固相支撐液液萃取-色質(zhì)聯(lián)用篩查樣本中毒性物質(zhì)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析化學(xué)與材料科學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種固相支撐液液萃取-色質(zhì)聯(lián) 用篩查樣本中毒性物質(zhì)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 法庭科學(xué)領(lǐng)域通常需要對(duì)新鮮器官組織、血液、體液、腐尸、腐泥等多種樣本中的 眾多毒性物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，毒性物質(zhì)范圍包括農(nóng)藥、鼠藥、醫(yī)源性藥物（例如安眠鎮(zhèn)靜藥物、 鎮(zhèn)痛藥物、麻醉藥物、抗生素等）、毒品、食品添加劑、中草藥等。然而，該些樣本成分較為復(fù) 雜，特別是所含有的油脂、色素、蛋白質(zhì)、酶等雜質(zhì)易對(duì)毒性物質(zhì)的檢測(cè)產(chǎn)生干擾，因此如何 有效去除樣本中的雜質(zhì)、高效提取樣本中的目標(biāo)毒物成為需要研究的課題之一。
[0003]固相支撐液液萃?。╯uppo;rtedliquid-liquidextraction,簡(jiǎn)稱SLE)是W傳統(tǒng) 液液萃取原理為基礎(chǔ)，W-種吸附性高、惰性、比表面積大的多孔填料為固相支撐體，實(shí)現(xiàn) 相分離和目標(biāo)物的萃取凈化，集固相萃取技術(shù)、液液萃取技術(shù)優(yōu)點(diǎn)于一體，具有操作簡(jiǎn)便、 有機(jī)溶劑用量、快速、高通量樣品處理，克服了傳統(tǒng)液液萃?。╨iquid-liquidextraction， 簡(jiǎn)稱LL巧操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、易出現(xiàn)乳化現(xiàn)象、不易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化和高通量等問(wèn)題。盡管SLE法 已被廣泛用于血漿和尿液中藥物及代謝產(chǎn)物、酒中多酪類物質(zhì)、地表水中農(nóng)藥殘留物檢測(cè) 和藥物成分的分離提取，然而其所針對(duì)的對(duì)象通常為某種或某類毒性物質(zhì)。
[0004] 此外，即便能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)樣本中的多種結(jié)構(gòu)不同的毒性物質(zhì)的分離提取，由于樣本 的復(fù)雜性、檢測(cè)目標(biāo)的不確定性W及檢測(cè)范圍的廣泛性，也很難做到有針對(duì)性地對(duì)樣本中 的多種毒性物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，因此樣本中毒性物質(zhì)的篩查至關(guān)重要。然而，各種毒性物質(zhì)的理 化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、色譜行為等性質(zhì)各異，所要求的分析檢測(cè)條件各異，因此如何在同一條 件下對(duì)樣本中的多種毒性物質(zhì)進(jìn)行有效分離、靈敏檢測(cè)成為目前法庭科學(xué)領(lǐng)域毒物篩查與 分析的難點(diǎn)及研究熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供一種固相支撐液液萃取-色質(zhì)聯(lián)用篩查樣本中毒性物質(zhì)的方法，用于 解決現(xiàn)有技術(shù)方法無(wú)法對(duì)樣本中多種不同結(jié)構(gòu)的毒性物質(zhì)進(jìn)行快速篩查等技術(shù)缺陷。
