗；
3)剝出枝條內(nèi)的莖尖，切下先端部分接入培養(yǎng)基中放在培養(yǎng)室中培養(yǎng)；
4)培養(yǎng)一段時(shí)間后，莖尖分化增殖形成若干不定芽，將不定芽轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中培
養(yǎng)；
5)培養(yǎng)一段時(shí)間后，將不定芽生長(zhǎng)形成的嫩莖切下，經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后，形成健壯的 組培生根苗。所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟1)中采集新生枝條前一個(gè) 月每隔7-10d整株噴灑700倍-900倍多菌靈；采集后的枝條，剪除羽狀復(fù)葉，自來(lái)水沖洗干 凈，洗潔精溶液浸泡5-lOmin，再用自來(lái)水沖洗0. 3-0. 6h備用。所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟2)中酒精濃度為70%_80%， 浸泡時(shí)間為20-30s，倒掉酒精后無(wú)菌水沖洗4-5次，然后加入0. 05%-0. 2%升汞溶液，浸泡8-10 min，其間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液用無(wú)菌水沖洗7_8次。所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟3)中枝條消毒后用無(wú)菌刀 片剝?nèi)∏o尖，切下先端長(zhǎng)度為3-6mm的部分，接入配制好的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基中；誘導(dǎo)分化培 養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 5-1. Smg-L"1 6-芐氨基嘌呤、0. 05-0. 15 mg·!/1吲哚丁酸、 2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0止。所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟4)中培養(yǎng)室中培養(yǎng)溫度 為25士2 °C，光照時(shí)間ll_13h/d，光強(qiáng)1500-2000LX ；莖尖接入培養(yǎng)基60d_65d，莖尖分化 形成新芽，并長(zhǎng)出幼嫩枝條，將長(zhǎng)于0. 4-0. 6 cm幼嫩枝條切割成0. 5-1. Ocm的莖段轉(zhuǎn)接入 增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基中添加0.5-1. 5 mg-r1 6-芐氨基嘌呤、0. 1-0. 2 mg.L—1吲哚丁酸、2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0止。所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟5)中莖段在增殖培養(yǎng)基培 養(yǎng)60d-65d，莖段增殖形成不定芽，并抽生出嫩莖，將莖段分化生長(zhǎng)出的長(zhǎng)度超過(guò)2-4 cm的 嫩莖切下，接入生根培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS培養(yǎng)基中添加0. 1-0. 5 mg·!/1吲哚 丁酸、0. 05-0. 15 mg.L—1萘乙酸、1-3%的蔗糖、0. 5-0. 8%的瓊脂和0. 1-0. 3 g.L-1活性炭制 成，至培養(yǎng)基PH為6. 3-6. 7止；培養(yǎng)后60-75d后，形成健壯的生根苗。所述的MS培養(yǎng)基、洗潔精可由市場(chǎng)上直接購(gòu)得。所述的BA為6-芐氨基嘌呤，IBA 為吲哚丁酸，NAA為萘乙酸。上述紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，成活率高、繁殖速度快，增殖系數(shù)達(dá)到7. 3，生根 率達(dá)到87%，得到的紅葉南天竹品質(zhì)優(yōu)良，具有廣闊的市場(chǎng)前景。本申請(qǐng)文件中涉及的百分含量除另有說(shuō)明外，均指重量百分含量。
具體實(shí)施例方式現(xiàn)結(jié)合本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1
1)從紅葉南天竹實(shí)生苗中選取健康、觀(guān)賞性狀表現(xiàn)典型的植株作為材料，采集新生枝 條前一個(gè)月每隔8d整株噴灑800倍多菌靈，在每年3-5月里晴天的上午剪取新枝，去除羽 狀復(fù)葉，用自來(lái)水沖洗表面灰塵，然后用洗潔精溶液浸泡7min，再用自來(lái)水沖洗0. 5h備用；
