作為免疫調(diào)節(jié)劑的基于球形核酸的構(gòu)建體的制作方法
【專利說(shuō)明】作為免疫調(diào)節(jié)劑的基于球形核酸的構(gòu)建體
[0001 ] 相關(guān)申請(qǐng)
[0002] 本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C.§119(e)要求2013年7月25日提交的題為"作為用于預(yù)防和治 療用途的免疫刺激劑的基于球形核酸的構(gòu)建體"的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/858,584的優(yōu)先權(quán)， 通過(guò)引用將其全文并入本文中。 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及用于遞送核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑的納米級(jí)構(gòu)建體及其方法和 組合物。
[0004] 發(fā)明背景
[0005] 免疫細(xì)胞(特別是巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和B細(xì)胞)使用Toll樣受體(TLR)來(lái)了解環(huán) 境中的外源材料(諸如細(xì)菌成分和外源DNA或RNA 4^3)。這些受體一旦活化之后，通過(guò)特定細(xì) 胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑(主要通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子NFkB 11)產(chǎn)生大的免疫應(yīng)答。然后，NFkB的活化導(dǎo)致產(chǎn)生 幾種分泌的信號(hào)傳導(dǎo)分子(諸如TNFa)，其促進(jìn)免疫應(yīng)答至相鄰的免疫細(xì)胞 n。這種免疫感覺 系統(tǒng)(sensory system)被稱為固有免疫應(yīng)答。在幾種自身免疫性疾病中，身體將自身成分 (諸如DNA或RNA)不正確地識(shí)別為外源成分，并會(huì)啟動(dòng)(mount)大規(guī)模的炎性應(yīng)答，如果不受 控制的話，其可以是破壞性的、痛苦的和威脅生命的。這種情況的最流行的實(shí)例包括如果沒 有進(jìn)行仔細(xì)調(diào)控則主要侵襲關(guān)節(jié)并且會(huì)破壞軟骨和骨的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及如果不受控 制則也會(huì)侵襲內(nèi)部器官(諸如心、腎和肺)并可能致命的狼瘡。目前的治療主要依賴于通過(guò) TNFa結(jié)合抗體(依那西普等)來(lái)隔絕（sequestering)免疫細(xì)胞所得到的細(xì)胞因子的產(chǎn)生以 及用化學(xué)治療劑（諸如氨甲蝶呤）進(jìn)行全身（general)免疫抑制和消除B細(xì)胞群體以延緩 (stave off)適應(yīng)性免疫應(yīng)答。但是，這些治療常常很難容忍和/或隨時(shí)間推移變得易于獲 得耐藥性。因此，針對(duì)該信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的開始時(shí)TLR活化的拮抗劑的開發(fā)應(yīng)當(dāng)是阻斷患有自 身免疫性紊亂的患者中自身DNA和RNA的不適當(dāng)識(shí)別的強(qiáng)效療法。
[0006] TLR 7、8和9均駐留于免疫細(xì)胞的內(nèi)體。TLR 9識(shí)別未甲基化的CpG基序，其在細(xì)菌 DNA中常見但在人DNA中不常見5'1(3。11^7和8二者均識(shí)別在病毒感染中常見的短單鏈RNA的 特異性序列& 8。重要的是，這些能夠拮抗它們各自TLR并阻斷下游信號(hào)傳導(dǎo)的常見識(shí)別基序 的模擬物是已知的12~。但是，它們?cè)谥委熤械挠猛颈凰鼈兡軌虮贿f送至病理部位而不被體 內(nèi)降解的能力所限制。
