一種用于全血樣品檢測(cè)的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)了一種用于全血樣品檢測(cè)的磁微粒化學(xué)發(fā)光微流控芯片，所述芯片由頂部膠帶(12)、芯片基板(1)和底部膠帶(15)構(gòu)成，其中芯片基板上的過(guò)濾區(qū)(2)、包被區(qū)(3)、反應(yīng)區(qū)(5)、清洗區(qū)(6)、檢測(cè)區(qū)(7)、液體釋放通道(8)依次連接，芯片基板上標(biāo)記配體存儲(chǔ)池(4)與反應(yīng)區(qū)(5)連接，檢測(cè)區(qū)(7)分別與清洗液存儲(chǔ)池(9)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池(10)通過(guò)液體釋放通道(8)連接，頂部膠帶包含加樣口(13)；所述包被區(qū)(3)中包被磁顆粒標(biāo)記配體；標(biāo)記配體存儲(chǔ)池(4)存儲(chǔ)酶或發(fā)光劑標(biāo)記配體。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種用于全血樣品檢測(cè)的磁微粒化學(xué)發(fā)光微流控芯片
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種利用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光技術(shù)和微流控芯片技術(shù)實(shí)現(xiàn)分析物高靈敏定量檢測(cè)的芯片，同時(shí)公開(kāi)了一種用于全血樣品檢測(cè)的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片，可實(shí)現(xiàn)病原體、重大疾病(如腫瘤、心血管疾病)、違禁藥品、毒品檢測(cè)、食品安全等分析物的準(zhǔn)確、高靈敏定量檢測(cè)，屬于微流控芯片化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，體外診斷(IVD)主要有兩種發(fā)展趨勢(shì):一種是自動(dòng)化、一體集成化，即利用大型醫(yī)院配套的中心實(shí)驗(yàn)室的全自動(dòng)化、高靈敏的大型儀器設(shè)備，實(shí)現(xiàn)高精度的疾病分析診斷；另一種小型化、床旁化，即通過(guò)掌上小型簡(jiǎn)易設(shè)備，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速分析診斷。小型醫(yī)院資金不足、樣本量少，并不適合購(gòu)買(mǎi)價(jià)格昂貴的大型設(shè)備?，F(xiàn)階段小型快速檢測(cè)設(shè)備主要是試紙條及其配套設(shè)備，但試紙條只能實(shí)現(xiàn)定性或半定量檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度低、特異性差、重復(fù)性差、受干擾明顯。由于中國(guó)人口眾多，老齡化加劇，發(fā)病率劇增，單純依靠大型醫(yī)院已不堪重負(fù)。因此研制操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、重復(fù)性好和定量準(zhǔn)確的快速檢測(cè)方法和設(shè)備變得極為迫切。
[0003]化學(xué)發(fā)光是指化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中的反應(yīng)中間體、反應(yīng)產(chǎn)物或外加發(fā)光試劑將化學(xué)能轉(zhuǎn)變?yōu)楣饽艿默F(xiàn)象。與熒光和吸收光相比，化學(xué)發(fā)光沒(méi)有外來(lái)激發(fā)光源背景信號(hào)干擾，交叉干擾小，具有靈敏度高、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。由此建立的化學(xué)發(fā)光分析已廣泛應(yīng)用于臨床診斷等領(lǐng)域。化學(xué)發(fā)光儀是IVD主要的大型分析檢測(cè)設(shè)備。
[0004]微流控芯片技術(shù)是把生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)分析過(guò)程的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測(cè)等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動(dòng)完成分析全過(guò)程。由于它在生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的巨大潛力，已經(jīng)發(fā)展成為一個(gè)生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)、流體、材料、機(jī)械等多學(xué)科交叉的研究領(lǐng)域，被應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、生化檢測(cè)、司法鑒定等領(lǐng)域。如中國(guó)專(zhuān)利201110006837.3描述了一種可定位的微流控芯片，該微流控芯片由圍欄陣列層、底片和蓋層組成，可用于體外受精、檢測(cè)神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元作用、構(gòu)建神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)和檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等。
[0005]但將化學(xué)發(fā)光和微流控芯片結(jié)合起來(lái)的資料及文獻(xiàn)并不多，實(shí)用及可產(chǎn)業(yè)化的更少，如中國(guó)專(zhuān)利200910114403.8描述了一種微流控芯片化學(xué)發(fā)光測(cè)定人單個(gè)血紅細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的方法，其需依賴(lài)顯微鏡平臺(tái)或透鏡和濾光片組成的復(fù)雜光路；中國(guó)專(zhuān)利200910154432.7公開(kāi)了毛細(xì)管電泳分離和化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的微流控芯片，其流路結(jié)構(gòu)單一，進(jìn)樣未經(jīng)充分混合從而導(dǎo)致反應(yīng)效率較低，無(wú)法達(dá)到最大發(fā)光強(qiáng)度。