2)在超凈工作臺(tái)上，將清洗干凈的枝條用75%的酒精溶液浸泡25s，倒掉酒精后用無(wú)菌 水沖洗5次，再加入0. 1%升汞溶液浸泡9min，其間不斷搖動(dòng)，然后倒掉升汞溶液用無(wú)菌水沖 洗8次備用；
3)用滅菌的刀片剝出枝條上的莖尖，切取長(zhǎng)度為5mm莖尖先端，接入配制好的誘導(dǎo)分 化培養(yǎng)基中放置培養(yǎng)室中培養(yǎng)；培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基中添加1.0 mg-r1 BA、0. 1 mg-Γ1 IBA、3%的蔗糖和0. 7%的瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為6. 0止；
4)培養(yǎng)室中培養(yǎng)溫度為25°C，光照時(shí)間12h/d，光強(qiáng)1500Lx；莖尖在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上 培養(yǎng)60d，分化形成若干新芽，并抽生幼嫩枝條，將其中大于0. 5cm的幼嫩枝條切下，分割成 0. 5cm的莖段，轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；增殖培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基中添加1. 5 mg·!/1 ΒΑ、0· 1 mg.L—1 IBA、3%的蔗糖和0. 7%的瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為6. 0止；
5)莖段在增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)60d，莖段增殖形成不定芽，并抽生出嫩莖，將莖段分化生長(zhǎng) 出的長(zhǎng)度超過(guò)3cm的嫩莖切下，接入生根培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS培養(yǎng)基中添加0. 25 mg.I^IBA、?！?1 mg-L^1NAA,2%的蔗糖、0. 7%的瓊脂和0. 2 g-Γ1活性炭制成，至培養(yǎng)基 PH為6. 5止；繼續(xù)培養(yǎng)后65d后，形成健壯的生根苗。實(shí)施例2:
步驟1)中每隔7d整株噴灑700倍多菌靈，洗潔精溶液浸泡5min，自來(lái)水沖洗0. 3h ；步 驟2)中酒精濃度為70%，浸泡時(shí)間為30s，倒掉酒精后無(wú)菌水沖洗4次，然后加入0. 05%升汞 溶液，浸泡時(shí)間為10 min，其間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液用無(wú)菌水沖洗7次；步驟3)中切下 先端長(zhǎng)度為3mm的部分，培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基，添加0. Smg-L^BA.O. lSmg.I^IBA、〗。/。的蔗 糖和0. 8%的瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為5. 8止；步驟4)中培養(yǎng)溫度為27°C，光照時(shí)間Ilh/ d，光強(qiáng)2000Lx ；將其中大于0. 6cm的幼嫩枝條切下，分割成0. 6cm的莖段；增殖培養(yǎng)基配方 為MS培養(yǎng)基中添加0.5 mg.L—1 ΒΑ、0·15 mg.L—1 IBA、4%的蔗糖和0. 8%的瓊脂制成，至培養(yǎng) 基PH為5. 8止；步驟5)中莖段在增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)65d，將莖段分化生長(zhǎng)出的長(zhǎng)度超過(guò)2 cm 的嫩莖切下，生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS培養(yǎng)基中添加0. 1 mg-L^IBA.O. 05 mg-L^1NAA,3% 的蔗糖、0. 6%的瓊脂和0. 3 g.L-1活性炭制成，至培養(yǎng)基pH為6. 3止；繼續(xù)培養(yǎng)后60d后， 形成健壯的生根苗；其它步驟同實(shí)施例1。實(shí)施例3 步驟1)中每隔9d整株噴灑900倍多菌靈，洗潔精溶液浸泡lOmin，自來(lái) 水沖洗0. 6h ；步驟2)中酒精濃度為80%，浸泡時(shí)間為20s，然后加入0. 15%升汞溶液，浸泡 時(shí)間為9 min，其間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液用無(wú)菌水沖洗7次；步驟3)中切下先端長(zhǎng)度為 4mm的部分，培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基中添加1.5 mg.L—1 ΒΑ、0. 