[0007] 發(fā)明概述
[0008] 本文中所述的是使用納米級(jí)構(gòu)建體通過(guò)調(diào)節(jié)受體相互作用(諸如TLR)用于調(diào)控免 疫應(yīng)答的新方法和組合物。本發(fā)明的方面涉及納米級(jí)構(gòu)建體，其具有核酸相互作用復(fù)合物 的拮抗劑的冠部，其中核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑的表面密度為至少〇.3pmol/cm 2。
[0009] 在其他方面，本發(fā)明是構(gòu)建體，其具有核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑的冠部，以及 被并入冠部的抗原。在一些實(shí)施方案中，抗原的表面密度為至少〇.3pmoΙ/cm 2。在其他實(shí)施 方案中，抗原包括至少兩種不同類型的抗原。
[0010] 在又一些其他方面，本發(fā)明是構(gòu)建體，其具有并入了核酸相互作用復(fù)合物的至少 兩種拮抗劑的冠部，其中拮抗劑選自由TLR 3、7/8和/或9的拮抗劑組成的組。
[0011] 在一些實(shí)施方案中，核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑含有間隔子。
[0012] 在其他實(shí)施方案中，核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑是RNA或DNA。核酸相互作用復(fù) 合物的拮抗劑可以是例如雙鏈RNA或雙鏈DNA。備選地，核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑可以 是單鏈RNA。在一些實(shí)施方案中，核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑為未甲基化的脫氧核糖核 酸，諸如優(yōu)化的免疫調(diào)節(jié)序列。
[0013] 在某些實(shí)施方案中，納米級(jí)構(gòu)建體包括納米顆粒核心并且任選地納米顆粒核心是 金屬的。在某些實(shí)施方案中，金屬選自由金、銀、鉑、鋁、鈀、銅、鈷、銦、鎳及其混合物組成的 組。在某些實(shí)施方案中，納米顆粒核心包含金。在某些實(shí)施方案中，納米顆粒核心是包括可 降解金的晶格結(jié)構(gòu)（lattice structure)。在一些實(shí)施方案中，納米級(jí)構(gòu)建體是可降解的。
[0014] 在某些實(shí)施方案中，納米級(jí)構(gòu)建體的直徑是平均直徑Inm至大約250nm、平均直徑 大約Inm至大約240nm、平均直徑大約Inm至大約230nm、平均直徑大約Inm至大約220nm、平均 直徑大約Inm至大約21〇11111、平均直徑大約1111]1至大約20〇11111、平均直徑大約1111]1至大約19〇11111、 平均直徑大約Inm至大約180nm、平均直徑大約Inm至大約170nm、平均直徑大約Inm至大約 160nm、平均直徑大約Inm至大約150nm、平均直徑大約Inm至大約140nm、平均直徑大約Inm至 大約130nm、平均直徑大約Inm至大約120nm、平均直徑大約Inm至大約llOnm、平均直徑大約 Inm至大約lOOnm、平均直徑大約Inm至大約90nm、平均直徑大約Inm至大約80nm、平均直徑大 約Inm至大約70nm、平均直徑大約Inm至大約60nm、平均直徑大約Inm至大約50nm、平均直徑 大約Inm至大約40nm、平均直徑大約Inm至大約30nm或者平均直徑大約Inm至大約20nm或者 平均直徑大約Inm至大約10nm。
[0015] 在其他方面，本發(fā)明是納米級(jí)構(gòu)建體，其具有核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑的球 形冠部，其中拮抗劑是具有至少一個(gè)核苷酸間磷酸二酯鍵的核酸。在一些實(shí)施方案中，核酸 的每個(gè)核苷酸間鍵是磷酸二酯鍵。
[0016] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，冠部是球形冠部。