[0006]故現(xiàn)有技術(shù)主要存在如下缺點(diǎn):
[0007]I)現(xiàn)有快速診斷方法主要定性或半定量的試紙條，其靈敏度低、重復(fù)性差、受干擾明顯。
[0008]2)現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光微流控芯片結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)操作復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，所需試劑多通過(guò)外部壓力注入芯片。
[0009]3)現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光微流控芯片其檢測(cè)系統(tǒng)依賴(lài)大型設(shè)備，如顯微鏡平臺(tái)、生物芯片掃描儀等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題為針對(duì)現(xiàn)有快速診斷方法靈敏度低、重復(fù)性差、受干擾明顯，以及現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光微流控芯片配套儀器昂貴、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的問(wèn)題，提供一種微流控磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)芯片，通過(guò)集成化芯片(把除測(cè)試樣本外所有組分均集成到芯片內(nèi))并配套小型便攜設(shè)備，從而實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)樣本中分析物的快速、準(zhǔn)確、高靈敏定量檢測(cè)。
[0011 ]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:
[0012]—種用于全血樣品檢測(cè)的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片，其特征在于，所述芯片由頂部膠帶(12)、芯片基板(I)和底部膠帶(15)構(gòu)成，其中芯片基板上過(guò)濾區(qū)(2)、包被區(qū)(3)、反應(yīng)區(qū)(5)、清洗區(qū)(6)、檢測(cè)區(qū)(7)、液體釋放通道(8)依次連接，芯片基板上標(biāo)記配體存儲(chǔ)池(4)與反應(yīng)區(qū)(5)連接，檢測(cè)區(qū)(7)分別與清洗液存儲(chǔ)池(9)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池(1)通過(guò)液體釋放通道(8)連接，頂部膠帶包含加樣口(13);所述包被區(qū)(3)中包被磁顆粒標(biāo)記配體；標(biāo)記配體存儲(chǔ)池(4)存儲(chǔ)酶或發(fā)光劑標(biāo)記配體。
[0013]發(fā)光基底液存儲(chǔ)池(10)也可以由發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A(16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B(17)替代，發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A(16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B(17)通過(guò)發(fā)光液預(yù)混合通道(18)連接。
[0014]具體地，所述過(guò)濾區(qū)包含濾血膜，其中濾血膜可通過(guò)物理孔徑或生物、化學(xué)試劑使液體與細(xì)胞分離，所述生物、化學(xué)試劑為凝血?jiǎng)?br>[0015]具體地，所述磁鐵可置于微流控芯片的頂部膠帶之上或底部膠帶之下。
[0016]具體地，所述磁顆粒標(biāo)記配體使用的磁顆粒包含三氧化二鐵和四氧化三鐵化合物，磁顆粒尺寸為0.1??ομπι，與磁珠匹配的磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500?30000高斯。
[0017]優(yōu)選地，所述磁顆粒標(biāo)記配體使用的磁顆粒包含三氧化二鐵和四氧化三鐵化合物，磁顆粒尺寸為0.5?3μπι，與磁珠匹配的磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為1000?8000高斯。
[0018]具體地，所述磁顆粒標(biāo)記配體、酶或發(fā)光劑標(biāo)記配體使用的配體包含核酸、抗原、單克隆抗體、多克隆抗體和激素受體，所述分析物包括DNA、小分子(藥物或毒品)、抗原、抗體、激素、抗生素、細(xì)菌或病毒及其他生化標(biāo)志物。
[0019]具體地，所述清洗液存儲(chǔ)池(9)預(yù)存儲(chǔ)清洗液，所述清洗液包含緩沖體系、蛋白質(zhì)和表面活性劑，其中緩沖體系選自硼酸鹽、磷酸鹽、Tris-HCl、醋酸鹽中的一種;蛋白質(zhì)選自牛血清白蛋白、酪蛋白中的一種;表面活性劑選自吐溫20、吐溫80、曲拉通Χ-100、聚乙二醇和聚乙烯基吡咯烷酮中的一種。
[0020]本發(fā)明所述芯片的制備方法如下:
[0021]步驟I)酶或發(fā)光劑標(biāo)記可與分析物結(jié)合或競(jìng)爭(zhēng)的一種配體，形成標(biāo)記配體;磁顆粒標(biāo)記可與分析物結(jié)合或競(jìng)爭(zhēng)的另一種配體，形成磁顆粒標(biāo)記配體，所述這兩種配體可相同或不同；
[0022]步驟2)將磁顆粒標(biāo)記配體溶液放入包被區(qū)中，干燥，然后將標(biāo)記配體溶液放入標(biāo)記配體存儲(chǔ)池中，密封，將清洗液和發(fā)光基底液分別注入清洗液存儲(chǔ)池和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池中，密封，組裝微流控芯片；
[0023]本發(fā)明提供一種微流控芯片測(cè)試流程如下:
[0024]步驟I)將微流控芯片放入配套儀器，把樣本滴入加樣口(13)后，開(kāi)始測(cè)試，樣本經(jīng)過(guò)濾區(qū)后，到達(dá)包被區(qū)，溶解磁顆粒標(biāo)記配體，磁鐵加速樣本中分析物與磁顆粒標(biāo)記配體反應(yīng)，磁鐵收集磁顆粒，標(biāo)記配體存儲(chǔ)池釋放溶液，磁鐵將磁顆粒移至反應(yīng)區(qū)，磁鐵攪拌加速反應(yīng)，充分反應(yīng)后收集磁顆粒；
[0025]步驟2)清洗液存儲(chǔ)池釋放溶液，磁顆粒清洗后，被移至檢測(cè)區(qū)，發(fā)光基底液存儲(chǔ)池釋放溶液，檢測(cè)區(qū)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)，儀器檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)分析物的定量檢測(cè)。
[0026]本發(fā)明芯片檢測(cè)的樣本體積為20?ΙΟΟμΙ;芯片配套儀器為小型便攜設(shè)備，包含擠壓存儲(chǔ)池，磁鐵移動(dòng)，發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)等功能，芯片放入儀器后，點(diǎn)擊開(kāi)始測(cè)試，儀器可自動(dòng)完成所有操作。
[0027]本發(fā)明提供微流控芯片是一種以化學(xué)發(fā)光為基礎(chǔ)、在微流控芯片上實(shí)現(xiàn)分析物快速、準(zhǔn)確、高靈敏檢測(cè)的微流控芯片。這種芯片是將分析物的配體(如抗原、抗體等)修飾酶，分析物的另一配體修飾在磁顆粒上，利用配體作用，如雙抗體夾心法原理結(jié)合磁顆粒富集、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)樣本中是否含有分析物。
[0028]本發(fā)明微流控芯片用于定量樣本中的分析物。分析物包括小分子(藥物和毒品)、抗原、抗體、激素、抗生素、細(xì)菌和病毒及其他生化標(biāo)志物。其中其他生化標(biāo)志物包括心血管標(biāo)志物、腫瘤標(biāo)志物和自身免疫性疾病標(biāo)志物。
[0029]本發(fā)明用于全血樣品檢測(cè)的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片能夠解決現(xiàn)有化學(xué)發(fā)光技術(shù)中儀器昂貴、檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)的不足和缺陷，解決現(xiàn)有微流控芯片中結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)操作復(fù)雜，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)等不足和缺陷，可實(shí)現(xiàn)對(duì)微量樣本的檢測(cè)。由于化學(xué)發(fā)光靈敏度高，其靈敏度是熒光檢測(cè)方法的100倍以上。
[0030]本發(fā)明中所述酶，包含但不限于過(guò)氧化氫酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)，發(fā)光基底液為對(duì)應(yīng)的發(fā)光底物(如魯米諾或金剛烷)和發(fā)光增強(qiáng)液(如堿性液或苯衍生物等增強(qiáng)劑)，其中發(fā)光底物和發(fā)光增強(qiáng)液可合并，如圖1所示混合均勻后注入一個(gè)發(fā)光基底液存儲(chǔ)池(10);但當(dāng)混合液保質(zhì)期少于I年時(shí)應(yīng)分開(kāi)，如圖4所示分別注入發(fā)光基底液存儲(chǔ)池Α(16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池Β(17)，通過(guò)發(fā)光液預(yù)混合通道(18)混合均勻。本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例采用過(guò)氧化氫酶，另一個(gè)實(shí)施例采用了堿性磷酸酶。
[0031]本發(fā)明所述發(fā)光劑，包含但不限于吖啶酯和吖啶磺酰胺。吖啶酯與發(fā)光液作用后，不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)。
[0032]本發(fā)明采用的標(biāo)記方法包含物理吸附、化學(xué)交聯(lián)或生物分子間特異性作用將分析物的配體連接到酶或磁顆粒表面，得到配體標(biāo)記的酶或配體標(biāo)記的磁顆粒，其中配體能與分析物特異性結(jié)合或競(jìng)爭(zhēng)。
[0033]本發(fā)明中所述物理吸附主要為通過(guò)顆粒與配體的表面電荷差異，非特異性吸附到顆粒表面，形成配體與磁顆粒的復(fù)合物。
[0034]本發(fā)明中所述化學(xué)交聯(lián)為:當(dāng)磁顆?；蛎副砻嬗谢钚曰鶊F(tuán)，可與配體或質(zhì)控分子直接反應(yīng)時(shí)，不需用化學(xué)交聯(lián)劑，反之用化學(xué)交聯(lián)劑把配體修飾到磁顆粒表面或酶上。
[0035]在本發(fā)明的實(shí)施例中采用化學(xué)交聯(lián)法對(duì)磁顆粒進(jìn)行蛋白質(zhì)分子修飾的方法為:利用1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、戊二醛等交聯(lián)劑將磁顆粒表面的官能團(tuán)(如羧基、氨基)與蛋白質(zhì)分子(如抗原、抗體等)表面的官能團(tuán)(如氣基、竣基、酸基等)連接。
[0036]在本發(fā)明的實(shí)施例中采用化學(xué)交聯(lián)法對(duì)酶進(jìn)行蛋白質(zhì)分子修飾的方法為:利用1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、戊二醛等交聯(lián)劑將酶標(biāo)記到蛋白質(zhì)分子(如抗原、抗體等)上。
[0037]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，采用EDC/NHS交聯(lián)法對(duì)磁顆粒進(jìn)行修飾，一般步驟為:將磁顆粒溶液與EDC和NHS混合，混合比例為1:100:100?I: 10000: 20000，優(yōu)選混合摩爾比例為1:100:100?1:2000: 5000。然后加入一定量的蛋白質(zhì)分子，其中磁顆粒與蛋白質(zhì)分子摩爾比例為1:100?1:108，優(yōu)選摩爾比例為1:1000?1:106，以pH7.4磷酸鹽緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)，培育4h，加入L-甘氨酸封閉，以透析、色譜、層析柱或超濾離心等方式純化，從而得到蛋白修飾的磁顆粒。