05 mg.L—1 IBA、5%的蔗糖和 0. 5%的瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為5. 9止；步驟4)中培養(yǎng)溫度為26°C，光照時(shí)間llh/d，光 強(qiáng)1600Lx ；將其中大于0. 6cm的幼嫩枝條切下，分割成1. Ocm的莖段；增殖培養(yǎng)基配方為MS 培養(yǎng)基中添加1. Smg-L"1 ΒΑ、0· 05 mg.L—1 IBA、5%的蔗糖和0. 6%的瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH 為5. 9止；步驟5)中莖段在增殖培養(yǎng)基培養(yǎng)62d，將莖段分化生長(zhǎng)出的長(zhǎng)度超過(guò)4 cm的嫩 莖切下，生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS培養(yǎng)基中添加0. 30 mg-L^IBA.O. 15 π^Ι^ΝΑΑΙ/。的蔗 糖、0. 8%的瓊脂和0. 1 g-Γ1活性炭制成，至培養(yǎng)基pH為6. 7止；培養(yǎng)后70d后，形成健壯 的生根苗；其它步驟同實(shí)施例1。實(shí)施例4 步驟1)中洗潔精溶液浸泡9min，自來(lái)水沖洗0. 4h ；步驟2)中酒精濃度 為78%，浸泡時(shí)間為23s ；步驟3)中培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基中添加1.2 mg-Γ1 BA,0. OSmg-L"1 IBA,4%的蔗糖和0. 6%的瓊脂制成；步驟4)中培養(yǎng)溫度為24°C，光照時(shí)間13h/d，光強(qiáng) 1700Lx ；增殖培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基中添加1. 2 mg.L—1 ΒΑ、0· 09 mg.L—1 IBA、3%的蔗糖和 0. 5%的瓊脂制成；步驟5)中生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS培養(yǎng)基中添加0. 5 mg-L^IBA.O. 12 mg.I^NAAJ/o的蔗糖、0. 6%的瓊脂和0. 25 g.L-1活性炭制成，至培養(yǎng)基pH為6. 6止；培養(yǎng) 后75d后，形成健壯的生根苗；其它步驟同實(shí)施例1。實(shí)施例5 步驟1)中每隔IOd整株噴灑650倍多菌靈，洗潔精溶液浸泡6min ；步驟 2)中升汞溶液濃度為0. 2%，浸泡時(shí)間為8 min，倒掉升汞溶液用無(wú)菌水沖洗8次；步驟4)中 培養(yǎng)溫度為23°C，光照時(shí)間12h/d，光強(qiáng)2000Lx ；其它步驟同實(shí)施例1。采用上述實(shí)施例1-5組織培養(yǎng)方法得到的紅葉南天竹生根苗，成活率高、繁殖速 度快，增殖系數(shù)達(dá)到7. 3，生根率達(dá)到87%。以下結(jié)合相應(yīng)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。試驗(yàn)1.設(shè)置增殖培養(yǎng)基中不同的激素配比試驗(yàn)，BA濃度4個(gè)梯度0. 5 mg-Γ1、1.0 mg.L-1、1.5 mg.L-1、2· 0 mg·!/1，ΙΒΑ2 個(gè)濃度梯度 0. 1 mg·!/1、。. 2mg·!^，并設(shè)立對(duì)照，
見(jiàn)表1。
權(quán)利要求
1.紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括以下步驟1)從紅葉南天竹實(shí)生苗中選取健康、觀(guān)賞性狀表現(xiàn)典型的植株作為材料；在晴天的上 午，剪取新枝，去除羽狀復(fù)葉，清洗備用；2)在超凈工作臺(tái)上，將清洗干凈的枝條依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并沖洗；3)剝出枝條內(nèi)的莖尖，切下先端部分接入培養(yǎng)基中放在培養(yǎng)室中培養(yǎng)；4)培養(yǎng)一段時(shí)間后，莖尖分化增殖形成若干不定芽，將不定芽轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；5)培養(yǎng)一段時(shí)間后，將不定芽生長(zhǎng)形成的嫩莖切下，經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后，形成健壯的 組培生根苗。
