專利名稱：一種含有枯草芽孢桿菌的防腐保鮮劑的制作方法
背景技術(shù)：
水果蔬菜在采摘后貯藏運輸?shù)倪^程中，由于微生物侵染而發(fā)生腐爛，或者由于采后自然的衰老，品質(zhì)下降，甚至最終失去食用價值，這些是導(dǎo)致水果蔬菜收獲后損失的主要原因。據(jù)統(tǒng)計，全世界平均年損失率為25％，發(fā)展中國家腐爛損失率則更高，達(dá)到40％～50％。目前，世界各國采用的防腐保鮮方法很多，分為物理保鮮法、化學(xué)保鮮法、薄膜保鮮法三大類，其中以化學(xué)保鮮法保鮮應(yīng)用的歷史最長，效果最好。托布津、苯來特、特克多、多菌靈等等是一些常用的果蔬化學(xué)防腐保鮮劑。但是，進(jìn)入二十世紀(jì)九十年代以后，由于這些化學(xué)制劑對人的毒副作用愈來愈受人重視，其中大多數(shù)制劑已先后被美國環(huán)境保護(hù)局和歐盟相應(yīng)機(jī)構(gòu)宣布禁止使用。
1980年以來，世界各國的科學(xué)家紛紛研發(fā)能夠用于果蔬防腐保鮮的生物制劑。先后有將啤酒酵母、哈茨木霉、假單胞菌、球菌和枯草芽孢桿菌用于果蔬貯藏病害防治的報道并有產(chǎn)品登記。國內(nèi)在1990年以來先后報道了D-67-2、Bs-98、Bs-208等幾株對植物真菌病原菌有拮抗作用的細(xì)菌菌株，它們主要被用于番茄、草莓的灰霉病，水稻紋枯病，蘆筍莖枯病等等田間病害的防治。
水果蔬菜往往是人們直接入口的食物，每天攝入量很大，而且可能是連同果皮一起吃掉。因此為了安全起見，對它們的防腐劑和保鮮劑要求很高?？莶菅挎邨U菌是可以從人與動物身上或體內(nèi)分離到的有益微生物。很多試驗證明了它對人類和動物的健康有幫助。早在二十世紀(jì)就有人將其生產(chǎn)為藥片供口服，以改善胃腸消化功能。以枯草芽孢桿菌制劑作為果蔬防腐劑，從而替代多菌靈、苯來特、特克多等化學(xué)合成的殺真菌劑，對保證食品安全大有幫助。在果蔬防腐保鮮方面國內(nèi)有商業(yè)開發(fā)價值的枯草芽孢桿菌菌株未見有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085的發(fā)酵液和活芽孢的防腐保鮮劑?？莶菅挎邨U菌CCTCC M204085已于2004年12月2日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)(地址在武漢大學(xué))，保藏號為CCTCC M204085。
本發(fā)明的另一目的是提供所述防腐保鮮劑的用途，用于水果蔬菜貯藏期的保鮮防腐。
本發(fā)明的進(jìn)一步目的是提供一種枯草芽孢桿菌CCTCC M204085。
發(fā)明人從土壤中分離得到的二千多個細(xì)菌菌株中篩選得到的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株。對比試驗發(fā)現(xiàn)它在果蔬防腐保鮮的效果優(yōu)于對照菌株。發(fā)明人以這個菌株為基礎(chǔ)研究了它的生物學(xué)特性，發(fā)酵工藝，制劑配方，應(yīng)用技術(shù)與方法，最終完成了本發(fā)明，形成了一類以枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌發(fā)酵液或芽孢為主要活性成份的果蔬防腐保鮮劑。
本發(fā)明提供了一種的防腐保鮮劑，其中含有枯草芽孢桿菌CCTCCM204085。
本發(fā)明所述的防腐保鮮劑，它是可濕性粉劑、水懸浮劑、泡騰顆粒、片劑。
可濕性粉劑各組分的重量百分比為菌細(xì)胞含量5×108～1×1010個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％木素磺酸鈉/鈣 0.1％～20％硬脂酸鈉 0.1％～3％白碳黑(膨化) 2％～10％絹云母粉 余量pH4.0～7.0。
水懸浮劑各組分的重量百分比為菌細(xì)胞含量5×108～3×109個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％Chitosan 0.1％～10％
羧甲基纖維素鈉0％～10％黃原膠0％～10％苯甲酸鈉 0.5％～2％水余量pH2.0～7.0。
