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一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白的制作方法

文檔序號(hào):12399249閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白,編碼牛呼吸道胞合體病毒關(guān)鍵蛋白F-蛋白野生種的氨基酸序列為簡(jiǎn)稱SEQ AAA42804.1,具體序列為MATTTMRMIISIILISTYVPHITLCQNITEEFYQSTCSAVSRGYLSALRTGWYTSVVTIELSKIQKNVCNGTDSKVKLIKQELERYNNAVAELQSLMQNEPTSSSRAKRGIPESIHYTRNSTKKFYGLMGKKRKRRFLGFLLGIGSAIASGVAVSKVLHLEGEVNKIKNALLSTNKAVVSLSNGVSVLTSKVLDLKNYIDKELLPKVNNHDCRISNIATVIEFQQKNNRLLEIAREFSVNAGITTPLSTYMLTNSELLSIINDMPITNDQKKLMSVCQIVRQQSYSIMSVLREVIAYVVQLPLYGVIDTPCWKLHTSPLCTTDNKEGSNICLTRTDRGWYCDNAGSVSFFPQAETCKVQSNRVFCDTMNSLTLPTDVNLCNTDIFNSKYDCKIMTSKTDISSSVITSIGAIVSCYGKTKCTASNKNRGIIKTFSNGCDYVSNKGVDTVSVGNTLYYVNKLEGKALYIKGEPIINYYNPLVFPSDEFDASIAQVNAKINQSLAFIRRSDELLHSVDVGKSTTNVVITTIIIVIVVVILMLITVGLLFYCKTRSTPIMLGKDQLSSINNLSFSK,其特征在于:所述牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白的氨基酸序列相比SEQ AAA42804.1至少有兩個(gè)位點(diǎn)被半胱氨酸替代,且替代后的半胱氨酸之間由二硫鍵連接。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白,其特征在于:所述位點(diǎn)為氨基酸序列第148位纈氨酸和288位異亮氨酸。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白,其特征在于:所述位點(diǎn)為氨基酸序列第158位亮氨酸和290位絲氨酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白,其特征在于:所述牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白的氨基酸序列相比SEQ AAA42804.1,在第260位點(diǎn)的亮氨酸由半胱氨酸替代,并在該位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)空穴填充。

5.根據(jù)權(quán)利要求1~3中所述的任一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白,其特征在于:所述針對(duì)牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白的氨基酸序列剔除SEQ AAA42804.1序列中的103位點(diǎn)至138位點(diǎn)的氨基酸序列,采用sgsgs連接102位點(diǎn)和139位點(diǎn)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1~3中所述的任一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白,其特征在于:所述針對(duì)牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白的氨基酸序列剔除SEQ AAA42804.1序列中的103位點(diǎn)至142位點(diǎn)的氨基酸序列,采用sgsgs連接102位點(diǎn)和143位點(diǎn)。

7.根據(jù)權(quán)利要求1~3中所述的任一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白,其特征在于:所述編碼牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白的氨基酸序列相比SEQ AAA42804.1序列,第99位點(diǎn)天冬氨酸由半胱氨酸替代,第362位點(diǎn)絲氨酸由半胱氨酸替代,并在替代后的半胱氨酸之間連接內(nèi)二硫鍵。

8.一種牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白的制備方法,其特征在于:具體工藝如下:

(1)根據(jù)結(jié)構(gòu)生物學(xué)的原理,進(jìn)行蛋白結(jié)晶,結(jié)晶后用X-射線觀測(cè),確定侵染病毒關(guān)鍵病原F-蛋白侵染前后的結(jié)構(gòu)變化;

(2)根據(jù)步驟(1)結(jié)構(gòu)變化設(shè)計(jì)出抗原蛋白的序列和結(jié)構(gòu);

(3)經(jīng)多種抗原測(cè)試和穩(wěn)定性特性檢測(cè)確定出需要抗原蛋白的合格性;

(4)將經(jīng)過驗(yàn)證的抗原蛋白序列進(jìn)行相應(yīng)的蛋白合成、表達(dá)、提純和檢測(cè),得到用來作為動(dòng)物試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)的針對(duì)牛呼吸道胞合體病毒抗原蛋白。

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