[0006] 本發(fā)明提供一種采用固相支撐液液萃取-氣質(zhì)聯(lián)用篩查樣本中毒性物質(zhì)的方法， 包括如下步驟：
[0007] 采用水溶性有機(jī)溶劑和去離子水的混合溶液對(duì)樣本進(jìn)行提取，對(duì)提取后的提取液 進(jìn)行離屯、，收取上清液并除去上清液中的有機(jī)溶劑，制得樣本液；
[0008] 將所述樣本液加入經(jīng)活化的固相支撐液液萃取柱中，靜置，隨后采用洗脫液進(jìn)行 洗脫，收集洗脫液；
[0009] 對(duì)所述洗脫液進(jìn)行色譜-質(zhì)譜分析。
[0010] 在一實(shí)施方式中，所述水溶性有機(jī)溶劑為丙酬，并且所述混合溶液中水溶性有機(jī) 溶劑與去離子水的體積比為4 : 1。本發(fā)明人經(jīng)大量研究發(fā)現(xiàn)；采用體積比為4 : 1的丙 酬和去離子水的混合溶液對(duì)樣本進(jìn)行提取時(shí)，不僅可w有效地去除樣本中的油脂、色素、蛋 白等多種雜質(zhì)，從而排除其對(duì)檢測(cè)的不利影響，此外還能夠在最大范圍內(nèi)使大量結(jié)構(gòu)不同 的目標(biāo)檢測(cè)物質(zhì)溶出，從而在檢測(cè)目標(biāo)不確定、檢測(cè)范圍廣泛時(shí)能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)樣本中的多種 毒性物質(zhì)的快速篩查?；旌先芤褐杏袡C(jī)溶劑體積過(guò)少可能會(huì)導(dǎo)致某些目標(biāo)檢測(cè)物質(zhì)無(wú)法溶 出，而體積過(guò)大不利于對(duì)后續(xù)對(duì)有機(jī)溶劑的去除，較佳的體積比為4 : 1。
[0011] 本發(fā)明對(duì)所述樣本不作嚴(yán)格限制，特別是可W為器官組織、血液、體液、腐尸、腐泥 等生物樣本。在一實(shí)施方式中，所述樣本可W為體液或血液等液態(tài)樣本，并且可W控制所 述混合溶液與所述樣本的體積比為（1.5-2. 5) : 1;此外，本發(fā)明對(duì)所述提取的溫度和時(shí)間 不作嚴(yán)格限制，其可W根據(jù)樣本的種類、目標(biāo)檢測(cè)物質(zhì)等進(jìn)行確定，提取溫度例如可W為室 溫，提取時(shí)間例如可W為1-lOmin。
[0012] 在另一實(shí)施方式中，所述樣本還可W為器官組織等固態(tài)樣本，所述提取為超聲波 提取，超聲波提取有利于固態(tài)樣本中目標(biāo)檢測(cè)物質(zhì)的釋放和溶出；并且可W控制所述混合 溶液與所述樣本的體積/質(zhì)量比為（1.5-2. 5) : 1，例如樣本質(zhì)量為Ig時(shí)，混合溶液的體積 為1. 5-2. 5mL。此外，超聲波提取的溫度可W為室溫，提取時(shí)間可W為20-40min。
[0013] 本發(fā)明對(duì)上清液中有機(jī)溶劑的去除方式不作嚴(yán)格限定，例如可W采用溫度為 40-60°C氣體流除去上清液中的有機(jī)溶劑，所述氣體流為空氣流或氮?dú)饬?，?yōu)選為45°C的 氮?dú)饬?。進(jìn)一步地，可W控制除去有機(jī)溶劑后的上清液的體積與樣本的質(zhì)量或體積比為 (0.5-1) : 1，例如樣本體積為2mL時(shí)，除去有機(jī)溶劑后的上清液的體積可控制在1-2111以較 佳的為ImU從而保證無(wú)有機(jī)溶劑殘留而影響目標(biāo)毒性物質(zhì)的檢測(cè)。
[0014] 本發(fā)明所述固相支撐液液萃取柱中所填裝的填料可W為本領(lǐng)域的常規(guī)填料，例如 娃藻±、中性氧化侶等，固相支撐液液萃取柱例如可W為IS0LUTESLE萃取柱，該萃取柱在 使用前可W采用甲醇進(jìn)行活化。進(jìn)一步地，將所述樣本液的抑值調(diào)至6后加入經(jīng)活化的固 相支撐液液萃取柱中，所述靜置的時(shí)間可W為1-lOmin，例如5min;此外，所述洗脫液可W 為二氯甲燒、己酸己醋或二氯甲燒/異丙醇，優(yōu)選為二氯甲燒；所述洗脫時(shí)洗脫液的流速可 W為 0. 4-0. 6血/min,例如 0. 5血/min。