泡騰顆粒、片劑各組分的重量百分比為菌細(xì)胞含量5×108～3×1010個CFU/g表面活性劑0.5％～20％崩解劑(酸/堿性化合物) 3％～30％粘合劑2％～25％助崩劑2％～15％填充物余量。
本發(fā)明所述的防腐保鮮劑，其中表面活性劑選自十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈣、木質(zhì)素磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈣、纖維素磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉中的一種或多種；崩解劑酸性化合物選自檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、己二酸、富馬酸、乳酸、硼酸中的一種或多種；堿性化合物選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀中的一種或多種；粘合劑選自聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇(聚合數(shù)12000～20000)中的一種或多種；助崩劑選自可溶性淀粉、糊精、羧甲基纖維素鈉中的一種或多種；填充劑選自硅藻土、輕質(zhì)碳酸鈣、絹云母粉中的一種或多種。
本發(fā)明所述的防腐保鮮劑，其特征在于，它是還含有化學(xué)殺菌劑的復(fù)配制劑。其中化學(xué)殺菌劑選自百菌清、特克多、米鮮胺、異菌脲、甲基托布津、農(nóng)利靈、三環(huán)唑、多菌靈的一種或多種。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述防腐保鮮劑的用途，將所述防腐保鮮劑用于水果蔬菜貯藏期間的防腐保鮮，防止青霉、綠霉、灰霉、輪紋病、黑斑病、輪霉病、褐腐病、酸腐病的侵染。其中水果蔬菜優(yōu)選蘋果、梨、柑、桔、橙、葡萄、花椰菜、西蘭花、蒜苔、韭菜、西紅柿。
本發(fā)明還提供一種枯草芽孢桿菌CCTCC M204085。
本發(fā)明中枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株的特征
a、個體形態(tài)特征枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株營養(yǎng)體為桿狀，兩端橢園，大小3.0×0.8(μm)，周生鞭毛。芽孢橢園形，大小1.7×0.7(μm)，芽孢生于菌體中間，芽孢不使芽孢囊膨大。
b、菌落形態(tài)枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株在牛肉汁蛋白胨瓊脂平板上培養(yǎng)時，單菌落明顯隆起，菌落邊緣波浪形，顏色淡黃色，質(zhì)地為不透明狀，不產(chǎn)生色素。肉湯靜置培養(yǎng)時形成菌膜，不形成菌環(huán)，培養(yǎng)液不渾濁無沉淀。
c、生理生化特性枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株與枯草芽孢桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株對比，生理生化特征相同H2O2酶反應(yīng)陽性，V.P.反應(yīng)陽性，硝酸鹽還原陽性，明膠水解，檸檬酸鈉利用，二羥基丙酮形成，酪素水解，淀粉水解，均呈陽性。D-葡萄糖、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇利用也都為陽性。利用葡萄糖不產(chǎn)氣。卵磷酯反應(yīng)，苯丙氨酸脫氫酶反應(yīng)，酪氨酸分解均呈陰性。7％NaCl濃度水溶液中可生長。最佳生長繁殖溫度30℃，53℃以上不生長?？莶菅挎邨U菌CCTCC M204085在V.P.培養(yǎng)液中生長后，培養(yǎng)液pH值為7.92。
