表示未顯示紅色條帶：
[0079]
[0080] 采用上述方法對臨床已經確診的陽性血清和陰性血清進行檢測，結果見表2 :
[0081] 表2實際樣本的檢測率
[0083] 盡管本發(fā)明已進行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的 條件下，可進行各個條件的適當變化。可以理解，本發(fā)明不限于所述實施方案，而歸于權利 要求的范圍，其包括所述每個因素的等同替換。
【主權項】
1. 檢測IgM抗體的膠體金試紙條，其特征在于，所述IgM抗體為九項呼吸道感染病原體 特異性IgM抗體，所述膠體金試紙條包括在聚氯乙烯底板上依次貼附的樣品墊、結合物墊、 硝酸纖維素膜和吸水墊；所述結合物墊為包覆有兔抗人IgM抗體-膠體金結合物的玻璃纖 維膜；所述硝酸纖維素膜依次包被有9條檢測線和1條質控線，所述9條檢測線分別為肺炎 支原體重組抗原、肺炎衣原體重組抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病 毒抗原、嗜肺軍團菌抗原、Q熱立克次體抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原，所述質控 線為二抗。2. 根據(jù)權利要求1所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述樣品墊為玻璃纖維膜；優(yōu)選 地，所述吸水墊為吸水紙。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述檢測線和質控線的各相 鄰線的間隔為3~4_，優(yōu)選為3mm;優(yōu)選地，所述膠體金試紙條的寬度為3~5_，優(yōu)選為 4mm〇4. 根據(jù)權利要求1至3中任一項所述的膠體金試紙條，其特征在于，所述樣品墊與結合 物墊之間重疊1~2mm，優(yōu)選為1mm，所述結合物墊與硝酸纖維素膜之間重疊1~2mm，優(yōu)選 為1mm，所述硝酸纖維素膜與吸水墊之間重疊1~2mm，優(yōu)選為1mm。5. 根據(jù)權利要求1至4中任一項所述的膠體金試紙條，其特征在于，選用的二抗為羊抗 兔IgG抗體。6. 權利要求1至5中任一項所述的膠體金試紙條的制備方法，其特征在于，該方法包括 以下步驟： (1) 處理兔抗人IgM抗體：取200μg兔抗人IgM抗體置于透析袋中對5mMTris-HCl進 行透析24h，期間每隔2h換一次水；透析完成后，將抗原取出置于離心管中，加入三蒸水至 2mL，離心后棄去沉淀雜質，得到經處理的兔抗人IgM抗體； (2) 采用檸檬酸鈉還原氯金酸法制備膠體金溶液：向燒杯中加入1000mL三蒸水，然后 加入10mL的1質量％的檸檬酸鈉溶液，加熱至沸騰后，再加入15mL1質量％的氯金酸溶 液，煮沸15min后至冷卻，置于4°C保存，得到膠體金溶液，其中金顆粒直徑約為30~40nm; 優(yōu)選地，該步驟中使用的玻璃儀器事先用洗液過夜浸泡，然后沖洗干凈； (3) 制備結合物墊：取步驟（2)制備的膠體金溶液20mL置于燒杯中，加入150yL0. 1M 的1(20)3溶液調節(jié)溶液的pH至7. 0,攪拌均勻，然后加入步驟（1)的經處理的兔抗人IgM抗 體，攪拌20min，然后加入2mL10質量％的牛血清白蛋白溶液，進行離心，離心時間40Min，轉 速為lOOOOrpm，然后棄去上清液，再加入1質量％的牛血清白蛋白的溶液繼續(xù)離心，棄去上 清液，對沉淀物進行恢復，恢復液的成分為質量％的牛血清白蛋白，0. 5質量％的蔗糖， 〇. 5質量％的酪蛋白鈉，將其涂覆在200平方厘米大小的玻璃纖維膜上面，-45°C冷凍后，作 為結合物墊凍干備用；優(yōu)選地，所述結合物墊在凍干后在室溫下避光保存?zhèn)溆茫? (4) 組裝試紙：將樣品墊、步驟（3)制備的結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊順次彼此 鄰接地貼附在聚氯乙烯底板上，得到組裝試紙； (5) 包被硝酸纖維素膜：使用劃膜儀將肺炎支原體重組抗原溶液、肺炎衣原體重組抗 原溶液、甲型流感病毒抗原溶液、乙型流感病毒抗原溶液、副流感病毒抗原溶液、嗜肺軍團 菌抗原溶液、Q熱立克次體抗原溶液、呼吸道合胞病毒抗原溶液、腺病毒抗原溶液和二抗溶 液分別包被在步驟（4)的組裝試紙的硝酸纖維素膜上作為9條檢測線和1條質控線； (6)將步驟（5)處理后的組裝試紙切割為寬度3~5mm，優(yōu)選4mm的試紙條，即得到所 述膠體金試紙條。