[0015] 在一實(shí)施方式中，所述色譜-質(zhì)譜分析可W為氣相色譜-質(zhì)譜分析，色譜條件為： HP-5MS、HP-1MS或HP-35MS色譜柱，30mX0. 25mmX0. 25ym;進(jìn)樣 口溫度 280°C;柱溫；起始 溫度80°C，保持2min，W20°C/min的速率升至280°C，保持16. 5min;載氣為氮?dú)?，流?血/ min,分流比20 : 1;質(zhì)譜條件為；傳輸線溫度250°C;四極桿溫度200°C;檢測(cè)器電壓1.IkV; 離子化方式；EI源；溶劑延遲時(shí)間3min;掃描模式；全掃描模式，掃描質(zhì)量范圍50-600m/z。
[0016] 研究表明；柱溫起始溫度過(guò)低時(shí)毒性物質(zhì)的檢測(cè)靈敏度降低，起始溫度過(guò)高時(shí)部 分毒性物質(zhì)保留時(shí)間短，易受干擾而不易準(zhǔn)確檢出，較佳的起始溫度為80°c。特別是，在上 述氣相色譜和質(zhì)譜條件下進(jìn)行檢測(cè)有利于同時(shí)在最大范圍內(nèi)檢出大量結(jié)構(gòu)不同的目標(biāo)檢 測(cè)物質(zhì)，并且提高檢測(cè)的靈敏度，從而有利于實(shí)現(xiàn)對(duì)樣本中多種不同結(jié)構(gòu)的毒性物質(zhì)的快 速篩查。
[0017] 在另一實(shí)施方式中，所述色譜-質(zhì)譜分析還可W為液相色譜-質(zhì)譜分析，色譜條件 為；AC卵ITYUPLC服SC18色譜柱，2.lmmX150mm，1.8ym;流動(dòng)相；A為0.1%甲酸己膳， B為5mM的甲酸錠，用0. 1%的甲酸調(diào)節(jié)抑值至3. 5;梯度洗脫條件；0min;13%A，87%B; lOmin;50%A，50%B;10. 75min;95%A，5%B;12. 5min;13%A，87%B;柱溫；35°C;流速； 0. 4mL/min;質(zhì)譜條件為；電離模式；電噴霧電離；毛細(xì)管電壓；3.OkV;離子源溫度；150°C; 霧化氣流速；10(K)LA;掃描模式；正離子掃描，掃描質(zhì)量范圍50-1000m/z。
[0018] 研究表明；采用己膳作為作為有機(jī)相進(jìn)行液相色譜分析時(shí)峰形良好，并且在己膳 中加入0. 1 %己酸或0. 1 %甲酸有利于化合物的離子化，并提高離子化效率，而采用其它有 機(jī)相（例如甲醇）存在峰形寬、伴有峰分叉等不良現(xiàn)象，不利于多種毒性物質(zhì)的同時(shí)檢出。 此外，鑒于流動(dòng)相若不使用緩沖鹽體系則色譜峰形易受樣品及環(huán)境的抑值影響，因此需要 加入少量揮發(fā)性鹽類，揮發(fā)性鹽類可降低進(jìn)入質(zhì)譜霧化室內(nèi)霧化液滴的表面張力，使目標(biāo) 化合物容易形成帶電電荷，然而過(guò)高濃度的揮發(fā)性鹽類不僅會(huì)競(jìng)爭(zhēng)電離，從而抑制目標(biāo)物 的電離信號(hào)，還可能使得色譜分離時(shí)在色譜柱中出現(xiàn)鹽析出，造成色譜柱的堵塞，柱子分離 效果降低；通過(guò)對(duì)150多種毒性物質(zhì)的質(zhì)譜信號(hào)的影響的研究，結(jié)果表明在流動(dòng)相中加入 5mmol/L的甲酸錠溶液，可獲得較理想的質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)，繼續(xù)增大緩沖鹽濃度對(duì)目標(biāo)化合物 的電離抑制很大，信號(hào)響應(yīng)值降低。因此，本發(fā)明采用0. 1%甲酸己膳和5mM的甲酸錠作為 流動(dòng)相。進(jìn)一步地，AC卵口YUPLCHSSC18色譜柱能夠更好地實(shí)現(xiàn)150多種結(jié)構(gòu)不同的毒 性物質(zhì)的同時(shí)分離，而AC卵ITYy化C邸HC18、服TC18W及服SC18柱的分離效果相對(duì)較 差，