一種口腔粘膜的良性病損排查與惡性病變檢測試劑盒及其檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測裝置試劑盒，尤其涉及一種口腔粘膜的良性病損排查與惡性 病變檢測試劑盒及其檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 口腔癌是指發(fā)生于口腔的惡性腫瘤，包括唇癌、牙齦癌，舌癌，軟硬腭癌、頌骨癌， 口底癌、口咽癌、涎腺癌和上頌竇癌以及發(fā)生于顏面部皮膚粘膜的癌癥等，口腔癌是頭頸部 較常見的惡性腫瘤之一目前用于口腔癌和癌前病變的診斷技術(shù)有二類：
[0003] 1、創(chuàng)傷性技術(shù)：即組織病理方法，需切除患者病變組織，然后切片在顯微鏡下觀察 組織病變情況。該方法直接，準(zhǔn)確，但因具創(chuàng)傷性，有促進轉(zhuǎn)移的可能性，且口腔病損組織 小，取樣和切片時可能因部位偏差出現(xiàn)假陰性，故此法不易為病人早期介紹，而影響早期診 斷。
[0004] 2、非創(chuàng)傷性技術(shù)：
[0005] 脫落細胞檢查法：優(yōu)點為非創(chuàng)傷性技術(shù)，易被患者接受，但此法假陽性結(jié)果可達 37%〇

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明針對【背景技術(shù)】中存在的問題提供了一種口腔粘膜的良性病損排查與惡性 病變檢測試劑盒。
[0007] 其具體技術(shù)方案如下：
[0008] -種口腔粘膜的良性病損排查與惡性病變檢測試劑盒，其特征在于：本試劑盒包 括以下組分：
[0009] (1)預(yù)檢試劑：包括以下原料：摩爾濃度為0.0 lmol/L的磷酸鹽緩沖液和以下質(zhì)量 百分比濃度的原料：山梨酸鉀0. 1~1%，牛血清白蛋白0. 01~0. 5%，余量為水；
[0010] (2)檢示試劑1:包括以下原料：摩爾濃度為0.0 lmol/L的磷酸鹽緩沖液和以下 質(zhì)量百分比濃度的原料：碳酸氫鈉1~5%、山梨酸鉀0. 1~1%、牛血清白蛋白0.01~ 0.5%、孟加拉紅0. 1 %~5%、十二烷基硫酸鈉0.01~0.5%及5-氨基酮戊酸0.01~ 0. 5%，余量為水；
[0011] ⑶檢示試劑2 :包括以下質(zhì)量百分比濃度的原料：碳酸氫鈉1~5%、山梨酸鉀 0. 1~1%，余量為水。
[0012] 所述磷酸鹽緩沖液為0. 01M，配制方法如下：
[0013] 稱 7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2P04 和 1.8g K2HP04,溶于 800ml 蒸餾水中，用 HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7. 4,最后加去離子水定容至1L，保存于4°C冰箱中備用。
[0014] 所述預(yù)檢試劑的配制方法為：在溫度為0~4°C條件下配制磷酸鹽緩沖液，再向配 制完成的磷酸鹽緩沖液中依次加入山梨酸鉀、牛血清白蛋白，最后用去離子水定容，在搖床 上充分混勻2~12小時即可。
[0015] 所述檢示試劑1的配制方法為：在溫度為0~4°C條件下配制磷酸鹽緩沖液，再依 次加入山梨酸鉀、碳酸氫鈉、牛血清白蛋白、孟加拉紅、十二烷基硫酸鈉及5-氨基酮戊酸， 最后用去離子水定容，在搖床上充分混勾2~12小時即可。
[0016] 所述檢示試劑2的配制方法為：先配制1~5%碳酸氫鈉溶液，再依次加入山梨酸 鉀，最后用去離子水定容，在搖床上充分混勾2~12小時即可。
[0017] 上述預(yù)檢試劑1和預(yù)檢試劑2中磷酸鹽緩沖液分別作為預(yù)檢試劑溶劑和檢示試劑 溶劑，山梨酸鉀用于試劑防腐，十二烷基硫酸鈉用于增強試劑熒光效應(yīng)，5-氨基酮戊酸為光 敏劑，用于增加試劑滲透性，牛血清白蛋白為酶穩(wěn)定劑，用于防止試劑成分被生物酶降解， 碳酸氫鈉用于調(diào)節(jié)試劑溶液PH值。
[0018] 本發(fā)明試劑盒需避光，且在-18攝氏度~室溫條件下保存。
[0019] 本發(fā)明還提供一種利用上述試劑盒檢測口腔粘膜的良性病損與惡性病變的方法， 步驟如下：
[0020] (1). 口腔檢查，記錄病變的詳細情況；
[0021] (2).用潔凈水漱口，去除食物殘肩；
[0022] (3).取預(yù)檢試劑含漱1~5分鐘；
[0023] (4).用棉簽蘸取檢示試劑1涂擦于病變局部，染色2~10分鐘；
[0024] (5) ·取檢示試劑2含漱1~5分鐘；
[0025] (6).對比比色板或自體激發(fā)熒光檢測儀器進行半定量或定量評價染色結(jié)果。
[0026] 所述對比比色板上由淺至深設(shè)置有a、b、c、d四個色相，其制備方法如下：分別配 置al、bl、cl、dl四種溶液，然后al、bl、cl、dl四種溶液中分別浸泡濾紙，待濾紙染色完全 后，拿出晾干，置于同一載體上即得。
