一種采用液相色譜法測定阿普斯特及其制劑中雜質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及用液相色譜法測定阿普斯特及其制劑中雜質(zhì) 的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿普斯特（Methylnaltrexone bromide)是一種憐酸二酯酶-4 (FOE-4)的抑制劑， 其分子式為C22H24N20 7S，其結(jié)構(gòu)式見下式（a)化合物。
[0003] 阿普斯特的化學(xué)名為：（S)-2-[l_(3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2_甲磺?；?基]-4-乙?；被愡胚徇?1，3-二酮。在合成該化合物的過程中，有幾步重要的中間 體和未知雜質(zhì)可能會(huì)由于去除不完全而影響藥物的純度和質(zhì)量，這些已知中間體和未知雜 質(zhì)以及產(chǎn)生的降解產(chǎn)物即為藥物質(zhì)量控制中通常所說的有關(guān)物質(zhì)（即雜質(zhì))。對于阿普斯 特的合成主要控制的已知雜質(zhì)有八個(gè)，分別是：起始原料SM2,其結(jié)構(gòu)式見下式（b);中間體 Π ，其結(jié)構(gòu)式見下式（c);中間體IV，其結(jié)構(gòu)式見下式（d) ;IP1，其結(jié)構(gòu)式見下式（e) ;IP8， 其結(jié)構(gòu)式見下式（f) ;IP9,其結(jié)構(gòu)式見下式（g) ;IP10,其結(jié)構(gòu)式見下式（h) ;IP14,其結(jié)構(gòu) 式見下式（i)。其中，中間體II即式（c)可通過商業(yè)途徑購買；IP1、IP9、IP10和IP14已 在 Disposition, metabolism and mass balance of [14C]apremilast following oral administration vfewoAioiica, 2011; 41(12) :1063 - 1075 中公開。
[0004] 可見，阿普斯特的相關(guān)物質(zhì)較多，且結(jié)構(gòu)類似，給分離帶來難度，另外，各個(gè)雜質(zhì)的 極性各不相同，有極性差異較大的中間體IV和IP1，有極性相近的IP9和IP10、以及IP1和 IP14,在滿足阿普斯特與各個(gè)雜質(zhì)分離的前提下，還要滿足雜質(zhì)與雜質(zhì)之間的分離，這使檢 測增大了難度。采用常規(guī)的檢測手段方法難以實(shí)現(xiàn)阿普斯特與雜質(zhì)以及雜質(zhì)與雜質(zhì)之間的 有效分離，這會(huì)影響阿普斯特及其制劑的質(zhì)量控制。
[0005] 為了準(zhǔn)確地控制阿普斯特及制劑產(chǎn)品的質(zhì)量，有必要研究一種能簡單、快速、準(zhǔn)確 地分離檢測出阿普斯特及其制劑有關(guān)物質(zhì)的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種用液相色譜法（HPLC)分離測定阿普斯特及其制劑中 雜質(zhì)的方法，該方法能有效實(shí)現(xiàn)阿普斯特與雜質(zhì)、雜質(zhì)與雜質(zhì)之間的分離和測定，從而實(shí)現(xiàn) 對阿普斯特及其制劑質(zhì)量的有效控制。
[0007] 這里所說的雜質(zhì)是指從合成過程中引入的雜質(zhì)或原料藥或其制劑降解產(chǎn)生的雜 質(zhì)，包括起始原料等，還包括已知結(jié)構(gòu)雜質(zhì)和未知結(jié)構(gòu)雜質(zhì)。所述測定阿普斯特及其制劑中 的雜質(zhì)是指測定阿普斯特原料藥和含有阿普斯特的制劑中的雜質(zhì)或稱為相關(guān)物質(zhì)，所述已 知結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)包含：4_氨基-2-[l- (3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2_ (甲基磺酰基)乙基]-1H-異吲哚-1，3 (2H)-二酮(簡稱IP1)、3-乙?；彵蕉姿?簡稱ΙΡ8)、Ν-{2-[1-(3-乙 氧基-4-羥基苯基）-2-(甲基磺酰基）乙基]-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基}乙酰胺(簡稱 ΙΡ9)、Ν-{2-[1- (3-乙氧基-4-羥基苯基）-2-(甲基磺?；┮一鵠-1,3-二氧代異吲哚 啉-5-基}乙酰胺(簡稱ΙΡ10)、Ν-{2-[1- (3-乙氧基-4-甲氧基苯基）-2-(甲基磺酰基） 乙基]-1，3-二氧代異吲哚啉-4-基}-2-羥基乙酰胺(簡稱IP14)、3-硝基鄰苯二甲酸(簡 稱SM2)、（S)-1- (3-乙氧基-4-甲氧基苯基)-2-(甲基磺?；┮野?，N-乙?；?L-亮氨 酸鹽(簡稱中間體II)或3-氨基鄰苯二甲酸(簡稱中間體IV)。