[0017] 在本發(fā)明的其他方面中提供了由如本文中所述的納米級(jí)構(gòu)建體和載體組成的疫 苗。
[0018] 在其他方面中提供了用于向細(xì)胞遞送治療劑的方法，其包括向細(xì)胞遞送本發(fā)明的 納米級(jí)構(gòu)建體。
[0019] 在本發(fā)明的其他方面中提供了用于調(diào)控靶分子的表達(dá)的方法。該方法涉及向細(xì)胞 遞送本發(fā)明的納米級(jí)構(gòu)建體。在一些實(shí)施方案中，靶分子是選自由TLR3、7、8和9組成的組的 TLR 0
[0020] 在本發(fā)明的其他方面中提供了用于拮抗TLR的方法，其通過(guò)向細(xì)胞遞送如本文中 所述的納米級(jí)構(gòu)建體。
[0021] 根據(jù)其他方面，本發(fā)明是治療受試者的方法，其涉及向受試者施用有效量的如本 文中所述的納米級(jí)構(gòu)建體以降低免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，受試者患有感染性疾病、癌 癥、自身免疫性疾病、哮喘或變應(yīng)性疾病、炎性疾病、代謝性疾病、心血管疾病，或者受試者 是組織或器官移植的候選者或者接受者。
[0022] 在其他方面，本發(fā)明是調(diào)節(jié)受試者中免疫應(yīng)答的方法，其通過(guò)向受試者施用有效 量的核酸相互作用復(fù)合物的拮抗劑的冠部的納米級(jí)構(gòu)建體以調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，其中所述拮抗 劑是具有至少一個(gè)核苷酸間磷酸二酯鍵的核酸。
[0023] 在某些實(shí)施方案中，該方法涉及向細(xì)胞遞送治療或檢測(cè)方式(modality)。
[0024] 本發(fā)明進(jìn)一步的方面涉及試劑盒，其包含:納米顆粒核心;拮抗劑和用于組裝拮抗 劑-納米顆粒的說(shuō)明。在某些實(shí)施方案中，該試劑盒進(jìn)一步包含使用說(shuō)明。
[0025] 本發(fā)明的每個(gè)限制可以涵蓋本發(fā)明的各種實(shí)施方案。因此，預(yù)計(jì)涉及任一種元素 或元素的組合的本發(fā)明的每個(gè)限制可以被包括于本發(fā)明的每個(gè)方面。本發(fā)明不限于所應(yīng)用 的以下說(shuō)明中所列出的或附圖中所示的成分的構(gòu)建和排列的細(xì)節(jié)。本發(fā)明能夠具有其他實(shí) 施方案并以各種方式進(jìn)行實(shí)踐或執(zhí)行。
【附圖說(shuō)明】
[0026] 附圖并不旨在按比例繪制。在附圖中，在各個(gè)圖中示出的每個(gè)相同或近似相同的 成分由相同的標(biāo)號(hào)表示。為了清晰起見，在每幅圖中并非每個(gè)成分均可被標(biāo)記。在附圖中： [0027] 圖1A-1D是證實(shí)本發(fā)明的構(gòu)建體(AST-015)能夠抑制巨噬細(xì)胞樣RAW Blue細(xì)胞中 CpG誘導(dǎo)的TLR9活化的一組圖。圖IA顯示的是AST-012，圖IB顯示的是AST-013，圖IC顯示的 是AST-014，圖ID顯示的是AST-015。
[0028]圖2A-2D是證實(shí)用本發(fā)明的構(gòu)建體(AST-015)預(yù)處理能夠抑制巨噬細(xì)胞樣RAW-Blue細(xì)胞中CpG誘導(dǎo)的TLR9活化的一組圖。在用TLR9的激動(dòng)劑刺激之前用免疫調(diào)節(jié)構(gòu)建體 孵育細(xì)胞。IC50值以納摩爾(nM)表示。"未處理"線是指從未經(jīng)過(guò)任何刺激劑(stimulant)的 細(xì)胞TLR活化水平。
[0029] 圖3A-3D是證實(shí)用本發(fā)明的構(gòu)建體(AST-015)和CpG DNA同時(shí)處理能夠抑制巨噬細(xì) 胞樣RAW-Blue細(xì)胞中CpG誘導(dǎo)的TLR9活化的一組圖。在RAW-Blue報(bào)告細(xì)胞系中針對(duì)TLR活化 比較了游離免疫調(diào)節(jié)DNA(圖3A和3B)和免疫調(diào)節(jié)SNA(圖3C和3D)的效力。在這些條件下，在 用TLR9的激動(dòng)劑刺激的同時(shí)用免疫調(diào)節(jié)構(gòu)建體孵育細(xì)胞。IC50值以納摩爾(nM)表示。"未處 理"線是指從未經(jīng)過(guò)任何刺激劑的細(xì)胞TLR活化水平。