d、與常見枯草芽孢桿菌的區(qū)別枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株從細(xì)菌分類學(xué)角度看，屬于枯草芽孢桿菌。與已報道過的枯草芽孢桿菌比較，本菌株的特點在于它們對青霉素的高度耐藥性。在青霉素濃度高達(dá)1000單位的濾紙片上點種枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株并移接到牛肉汁蛋白胨瓊脂平板上，該菌株可以很正常的生長繁殖形成菌苔并且對柑桔綠霉、灰霉病菌、輪紋病菌等指示菌產(chǎn)生抑菌圈。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株與國內(nèi)外已經(jīng)篩選得到的一些可以用于水果、蔬菜防腐的酵母菌和芽孢桿菌菌株相比，有使用效果好、芽孢存活率高、發(fā)酵菌數(shù)多等優(yōu)點。
生物體保藏說明枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址武漢大學(xué)，保藏編號CCTCC M204085，保藏日期2004年12月2日。
具體實施例方式
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085的防腐保鮮效果枯草芽孢桿菌CCTCC M204085對部分水果蔬菜的防腐保鮮扼要列表如下(見表1)表1枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌株對部分水果蔬菜防腐保鮮效果

*.TL-6為本發(fā)明人分離篩選得到的另一個枯草芽孢桿菌菌株(發(fā)明人可提供)。
**.為病指數(shù)值。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085的液體發(fā)酵工藝a、斜面菌種斜面菌種培養(yǎng)基配方常規(guī)的馬鈴薯蔗糖瓊脂(馬鈴薯去皮切片200克已煮汁，蔗糖20克，瓊脂15克，水1000ml，pH自然)。斜面菌種培養(yǎng)溫度28～32℃；培養(yǎng)時間3天。
b、液體發(fā)酵液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方葡萄糖0％～2％，豆餅粉0.3％～4.5％，酵母粉0.1％～1.2％，麥麩0％～2.5％，米粉0％～4％，魚粉0％～2.5％，玉米粉0％～4％，磷酸二氫鉀0.1％～0.8％，硫酸鎂0.1％～0.6％，NaCl 0％～1％。消前pH7.0～7.5。液體發(fā)酵溫度28℃～32℃，攪拌轉(zhuǎn)速120rpm/min～350rpm/min，通氣量1∶0.6～1.5，發(fā)酵周期因不同配方而變化，最短30小時，最長72小時，至芽孢囊完全形成且有30％左右芽孢脫落時放罐。
c、后處理方法發(fā)酵液經(jīng)碟片式離心機(jī)離心去水，留菌漿。將菌漿用噴霧干燥方法干燥得枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢原粉。原粉中菌量為1×1010cfu/g-3×1010cfu/g。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085固體發(fā)酵工藝a、種子制備斜面菌種的制備方法同上。
固體發(fā)酵培養(yǎng)基滅過菌后用液體搖瓶菌種(或種子罐發(fā)酵菌種)接種。種子發(fā)酵培養(yǎng)液配方為20％馬鈴薯煮汁當(dāng)水，加1％～3％葡萄糖，0％～0.5％NaCl，0.1％～2％蛋白胨，0％～0.8％酵母膏。
用斜面菌種制備孢子懸浮液后接種搖瓶或種子罐。發(fā)酵溫度28～30℃，搖床轉(zhuǎn)速200rpm/min(或發(fā)酵罐轉(zhuǎn)速120rpm/min～350rpm/min，通氣量0.6％～1.2％)。發(fā)酵至對數(shù)增殖中期為宜。
b、固體發(fā)酵培養(yǎng)基固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為麥麩2％～20％，豆餅粉1％～10％，玉米粉1％～10％，葡萄糖1％～10％，磷酸二氫鉀0.1％～2.0％，輕質(zhì)碳酸鈣0.3％～5％，大米粉0％～15％，用珍珠巖補(bǔ)足至100％(w/w)。水的用量為∶料∶水＝1∶1.0～1.3(w/w)。
固體發(fā)酵培養(yǎng)基配制完畢后用高壓蒸汽滅菌，121℃，維持30分鐘。
