金銀花濃縮過程在線實時放行檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于近紅外檢測和統(tǒng)計過程控制領(lǐng)域，具體涉及一種金銀花濃縮過程在線 實時放行檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬ZofliceraThumb.的干燥花蕾或帶初 開的花，是一味應(yīng)用十分廣泛的藥材，其性甘寒，氣芳香，既能宣散風熱，還善清解血毒，用 于各種熱性病，如身熱、發(fā)瘆、發(fā)斑、熱毒瘡癰、咽喉腫痛等癥，均效果顯著。目前金銀花已是 "熱毒寧注射液"、"清開靈注射液"、"銀黃注射液"等中藥大品種的主要原藥材。金銀花濃縮 過程作為生產(chǎn)浸膏的一個重要過程，其有效成分和溶劑含量的變化對后續(xù)精制過程有重要 影響。
[0003] 人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH)于2009年提出"實時放行檢測（RTRT)" 的理念，結(jié)合工藝控制和關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA)等數(shù)據(jù)的分析，評估和保證中間產(chǎn)品或最終成 品質(zhì)量的能力。RTRT既可應(yīng)用于連續(xù)的生產(chǎn)過程，也可應(yīng)用不連續(xù)的生產(chǎn)單元，如蒸餾、結(jié) 晶、分離純化及各種化學反應(yīng)等。歐盟藥監(jiān)局（EMA)于2012年發(fā)布RTRT指導(dǎo)文件，該文件 中提出RTRT通常包含利用PAT工具的一系列過程控制的組合，比如近紅外光譜分析技術(shù) 和拉曼光譜分析技術(shù)結(jié)合多變量統(tǒng)計過程控制（MSPC)方法，以實現(xiàn)生產(chǎn)過程的實時放行檢 測。
[0004] 近紅外光譜技術(shù)是目前發(fā)展迅速和最具有應(yīng)用前景的過程分析技術(shù)之一，具有樣 品處理簡單、分析快速、綠色環(huán)保、無損、適于光纖遠距離傳輸?shù)忍攸c，已陸續(xù)用于藥效成分 的含量測定、中藥提取、濃縮、醇沉、萃取等過程的在線分析、天然藥物鑒別、中藥材的產(chǎn)地 鑒別和成品的質(zhì)量分析等，能夠?qū)崿F(xiàn)中藥生產(chǎn)過程關(guān)鍵質(zhì)量屬性的實時放行檢測。而統(tǒng)計 過程控制通過對生產(chǎn)過程數(shù)據(jù)和近紅外光譜的統(tǒng)計分析方法可得到實時放行科學合理的 放行標準。將近紅外光譜技術(shù)與統(tǒng)計過程控制方法聯(lián)用可實現(xiàn)金銀花濃縮過程的實時放行 檢測，同時符合定量和定性放行標準的金銀花濃縮批次放行進入后續(xù)精制純化環(huán)節(jié)，以提 高金銀花濃縮過程的質(zhì)量控制水平，保證終產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定和可控。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種金銀花濃縮過程在線實時放行檢測方法。建立金銀花濃 縮過程新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、密度及含水率的在線近紅外檢測模型，并以Shewhart 控制圖建立定量放行控制限，實現(xiàn)金銀花濃縮過程的5個質(zhì)控指標的定量實時放行檢測。 同時利用多變量統(tǒng)計過程控制（MSPC)建立D統(tǒng)計量和Q統(tǒng)計量控制圖，并得到定性放行控 制限，實現(xiàn)金銀花濃縮過程的定性實時放行檢測。同時符合定量和定性放行標準的批次放 行進入后續(xù)生產(chǎn)過程。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：(在以下步驟中，要求將用到的） 1.