[0027] 所述al、bl、cl、dl四種溶液的成分與檢示試劑1的成分一致，其中al中各溶質(zhì) 的濃度為檢不試劑1的十分之一，bl中各溶質(zhì)的濃度為檢不試劑1的四分之一，cl中各溶 質(zhì)的濃度為檢示試劑1的二分之一，dl中各溶質(zhì)的濃度為檢示試劑1的四分之三。
[0028] 該試劑盒可用于口腔粘膜的良性病損與惡性病變的輔助鑒別診斷，輔助臨床醫(yī)師 早期診斷口腔癌及監(jiān)測口腔癌前病變惡變。
[0029] 本試劑盒RB試劑為獨有配方，歷經(jīng)多年的研究與改進，配伍合理，特異性高，因為 孟加拉紅直接與腫瘤細胞的DNA多聚酶特異性結(jié)合，敏感性強，對比比色板或自體激發(fā)熒 光檢測儀器通過定量和半定量評價染色結(jié)果，使結(jié)果更精準(zhǔn)，精確度更高，在臨床使用中發(fā) 現(xiàn)，使口腔病損區(qū)域著色迅速且不易脫落，與周圍正常組織著色程度差異明顯。同時，本試 劑盒還增置了對比比色板或自體激發(fā)熒光檢測儀器進行半定量或定量評價染色結(jié)果，使著 色結(jié)果的評判更加客觀。
【附圖說明】
[0030] 圖1為利用本試劑盒進行口腔檢測的案例圖。
[0031] 圖2為檢測本發(fā)明染色結(jié)果的熒光光譜診斷系統(tǒng)示意圖；
[0032] 圖3為檢測組織的自發(fā)熒光和利用本發(fā)明染色的熒光強度光譜圖。
【具體實施方式】 [0033] 實施例1
[0034] (1). 口腔檢查，記錄病變的詳細情況；
[0035] (2) ·用潔凈水漱口，去除食物殘肩；
[0036] (3).取預(yù)檢試劑含漱1~5分鐘；
[0037] (4).用棉簽蘸取檢示試劑1涂擦于病變局部，染色2~10分鐘；
[0038] (5).取檢示試劑2含漱1~5分鐘；
[0039] (6).對比比色板或自體激發(fā)熒光檢測儀器進行半定量或定量評價染色結(jié)果。
[0040] 上述所述磷酸鹽緩沖液為0. 01M，配制方法如下：
[0041] 在溫度為0 ~4°C條件下，稱 7.9g NaCl，0.2g KCl，1.44g Na2HP04和 1.8g K2HP04， 溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7. 4,最后加去離子水定容至1L，保存于 4 °C冰箱中備用。
[0042] 上述預(yù)檢試劑的配制方法為：在溫度為0~4°C條件下配制磷酸鹽緩沖液，再向配 制完成的磷酸鹽緩沖液中依次加入山梨酸鉀、牛血清白蛋白，最后用去離子水定容，在搖床 上充分混勻2~12小時即可；其中0.0 lM的磷酸鹽緩沖液中含有以下質(zhì)量百分比濃度的山 梨酸鉀0. 1%、牛血清白蛋白0. 01% ;
[0043] 上述檢示試劑1的配制方法為：在溫度為0~4°C條件下配制磷酸鹽緩沖液，再依 次加入山梨酸鉀、碳酸氫鈉、牛血清白蛋白、孟加拉紅、十二烷基硫酸鈉及5-氨基酮戊酸， 最后用去離子水定容，在搖床上充分混勻2~12小時即可，其中0.0 lM的磷酸鹽緩沖液含 有以下質(zhì)量百分比濃度的碳酸氫鈉〇. 1 %、山梨酸鉀〇. 1 %、牛血清白蛋白〇. 01 %、孟加拉 紅0. 1 %、十二烷基硫酸鈉0. 01 %及5-氨基酮戊酸0. 01 %;上述檢示試劑2的配制方法為： 先配制1~5%碳酸氫鈉溶液，再依次加入山梨酸鉀，最后用去離子水定容，在搖床上充分 混勻2~12小時即可，其中碳酸氫鈉1%、山梨酸鉀0. 1%。
[0044] 實施例2
[0045] (1). 口腔檢查，記錄病變的詳細情況；
[0046] (2).用潔凈水漱口，去除食物殘肩；
[0047] (3).取預(yù)檢試劑含漱1~5分鐘；
[0048] (4).用棉簽蘸取檢示試劑1涂擦于病變局部，染色2~10分鐘；
[0049] (5).取檢示試劑2含漱1~5分鐘；
[0050] (6).對比比色板或自體激發(fā)熒光檢測儀器進行半定量或定量評價染色結(jié)果。
[0051 ] 上述所述磷酸鹽緩沖液為0. 01M，配制方法如下：
[0052] 在溫度為 0 ~4°C條件下，稱 7.9g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2P04 和 1.8g K2HP04， 溶于800ml蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7. 4,最后加去離子水定容至1L，保存于 4 °C冰箱中備用；
[0053] 上述預(yù)檢試劑的配制方法為：在溫度為0~4°C條件下配制磷酸鹽緩沖液，再向配 制完成的磷酸鹽緩沖液中依次加入山梨酸鉀、牛血清白蛋白，最后用去離子水定容，在搖床 上充分混勻2~12小時即可；其中0.0 lM的磷酸鹽緩沖液中含有以下質(zhì)量百分比濃度的山 梨酸鉀1%、牛血清白蛋白0.5% ;
[0054] 上