絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于免疫檢測領(lǐng)域，具體涉及一種高靈敏度絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]絨毛膜促性腺激素(human chor1nic gonadotrophin，簡稱HCG)是由胎盤的滋養(yǎng)層細胞分泌的一種糖蛋白，它的主要功能是:維持黃體及降低母體淋巴細胞的活動，防止對胎兒的排斥反應。HCG結(jié)構(gòu)中包括α、β兩個亞基，α亞基與LH、FSH、TSH近似，尤其是與LH有較大的免疫交叉反應，β鏈為其獨有，故而β亞單位被用來制備特異性抗體測定血中的HCG，專名為β-HCG。女性懷孕后，血液和尿液中都會含有HCG，從受精日第9-11天起即可測出血中β-HCG升高，在妊娠的前12周增值很快，以維持妊娠，之后逐漸下降，大約孕20周后保持一定的水平。
[0003]因HCG是妊娠時所分泌的特異性激素，所以β -HCG可用于協(xié)助宮外孕早期未破裂的診斷。正常發(fā)育的絨毛所分泌的β-HCG量很大，每天的滴度不斷的快速上升，每48小上升66%以上。如果β-HCG每兩天增加的量大于66%，可以診斷為宮內(nèi)妊娠；而如果增加的量小于66%，則宮外孕或?qū)m內(nèi)孕發(fā)育不良的可能性很大。對于宮外孕，由于輸卵管肌層菲薄，血供不良，β-HCG分泌量很低。每天升值較少，48小時上升不到50% (但有一部分人最初的β-HCG上升正常)。如果用β-HCG難以確認，還可用血孕酮來做輔助性診斷。
[0004]異位妊娠患者血β -HCG水平較同期正常官內(nèi)妊娠低。根據(jù)此特點，可對異位妊娠進行早期診斷。當β-HCG上升速度異常時，應高度警惕異位妊娠的可能。如果β-HCG滴度下降，說明滋養(yǎng)細胞活性在減退。臨床建議以治療后血β-HCG下降是否呈對數(shù)作為臨床療效評價及判斷預后的客觀指標。治療后血β-HCG下降越快，治療成功率也越高。在藥物保守治療失敗的患者中，也有部分患者的血β -HCG值偏低，說明治療效果不僅僅與血β -HCG指標有關(guān)，可能還與輸卵管妊娠部位或其他因素有關(guān)?？梢娧?HCG對早期診斷異位妊娠、提尚異位妊娠保守治療成功率有$父尚的臨床意義。
[0005]目前β-HCG的測定方法較多，產(chǎn)品多樣，定量檢測的有:化學發(fā)光法、放射免疫法(RIA)和免疫金標試紙法等，但檢測靈敏度均有一定的不足。
[0006]生物素-親和素系統(tǒng)(b1tinavidin system，BAS)，是一種新型生物反應放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問世，BAS很快被廣泛應用于醫(yī)學各領(lǐng)域。將該系統(tǒng)應用于免疫組化，酶聯(lián)免疫，熒光免疫，放射免疫等檢測技術(shù)中，可顯著地提高以上技術(shù)方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，使方法更簡便，有助于臨床快速診斷，并利于進行大規(guī)模流行病學調(diào)查，成為研究免疫反應的有力工具。由于BAS檢測系統(tǒng)經(jīng)濟快速，又無放射物質(zhì)污染，不需復雜儀器，充分顯示了此系統(tǒng)的巨大潛力和應用的可能性。
[0007]生物素-親和素系統(tǒng)檢測原理:BAS是在常規(guī)ELISA原理的基礎上，結(jié)合生物素與親和素間的高度放大作用，而建立的一種檢測系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，分子量為68kDa，由4個亞單位組成，對生物素有非常高的親和力(結(jié)合常數(shù)高達K^M1)。生物素很易與蛋白質(zhì)(如抗體等)以共價鍵結(jié)合。這樣，結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應，既起到了多級放大作用，又由于酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學特性的一種蛋白質(zhì)，鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結(jié)合一個生物素，因幾乎所有用于標記的物質(zhì)均可以同親和素或鏈霉親合素結(jié)合。利用生物素-親和素系統(tǒng)研制絨毛膜促性腺激素β亞單位檢測快速診斷試劑尚無報道。
【實用新型內(nèi)容】
[0008]本實用新型的目的，在于提供一種絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測試紙條，其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側(cè)向?qū)游龊蜕锼?鏈霉親和素放大系統(tǒng)，提供高靈敏度絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測試紙條。使用本實用新型時，提高了檢測靈敏度和檢測穩(wěn)定性，降低了非特異性結(jié)合，檢測時間不大于10分鐘，大大提高了診斷效率。