[0030] 圖4是證實(shí)本發(fā)明的構(gòu)建體(AST-015)能夠抑制慢性刺激的巨噬細(xì)胞樣RAW-Blue 細(xì)胞中CpG誘導(dǎo)的TLR9活性的圖。在RAW-Blue報(bào)告細(xì)胞系中針對(duì)TLR活化確定游離免疫調(diào)節(jié) DNA的效力。在這些條件下，先用TLR9的激動(dòng)劑構(gòu)建體預(yù)刺激細(xì)胞至慢性水平，然后在用 TLR9激動(dòng)劑再刺激的同時(shí)用免疫調(diào)節(jié)構(gòu)建體孵育細(xì)胞。IC50值以納摩爾(nM)表示。"未處 理"線是指從未經(jīng)過(guò)任何刺激劑的細(xì)胞TLR活化水平。"o/n未處理"線是指經(jīng)過(guò)刺激劑過(guò)夜 但在第二天沒有接受第二劑量的刺激劑的細(xì)胞。
[0031] 圖5A和5B是證實(shí)AST開發(fā)的免疫調(diào)節(jié)序列4084F7/8能夠抑制巨噬細(xì)胞樣RAW-Blue 細(xì)胞中CpG誘導(dǎo)的TLR9活性和ssRNA誘導(dǎo)的TLR7/8活性的一組圖。將AST-015中所使用的 4084F序列和AST開發(fā)的修飾的4084F7/8序列與來(lái)自Dynavax的臨床樣品的IRS869和IRS954 就對(duì)抗TLR9(圖5A)和TLR7/8(圖5B)的效力進(jìn)行了比較。IC50值以納摩爾（nM)表示。"未處 理"線是指從未經(jīng)過(guò)任何刺激劑的細(xì)胞TLR活化水平。
[0032]圖6顯示的是表示含有免疫調(diào)節(jié)DNA(irDNA)的新的構(gòu)建體的圖。圖6顯示可以使用 直徑13nm的金納米顆粒合成ir SNA，所述金納米顆粒作為用于添加硫醇化（thio Iated) irDNA和短乙二醇聚合物的模板。
[0033]圖7A-7D是描繪本發(fā)明的構(gòu)建體阻斷各種激動(dòng)劑的能力的圖。兩種所測(cè)試的構(gòu)建 體均能夠阻斷所測(cè)試的所有三種激動(dòng)劑:咪喹莫特(TLR7，圖7B)、CpG 1826(CpG，TLR9，圖 7D)、細(xì)菌脂多糖（LPS，TLR4，圖7C)的刺激或者能夠同時(shí)阻斷所有三種激動(dòng)劑的刺激（圖 7B)。
[0034]
[0035]本發(fā)明不限于所應(yīng)用的以下說(shuō)明中所列出的或附圖中所示的成分的構(gòu)建和排列 的細(xì)節(jié)。本發(fā)明能夠具有其他實(shí)施方案并以各種方式進(jìn)行實(shí)踐或執(zhí)行。此外，本文中使用的 措辭和術(shù)語(yǔ)是為了說(shuō)明的目的，而不應(yīng)被視為限制。本文中使用"包括"、"包含"或"具有"、 "含有"、"涉及"及其變型是指涵蓋其后所列出的項(xiàng)目及其等價(jià)物以及其他項(xiàng)目。
[0036]在一些方面，本發(fā)明涉及新的含有免疫調(diào)節(jié)DNA(irDNA)的構(gòu)建體或顆粒。免疫調(diào) 節(jié)DNA可以是例如拮抗TLR9、TLR7/8和/或TLR7/8/9的DNA寡核苷酸。顆粒具有吸附其的寡核 苷酸結(jié)構(gòu)的密集排列，其在本文中被等價(jià)地稱為納米顆粒構(gòu)建體、納米級(jí)構(gòu)建體或irSNA。 這些構(gòu)建體能夠拮抗TLR介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)，所述信號(hào)傳導(dǎo)響應(yīng)于幾種自身免疫病理學(xué)常見 的含有非甲基化CpG單鏈寡核苷酸和單鏈RNA的激動(dòng)劑。在下面的實(shí)施例中呈現(xiàn)了一些示例 性數(shù)據(jù)。