[0038]本發(fā)明中所述生物分子間特異性作用包括生物素-親和素系統(tǒng)和抗原-抗體系統(tǒng)。作為優(yōu)選，在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，采用生物素-親和素系統(tǒng)結(jié)合方式對(duì)分析物配體進(jìn)行磁顆粒修飾，該結(jié)合方式具有放大信號(hào)的作用，具體為:以EDC將鏈霉親和素連接到磁顆粒表面，生物素連接到蛋白質(zhì)分子表面，通過(guò)親和素-生物素間的相互作用，把配體連接到磁顆粒表面。其中親和素標(biāo)記的磁顆粒和生物素化配體摩爾比例為1:10?I: 108，優(yōu)選I:1000?1:106。
[0039]本發(fā)明的分析物配體包含抗原、半抗原、單克隆抗體、多克隆抗體和激素受體。該配體可與分析物結(jié)合(如雙抗體夾心法)或者與分析物競(jìng)爭(zhēng)(如競(jìng)爭(zhēng)法)。其中酶標(biāo)記的抗體與磁顆粒標(biāo)記的抗體可以相同，也可以不同。
[0040]作為優(yōu)選，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，選擇兩種不同抗體，分別標(biāo)記酶和磁顆粒，以雙抗體夾心法檢測(cè)分析物。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，選擇一種抗原和一種抗體，分別標(biāo)記酶和磁顆粒，以競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)分析物。
[0041 ]本發(fā)明的標(biāo)記配體溶液和磁顆粒標(biāo)記配體溶液包含緩沖液、蛋白質(zhì)、表面活性劑及防腐劑。其中HRP標(biāo)記的配體，緩沖體系中不能含有NaN3;ALP標(biāo)記配體，緩沖體系不能是磷酸體系。作為優(yōu)選，在本發(fā)明的實(shí)施例中，HRP標(biāo)記抗體溶液為包含牛血清白蛋白、吐溫20和Proclin300的pH7.4磷酸緩沖液;磁顆粒標(biāo)記抗體溶液為包含牛血清白蛋白、酪蛋白、吐溫20和Proclin300的pH7.4磷酸緩沖液。在另一個(gè)實(shí)施例中，ALP標(biāo)記抗體溶液為包含牛血清白蛋白、吐溫20和Proclin300的pH7.4 Tris-HCl緩沖液;磁顆粒標(biāo)記抗原溶液為包含牛血清白蛋白、酪蛋白、吐溫20和Procl in300的pH7.4 Tris_HCl緩沖液。
[0042]本發(fā)明的微流控芯片根據(jù)配套儀器采用磁鐵行程的差異，可分為直線磁鐵操控(圖3)和平面磁鐵操控(圖1)兩種，其中磁鐵可置于微流控芯片的頂部膠帶之上或底部膠帶之下。其中微流控芯片由頂部膠帶、芯片基板和底部膠帶構(gòu)成。成型材料為聚合物，包含但不限于聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、環(huán)氧樹(shù)脂等。如圖1所述，芯片基板由過(guò)濾區(qū)(2)、包被區(qū)(3)、標(biāo)記配體存儲(chǔ)池(4)、反應(yīng)區(qū)(5)、清洗區(qū)(6)、檢測(cè)區(qū)(7)、液體釋放通道(8)、清洗液存儲(chǔ)池(9)、發(fā)光基底液存儲(chǔ)池(10)和廢液池(11)組成。其中檢測(cè)區(qū)分別與清洗液存儲(chǔ)池和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池通過(guò)液體釋放通道(8)連接。
[0043]本發(fā)明的存儲(chǔ)池為液體密封池，所用密封材料包含玻璃、塑料、橡膠、鋁箔和高阻隔薄膜，其中密封材料可為同種材料組成，也可為多種材料組合而成。在物理擠壓下，存儲(chǔ)池可局部破裂，從而把密封的液體釋放出來(lái)。其中酶標(biāo)配體存儲(chǔ)池、清洗液存儲(chǔ)池、發(fā)光基底液存儲(chǔ)池可采用相同或不同材料和方法制作。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，酶標(biāo)配體存儲(chǔ)池、清洗液存儲(chǔ)池、發(fā)光基底液存儲(chǔ)池均采用塑料和彈性橡膠密封而成。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，酶標(biāo)配體存儲(chǔ)池采用塑料和彈性橡膠密封而成，而清洗液存儲(chǔ)池、發(fā)光基底液存儲(chǔ)池采用高阻隔薄膜密封而成。
[0044]本發(fā)明的過(guò)濾區(qū)包含濾血膜，其中濾血膜可通過(guò)物理孔徑或生物/化學(xué)試劑使液體與細(xì)胞分離，實(shí)現(xiàn)血漿與紅細(xì)胞分離，血漿流到磁顆粒包被區(qū)，而紅細(xì)胞停留在濾血膜上，從而減少紅細(xì)胞對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾。其中所述生物/化學(xué)試劑包含凝血?jiǎng)┑龋墒辜t細(xì)胞間連接，形成凝塊，增大尺寸，更容易被濾血膜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)阻擋。
[0045]本發(fā)明的微流控芯片，當(dāng)發(fā)光基底液由發(fā)光底物和發(fā)光增強(qiáng)液組成，且不能混合并并長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)，可分別注入發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A( 16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B(17)中，并在芯片上增加預(yù)混合通道(18)，該預(yù)混合通道可為蛇形通道或上下結(jié)構(gòu)混合通道，如圖4所不O
[0046]在一個(gè)實(shí)施例中，存儲(chǔ)池封入HRP標(biāo)記抗體，包被區(qū)包被磁顆粒標(biāo)記抗體，以雙抗體夾心法檢測(cè)CTnT。另一個(gè)實(shí)施例中，存儲(chǔ)池封入ALP標(biāo)記抗原，包被區(qū)包被磁顆粒標(biāo)記抗體，以競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)他克莫司。
