一種測定利巴韋林制劑中已知雜質的檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種測定利己韋林制劑中已知雜質的檢測方法。
【背景技術】
[0002] 利己韋林巧ibavirin，又名病毒哇，Η氮哇核巧）是一種廣譜的抗病毒藥物，經體 外試驗，它可W抑制16種W上的DNA和RNA病毒增殖，如甲己型流感病毒、副流感病毒1、 3型、合胞病毒、麻疹病毒、風疹病毒、己腦病毒、流行性出血熱病毒等等，其次還有免疫抑制 和抗腫瘤作用。
[0003] 利己韋林制劑的主要成分是利己韋林，其適應癥為病毒性上呼吸道感染，如病毒 性鼻炎、咽巧炎、咽結膜熱或口咽部病毒感染。
[0004]歐洲藥典和英國藥典2012年版中均指明了利己韋林有六種已知雜質，分別為已 知雜質A、B、C、D、F和G，而中國藥典中并未對任一已知雜質進行控制。然而，研究表明利己 韋林雜質毒性和潛在危害包括：溶血性貧血、遺傳毒性、生殖毒性和致癌性等，因此嚴格控 制利己韋林的雜質含量水平是至關重要的。就目前而言，在大部分可查到的藥典標準中，利 己韋林檢測方法均為使用礙化交聯(lián)的苯己帰-二己帰基共聚物的氨型陽離子交換色譜柱， 檢測波長為207nm，在PH= 2. 5的水流動相下測定。經試驗，采用該方法，在使用離子色譜 柱檢測的一周左右便會出現(xiàn)色譜峰拖尾，在使用一個月左右會出現(xiàn)主峰形嚴重拖尾，峰形 不好，不利于利己韋林雜質水平的檢測，且離子交換色譜柱購買價格昂貴，不適用于利己韋 林制品日常生產的檢測。
[000引因此，建立一種更為便捷的利己韋林制劑中已知雜質的檢測方法，是十分需要的。

【發(fā)明內容】

[0006] 本發(fā)明所解決的技術問題在于克服了現(xiàn)有技術中利己韋林雜質的檢測方法成本 高、準確度低等的缺陷，提供一種測定利己韋林制劑中已知雜質的檢測方法。本發(fā)明的檢測 方法操作簡單，峰形好，靈敏度高，檢測限低，精密度高，重現(xiàn)性好，其能準確、穩(wěn)定、高效地 測定出利己韋林制劑中的雜質A、B、C、D、F和G，可供藥企的日常生產使用。
[0007] 本發(fā)明通過W下技術方案解決上述技術問題。
[0008] 本發(fā)明提供了一種測定利己韋林制劑中已知雜質的檢測方法，其包括下述步驟： 按照本領域常規(guī)方法制備利己韋林制劑的供試液，再通過高效液相色譜法測定已知雜質A、 B、C、D、F和G中一種或多種的含量；
[0009] 所述高效液相色譜法的色譜條件為：洗脫液由流動相A和流動相B組成，流動相A 為溶液C，流動相B由體積比為96:4-94:6的溶液C和己臘組成；所述溶液C由下述方法制 得；W1000血的量計，將Ig硫酸鋼和950血水混合均勻，用磯酸溶液調節(jié)抑值至2. 7-2. 9， 稀釋至lOOOmU混合均勻后過濾，即得；洗脫梯度如表1所示：
[0010] 表 1
[0011]
腳)1引其中，所述的v/v%為占所述流動相A和流動相B總體積的體積百分比;色譜柱為Ci8色譜柱。
[0013] 所述溶液C的制備過程中，較佳地用磯酸溶液調節(jié)pH值至2. 75-2. 9,更佳地用磯 酸溶液調節(jié)抑值至2. 8。所述的磯酸溶液較佳地為濃度為5wt%的磯酸溶液。
[0014] 所述溶液C的制備中，所述過濾的方法和條件可為本領域常規(guī)的方法和條件。所 述過濾較佳地采用0. 45μm的水相濾膜進行。
[0015] 其中，所述流動相B較佳地由體積比為95:5的所述溶液C和己臘組成。
[0016] 本發(fā)明中，所述洗脫梯度中，所述流動相A和流動相B的改變較佳地為線性梯度改 變。
[0017] 本發(fā)明中，所述利己韋林制劑可為本領域任意的利己韋林制劑，所述利己韋林制 劑的供試液可按本領域常規(guī)方法進行制備。所述利己韋林制劑較佳地為利己韋林氣霧劑。 所述利己韋林氣霧劑的供試液的制備較佳地包括下述操作步驟：將利己韋林氣霧劑產品充 分震搖，試噴1-10歡，除去驅動器，用水洗凈閥口后干燥；將所述利己韋林氣霧劑產品倒置 于水吸收液中，并使閥口浸入水面下，噴射20-200歡，不稀釋或用水稀釋后，將利己韋林水 溶液混合均勻，即得利己韋林氣霧劑的供試液。其中，所述浸入的方法和條件為本領域常 規(guī)的方法和條件，所述浸入較佳地為所述閥口在水面25mmW下；所述噴射的方法和條件為 本領域常規(guī)的方法和條件，所述噴射的間隔較佳地為1-lOs，所述噴射前較佳地進行充分振 搖。