c、發(fā)酵工藝參數(shù)接種量1％～10％(v/w)。接種后，按通風(fēng)曲池法或盤架法進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵溫度28℃～32℃(控制料溫)，發(fā)酵周期48～120小時。以孢子囊完全成熟，且有30％左右芽孢脫落為判斷發(fā)酵終止的標(biāo)準(zhǔn)。
d、干燥與粉碎發(fā)酵結(jié)束后以熱風(fēng)風(fēng)干物料，熱風(fēng)溫度控制在55℃以下。物料干燥后先用溫升較低的粉碎機(jī)粉碎至60目～80目，過篩去除較粗的麩皮等雜質(zhì)。然后用氣流粉碎機(jī)再粉碎，過325目篩即成。此種粉體可以作為原粉使用，原粉中含菌量為1×1010cfu/g-1×1011cfu/g。
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085制備果蔬防腐保鮮劑a、可濕性粉劑可濕性粉劑配方十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％(w/w，下同)木素磺酸鈉 0.1％～20％膨化白碳黑 2％～20％枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原粉5×108～1×1010CFU/g絹云母粉 補(bǔ)充至100％上述原料按比例稱取，投入混合機(jī)械中，充分混勻后經(jīng)過噴射式氣流粉碎機(jī)，粉碎至325目過篩，包裝。
b、水懸劑枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原粉5×108～1×1010CFU/ml二甲苯 0％～10％十二烷基苯磺酸鈉 0.2％～20％Chitosan 0.1％～10％羧甲基纖維素鈉 0％～10％黃原膠 0％～10％苯甲酸鈉 0.5％～2％水 補(bǔ)充至100％pH 2.0～7.0(用稀鹽酸調(diào))上述原料按比例稱取后，投入配料池混勻，經(jīng)膠體磨磨至95％過325目篩后裝瓶。
c、泡騰劑(顆粒劑或片劑)
枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原粉5×108～3×1010個CFU/g十二烷基苯磺酸鈣/鈉 0.2％～20％崩解劑(酸/堿性化合物)3％～30％粘合劑 2％～25％助崩劑 2％～15％填充物 余量上述原料混合均勻后用壓片機(jī)壓片或者用擠壓造粒機(jī)造粒。
實施例1枯草芽孢桿菌CCTCC M204085液體發(fā)酵并制備芽孢原粉的工藝a、菌種準(zhǔn)備斜面菌種的培養(yǎng)基去皮馬鈴薯切成的薄片200克，加水1000ml煮汁(100℃，20分鐘)，去渣留汁。煮的過程中適時適量補(bǔ)水至煮出的汁為1000ml。加蔗糖20克，溶化。再加瓊脂15克，融化瓊脂(融化瓊脂的過程中亦要適量補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水)。pH自然。
按常規(guī)方法滅菌，做成斜面，預(yù)培養(yǎng)2天后，接種已活化過的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085原種，30℃±1℃恒溫培養(yǎng)3天。鏡檢95％以上的菌體都已形成芽孢時停止培養(yǎng)。
將上述培養(yǎng)好的試管斜面菌種用無菌水洗下，打散，使之成均勻的芽孢懸浮液，經(jīng)75℃恒溫水浴處理30分鐘。將此芽孢懸液冷至室溫后轉(zhuǎn)接茄子瓶斜面，每支試管斜面菌種接2-3個茄子瓶斜面。30℃±1℃恒溫培養(yǎng)12小時，再用無菌水洗下，振搖打散成菌懸液。用此菌懸液接種100L液體發(fā)酵罐。
b、發(fā)酵液體發(fā)酵培養(yǎng)基為葡萄糖2％，豆餅粉1.5％，酵母粉0.8％，麥麩1.0％，大米粉2％，玉米粉1.0％，磷酸二氫鉀0.3％，硫酸鎂0.3％，NaCl 0.5％。消前pH 8.0。
100L發(fā)酵罐中投料60L。121℃滅菌30分鐘。冷卻至30℃時接種上述菌懸液。液體發(fā)酵溫度29℃±1℃，攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，通氣量1∶1.2。發(fā)酵32小時左右，至芽孢囊形成率≥95％，而且有30％左右芽孢囊脫落時放罐。測得發(fā)酵原液活芽孢數(shù)為42×108cfu/ml。