7. 根據(jù)權利要求6所述的制備方法，其特征在于，在步驟（5)中，所述肺炎支原體重組 抗原的溶液、肺炎衣原體重組抗原溶液、甲型流感病毒抗原溶液、乙型流感病毒抗原溶液、 副流感病毒抗原溶液、嗜肺軍團菌抗原溶液、Q熱立克次體抗原溶液、呼吸道合胞病毒抗原 溶液和腺病毒抗原溶液的濃度均為〇. 5mg/mL，所述二抗溶液的濃度為0. 3mg/mL;優(yōu)選地， 所述劃膜儀的設定參數(shù)為：所述檢測線和質控線的各相鄰線的間隔為3~4mm，優(yōu)選為3mm; 劃線濃度均為1μL/cm;更優(yōu)選地，所述劃膜儀為三維平面劃膜儀。8. 檢測IgM抗體的膠體金試紙卡，其特征在于，所述IgM抗體為九項呼吸道感染病原體 特異性IgM抗體，所述膠體金試紙卡包括殼體和位于所述殼體中的權利要求1~5中任一 項所述的膠體金試紙條或按照權利要求6或7所述的方法制備的膠體金試紙條，所述殼體 上設置有加樣孔和顯色觀察窗，所述加樣孔對準所述樣品墊的位置，所述顯色觀察窗對準 所述包被有9條檢測線和1條質控線的硝酸纖維素膜的位置。9. 檢測IgM抗體的膠體金試劑盒，其特征在于，所述IgM抗體為九項呼吸道感染病原體 特異性IgM抗體，所述膠體金試劑盒包括鋁箱袋和密封在所述鋁箱袋中的干燥劑、滴管以 及權利要求1~5中任一項所述的膠體金試紙條或按照權利要求6或7所述的方法制備的 膠體金試紙條或權利要求8所述膠體金試紙卡。10. 使用權利要求1~5中任一項所述的膠體金試紙條或按照權利要求6或7所述的 方法制備的膠體金試紙條或權利要求8所述膠體金試紙卡或權利要求9所述的膠體金試劑 盒進行檢測的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟： (1) 收集待測樣品：待測樣品為全血或血清；其中，當血清存在渾濁時，對其進行高速 離心并去除渾濁的雜質； (2) 將膠體金試紙條或膠體金試紙卡平放在檢測臺面上，將步驟（1)的血清10倍稀釋 后滴加在樣品墊上，在10~20分鐘內，優(yōu)選10~15分鐘內，進一步優(yōu)選在15分鐘時觀察 檢測線和質控線的顯色結果；20分鐘后的顯色結果和/或質控線未顯示紅色條帶，視為檢 測結果無效，需重新檢測； (3) 根據(jù)下表判斷待測樣品中九項呼吸道感染病原體的特異性IgM抗體的情況，其中 " + "表示顯示紅色條帶，表示未顯示紅色條帶：
【專利摘要】本發(fā)明提供一種檢測IgM抗體的膠體金試紙條，所述IgM抗體為九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體，其包括在聚氯乙烯底板上依次貼附的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；所述結合物墊為包覆有兔抗人IgM抗體-膠體金結合物的玻璃纖維膜；所述硝酸纖維素膜依次包被有9條檢測線和1條質控線，所述9條檢測線分別為肺炎支原體重組抗原、肺炎衣原體重組抗原、甲型流感病毒抗原、乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺軍團菌抗原、Q熱立克次體抗原、呼吸道合胞病毒抗原和腺病毒抗原，質控線為二抗。還提供了包括該膠體金試紙條的膠體金試紙卡及膠體金試劑盒，及其制備方法和使用該膠體金試紙條、試紙卡或試劑盒進行檢測的方法。
【IPC分類】G01N33/68, G01N33/558
【公開號】CN105259345
【申請?zhí)枴緾N201510801825
【發(fā)明人】蔣興宇, 曹豐晶, 張偉
【申請人】國家納米科學中心
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年11月19日