專利名稱：：益生菌培養(yǎng)基及其微生物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種微益生菌培養(yǎng)基及其微生物制劑，特別涉及一種含有大豆肽為氮源的益生菌培養(yǎng)基及其微生物制劑。
背景技術(shù)：
：大豆肽粉是以大豆、豆粕或大豆蛋白為主要原料，用酶解法或微生物發(fā)酵法生產(chǎn)的，主要成分為分子量分布在10000Dalton以下的肽，產(chǎn)品外觀為白色或淡黃色粉末。大豆蛋白肽是小分子肽類，除了營養(yǎng)豐富，易于吸收，還具有降低血壓，降低膽固醇，改善脂類代謝，防止動脈硬化，促進(jìn)大腦和神經(jīng)發(fā)育等功能。益生菌系一種對人體有益的細(xì)菌，它們可直接作為食品添加劑服用，以維持腸道菌叢的平衡。在國外已開發(fā)出數(shù)以百計(jì)的益生菌保健產(chǎn)品，其中包括含益生菌的酸牛奶、酸乳酪、酸豆奶以及含多種益生菌的口服液、片劑、膠囊、粉末劑等等。迄今為止，科學(xué)家已發(fā)現(xiàn)的益生菌大體上可分成三大類，其中包括①乳桿菌類(如嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、詹氏乳桿菌、拉曼乳桿菌等)；②雙歧桿菌類(如長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、卵形雙歧桿菌、嗜熱雙歧桿菌等)；③革蘭氏陽性球菌(如糞鏈球菌、乳球菌、中介鏈球菌等)。此外，還有一些酵母菌與酶亦可歸入益生菌的范疇。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于公開一種含有大豆肽為氮源的益生菌培養(yǎng)基及其微生物制劑。本發(fā)明含有大豆肽為氮源的益生菌培養(yǎng)基主要組成包括大豆肽4-40重量份(優(yōu)選4-20重量份)，加入液體乳至100重量份，上述培養(yǎng)基中還可以加入碳源2-20重量份(優(yōu)選2-7重量份)。本發(fā)明微生物制劑原料主要組成包括大豆肽4-40重量份(優(yōu)選4-20重量份，更優(yōu)選4-10重量份)，益生菌0.1-1重量份(活菌數(shù)107重量份)，加入液體乳100至重量份，上述生物制劑中還可以加入碳源2-20重量份(優(yōu)選2-7重量份)。液體乳是指牛奶或其他液體奶制品，上述碳源是指麥芽低聚糖、異麥芽低聚糖、低聚果糖或者大豆低聚糖，上述益生菌是指乳桿菌類、雙歧桿菌類，特別是指保加利亞乳桿菌Lactobacillusbulgaricus、嗜酸乳桿菌Lactobacillusacidophilus，青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)或嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacteriuminfantis)。上述原料大豆肽是按照專利號為00103392.1生產(chǎn)的大豆肽，或是按照現(xiàn)有技術(shù)所制備的大豆肽。大豆肽可以用其他生物活性肽替代，例如玉米肽，酪蛋白活性肽。本發(fā)明微生物制劑可以用可接受的食品添加劑或常用輔料制成保健食品，其中液體原料可用酸牛奶、酸乳酪、豆奶、酸豆奶以及其他能夠促進(jìn)益生菌生長的物質(zhì)一種或多種替代。本發(fā)明微生物制劑可以制成含多種益生菌的口服液、片劑、膠囊、粉末劑、水性混懸劑或溶液劑等保健食品?？梢耘c藥物上可接受的載體一起制成藥物組合物，例如片劑、膠囊、口服液、注射劑或滴丸等。用本發(fā)明微生物制劑制備所需的各種劑型時，可以按照藥學(xué)領(lǐng)域3的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。優(yōu)選本發(fā)明的這類藥物制劑可以被口服、腸胃外給藥。優(yōu)選制劑是口服的。在口用片劑的情況下，常用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常還加入潤滑劑，例如硬脂酸鎂。就按膠囊劑型口服給藥而言，有用的稀釋劑包括乳糖和干燥的玉米淀粉。當(dāng)口用需要水性混懸劑時，活性成分是與乳化和懸浮劑聯(lián)用的。如果需要的話，還可以加入某些甜味劑、矯味劑或著色劑。本發(fā)明生物制劑的制備方法將液體乳加熱到5(TC時，先后與氮源、碳源混合，干燥成粉末，與微膠囊包埋的凍干菌株混合制成各種劑型。下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例一大豆肽增殖作用試驗(yàn)1、試驗(yàn)方案與步驟菌種和培養(yǎng)基的初篩，分別用經(jīng)過大豆肽改良的培養(yǎng)基對上述菌株進(jìn)行單獨(dú)培養(yǎng)，篩選各自比較合適的培養(yǎng)基，初篩出增殖效果最好的菌種和培養(yǎng)基；摸索大豆肽的最佳添加量及益生菌對大豆肽的可耐受程度的實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)步驟菌種的活化、培養(yǎng)基配制(1)菌禾中-Lactobacillusbulgaricus，Lactobacilllusacidophilus;(2)培養(yǎng)基1:蛋白胨1%、牛肉膏1%、酵母膏0.5%、K2HP040.2%、檸檬酸二銨0.2%、乙酸鈉0.5%、葡萄糖2%、MgS04.7H200.058%，MnS04.4H200.025%;(3)培養(yǎng)基2:液體乳(市售龍丹牌液體乳)(4)將菌種接入滅菌后的液體乳培養(yǎng)基中活化。