2.如權(quán)利要求1所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟1)中采集新生 枝條前一個(gè)月每隔7-10d整株噴灑700倍-900倍多菌靈；采集后的枝條，剪除羽狀復(fù)葉，自 來(lái)水沖洗干凈，洗潔精溶液浸泡5-lOmin，再用自來(lái)水沖洗0. 3-0. 6h備用。
3.如權(quán)利要求1所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟2)中酒精濃度 為70%-80%，浸泡時(shí)間為20-30s，倒掉酒精后無(wú)菌水沖洗4-5次，然后加入0. 05%-0. 2%升汞 溶液，浸泡8-10 min，其間不斷搖動(dòng)，倒掉升汞溶液用無(wú)菌水沖洗7-8次。
4.如權(quán)利要求1所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟3)中枝條消 毒后用無(wú)菌刀片剝?nèi)∏o尖，切下先端長(zhǎng)度為3-6mm的部分，接入配制好的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基 中；誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的配方為MS培養(yǎng)基中添加0. 5-1. Smg-L-1 6-芐氨基嘌呤、0. 05-0. 15 mg.L—1吲哚丁酸、2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0止。
5.如權(quán)利要求1所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟4)中培養(yǎng)室中 培養(yǎng)溫度為25士2°C，光照時(shí)間ll_13h/d，光強(qiáng)1500-2000LX ；莖尖接入培養(yǎng)基60d_65d，莖 尖分化形成新芽，并長(zhǎng)出幼嫩枝條，將長(zhǎng)于0. 4-0. 6 cm幼嫩枝條切割成0. 5-1. Ocm的莖段 轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基配方為MS培養(yǎng)基中添加0.5-1. 5 mg-r1 6-芐氨基嘌呤、 0. 1-0. 2 mg.L—1吲哚丁酸、2-5%蔗糖和0. 5-0. 8%瓊脂制成，至培養(yǎng)基pH為5. 8-6. 0止。
6.如權(quán)利要求1所述的紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟5)中莖段在增 殖培養(yǎng)基培養(yǎng)60d-65d，莖段增殖形成不定芽，并抽生出嫩莖，將莖段分化生長(zhǎng)出的長(zhǎng)度超 過(guò)2-4 cm的嫩莖切下，接入生根培養(yǎng)基；生根培養(yǎng)基的配方為1/2MS培養(yǎng)基中添加0. 1-0. 5 mg.L—1 吲哚丁酸、0. 05-0. 15 mg.L—1 萘乙酸、1-3% 的蔗糖、0. 5-0. 8% 的瓊脂和 0. 1-0. 3 g-Γ1 活性炭制成，至培養(yǎng)基PH為6. 3-6. 7止；培養(yǎng)后60-75d后，形成健壯的生根苗。
全文摘要
紅葉南天竹的組織培養(yǎng)方法，屬于植物栽培技術(shù)領(lǐng)域。包括以下步驟1)從紅葉南天竹實(shí)生苗中選取健康、觀(guān)賞性狀表現(xiàn)典型的植株作為材料；在晴天的上午，剪取新枝，去除羽狀復(fù)葉，清洗備用；2)在超凈工作臺(tái)上，將清洗干凈的枝條依次用酒精溶液、升汞溶液浸泡消毒并沖洗；3)剝出枝條內(nèi)的莖尖，切下先端部分接入培養(yǎng)基中；4)培養(yǎng)一段時(shí)間后，莖尖分化增殖形成若干不定芽，將不定芽轉(zhuǎn)接入增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)；5)培養(yǎng)一段時(shí)間后，將不定芽生長(zhǎng)形成的嫩莖切下，經(jīng)生根培養(yǎng)基培養(yǎng)后，形成健壯的組培生根苗。該組織培養(yǎng)方法成活率高、繁殖速度快，增殖系數(shù)達(dá)到7.3，生根率達(dá)到87%，得到的紅葉南天竹品質(zhì)優(yōu)良，具有廣闊的市場(chǎng)前景。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102138526SQ20111007220
公開(kāi)日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2011年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月24日
發(fā)明者張俊林, 王春, 邵春榮, 鄭勇平 申請(qǐng)人:浙江森禾種業(yè)股份有限公司