一種鑒別粉條或粉絲中是否摻雜異種蛋白的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及食品加工技術領域，尤其涉及一種鑒別粉條或粉絲中是否摻雜異種蛋白的方法。
【背景技術】
[0002]我國是薯類種植和生產大國，年產量居世界首位，是列于稻谷、玉米、小麥之后的第四大主要糧食作物。淀粉是薯類的主要組成成分，約占其干重的50-80%，在食品工業(yè)中主要被用于制作粉絲粉條等。薯類粉絲粉條是我國及廣大亞洲國家和地區(qū)普遍喜愛的一種傳統(tǒng)食品，暢銷韓國、日本等多個國家和地區(qū)。
[0003]然而，由于缺乏相關檢測標準與方法，同時由于市場上玉米淀粉、木薯淀粉與馬鈴薯淀粉、甘薯淀粉價格的差異較大，一些企業(yè)和個體加工戶受經濟利益的驅使，在馬鈴薯淀粉或甘薯淀粉中摻雜摻假再制成粉絲粉條，造成馬鈴薯及甘薯粉絲粉條的品質不一、惡意競爭現(xiàn)象嚴重，導致馬鈴薯及甘薯粉絲粉條生產企業(yè)的合法權益收到侵害，極大地阻礙了馬鈴薯及甘薯加工產業(yè)的發(fā)展。
[0004]傳統(tǒng)的粉條粉絲鑒別方法為燈檢或火檢，其存在的問題是:只能通過觀察透明度或聞味來初步推測粉條粉絲中有無其他雜質或有無添加對人體有害的物質。
[0005]目前，以薯類為原料的粉條或粉絲摻假鑒別方法的報道尚屬空白。建立粉條或粉絲鑒別方法，對于保障我國薯類粉條或粉絲加工生產企業(yè)的合法權益，促進我國薯類加工業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，保障我國糧食安全和改善居民膳食營養(yǎng)具有重要意義。

【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種鑒別粉條或粉絲中是否摻雜異種蛋白的方法，所述方法通過測定粉條或粉絲中蛋白構成、分子量的不同實現(xiàn)，所述鑒別方法包括如下步驟:
[0007](1)制備待測樣品溶液:向粉碎后的粉條或粉絲樣品中加入蛋白溶解液，混合均勻即得；
[0008](2)制備標準品溶液:分別向多種蛋白標準品中加入蛋白溶解液，混合均勻即得；
[0009](3)對標準品進行檢測:分別向每個所述標準品溶液中加入上樣緩沖溶液，然后采用凝膠電泳法進行檢測；
[0010](4)對待測樣品溶液進行檢測:向所述待測樣品溶液中加入上樣緩沖溶液，然后采用與所述標準品溶液相同的凝膠電泳法進行檢測；
[0011](5)結果判定:電泳結束后，采用染色法對蛋白染色并與標準品蛋白的電泳結果比對，判定待測樣品中是否摻雜異種蛋白。
[0012]其中，所述蛋白標準品為甘薯蛋白、馬鈴薯蛋白、木薯蛋白、玉米蛋白中的一種或多種。
[0013]采用上述鑒別方法，以馬鈴薯蛋白、甘薯蛋白、木薯蛋白、玉米蛋白為標準品，可用于鑒定馬鈴薯粉條或粉絲、甘薯粉條或粉絲中是否摻雜有玉米淀粉和/或木薯淀粉，達到快速準確的對馬鈴薯或甘薯粉條、粉絲質量監(jiān)控的目的。
[0014]其中，所述蛋白溶解液可選自本領域常規(guī)的物質，本發(fā)明優(yōu)選為二甲基亞砜、Tris-HCl緩沖溶液、尿素溶液中的一種。采用上述蛋白溶解液能夠使水溶性蛋白、鹽溶性蛋白或醇溶性蛋白最大限度的溶解，提高檢測的準確度。