[0047]本發(fā)明的實(shí)施例中所用樣本為全血，但本發(fā)明樣本不限于全血，所用樣本還包含血清、血漿、唾液、尿液、糞便和其他液態(tài)組織樣本。
[0048]本發(fā)明的樣本體積在10?500μ1，優(yōu)選20?ΙΟΟμΙ。作為優(yōu)選，在實(shí)施例中加樣體積為50μ1。
[0049]本發(fā)明的微流控芯片為快速檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間應(yīng)小于30分鐘，作為優(yōu)選，實(shí)施例中采用15分鐘。
[0050]本發(fā)明的配體儀器包含擠壓存儲(chǔ)池，磁鐵移動(dòng)，發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)等功能，應(yīng)可包含擠壓裝置、磁鐵及移動(dòng)裝置、檢測(cè)系統(tǒng)、控制分析模塊和軟件系統(tǒng)。
[0051]本發(fā)明可廣泛應(yīng)用于病原體、重大疾病(如腫瘤、心血管疾病等)、違禁藥品、毒品檢測(cè)、食品安全等多種分析物的定量檢測(cè)。
[0052]本發(fā)明的核心是采用磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)在微流控芯片實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的快速、高靈敏度、準(zhǔn)確定量檢測(cè)。
[0053]微流控芯片技術(shù)是把生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)分析過(guò)程的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測(cè)等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上，自動(dòng)完成分析全過(guò)程。
[0054]本發(fā)明的微流控芯片將檢測(cè)過(guò)程所需的所有試劑組分(酶標(biāo)配體、磁顆粒標(biāo)記配體、清洗液、發(fā)光基底液等)均集成、內(nèi)置到微流控芯片中，并通過(guò)巧妙溝道設(shè)計(jì)，在配套儀器的操作下，實(shí)現(xiàn)微流控芯片的一鍵式檢測(cè)(只需按開(kāi)始鍵就能實(shí)現(xiàn)檢測(cè)，無(wú)需復(fù)雜操作)，實(shí)現(xiàn)全血分離、免疫反應(yīng)、清洗分離、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，從而避免了現(xiàn)有微流控芯片中結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)操作復(fù)雜等不足和缺陷。還克服了傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光儀只能進(jìn)行血清或血漿檢測(cè)，而不能對(duì)全血樣本進(jìn)行檢測(cè)的缺點(diǎn)。
[0055]由于磁顆粒易沉淀，傳統(tǒng)化學(xué)發(fā)光儀采用手工混合，并以持續(xù)振蕩維持磁顆粒的懸浮狀態(tài)，但微流控芯片內(nèi)磁顆粒混均操作難以在小型便攜儀器中實(shí)現(xiàn)。
[0056]本發(fā)明將磁顆粒包被、干燥于微流控芯片溝道中，并設(shè)計(jì)了磁鐵主動(dòng)驅(qū)動(dòng)磁顆粒(而傳統(tǒng)微流控芯片一般采用流體驅(qū)動(dòng)或電驅(qū)動(dòng))，從而使磁顆粒復(fù)溶，并在微流控芯片不同區(qū)域?qū)崿F(xiàn)免疫反應(yīng)、清洗、發(fā)光。此設(shè)計(jì)不僅解決了磁顆粒應(yīng)用于微流控芯片時(shí)易沉淀、重復(fù)性差等問(wèn)題，還實(shí)現(xiàn)了更可控的免疫反應(yīng)和物理清洗，提高了靈敏度和重復(fù)性。其中磁鐵磁性和磁顆粒尺寸對(duì)檢測(cè)效果了明顯影響，本發(fā)明選擇磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500-30000高斯，優(yōu)選1000-8000高斯;磁顆粒尺寸為0.1-10μπι，優(yōu)選0.5_3μπι。
[0057]本發(fā)明中微流控芯片配套儀器與微流控芯片無(wú)液體接觸，無(wú)需要清洗的部件，避免了傳統(tǒng)大型化學(xué)發(fā)光儀需要攪拌或加樣、清洗等操作而產(chǎn)生的交叉干擾及污染。
[0058]所以本發(fā)明并非簡(jiǎn)單疊加磁微粒化學(xué)發(fā)光技術(shù)和微流控芯片技術(shù)，而是通過(guò)液體密封設(shè)計(jì)、溝道設(shè)計(jì)，把檢測(cè)所需所有化學(xué)組分集成、內(nèi)置到微流控芯片中，并以磁鐵主動(dòng)驅(qū)動(dòng)，實(shí)現(xiàn)一鍵式的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)，從而在便攜配套儀器中實(shí)現(xiàn)全血中分析物的快速、高靈敏度、準(zhǔn)確定量檢測(cè)。
[0059]本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)如下:
[0060]I)本發(fā)明采用化學(xué)發(fā)光方法，具有背景低、靈敏度高、線性范圍寬的優(yōu)點(diǎn)。
[0061]2)本發(fā)明采用磁顆粒技術(shù)，具有磁富集功能，增強(qiáng)并放大信號(hào);并能利用磁鐵把磁顆粒轉(zhuǎn)移區(qū)域(如由包被區(qū)-清洗區(qū)-檢測(cè)區(qū))，減少樣本基質(zhì)的影響。
[0062]3)本發(fā)明采用微流控芯片技術(shù)，把樣本混合、反應(yīng)、分離和檢測(cè)集成在芯片上，并把反應(yīng)所需的所有試劑組分集成到芯片上。
[0063]4)本發(fā)明操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)，只需加入樣本，蓋上蓋子，把芯片放入小型便攜配套儀器中即可。