在該數(shù)據(jù)中顯示可以使用直徑13nm的金納米顆粒合成irSNA，所述金納米顆粒作為 用于添加硫醇化(thi 〇lated)irDNA和短乙二醇聚合物的模板(示于方案1中，圖6B)。發(fā)現(xiàn)對(duì) 抗駐留內(nèi)體的TLR的、含有irDNA的irSNA能夠提供強(qiáng)效和新的向免疫細(xì)胞遞送irDNA以阻斷 紊亂(諸如自身免疫性紊亂諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎）中常見的TLR介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑的過(guò)度 活化的方法。這些構(gòu)建體比現(xiàn)有的用于遞送用于治療紊亂的irDNA的方法顯著更有效的發(fā) 現(xiàn)是相當(dāng)出乎意料的。盡管申請(qǐng)人不被機(jī)制束縛，相信本發(fā)明的構(gòu)建體中呈現(xiàn)的irDNA的密 度大大增強(qiáng)核酸受體調(diào)節(jié)。
[0037] 實(shí)施例中呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)證實(shí)，irSNA是鼠巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞(RAW)中TLR9和TLR7/8介導(dǎo) 的NFkB和TNFa免疫活化信號(hào)傳導(dǎo)的強(qiáng)效抑制劑。在一個(gè)實(shí)施例中，被并入irSNA的低nM劑量 的免疫調(diào)節(jié)寡核苷酸序列能夠阻斷活化的TLR9和TLR7/8介導(dǎo)的NFKB/TNFa信號(hào)傳導(dǎo)。重要 的是，具有天然磷酸二酯主鏈的DNA在被并入irSNA時(shí)是有效的，而在作為溶液中的游離寡 核苷酸被施用時(shí)是無(wú)效的。并入含有硫代磷酸酯(ps)主鏈的序列的irSNA能夠與游離DNA施 用一樣有效調(diào)節(jié)TLR的活化，但具有更長(zhǎng)釋放譜的附加優(yōu)點(diǎn)。目前大多數(shù)基于DNA的療法想 要發(fā)揮任何效力需要硫代磷酸酯主鏈修飾，但由于硫代磷酸酯介導(dǎo)的全身毒性而被限于治 療窗口。本發(fā)明的構(gòu)建體能夠并入天然的和修飾的主鏈化學(xué)物質(zhì)（chemistries)的事實(shí)大 大增強(qiáng)了用于在該平臺(tái)上開發(fā)的療法的潛在治療窗口。
[0038] NFkB和TNFa信號(hào)傳導(dǎo)途徑是自身免疫性紊亂(特別是RA)的急性病理學(xué)的主要貢 獻(xiàn)者18。傳統(tǒng)療法主要依賴于隔絕（sequestration)策略以下調(diào)過(guò)度活化的免疫系統(tǒng)的作 用，并且本質(zhì)上是保守的(reactionary^M^irSNA積極主動(dòng)地通過(guò)阻斷主要負(fù)責(zé)導(dǎo)致活化 促炎細(xì)胞應(yīng)答的信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)的受體調(diào)控免疫信號(hào)傳導(dǎo)。采用該作用機(jī)制給治療自身免疫 性患者(包括RA患者)提供顯著潛在改善，例如導(dǎo)致增強(qiáng)的效力，降低的耐藥性機(jī)會(huì)和用于 更大的治療窗口的潛力。與許多廣譜治療不同，由于irSNA僅阻斷主要只存在于免疫細(xì)胞中 的這些信號(hào)傳導(dǎo)途徑的過(guò)度活化，施用irSNA對(duì)于正常組織和細(xì)胞的副作用可以得到降低 或者甚至被消除。
[0039]本發(fā)明的方面涉及納米級(jí)構(gòu)建體。納米級(jí)構(gòu)建體是指具有容納于幾何位置中的一 種或多種核酸的納米大小的構(gòu)建體。納米級(jí)構(gòu)建體通常被稱為一組核酸的冠部。本文中使 用的冠部是指由核酸分子組成的外殼。冠部可以具有由核酸或其他材料(諸如金屬)組成的 納米顆粒核心。備選地，冠部可以簡(jiǎn)單地為以具有中空核心的幾何形狀排列的一組核酸，即 核酸的三維形狀的層。通常、但不總是如此，冠部具有球形形狀。