[0008] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的方法，提供了如下實(shí)施方案： 在一實(shí)施方案中，本發(fā)明的一種采用液相色譜法測定阿普斯特及其制劑中雜質(zhì)的方 法，包括： a) 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱； b) 以緩沖溶液為流動(dòng)相A，甲醇與乙腈的混合溶劑為流動(dòng)相B ; c) 流動(dòng)相采用梯度洗脫方法，流速為0. 8ml/min~1. 2ml/min，用紫外檢測器進(jìn)行檢 測； 其中，所述緩沖溶液為磷酸、磷酸鹽溶液或它們的混合物，甲醇和乙腈的體積比為60 : 40~40 :60〇
[0009] 在上述實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法，所說的緩沖溶液的pH為2.0至2. 4,優(yōu)選 ρΗ2· 0至2. 3,最優(yōu)為ρΗ2· 3 ;緩沖溶液的濃度為0· 0001mol/L至lmol/L，優(yōu)選為0· OOlmol/ L至0. lmol/L，最優(yōu)選為0. 01m〇l/L ;所說的緩沖溶液優(yōu)選為磷酸鹽緩沖溶液，其濃度為 0· 0001mol/L 至 lmol/L，優(yōu)選 0· 001mol/L 至 0· 01mol/L，最優(yōu) 0· 01mol/L ;所說的磷酸鹽為 磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫銨、磷酸氫二鉀、磷酸氫二鈉或磷酸氫二銨，優(yōu)選磷酸二 氫鉀。
[0010] 在上述實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法，所說的色譜柱選自下列牌號(hào)的色譜柱： Agilent Eclipse Plus C18、Agilent Zorbax SB_C18、Agilent Zorbax XDB_C18、Agilent Zorbax Extend-C18、Welch XB-C18 和 Welch AQ-C18 色譜柱。
[0011] 在上述實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法，所說的梯度洗脫方法為：〇分鐘，流動(dòng)相A為 95%~80%(V/V)，流動(dòng)相B為5%~20%(V/V);0分鐘至8分鐘，流動(dòng)相A線性減少至80%~ 60% (V/V)，流動(dòng)相B線性增加至20%~40% (V/V);8分鐘至40分鐘，流動(dòng)相A線性減少至 20%~0% (V/V)，流動(dòng)相B線性增加至80%~100% (V/V) ;40分鐘至50分鐘，流動(dòng)相A為 20%~0% (V/V)，流動(dòng)相B為80%~100% (V/V) ;50分鐘至53分鐘，流動(dòng)相A線性增加至 95%~80% (V/V)，流動(dòng)相B線性減少至5%~20% (V/V) ;53分鐘至60分鐘，流動(dòng)相A為 95%~80% (V/V)，流動(dòng)相B為5%~20% (V/V);即50分鐘后為平衡色譜柱。
[0012] 在上述實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法，優(yōu)選的梯度洗脫方法為：0分鐘，流動(dòng)相A為 95% (V/V)，流動(dòng)相B為5% (V/V) ;0分鐘至8分鐘，流動(dòng)相A線性減少至80% (V/V)，流動(dòng) 相B線性增加至20% (V/V) ;8分鐘至40分鐘，流動(dòng)相A線性減少至20% (V/V)，流動(dòng)相B 線性增加至80% (V/V);40分鐘至50分鐘，流動(dòng)相A為20% (V/V)，流動(dòng)相B為80% (V/V); 50分鐘至53分鐘，流動(dòng)相A線性增加至95% (V/V)，流動(dòng)相B線性減少至5% (V/V) ;53分 鐘至60分鐘，流動(dòng)相A為95% (V/V)，流動(dòng)相B為5% (V/V);即50分鐘后為平衡色譜柱。