c、制備原粉發(fā)酵液放罐后用HCl在酸化罐中調(diào)pH至pH4.0，經(jīng)碟片式離心機(jī)離心去水(分離因素≥8000g)，留菌漿。將菌漿中按體積加入2％(w/v)的娟云母粉(細(xì)度325目)，打漿。用噴霧干燥塔，將菌漿噴干成原粉。噴干時進(jìn)口風(fēng)溫180℃，出口風(fēng)溫70℃。經(jīng)檢測，原粉中活芽孢數(shù)5×1010cfu/g。
實施例2、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085固體發(fā)酵并制備原粉的工藝a、菌種準(zhǔn)備同實施例1。
b、固體發(fā)酵種子準(zhǔn)備固體發(fā)酵的種子在液體發(fā)酵罐中制備。其種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖2％，豆餅粉1.5％，酵母粉1％，輕質(zhì)碳酸鈣1％，玉米粉1.0％，KH2PO4 0.5％，MgSO40-3％，消前pH 8.0。高壓蒸汽滅菌后接準(zhǔn)備好的菌種，接種量為每200升種子液接1個茄瓶菌種。28℃-30℃通氣培養(yǎng)12小時，攪拌轉(zhuǎn)速250rpm，風(fēng)量1∶0.6逐步加大到1∶10。本實施中，發(fā)酵獲得種子液200升。
c、固體發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉8％，豆餅粉10％，麥麩20％，米粉10％，葡萄糖2％，珍珠巖50％。水與料的比為1∶1。高壓蒸汽121℃，滅菌1個小時(葡萄糖單獨加少量水滅菌，115℃，20分鐘)。滅菌在轉(zhuǎn)鍋中進(jìn)行，滅完后通過夾層進(jìn)自來水降溫至28℃。
d、接種與發(fā)酵以上固體培養(yǎng)基1噸(加水后)滅菌并降溫后，通過無菌管道將200升種子液和單獨滅菌的葡萄糖水均勻加入轉(zhuǎn)鍋內(nèi)的培養(yǎng)基物料中。邊接種邊轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)鍋，使種子液與物料混合均勻。將接好種的物料裝入發(fā)酵床，物料厚度10cm。間歇地通入無菌空氣進(jìn)行發(fā)酵，控制溫度為28℃～30℃。發(fā)酵周期為72小時。72小時時取樣鏡檢，在芽孢囊全部成熟并有30％左右芽孢脫落時中止發(fā)酵。本實施例發(fā)酵同步率≥96％。
e、發(fā)酵半成品干燥用40～45℃無菌熱風(fēng)大風(fēng)量吹發(fā)酵床上的物料，風(fēng)向由下而上。經(jīng)過12小時，發(fā)酵半成品風(fēng)干，含水量4.9％。
f、粉碎過篩制成原粉以錘片式粉碎機(jī)預(yù)粉碎一遍，細(xì)度達(dá)到80目。再進(jìn)噴射式氣流粉碎機(jī)粉碎第二遍，細(xì)度達(dá)到325目。測活芽孢數(shù)結(jié)果為6×1010cfu/g。經(jīng)過細(xì)度、活芽孢數(shù)、水份含量等指標(biāo)的檢測，均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。
實施例3、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085果蔬保鮮劑制劑生產(chǎn)方法(活芽孢水懸劑生產(chǎn))按實施例1方法進(jìn)行發(fā)酵，投料1000L。發(fā)酵結(jié)束后將發(fā)酵液經(jīng)過HCl酸化至pH4.0，用碟片式離心機(jī)離心，得到濃稠的菌漿300升。按菌漿的體積比，加入6％的十二烷基苯磺酸鈉(w/v)，1％的Chitosan(w/v)，2％羧甲基纖維素鈉(w/v)，1％苯甲酸鈉(w/v)，二甲苯5％(v/v)，共重345公斤。充分?jǐn)嚢韬髾z測制劑半成品中的活芽孢數(shù)，結(jié)果為110×108cfu/ml，符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求。包裝成1000ml一瓶的試驗樣品。