[0009]本實用新型解決其技術(shù)問題的解決方案是:絨毛膜促性腺激素β亞單位定量檢測試紙條，其包括底板，所述底板上依次設有樣品墊、熒光標記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標記物結(jié)合墊上，所述熒光標記物結(jié)合墊上固定有生物素標記的絨毛膜促性腺激素β亞單位單克隆抗體和鏈霉親和素標記的熒光蛋白；所述檢測區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識別絨毛膜促性腺激素β亞單位另外一個表位的單克隆抗體構(gòu)成的檢測線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。
[0010]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述熒光標記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標記物結(jié)合墊和第二熒光標記物結(jié)合墊，所述第一熒光標記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的下方，所述第二熒光標記物結(jié)合墊交疊壓在硝酸纖維素膜的一端。
[0011]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述第一熒光標記物結(jié)合墊中插入樣品墊下方的一端設有定位條，所述樣品墊的下端面設有能容納定位條的定位槽。
[0012]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，還包括卡殼，所述底板、樣品墊、熒光標記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊均置于卡殼內(nèi)，所述卡殼殼面上對應于硝酸纖維膜的位置設有觀察窗，卡殼殼面上對應于樣品墊的位置設有加樣孔。
[0013]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述觀察窗為長方形孔。
[0014]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述熒光蛋白可以是綠色熒光蛋白、藻膽蛋白中的一種。
[0015]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述樣品墊為經(jīng)表面活性劑緩沖液浸泡處理后干燥的玻璃纖維構(gòu)件。
[0016]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述底板為聚苯乙烯構(gòu)件或者聚乙烯構(gòu)件。
[0017]作為上述技術(shù)方案的進一步改進，所述卡殼包括塑料上殼和塑料下殼，所述塑料上殼扣合塑料下殼上后形成卡殼。
[0018]本實用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點:
[0019](1)本實用新型將熒光蛋白作為標記物，此標記物穩(wěn)定性良好，有利于提高檢測穩(wěn)定性。
[0020](2)本實用新型通過利用“鏈霉親和素-生物素放大系統(tǒng)”，提高檢測靈敏度，降低非特異性結(jié)合，有利于提高試劑盒性能。
[0021](3)利用本實用新型進行絨毛膜促性腺激素β亞單位的檢測時間不大于10分鐘，檢測線性范圍為0.5-50000.0mIU/mL，極大地提高了檢測效率。
[0022](4)本實用新型可通過熒光免疫分析儀對結(jié)果進行判讀，可實現(xiàn)自動化，減少主觀因素的影響，提供便利、快速、可靠的診斷結(jié)果。
[0023](5)本實用新型卡殼設有樣品進入的加樣孔和供觀測結(jié)果的觀察窗，根據(jù)分析儀器判定結(jié)果，準確可靠。
[0024](6)本實用新型制作方便，體積小、便于攜帶。
[0025](7)本實用新型檢測成本較低。
[0026](8)本實用新型可批量生產(chǎn)，適用于臨床快速診斷和現(xiàn)場快速診斷；易于保存，有利于基層單位推廣。
【附圖說明】
[0027]為了更清楚地說明本實用新型實施例中的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單說明。顯然，所描述的附圖只是本實用新型的一部分實施例，而不是全部實施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他設計方案和附圖。
[0028]圖1是本實用新型實施例一的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0029]圖2是本實用新型實施例二的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0030]圖3是本實用新型實施例三的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0031]圖4是本實用新