[0015]優(yōu)選地，本發(fā)明所述的Tris-HCl緩沖溶液中添加有十二烷基硫酸鈉(SDS)和甘油，加入SDS和甘油能夠增加樣品的表面活性，更好的幫助蛋白溶解，進一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的Tris-HCl緩沖溶液中添加有2%十二烷基硫酸鈉(SDS)和4%甘油。該Tris-HCl緩沖溶液的制備方法為:取市售Tris-HCl緩沖溶液(pH值7.4) 100ml，向其中添加2g SDS和4g甘油，即得。
[0016]本發(fā)明優(yōu)選標準品蛋白采用二甲基亞砜蛋白溶解液、待測樣品采用上述含有2%SDS和4%甘油的Tris-HCl緩沖溶液溶解，此種情況下，標準品蛋白和粉條/粉絲具有最佳的溶解效果，電泳效果良好，條帶分離充分、清晰，結果準確可靠。
[0017]所述標準溶液的制備方法優(yōu)選為:按照lmg蛋白標準品加入0.5-1.5mL 二甲基亞砜蛋白溶解液的比例，向蛋白標準品中加入二甲基亞砜蛋白溶解液，混合均勻后超聲處理，然后離心取上清液即得。
[0018]所述待測樣品溶液的制備方法優(yōu)選為:將粉條或粉絲樣品粉碎后，過100-400目篩，按照0.1-0.5g樣品加入l_3mL蛋白溶解液的比例，向粉碎后的樣品中加入含有2% SDS和4%甘油的Tris-HCl緩沖溶液，混合均勻后超聲處理，然后離心取上清液即得。采用此種待測樣品溶液制備方法，能夠最大程度使得樣品中的蛋白被提取，且在進行凝膠電泳時，能夠得到清晰的、分離完全的條帶，確保該凝膠電泳法具有極低的檢出限和精準的檢測效果。
[0019]其中，所述超聲處理優(yōu)選在如下條件下進行:超聲波頻率50-60HZ，功率40-50W，超聲溫度25-35 °C。
[0020]所述離心優(yōu)選在如下條件下進行:離心速度8，000-10, 000g，離心時間10_30min，溫度 10-25 °C。
[0021]本發(fā)明所述凝膠電泳為聚丙烯酰胺凝膠電泳，優(yōu)選為10% -15%聚丙烯酰胺凝膠電泳或4% -12%梯度膠凝膠電泳，進一步優(yōu)選為15%凝膠電泳。采用梯度膠凝膠電泳可分離分子量范圍從幾kDa至200kDa的蛋白質，對本發(fā)明待分離檢測的蛋白而言，具有很好的分離效果。發(fā)明人同時對6%，20%聚丙烯酰胺凝膠電泳進行了平行鑒別實驗，發(fā)現(xiàn)該凝膠電泳無法實現(xiàn)對于分子量較小或較大的蛋白質進行鑒別，而15 %聚丙烯酰胺凝膠電泳具有極佳的分離效果，能夠很好的實現(xiàn)對本發(fā)明涉及蛋白的鑒別。
[0022]為了得到理想的電泳結果，本發(fā)明凝膠電泳優(yōu)選采用恒流或恒壓方式進行，恒流或恒壓操作不僅能夠保證蛋白質具有高的分辨率，并且操作簡化。
[0023]所述恒流的電流優(yōu)選為20-30mA，恒壓的電壓優(yōu)選為80-120V。
[0024]本發(fā)明所述的上樣緩沖溶液優(yōu)選為非還原型上樣緩沖溶液，本發(fā)明優(yōu)選所述上樣緩沖溶液的體積用量為樣品體積用量的3-7倍，進一步優(yōu)選為5倍。
[0025]本發(fā)明最佳的鑒別方法包括如下步驟:
[0026](1)制備待測樣品溶液:向粉碎后的粉絲/粉條中加入含有2%十二烷基硫酸鈉和4%甘油的Tris-HCl緩沖溶液，超聲混合均勻后離心取上清液即得；
[0027](2)制備標準品洛液:分別向多種蛋白標準品中加_Λ—■甲基亞諷，超聲混合均勾后離心取上清液即得；