實施例4、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085果蔬保鮮劑制劑生產(chǎn)方法(可濕性粉劑)稱按實施例1生產(chǎn)的原粉(500×108cfu/g)100公斤，加入十二烷基苯磺酸鈉45kg，木素磺酸鈉22.5kg，硫酸銨45.0kg，白碳黑(膨化)90kg，絹云母粉147.5kg，合計重450kg。在混合機(jī)中混合1小時，再過氣流粉碎機(jī)，過325目篩。經(jīng)檢測，產(chǎn)品中活芽孢數(shù)為110×108cfu/g，符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。包裝為200克/袋。
實施例5、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085果蔬保鮮劑制劑生產(chǎn)方法(泡騰片劑)取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢原粉50公斤(500億cfu/g)，加入十二烷基磺酸鈉30公斤，可溶性淀粉17.5公斤，碳酸鈉15.75公斤，碳酸氫鈉13.75公斤充分混勻。再加入檸檬酸12.5公斤，富馬酸2公斤，酒石酸15.75公斤，羧甲基纖維素鈉25公斤，充分混勻。用絹云母粉補(bǔ)足至物料總重量為250公斤，再一次充分混勻。用壓片機(jī)將混好的物料壓片，成為每片重約2克的泡騰片劑。本實施例最后獲得片劑249.2公斤，片劑內(nèi)每克含活芽孢98.7億。
實施例6、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085與百菌清復(fù)配劑(可濕性粉)經(jīng)過室內(nèi)篩選試驗已證明枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉(以500億cfu/g計)與百菌清(折百計含量)下列配比具有明顯的增效作用枯草芽孢桿菌CCTCC M204085∶百菌清＝(5～1)∶(1～2)。以枯草芽孢桿菌CCTCCM204085∶百菌清＝2∶1為例。
稱取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉100公斤，百菌清(折百)50公斤(或75％可濕性粉劑67公斤)，十二烷基苯磺酸鈉20公斤，余量為高嶺土，補(bǔ)齊至200公斤。經(jīng)機(jī)械充分混合均勻后再用氣流粉碎機(jī)粉碎至325目以上，每100克一袋，包裝為成品。本實施例得到成品194公斤，成品中枯草芽孢桿菌CCTCC M204085活芽孢含量為250億cfu/g，百菌清含量25％。使用時加水稀釋500～600倍浸果3分鐘左右晾干即可。
實施例7、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085與異菌脲(撲海因)復(fù)配劑(可濕性粉)室內(nèi)篩選試驗證明枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉(500億cfu/g)與異菌脲50％可濕性粉，在下列配比條件下有明顯的增效作用枯草芽孢桿菌CCTCC M204085∶異菌脲＝(10～2)∶(1～5)。以枯草芽孢桿菌CCTCCM204085∶異菌脲＝1∶1為例。
稱取500億cfu/g含量的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085母粉100公斤，異菌脲50％可濕性粉100公斤，加十二烷基苯磺酸鈉40公斤，娟云母粉補(bǔ)足至300公斤，經(jīng)過充分混合后用氣流粉碎機(jī)粉碎至325目以上。每100克一袋。本實施例獲得成品290公斤，成品中含枯草芽孢桿菌CCTCC M204085活芽孢167億cfu/g，撲海因16.7％。使用時加水稀釋500倍浸果3分鐘左右晾干即可。