在線采集金銀花濃縮過程近紅外透射光譜及濃縮液樣本 金銀花濃縮過程工藝條件為：濃縮溫度80°C，真空度-0. 04~-0. 08 MPa，濃縮時間為 150分鐘，并以濃縮液密度達到I. 10~1. 12 g/mL為濃縮終點，濃縮過程中每隔1分鐘在線 采集濃縮液近紅外透射光譜。濃縮開始后每隔15分鐘采集濃縮液樣品，1小時后每隔10分 鐘取樣，濃縮液合并后每隔5分鐘取樣，達到濃縮終點后連續(xù)取樣3份； 2. 測定濃縮液樣本各質(zhì)控指標，包括新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、密度及含水率； (1)新綠原酸、綠原酸和隱綠原酸濃度測定 高效液相色譜條件：色譜柱：Kromasil 100-5-C18分析柱（4. 6X250 mm，5 μπι);流動 相：0. 1%磷酸水溶液-甲醇（80:20, v/v);檢測波長為327 nm ;進樣量為10 yL ;柱溫為 30°C ;流速為 I mL/min。
[0007] 供試品溶液制備：稱取濃縮合并前藥液樣本約I g于25 mL量瓶中，稱取濃縮合并 后藥液樣本約I g于100 mL量瓶，分別用純化水稀釋置刻度，于13000 r/min離心5 min， 濾過（0. 45 Mm微孔濾膜)，取續(xù)濾液用于液相分析。
[0008] 標準曲線繪制：精密稱取新綠原酸、綠原酸和隱綠原酸對照品各5 mg、25 mg和5 mg于25 mL量瓶中，50%甲醇溶解定容，作為儲備液。用移液管分別精密吸取對照品儲備 液I mL到100 mL，50 mL，25 mL和10 mL的量瓶中，精密吸取對照品儲備液2 mL和4 mL 到10 mL量瓶中，并用50%甲醇稀釋至刻度，得到不同濃度的對照品溶液，按高效液相色譜 條件依次進樣，并記錄峰面積。結(jié)果顯示新綠原酸、綠原酸和隱綠原酸分別在I. 94~194. 4 4 8/1^、10.11~1011.2 4 8/1^、1.98~198.0 48/1^范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)1?均大 于 0· 999。
[0009] (2)密度值測定 將在線取得的樣品于80°C水浴鍋中恒溫后，搖勻，精密吸取I mL，體積記做V，精密稱 定，質(zhì)量記為《。即可計算出濃縮液的密度值，密度的計算公式見公式（1)，重復(fù)三次，取平 均值。
[0010] (3)含水率測定
【主權(quán)項】
1. 一種金銀花濃縮過程在線實時放行檢測方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn)： (1) 在線采集金銀花濃縮過程近紅外透射光譜及濃縮液樣本：金銀花濃縮過程正常工 藝條件為：濃縮溫度80°C，真空度-ο. 04~-0. 08 MPa，濃縮時間為150分鐘，并以濃縮液密 度達到I. 10~1. 12 g/mL為濃縮終點，濃縮過程中每隔1分鐘在線采集濃縮液近紅外透射光 譜，濃縮開始后每隔15分鐘采集濃縮液樣品，1小時后每隔10分鐘取樣，濃縮液合并后每隔 5分鐘取樣，達到濃縮終點后連續(xù)取樣3份； (2) 測定濃縮液樣本中各質(zhì)控指標數(shù)據(jù)：新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、密度及含水率； (3) 采用偏最小二乘法建立各質(zhì)控指標的近紅外定量模型，新綠原酸、綠原酸和隱綠原 酸模型采用一階導(dǎo)數(shù)和Savitzky-Golay平滑預(yù)處理，建模波段為6102~5446 cnT1;密度和 含水率模型采用一階導(dǎo)數(shù)和Savitzky-Golay平滑預(yù)處理，建模波段為7502~4997 cm-1; (4) 在線收集多批次正常工藝條件濃縮終點樣本，測定各質(zhì)控指標，利用Shewhart控 制圖建立定量實時放行檢測標準； (5) 在線采集多批次正常和異常工藝條件濃縮終點樣本的近紅外透射光譜，建立多變 