[0013] 在上述實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法，還包括以下步驟： a)供試品溶液的配制：取阿普斯特或含阿普斯特的制劑適量，加稀釋劑溶解樣品，并 配 制成每lml含阿普斯特0. 5至lOmg的樣品溶液作為供試品溶液； b) 對照溶液的配制：精密量取供試品溶液適量，加稀釋劑制成濃度為供試品溶液濃度 0. 1%~2. 0%的溶液，作為對照溶液； c) 設(shè)置流動(dòng)相的流速為0. 8~1. 2ml/min，優(yōu)選1.0ml/min ;設(shè)置檢測波長為200nm 至250nm，優(yōu)選230nm ;設(shè)置色譜柱的柱溫為15°C至40°C，優(yōu)選25°C ;設(shè)置進(jìn)樣量為5ml至 l〇〇ml，優(yōu)選20ml ;分別精密量取等體積供試品溶液與對照溶液，注入液相色譜儀，記錄色 譜圖，完成供試品溶液有關(guān)物質(zhì)的分離測定； 其中，所述稀釋劑為乙腈和水的混合溶液，乙腈與水的體積比為5 :95~30 :70,優(yōu)選 20 ：80〇
[0014] 在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的一種采用液相色譜法測定阿普斯特及其制劑中雜 質(zhì)的方法，包括：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，以0.0 lmol/L磷酸二氫鉀溶 液為流動(dòng)相A，其pH值為2. 3,以體積比為45 :55(V/V)的甲醇-乙腈為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度 洗脫：〇分鐘，流動(dòng)相A為95% (V/V)，流動(dòng)相B為5% (V/V);0分鐘至8分鐘，流動(dòng)相A線性 減少至80% (V/V)，流動(dòng)相B線性增加至20% (V/V);8分鐘至40分鐘，流動(dòng)相A線性減少至 20% (V/V)，流動(dòng)相B線性增加至80% (V/V) ;40分鐘至50分鐘，流動(dòng)相A為20% (V/V)，流 動(dòng)相B為80% (V/V) ;50分鐘至53分鐘，流動(dòng)相A線性增加至95% (V/V)，流動(dòng)相B線性減 少至5% (V/V) ;53分鐘至60分鐘，流動(dòng)相A為95% (V/V)，流動(dòng)相B為5% (V/V);即50分 鐘后為平衡色譜柱，包括以下步驟： a) 供試品溶液的配制：取阿普斯特或含阿普斯特的制劑適量，加稀釋劑溶解樣品，并配 制成每lml含阿普斯特0. 5至10mg的樣品溶液作為供試品溶液； b) 對照溶液的配制：精密量取供試品溶液適量，加稀釋劑制成濃度為供試品溶液濃度 0. 1%~2. 0%的溶液，作為對照溶液； c) 設(shè)置流動(dòng)相的流速為0. 8~1. 2ml/min，優(yōu)選1.0ml/min ;設(shè)置檢測波長為200nm 至250nm，優(yōu)選230nm ;設(shè)置色譜柱的柱溫為15°C至40°C，優(yōu)選25°C ;設(shè)置進(jìn)樣量為5ml至 l〇〇ml，優(yōu)選20ml ;分別精密量取等體積供試品溶液與對照溶液，注入液相色譜儀，記錄色 譜圖，完成供試品溶液有關(guān)物質(zhì)的分離測定； 其中，所述稀釋劑為乙腈和水的混合溶液，乙腈與水的體積比為5 :95~30 :70,優(yōu)選 20 ：80〇
[0015] 本發(fā)明所述的雜質(zhì)包括已知結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)和其它未知結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)(包括降解產(chǎn)物)。 所述的 已知結(jié)構(gòu)的雜質(zhì)包含選自以下化合物中的一種或多種：IP1、IP8、IP9、IP10、IP14、 SM2、中間體II和中間體IV。
[0016] 本發(fā)明采用Agilent Eclipse Plus C18色譜柱，能夠有效的分離檢測阿普斯特及 其制劑中的雜質(zhì)。選用水與乙腈混合液作為稀釋劑溶解樣品，排除了溶劑峰的干擾和溶劑 效應(yīng)；采