[001引其中，所述的Cis色譜柱可為現(xiàn)有的各種型號和規(guī)格的Cis色譜柱。本發(fā)明中，所 述的Cis色譜柱較佳地為上海通微分析技術有限公司生產的化isilGS-120-3-C18-BP色譜 柱。所述色譜柱的規(guī)格較佳地為4. 6mmX150mm。
[0019] 所述高效液相色譜法中，檢測波長可為本領域常規(guī)的檢測波長，較佳地為 218-222nm，更佳地為 220nm。
[0020] 所述高效液相色譜法的其他色譜條件為本領域常規(guī)條件，所述其他色譜條件較佳 地如下；柱溫為13-17°C，更佳地為15°C;進樣量為1-20μL;流動相總流速為0. 9-1. 1血/ min,更佳地為1. 0血/min;檢測器為紫外檢測器。
[0021] 本發(fā)明中，利己韋林的各雜質含量可通過本領域常用的定量分析方法確定。對于 所述利己韋林的雜質A，因其為利己韋林的特殊雜質，在多種惡劣環(huán)境（酸、堿、氧化、高溫） 下均能生成，為了準確的控制雜質A的含量，應選用外標法計算峰面積，從而確定利己韋林 制劑中的雜質A的含量；一般而言，雜質A的含量不得超過0. 25%。對于利己韋林的雜質B、C、D、F和G，較佳地選用主成分自身對照法計算，從而確定利己韋林制劑中的雜質B、C、 D、F和G的含量；一般而言，最大單個雜質含量不得超過0. 25%。按照本領域常識，利己韋 林的雜質總量不應當超過1. 0%。
[0022] 本發(fā)明中，對于對照溶液的測試方法較佳地為；將對照溶液進樣，調節(jié)儀器靈敏 度，使對照溶液的主成分峰高達滿量程的20% -25% ;然后取供試液和對照溶液各5μ以分 別進樣，記錄色譜圖至主成分色譜峰保留時間的2倍W上；扣除溶劑峰和輔料峰。按本領域 常識，溶劑峰和輔料峰的出峰時間一般為前2min。
[0023] 在符合本領域常識的基礎上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實 例。
[0024] 本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[00巧]本發(fā)明的積極進步效果在于：
[0026] 本發(fā)明采用特定的高效液相色譜法對利己韋林制劑中的各雜質進行分析，具有靈 敏度高，檢測限低、精密度好、耐用性好等優(yōu)點，可用于該藥品的生產檢測。
【附圖說明】
[0027] 圖1為效果實施例中耐性用試驗中采用本發(fā)明的測試方法所測得的HPLC圖。
[002引圖2為對比實施例1的測試方法所測得離子交換色譜圖。
【具體實施方式】
[0029] 下面通過實施例的方式進一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實 施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商 品說明書選擇。
[0030] 下述實施例中，所用的實驗儀器和試劑來源如下：
[0031] 實驗儀器：
[0032] Agilent1100 高效液相色譜儀；SartoriusBP-211D電子天平；
[003引試劑：
[0034] 利己韋林氣霧劑，批號：130401來源；上海信誼藥廠；
[0035] 利己韋林對照品，批號：629. 200202,來源；中國藥品生物制品檢定所；
[0036] 利己韋林雜質A對照品，批號；10685,來源；LGC公司；
[0037] 利己韋林雜質B對照品，批號；1-KJN-104-1，來源；TRC公司；
[0038] 利己韋林雜質C對照品，批號；769,來源；LGC公司；
[003引利己韋林雜質D對照品，批號；5化04. 09. 02,來源；LGC公司；
[0040] 利己韋林雜質F對照品，批號；5化06. 08. 03,來源：