(5)將活化后的菌種接入加入不同量大豆肽的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)。2、促生長增殖試驗(yàn)(1)培養(yǎng)方法37t:恒溫培養(yǎng)培養(yǎng)18小時。分三批在液體培養(yǎng)基中加入如下百分比的大豆肽①0.5%、1%、2%;②3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、腦；@4%、5%、6%、7%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表1不同百分比大豆肽培養(yǎng)基4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表3不同百分比大豆肽培養(yǎng)基<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、試驗(yàn)結(jié)果在保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌的培養(yǎng)基中，加入大豆肽，可以改善發(fā)酵液的狀態(tài)，提高其凝固性，同時大豆肽的味道增大，初步實(shí)驗(yàn)表明，對于保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌在肽加量3%7%范圍內(nèi)可以提高發(fā)酵液中的活菌數(shù)量。實(shí)驗(yàn)例二大豆肽增殖作用試驗(yàn)1、試驗(yàn)方案與步驟菌種的復(fù)壯活化，分別用市售液態(tài)乳和乳粉做培養(yǎng)基，在厭氧條件下對青春雙歧和嬰兒雙歧進(jìn)行反復(fù)的活化培養(yǎng)；摸索大豆肽的最佳添加量及不同種低聚糖對菌種的促進(jìn)作用。試驗(yàn)步驟菌種的活化、培養(yǎng)基配制菌禾中青春雙歧桿菌(Bifidobacteriumadolescentis)嬰兒雙歧桿菌(Bifidobacteriuminfantis)培養(yǎng)基(1)分離純化用培養(yǎng)基MRSMRS培養(yǎng)基蛋白胨1%、牛肉膏1%、酵母膏0.5%、K2HP040.2%、檸檬酸二銨0.2%、乙酸鈉0.5%、葡萄糖2%、MgS04.7H200.058%，MnS04.4H200.025%;(2)菌種活化培養(yǎng)基液體乳(市售龍丹牌液體乳)(3)發(fā)酵培養(yǎng)基液體乳、大豆肽和低聚糖按不同濃度配制。2、促生長增殖試驗(yàn)(1)大豆肽不同加量的單因素實(shí)驗(yàn)先將青春雙歧桿菌Bifidobacteriumadolescentis接入滅菌后的液體乳培養(yǎng)基中活化，再將活化后的菌種接入不同量大豆肽的液體培養(yǎng)基中，37t:靜止厭氧培養(yǎng)20小時。表4青春雙歧桿菌大豆肽不同加量實(shí)驗(yàn)序號肽添力口量(％)生長狀態(tài)菌落數(shù)(個/mL)10全凝固2.15x101321全凝固2.3x101332全凝固9.8x101343全凝固9.9x101354全凝固1.13x101465全凝固1.03x101476全凝固9.3x101387全凝固8.8x101398全凝固9.1x1013109全凝固4.07x10141110全凝固1.36x10"(2)不同低聚糖單因素實(shí)驗(yàn)先將青春雙歧桿菌Bifidobacteriumadolescentis接入滅菌后的液體乳培養(yǎng)基中活化，再將活化后的菌種接入添加量3%的不同種類低聚糖液體，培養(yǎng)基中，37t:靜止厭氧培養(yǎng)20小時。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表表5青春雙歧桿菌不同低聚糖實(shí)驗(yàn)種類肽添加量(％)生長狀態(tài)菌落數(shù)(個/mL)麥芽低聚糖1.5半凝固、斜放流動5x1017異麥芽低聚糖1.5半凝固、斜放流動3.1x1018異麥芽低聚糖1.5半凝固、斜放流動低聚果糖1.5半凝固、斜放流動1.53xio19大豆低聚糖1.5半凝固、斜放流動2.8x10173、試驗(yàn)結(jié)果在青春雙歧桿菌的培養(yǎng)基中，加入大豆肽，可以改善發(fā)酵液的狀態(tài)，提高其凝固性，同時大豆肽的味道增大，初步實(shí)驗(yàn)表明，對于青春雙歧桿菌在肽加量3%11%范圍內(nèi)可以提高發(fā)酵液中的活菌數(shù)量。嬰兒雙歧桿菌Bifidobacteriuminfantis活化類似，大豆肽培養(yǎng)結(jié)果理想，隨著肽添加量的增加，培養(yǎng)液的肽味也在增加。不同種類低聚糖可以提高發(fā)酵液中的活菌數(shù)量。實(shí)驗(yàn)例三發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源的優(yōu)選實(shí)驗(yàn)取實(shí)驗(yàn)例1活化后的Lactobacillusbulgaricus菌禾中禾口Lactobacillusacidophilus菌種在下列發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，37。C靜止厭氧培養(yǎng)20小時，計(jì)算菌落數(shù)。表6不同氮源菌落數(shù)發(fā)酵培養(yǎng)基Zs"o力scj77f/51Zw7gar/cws菌落數(shù)、發(fā)酵培養(yǎng)基添加量(％)4%5%6%7%大豆肽>10u>,>10u大豆蛋白胨〈1010〈1010<101G〈1010胰蛋白胨<1010<101G<1010酪蛋白活性肽〈1010〈1010<1010〈1010牛肉浸膏<101Q<1010〈1010<101()表7不同氮源菌落數(shù)發(fā)酵培養(yǎng)基Zact。