量統(tǒng)計過程控制模型，通過D統(tǒng)計量和Q統(tǒng)計量控制圖建立定性RTRT標準； (6) 在線監(jiān)測正常生產(chǎn)工藝的金銀花濃縮過程，利用建立的近紅外定量模型在線預(yù)測 各指控指標含量，并利用建立的MSPC模型計算D統(tǒng)計量和Q統(tǒng)計量，符合定量和定性RTRT 標準的批次方可放行進入下一生產(chǎn)環(huán)節(jié)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金銀花濃縮過程在線實時放行檢測方法，其特征在于， 步驟（4)中的利用Shewhart控制圖建立定量RTRT標準通過以下步驟實現(xiàn)：（1)在線收集 多批次正常工藝條件濃縮終點樣本；（2)測定樣本中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、密度及 含水率值，分別計算均值Cf )和標準差（σ );(3)計算5個質(zhì)控指標的控制下限（LCL)和控 制上限（UCL)，其中綠原酸、綠原酸、隱綠原酸和含水率的控制限為尤±3 〇，密度的控制限 為X ±2 〇 ; (4)金銀花濃縮過程的定量RTRT放行標準為：新綠原酸為0.98~1. 64 mg/g，綠 原酸為9. 14~14. 3 mg/g，隱綠原酸為1.53~2. 61 mg/g，密度為I. 11~1. 13 g/mL，含水率為 61. 84~75. 22%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金銀花濃縮過程在線實時放行檢測方法，其特征在于， 步驟（5)中的通過D統(tǒng)計量和Q統(tǒng)計量控制圖建立定性RTRT標準通過以下步驟實現(xiàn)： (1)在線收集多批次正常和異常工藝條件濃縮終點樣本，在線采集近紅外光譜；（2)選擇 6500~5500 cnT1波段的近紅外光譜數(shù)據(jù)，經(jīng)主成分分析后，選擇的主成分數(shù)為2,建立MSPC 模型；（3)取臨界水平a= 0.95計算光譜的D統(tǒng)計量和Q統(tǒng)計量的控制限，作為定性實時放 行標準；（4)金銀花濃縮過程的定性RTRT標準為：D統(tǒng)計量低于6. 58, Q統(tǒng)計量低于0. 04。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金銀花濃縮過程在線實時放行檢測方法在金銀花濃縮 過程中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種金銀花濃縮過程在線實時放行檢測方法，通過采集金銀花濃縮過程近紅外透射光譜，建立在近紅外模型，收集終點樣本，測定各質(zhì)控指標，利用Shewhart控制圖建立定量實時放行檢測標準，采集終點樣本的近紅外光譜，建立多變量統(tǒng)計過程控制模型，獲得定性RTRT標準，采集異常批次樣本，利用近紅外模型預(yù)測異常批次并繪制Shewhart控制圖，驗證定量RTRT可行性，采集異常批次樣本光譜，利用MSPC模型計算D統(tǒng)計量和Q統(tǒng)計量，驗證RTRT可行性。本發(fā)明結(jié)合近紅外和統(tǒng)計過程控制，實現(xiàn)金銀花濃縮過程實時放行檢測，同時符合定量和定性放行標準的批次方可放行進入后續(xù)精致純化環(huán)節(jié)，提高了濃縮過程的質(zhì)量控制水平。
【IPC分類】G01N30-02, G01N9-04, G01N21-3577, G01N5-04, G01N21-359
【公開號】CN104833651
【申請?zhí)枴緾N201510177436
【發(fā)明人】劉雪松, 金葉, 陳勇, 吳永江, 杜文俊, 蕭偉, 王振中, 畢宇安, 吳建雄
【申請人】浙江大學, 江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司
【公開日】2015年8月12日
【申請日】2015年4月15日