[0064]5)本發(fā)明配套儀器是小型便攜儀器，儀器只與芯片發(fā)生物理接觸，芯片內(nèi)液體不與儀器接觸，不會(huì)污染儀器而產(chǎn)生交叉干擾。
【附圖說(shuō)明】
[0065]圖1為微流控芯片基板示意圖，其中I為芯片基板，2為過(guò)濾區(qū)，3為包被區(qū)，4為標(biāo)記配體存儲(chǔ)池，5為反應(yīng)區(qū)，6為清洗區(qū)，7為檢測(cè)區(qū)，8為液體釋放通道，9為清洗液存儲(chǔ)池，10為發(fā)光基底液存儲(chǔ)池，11為廢液池。
[0066]圖2為微流控芯片整體結(jié)構(gòu)示意圖，其中I為芯片基板，12為頂部膠帶，13為加樣口，14為發(fā)光基底液和清洗液存儲(chǔ)池讓位孔，15為底部膠帶。
[0067]圖3為微流控芯片基板示意圖，其中I為芯片基板，2為過(guò)濾區(qū)，3為包被區(qū)，4為標(biāo)記配體存儲(chǔ)池，5為反應(yīng)區(qū)，6為清洗區(qū)，7為檢測(cè)區(qū)，8為液體釋放通道，9為清洗液存儲(chǔ)池，10為發(fā)光基底液存儲(chǔ)池，11為廢液池。
[0068]圖4為雙發(fā)光基底液存儲(chǔ)池的微流控芯片基板示意圖，其中16為發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A，17為發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B，18為預(yù)混合通道。
【具體實(shí)施方式】
[0069]本發(fā)明公開(kāi)了一種用于全血樣品檢測(cè)的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0070]為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
[0071]實(shí)施例1:雙抗體夾心測(cè)定超敏肌鈣蛋白T(CTnT)
[0072](一)抗體標(biāo)記
[0073]取5yg HRP溶解于ImL蒸餾水中，再加入0.2mL0.1M新配N(xiāo)a14溶液，室溫避光反應(yīng)20min后，以ImM pH4.4醋酸鈉緩沖液透析純化溶液。再以0.2M pH9.5碳酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)pH至9.0，加入1(^8抗01']11'單抗，室溫避光反應(yīng)2h。加0.ImL新配的4mg/mLNaBH4液，混勾，于4°C反應(yīng)2h。將上述溶液裝入透析袋，以0.15M pH7.4PBS透析，4 V過(guò)夜，得到HRP標(biāo)記cTnT抗體。
[0074]向Iml 1mM pH7.4磷酸緩沖液中加入Img磁顆粒(尺寸為2μηι)、1yg EDC和15ygNHS溶液和15yg抗cTnT單抗(與HRP標(biāo)記的抗體不同)溶液，混合均勾并于室溫下反應(yīng)4h，加入Img甘氨酸封閉。以磁鐵富集，去除未反應(yīng)的抗cTnT單抗，得到磁顆粒標(biāo)記cTnT抗體。
[0075](二)微流控芯片組裝
[0076]HRP標(biāo)記cTnT抗體溶液中含0.1 %牛血清白蛋白、0.1 %吐溫20和0.01%Proclin300的pH7.4磷酸緩沖液；磁顆粒標(biāo)記cTnT抗體溶液為包含0.5%牛血清白蛋白、
0.1%酪蛋白、0.2 %吐溫20和0.01% Procl in300的pH7.4磷酸緩沖液。
[0077]清洗液為包含0.2%BSA,0.5%吐溫20和0.01 %Proclin300的pH7.4磷酸緩沖液。發(fā)光基底液分A液和B液，A液為含魯米諾的酸性溶液，B液為含苯衍生物的堿性溶液。
[0078]將HRP標(biāo)記抗體溶液放入頂板酶標(biāo)配體存儲(chǔ)池(4)中，密封。將磁顆粒標(biāo)記抗體溶液放入底板包被區(qū)(3)中，室溫干燥。將清洗液注入清洗液存儲(chǔ)池(9)中，將發(fā)光基底液的A液和B液分別注入發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A( 16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B( 17)，密封。按圖1所示，將濾血膜粘入底板過(guò)濾區(qū)中，將存儲(chǔ)池內(nèi)置入底板。然后按圖2所示，組裝成微流控芯片。裝入鋁箔袋中，密封4°保存。
[0079](三)樣本檢測(cè)
[0080]用正常人血楽作稀釋液，將CTnT標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成如下濃度:0pg/ml、5pg/ml、50pg/ml、500pg/ml、lng/ml和lOng/ml。
[0081]將微流控芯片放入配套儀器(磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為6000高斯)中，往加樣口滴入50μ1樣本。樣本過(guò)濾后，到達(dá)微通道，溶解磁顆粒并反應(yīng)，然后磁鐵收集磁顆粒。存儲(chǔ)池釋放HRP標(biāo)記單抗，并使磁顆粒復(fù)合物和HRP標(biāo)記單抗反應(yīng)，形成夾心結(jié)果復(fù)合物。清洗液存儲(chǔ)池釋放清洗液，將磁顆粒清洗后，發(fā)光基底液釋放，儀器檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度?？倷z測(cè)時(shí)間15min。每個(gè)樣本分別用3個(gè)微流控芯片測(cè)定3次，取平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0082]將50μ1全血樣本滴加到加樣口，15分鐘內(nèi)儀器檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣本中cTnT濃度。
[0083]檢測(cè)原理為:當(dāng)全血加入微流控芯片后，經(jīng)過(guò)濾區(qū)后，到達(dá)微通道，血漿溶解磁標(biāo)記抗體，磁鐵加速樣本反應(yīng)，然后磁鐵收集磁顆粒。存儲(chǔ)池釋放HRP標(biāo)記單抗，并使磁顆粒復(fù)合物和HRP標(biāo)記單抗反應(yīng)，當(dāng)血樣中含有cTnT，則形成HRP標(biāo)記抗體-cTnT-磁顆粒標(biāo)記抗體的三明治結(jié)構(gòu)(雙抗體夾心法)。經(jīng)清洗后，在發(fā)光基底液作用下發(fā)光，儀器檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)試發(fā)光信號(hào)。依據(jù)配套儀器獲取的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而分析血樣中cTnT濃度。樣本中cTnT含量越高，則發(fā)光信號(hào)越強(qiáng)。