力aw'7iiA5sc/c/b;p力Yi"s菌落數(shù)發(fā)酵培養(yǎng)基添加量(％)4%5%6%7%大豆肽3.8x1010>10U>10u>10u大豆蛋白胨<101Q〈101()<101()〈1010胰蛋白胨〈101Q〈101Q<1010〈101Q酪蛋白活性肽<101()〈1010<1010〈101Q牛肉浸膏<1010<1010<1010<101Q結(jié)論通過以上對活化后的Lactobacillusbulgaricus菌禾中禾口Lactobacillusacidophilus菌種在不同發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，證實(shí)大豆肽對于Lactobacillusbulgaricus菌禾中禾口Lactobacillusacidophilus菌禾中是優(yōu)質(zhì)氣源。實(shí)驗(yàn)例四發(fā)酵培養(yǎng)基中氮源的優(yōu)選實(shí)驗(yàn)取實(shí)驗(yàn)例1活化后的Bifidobacteriumadolescentis菌種在下列發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，37t:靜止厭氧培養(yǎng)20小時，計(jì)算菌落數(shù)。8表8不同氮源菌落數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>結(jié)論通過以上對活化后的Bifidobacteriumadolescentis菌種在不同發(fā)酵甸養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，證實(shí)大豆肽對于Bifidobacteriumadolescentis菌種是優(yōu)質(zhì)氮源。具體實(shí)施方式如下實(shí)施例1:益生菌培養(yǎng)基的配方制備表9益生菌培養(yǎng)基的配方<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例2:肽類益生菌乳品飲料配方表10益生菌液體制劑的配方將液體乳加熱到5(TC時，先后與氮源、碳源混合，干燥成粉末，與微膠囊包埋的凍干菌株混合制成各種劑型。權(quán)利要求一種益生菌培養(yǎng)基，其特征在于該益生菌培養(yǎng)基的氮源為大豆肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌培養(yǎng)基，其特征在于該益生菌培養(yǎng)基的的原料主要組成包括大豆肽和液體乳，其中大豆肽4-40重量份，加入液體乳原料至100重量份。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌培養(yǎng)基，其特征在于該益生菌培養(yǎng)基的的原料組成包括大豆肽4-40重量份，碳源2-20重量份，加入液體乳原料至100重量份。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的益生菌培養(yǎng)基，其特征在于碳源是指果糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇，優(yōu)選低聚果糖。5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4所述的微生物制劑，其特征在于該微生物制劑原料中的大豆肽的重量份為4-20重量份；碳源的重量份為2-7重量份。6.—種微生物制劑，其特征在于該微生物制劑原料主要組成包括大豆肽4-40重量份，益生菌0.1-1重量份，益生菌活菌數(shù)為107重量份，加入液體乳原料至100重量份。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的微生物制劑，其特征在于該微生物制劑原料組成為大豆肽4-40重量份，益生菌0.1-1重量份，碳源2-20重量份，加入液體乳原料至100重量份。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微生物制劑，其特征在于該微生物制劑原料中碳源是指果糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇或低聚果糖。9.根據(jù)權(quán)利要求6、7或8所述的微生物制劑，其特征在于該微生物制劑原料中的大豆肽的重量份為4-20重量份；碳源的重量份為2-7重量份。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的微生物制劑的制備方法，其特征在于該方法為將碳源加熱到5(TC時，再與大豆肽，液體乳(液體牛奶)混合，干燥成粉末，與微膠囊包埋的凍干菌株混合制成各種劑型。全文摘要本發(fā)明目的在于公開一種益生菌培養(yǎng)基及其微生物制劑。本發(fā)明的益生菌培養(yǎng)基及其微生物制劑的氮源為大豆肽。益生菌培養(yǎng)基的原料主要組成包括大豆肽和液體乳，還可以加入碳源。微生物制劑的原料主要組成包括大豆肽，益生菌和液體乳，還可以加入碳源。本發(fā)明同時公開微生物制劑的制備方法。文檔編號A23P1/00GK101768557SQ20081018808公開日2010年7月7日申請日期2008年12月30日優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日發(fā)明者劉樹軍申請人:哈爾濱三樂生物工程有限公司