[0040] 在該情況下，當(dāng)冠部包括納米顆粒核心時(shí)，核酸可以被直接連接至該核心。一些或 所有的核酸可以通過(guò)共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵被直接或間接連接至其他核酸。一種核酸與另一核 酸的鍵可以是除了該核酸與核心的鍵之外的鍵，或者備選地是該核酸與核心的鍵。核酸的 一種或多種還可以被連接至其他分子(諸如抗原）。
[0041] 當(dāng)冠部不包括納米顆粒核心時(shí)，核酸可以通過(guò)共價(jià)鍵或非共價(jià)鍵被直接或間接互 相連接。在一些實(shí)施方案中，可以通過(guò)將核酸在晶格或其他可溶解結(jié)構(gòu)上成層（layering) 形成不包括納米顆粒核心的冠部，然后溶解晶格或其他結(jié)構(gòu)以產(chǎn)生空的中心。
[0042] 本文中使用的納米級(jí)構(gòu)建體是具有納米級(jí)（即在大約Inm和1微米之間）平均直徑 (average diameter)的構(gòu)建體。例如，在一些情況下，納米級(jí)構(gòu)建體的直徑是平均直徑 (mean diameter)大約Inm至大約250nm、平均直徑大約Inm至大約240nm、平均直徑大約Inm 至大約230nm、平均直徑大約Inm至大約220nm、平均直徑大約Inm至大約210nm、平均直徑大 約Inm至大約200nm、平均直徑大約Inm至大約190nm、平均直徑大約Inm至大約180nm、平均直 徑大約Inm至大約170nm、平均直徑大約Inm至大約160nm、平均直徑大約Inm至大約150nm、平 均直徑大約Inm至大約HOnm、平均直徑大約Inm至大約130nm、平均直徑大約Inm至大約 120nm、平均直徑大約Inm至大約11〇11111、平均直徑大約1111]1至大約10〇11111、平均直徑大約1111]1至 大約90nm、平均直徑大約Inm至大約80nm、平均直徑大約Inm至大約70nm、平均直徑大約Inm 至大約60nm、平均直徑大約Inm至大約50nm、平均直徑大約Inm至大約40nm、平均直徑大約 Inm至大約30nm、平均直徑大約Inm至大約20nm、平均直徑大約Inm至大約10nm、平均直徑大 約5nm至大約150nm、平均直徑大約5至大約50nm、平均直徑大約10至大約30nm、平均直徑大 約10至150nm、平均直徑大約10至大約IOOnm、平均直徑大約10至大約50nm、平均直徑大約30 至大約IOOnm或者平均直徑大約40至大約80nm〇
[0043] 在一些情況下，冠部包括附接至核酸相互作用復(fù)合物的一種或多種拮抗劑和/或 抗原的納米顆粒核心。本文中使用的納米顆粒核心是指沒有任何附接的形式(modality)的 納米顆粒構(gòu)建體的納米顆粒成分。在一些情況下，納米顆粒核心是金屬的。應(yīng)當(dāng)理解的是， 納米顆粒核心、可以包含任何金屬。金屬的幾種非限制性實(shí)例包括金、銀、鉑、錯(cuò)、鈀、銅、鈷、 銦、鎳及其混合物。在一些實(shí)施方案中，納米顆粒核心包含金。例如，納米顆粒核心可以是包 括可降解金的晶格結(jié)構(gòu)。納米顆粒還可以包含半導(dǎo)體和磁性材料。
[0044] 與本發(fā)明的方面相容的納米顆粒的非限制性實(shí)例被描述于并被通過(guò)引用并入自： 美國(guó)專利號(hào)7,238,472、美國(guó)專利公開號(hào)2003/0147966、美國(guó)專利公開號(hào)2008/0306016、美 國(guó)專利公開號(hào)2009/0209629、美國(guó)專利公開號(hào)2010/0136682、美國(guó)專利公開號(hào)2010/ 0184844、美國(guó)專利公開號(hào)2010/0294952、美國(guó)專利公開號(hào)2010/0129808、美國(guó)專利公開號(hào) 2010/0233270、美國(guó)專利公開號(hào) 2011/0111974、PCT[0045]本文中使用的核酸相互作用復(fù)合物是指與