[0084]結(jié)果表明，其最低檢測(cè)限為5pg/ml，最低定量限為30pg/ml，定量檢測(cè)范圍為5?10000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.99;在檢測(cè)范圍內(nèi)，未出現(xiàn)HOOK效應(yīng);且批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于10%?？蔀樾墓Ｐ乃ゼ膊≡\斷提供參考。
[0085]實(shí)施例2:競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定他克莫司血藥濃度
[0086](— )抗體/抗原標(biāo)記
[0087]稱(chēng)取ALP0.1mg溶于0.1ml 12.5%戊二醛的pH6.8 0.IM PBS溶液中，室溫過(guò)夜。反應(yīng)后的酶溶液經(jīng)SephadexG-25層析柱，用生理鹽水洗脫，收集棕色液。攪拌下將22.5yg抗他克莫司抗體逐滴加入酶溶液中，反應(yīng)3h。加0.2M賴(lài)氨酸封閉，混勻后，置室溫2h。在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸錢(qián)，置4°C lhJOOOrpm/min離心30min，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，最后沉淀物溶于0.15M pH7.4 PBS中。將上述溶液裝入透析袋中，對(duì)0.15M pH7.4PBS緩沖液透析，去除銨離子后，lOOOOrpm/min離心除沉淀，上清液即為ALP標(biāo)記抗他克莫司抗體。
[0088]向1ml 1mM pH7.4磷酸緩沖液中加入Img磁顆粒(尺寸為0.5μπι)、1yg EDC和15ygNHS溶液和20yg鏈霉親和素，混合均勻并于室溫下反應(yīng)4h，加入Img甘氨酸封閉。以磁鐵吸附富集，去除未反應(yīng)的鏈霉親和素，得到磁顆粒標(biāo)記鏈霉親和素。
[0089]將1yg他克莫司抗原加入5yL0.25mg/mL Sulfo-NHS-LC-b1tin溶液中，反應(yīng)lh。以超濾離心管純化，去除未反應(yīng)的生物素。得到生物素化的抗原。
[0090]通過(guò)親和素-生物素間的相互作用，把抗原連接到磁顆粒表面。其中親和素標(biāo)記的磁顆粒和生物素化的抗體比例為1:1O40
[0091](二)微流控芯片組裝
[0092]ALP標(biāo)記抗他克莫司抗體溶液中含0.1%牛血清白蛋白、吐溫20和Proclin300的pH7.4 Tris-HCl緩沖液；磁顆粒標(biāo)記配體溶液包含0.5 %牛血清白蛋白、0.2 %酪蛋白、
0.1%吐溫20和0.02%Proclin30(^9pH7.4 Tris-HCl緩沖液。
[0093]清洗液為包含0.2%BSA、0.5%吐溫20、0.5%曲拉通X-100和0.01%Proclin300的PH7.4 Tris-HCl緩沖液。發(fā)光基底液分A液和B液，A液為含金剛烷的酸性溶液，B液為堿性溶液。
[0094]將ALP標(biāo)記抗體溶液放入頂板酶標(biāo)配體存儲(chǔ)池(5)中，密封。將他克莫司標(biāo)記的磁顆粒溶液放入底板包被區(qū)(7)中，室溫干燥。將清洗液注入清洗液存儲(chǔ)池(9)中，將發(fā)光基底液的A液和B液分別注入發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A( 16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B( 17 )，密封。按圖1所示，將濾血膜粘入底板過(guò)濾區(qū)中，將存儲(chǔ)池內(nèi)置入底板。然后按圖2所示，組裝成微流控芯片。裝入鋁箔袋中，密封4°保存。
[0095](三)樣本檢測(cè)
[0096]用磷酸緩沖液作稀釋液，將他克莫司標(biāo)準(zhǔn)品配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液如下:0ng/mL、0.Ing/mL、lng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mLo
[0097]將微流控芯片放入配套儀器(磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為2000高斯)中，往加樣口滴入50μ1標(biāo)準(zhǔn)品，樣本過(guò)濾后，到達(dá)微通道，溶解磁顆粒并反應(yīng)，然后磁鐵收集磁顆粒。存儲(chǔ)池釋放ALP標(biāo)記他克莫司，并與磁顆粒復(fù)合物反應(yīng)，ALP標(biāo)記他克莫司競(jìng)爭(zhēng)與他克莫司結(jié)合的磁顆粒標(biāo)記抗體。清洗液存儲(chǔ)池釋放清洗液，將磁顆粒清洗后，發(fā)光基底液釋放，儀器檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度?？倷z測(cè)時(shí)間15min。每個(gè)樣本分別用3個(gè)微流控芯片測(cè)定3次，取平均值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0098]將50μ1全血樣本滴入加樣口，15分鐘內(nèi)儀器檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)發(fā)光信號(hào)強(qiáng)度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣本中他克莫司濃度。
[0099]檢測(cè)原理為:當(dāng)樣本加入微流控芯片，經(jīng)過(guò)濾區(qū)后到達(dá)微通道，樣本溶解磁顆粒標(biāo)記抗體。當(dāng)樣本中含有他克莫司，則他克莫司與磁顆粒標(biāo)記抗體反應(yīng)。磁鐵收集磁顆粒。存儲(chǔ)池釋放ALP標(biāo)記他克莫司，ALP標(biāo)記他克莫司競(jìng)爭(zhēng)與他克莫司結(jié)合的磁顆粒標(biāo)記抗體(競(jìng)爭(zhēng)法)。經(jīng)清洗后，在發(fā)光基底液作用下發(fā)光，儀器檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)試發(fā)光信號(hào)。依據(jù)配套儀器獲取的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而分析樣本中他克莫司濃度。樣本中他克莫司含量越高，則發(fā)光信號(hào)越弱。