實施例8、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢水懸浮劑用于蘋果貯藏取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085水懸劑0.5kg，加水25kg，稀釋成2×108cfu/ml的水懸液，充分?jǐn)嚢?約15分鐘)之后分批將100kg紅富士蘋果(每批10kg)浸入枯草芽孢桿菌CCTCC M204085水懸液中，浸泡時間5分鐘。撈出晾干，單果套網(wǎng)袋。裝箱貯藏。室溫下貯藏5個月，防腐效果93.1％，蘋果總酸度下降率26.2％，對照化學(xué)農(nóng)藥為多菌靈可濕性粉劑，稀釋1000倍，處理方法與枯草芽孢桿菌CCTCC M204085相同。同等貯藏條件下，防腐效果84.3％，總酸度下降31.4％。枯草芽孢桿菌CCTCC M204085處理優(yōu)于化學(xué)藥劑和清水對照。
實施例9、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085可濕性粉劑用于橙子防腐保鮮取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085可濕性粉劑(產(chǎn)品中活芽孢數(shù)為110×108cfu/g)0.5Kg，加水25kg，稀釋成2×108cfu/ml的枯草芽孢桿菌CCTCCM204085芽孢懸浮液，將從樹上采下僅三天的新鮮橙子200kg分批浸入枯草芽孢桿菌CCTCC M204085懸液中，泡5分鐘后將橙子取出晾干，用小塑料袋單果包裝，然后每10公斤裝一紙箱。室溫下貯藏。以多菌靈為化學(xué)防腐劑對照，以清水為空白對照。兩種處理的用橙子量和包裝貯藏情況與枯草芽孢桿菌CCTCCM204085處理完全相同。貯藏120天后檢查結(jié)果?？莶菅挎邨U菌CCTCC M204085(可濕性粉劑)處理防腐效果為84.7％，多菌靈效果為86.1％，兩者差異不顯著，證明枯草芽孢桿菌CCTCC M204085有可能代替多菌靈用于橙子防腐保鮮。
實施例10、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085泡騰顆粒劑用于梨子的貯藏保鮮取實施例5制備的枯草芽孢桿菌CCTCC M204085泡騰顆粒0.5kg(產(chǎn)品中活芽孢數(shù)為110×108cfu/g)，加水24.5kg稀釋成2.2×108cfu/ml的孢子懸浮液。將稀釋好的孢子懸浮液均勻噴施在待采收的梨子表皮，風(fēng)干1-2小時后開始采收。采收時輕拿輕放，不傷梨子的表面。采收后及時用薄的軟紙單果包裝，然后分裝紙箱，每箱10公斤梨。噴施清水的處理作為空白對照，噴施0.1％多菌靈(w.p)的為標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥劑對照。室溫條件下貯藏90天防腐效果枯草芽孢桿菌CCTCC M204085為66.1％，多菌靈為60.0％，枯草芽孢桿菌CCTCC M204085處理優(yōu)于多菌靈處理。
實施例11、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085芽孢水懸浮劑用于花椰菜防霉取枯草芽孢桿菌CCTCC M204085水懸劑500毫升，加水24.5升，混勻后噴灑在即將采收的花椰菜的菜花表面。要求噴布得盡可能均勻。風(fēng)干后馬上采收菜花。每個菜花單個用軟紙包裝，然后存放在紙箱中，每箱5公斤。設(shè)噴清水為空白對照。溫度為7℃的冷庫中保藏，30天后開箱檢查結(jié)果?？莶菅挎邨U菌CCTCC M204085水懸劑處理防霉的效果達(dá)到78.2％(按病指數(shù)計算)。
實施例12、枯草芽孢桿菌CCTCC M204085百菌清復(fù)配劑用于桔子貯藏取復(fù)配劑250克加水25升，混勻后用噴霧器噴到樹上即將采摘的桔子表面。風(fēng)干后嚴(yán)格按桔子采摘的技術(shù)要求進(jìn)行采摘。采下的桔子單果用軟紙包好后裝箱，每箱5kg，以清水做空白對照。7℃冷庫中保藏2個月后檢查結(jié)果。二個月貯藏期中，空白對照爛果率為41.9％，枯草芽孢桿菌CCTCC M204085單劑處理爛果率17.5％，復(fù)配劑處理爛果率僅8.3％，復(fù)配劑防腐爛效果優(yōu)于枯草芽孢桿菌CCTCC M204085菌的單劑。
權(quán)利要求