[0028](3)對標準品溶液進行檢測:向所述標準品溶液中加入非還原型上樣緩沖液，采用10-15%的連續(xù)膠在恒流或恒壓條件下進行聚丙烯酰胺凝膠電泳；
[0029](4)對待測樣品溶液進行檢測:向所述待測樣品溶液中加入非還原型上樣緩沖液，然后采用與所述標準品溶液相同的凝膠電泳法進行檢測；
[0030](5)結果判定:電泳結束后，采用銀染法對蛋白染色并與標準品蛋白的電泳結果比對，判定待測樣品中是否摻雜有異種蛋白。
[0031]本發(fā)明具有以下優(yōu)點:
[0032](一 )本發(fā)明提供的粉條鑒別方法克服了光檢、火驗等傳統(tǒng)粉條摻假推測方法的缺陷，具有可準確定性、初步定量的特點，采用此種方法能夠檢測出3 %玉米淀粉或木薯淀粉摻雜的粉條或粉絲，滿足了消費者對健康飲食、明白消費的需求。
[0033]( 二)本發(fā)明只需要超聲裝置、電泳儀及離心機等設備，且操作簡單，易于粉條或粉絲的快速鑒別，易于大范圍推廣。
【附圖說明】
[0034]圖1為本發(fā)明實施例2中馬鈴薯粉條鑒別的電泳圖。
[0035]其中，Μ，分子量標樣；泳道1:100%馬鈴薯淀粉粉條；
[0036]泳道2:3%木薯淀粉粉條；泳道3: 10%木薯淀粉粉條；
[0037]泳道4:3%玉米淀粉粉條；泳道5:10%玉米淀粉粉條。
【具體實施方式】
[0038]下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實施例。應當指出的是，對本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0039]若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0040]實施例1甘薯蛋白、馬鈴薯蛋白、木薯蛋白和玉米蛋白的構成和分子量對比
[0041]甘薯蛋白、馬鈴薯蛋白、木薯蛋白和玉米蛋白均為實驗室提取，其中甘薯蛋白、馬鈴薯蛋白、木薯蛋白采用酸沉堿溶的方法提取，玉米蛋白采用乙醇提取法。
[0042]1)分別取2mg上述蛋白加入lml 二甲基亞砜中，混合均勻后超聲波(超聲波頻率為50Hz，超聲波功率為40W，溫度為30°C )處理30min，10, 000g離心30min取上清液；
[0043]2)將所得上清液與5倍電泳上樣緩沖液混合后進行15%聚丙烯酰胺凝膠電泳，上樣量10 μ L，電泳在恒流20mA下進行，電泳完畢后采用考馬斯亮藍法對蛋白進行染色與判定。
[0044]結果發(fā)現(xiàn)，在非還原條件下，甘薯蛋白主要有兩條條帶，分別為Sporamin A和B，其分子量分別為31和22kDa。馬鈴薯蛋白主要由五條條帶構成，分別是蛋白酶抑制劑(5-25kDa)，Patatin (39_45kDa)、多酚氧化酶(約 69kDa)、Patatin 二聚體(78_90kDa)和Patatin三聚體(117-135kDa)。木薯蛋白的分子量主要分布于20_100kDa之間。而玉米蛋白主要有3條條帶，分子量分別約為22、24和44kDa。
[0045]實施例2馬鈴薯粉條的鑒別
[0046]分別以馬鈴薯淀粉，3%木薯淀粉和97%馬鈴薯淀粉，10%木薯淀粉和90%馬鈴薯淀粉，3%玉米淀粉和97%馬鈴薯淀粉，10%玉米淀粉和90%馬鈴薯淀粉為原料制備粉條，所得粉條分別記為100%馬