[Ο?ΟΟ] 結(jié)果表明，他克莫司最低檢測(cè)限為0.1ng/mL，最低定量限為0.2ng/mL，檢測(cè)范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)R2>0.96，在定量檢測(cè)范圍內(nèi)，未出現(xiàn)HOOK效應(yīng);且批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于12%，可用于他克莫司血藥濃度檢測(cè)。
[0101]實(shí)施例3:磁微粒顆粒尺寸篩選
[0102]其他的實(shí)驗(yàn)條件參見(jiàn)實(shí)施例1，磁顆粒尺寸和磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度按照以下方案進(jìn)行。
[0103]顆粒尺寸為0.1μπι、0.5μηι、1.Ιμπι、1.5μηι、2.5μηι、3μηι、ΙΟμπι。磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500尚斯、1000尚斯、4000尚斯、8000尚斯、12000尚斯、30000尚斯。分別以這八種磁鐵分別驅(qū)動(dòng)七種尺寸的磁顆粒。
[0?04] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:0.1ym磁顆粒和500高斯磁鐵組合時(shí)，其最低檢測(cè)限為50pg/ml，定量檢測(cè)范圍為50?5000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.90;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于20%。即:
化學(xué)發(fā)光信號(hào)較弱，靈敏度不高，重復(fù)性較差。
[0105]ΙΟμπι磁顆粒和30000高斯磁鐵組合時(shí)，其最低檢測(cè)限為100pg/ml，定量檢測(cè)范圍為100?5000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.92；批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于20%。即:陰性樣本信號(hào)較高(清洗不充分)，線性范圍不寬。
[0106]0.5?3μπι的磁顆粒為和1000?8000高斯的磁鐵組合使用時(shí)，其最低檢測(cè)限均小于20pg/ml，定量檢測(cè)范圍可達(dá)到10?10000pg/ml，線性相關(guān)系數(shù)R2>0.97 ;批內(nèi)與批間重復(fù)性均小于12%。滿(mǎn)足為臨床心梗心衰疾病診斷提供參考的需要。
[0107]根據(jù)以上結(jié)果，磁顆粒尺寸優(yōu)選0.5?3μηι，磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度優(yōu)選1000?8000高斯。可根據(jù)磁顆粒所用尺寸，進(jìn)一步確定磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度。
[0108]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種用于全血樣品檢測(cè)的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光微流控芯片，其特征在于，所述芯片由頂部膠帶(12)、芯片基板(I)和底部膠帶(15)構(gòu)成，其中芯片基板上的過(guò)濾區(qū)(2)、包被區(qū)(3)、反應(yīng)區(qū)(5)、清洗區(qū)(6)、檢測(cè)區(qū)(7)、液體釋放通道(8)依次連接，芯片基板上標(biāo)記配體存儲(chǔ)池(4)與反應(yīng)區(qū)(5)連接，檢測(cè)區(qū)(7)分別與清洗液存儲(chǔ)池(9)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池(1)通過(guò)液體釋放通道(8)連接，頂部膠帶包含加樣口(13);所述包被區(qū)(3)中包被磁顆粒標(biāo)記配體；標(biāo)記配體存儲(chǔ)池(4)存儲(chǔ)酶或發(fā)光劑標(biāo)記配體。2.如權(quán)利要求1所述的芯片，其特征在于，所述發(fā)光基底液存儲(chǔ)池(10)由發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A (16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B (17)替代，發(fā)光基底液存儲(chǔ)池A (16)和發(fā)光基底液存儲(chǔ)池B(17)通過(guò)發(fā)光液預(yù)混合通道(18)連接。3.如權(quán)利要求1或2所述的微流控芯片，其特征在于，所述過(guò)濾區(qū)包含濾血膜，其中濾血膜可通過(guò)物理孔徑或生物、化學(xué)試劑使液體與細(xì)胞分離，所述生物、化學(xué)試劑為凝血?jiǎng)?.如權(quán)利要求1或2所述的芯片，其特征在于，所述微流控芯片的頂部膠帶之上或底部膠帶之下懸置磁鐵。5.如權(quán)利要求1或2所述的芯片，其特征在于，所述磁顆粒標(biāo)記配體使用的磁顆粒尺寸為0.1?ΙΟμπι，與磁顆粒匹配的磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為500-30000高斯。6.如權(quán)利要求5所述的芯片，其特征在于，所述磁顆粒標(biāo)記配體使用的磁顆粒尺寸為.0.5?3μπι，與磁顆粒匹配的磁鐵磁感應(yīng)強(qiáng)度為1000-8000高斯。
【文檔編號(hào)】G01N33/53GK205449806SQ201520828569
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2015年10月26日
【發(fā)明人】王東, 李泉
【申請(qǐng)人】深圳華邁興微醫(yī)療科技有限公司