1.一種防腐保鮮劑，其中含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防腐保鮮劑，其特征在于，它是可濕性粉劑、水懸浮劑、泡騰顆?；蚱瑒?。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的防腐保鮮劑，其中可濕性粉劑各組分的重量百分比為菌細(xì)胞含量 5×108～1×1010個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉0.2％～20％木素磺酸鈉/鈣 0.1％～20％硬脂酸鈉0.1％～3％膨化白碳黑 2％～10％絹云母粉余量pH 4.0～7.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的防腐保鮮劑，其中水懸浮劑各組分的重量百分比為菌細(xì)胞含量 5×108～3×109個CFU/g十二烷基苯磺酸鈉0.2％～20％Chitosan0.1％～10％羧甲基纖維素鈉 0％～10％黃原膠 0％～10％苯甲酸鈉0.5％～2％水 余量pH 2.0～7.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的防腐保鮮劑，其中泡騰顆粒或片劑各組分的重量百分比為菌細(xì)胞含量5×108～3×1010個CFU/g表面活性劑0.5％～20％崩解劑3％～30％粘合劑2％～25％助崩劑2％～15％填充物余量其中崩解劑為酸性化合物或堿性化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的防腐保鮮劑，其中表面活性劑選自十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈣、木質(zhì)素磺酸鈉、木質(zhì)素磺酸鈣、纖維素磺酸鈉、茶枯粉、皂角粉中的一種或多種；崩解劑酸性化合物選自檸檬酸、酒石酸、蘋果酸、己二酸、富馬酸、乳酸、硼酸中的一種或多種；崩解劑堿性化合物選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀中的一種或多種；粘合劑選自聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇中的一種或多種；助崩劑選自可溶性淀粉、糊精、羧甲基纖維素鈉中的一種或多種；填充劑選自硅藻土、輕質(zhì)碳酸鈣、絹云母粉中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防腐保鮮劑，其特征在于，它還含有化學(xué)殺菌劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的防腐保鮮劑，其中化學(xué)殺菌劑選自百菌清、特克多、米鮮胺、異菌脲、甲基托布津、農(nóng)利靈、三環(huán)唑、多菌靈的一種或多種。
9.一種權(quán)利要求1-8之任一所述防腐保鮮劑的用途，其特征在于，將所述防腐保鮮劑用于水果蔬菜的防腐保鮮。
10.一種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種含有枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)CCTCCM204085的防腐保鮮劑及其用途。經(jīng)鑒定枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085屬于典型的枯草芽孢桿菌，但與其它枯草芽孢桿菌相比，其發(fā)酵液和芽孢用于蔬菜水果的采后貯藏防腐保鮮效果更好。本發(fā)明公開了含有枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCCM204085的防腐保鮮劑的可濕性粉劑、水懸浮劑、泡騰顆粒、片劑的單劑及枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)CCTCC M204085芽孢與化學(xué)殺菌劑的復(fù)配制劑。
文檔編號A01N65/00GK1853489SQ200510011649
公開日2006年11月1日 申請日期2005年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月28日
發(fā)明者林開春, 徐雪蓮, 代鵬, 馮斌, 張用梅 申請人:武漢綠世紀(jì)生物工程有限責(zé)任公司, 武漢天惠生物工程有限公司