一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種叔丁基肼鹽酸鹽的定量分析方法，具體涉及 一種利用柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 叔丁基肼鹽酸鹽（Tertbutylhydrazinehydrochloride)，又名特丁基肼鹽酸 鹽，是一種重要的農(nóng)藥中間體；是合成抑食肼（RH-5849)、蟲酰肼（Tebufenozide)、氯蟲酰 餅（Halofenozide)、甲氧蟲酰餅（Methoxyfenozide)、環(huán)蟲酰餅（Chromafenozide)及_螨 靈（Pyridben)等殺蟲劑的重要原料。由于叔丁基肼鹽酸鹽在生產(chǎn)過程中引入較多的鹽酸 肼且不易分離。因此，對叔丁基肼鹽酸鹽的質(zhì)量控制，直接影響到合成產(chǎn)物的質(zhì)量。
[0003] 目前報(bào)道的叔丁基肼鹽酸鹽的測定方法主要有三種：（1)碘量法(氧化還原滴定）； (2)將叔丁基肼鹽酸鹽衍生化后利用氣相色譜法進(jìn)行測定 [1]; (3)利用離子色譜法檢測叔 丁基肼鹽酸鹽[2]。
[0004] 以上三種方法均有不足之處。方法一測定過程中，由于叔丁基肼鹽酸鹽生產(chǎn)過程 中會(huì)引入鹽酸肼的干擾，影響含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性；方法二測定過程中，衍生物的沸點(diǎn)較 高，且溶劑影響較大；方法三中采用的離子色譜儀價(jià)格昂貴，不利用推廣。
[0005] 本發(fā)明采用普及率較高的高效液相色譜儀，柱前衍生化法對叔丁基肼鹽酸鹽進(jìn)行 測定。該方法精密度高，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，樣品處理簡單易行，方便可靠。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所述的柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方法，采用高 效液相色譜儀檢測，外標(biāo)法進(jìn)行定量。
[0007] 具體步驟包括。
[0008] (1)叔丁基肼鹽酸鹽對照品溶液的配置：取叔丁基肼鹽酸鹽對照品（> 98%) -定 量，精密稱定，配制成10mg/mL的叔丁基肼鹽酸鹽對照品溶液。
[0009] (2)叔丁基肼鹽酸鹽樣品溶液的配置：取叔丁基肼鹽酸鹽(約90%)適量，精密稱 定，配制成約10mg/mL的叔丁基肼鹽酸鹽樣品溶液。
[0010] (3)衍生試劑的配置：所述的衍生試劑為苯甲醛。取苯甲醛(分析純)適量，配制成 40mg/mL的苯甲醛的無水乙醇溶液。
[0011] (4)衍生方法：取上述叔丁基肼鹽酸鹽溶液一定量置25mL容量瓶中，加入等體積 衍生試劑和PH=5. 0的磷酸鹽緩沖溶液lmL，置恒溫水浴振蕩器中，30°C振搖90min。放冷， 甲醇定容至刻度。
[0012] (5)色譜條件：所述的高效液相色譜儀為依利特1201高效液相色譜儀，紫外可變 檢測器；HypersilBDSC18 (5ym，4. 6X250mm)色譜柱；柱溫25°C;流動(dòng)相為甲醇；流速為 1.OmL/min;檢測波長為298nm;進(jìn)樣量20yL(定量環(huán)）。
[0013] (6)測定方法：分別取叔丁基肼鹽酸鹽對照品溶液0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7mL置 25mL容量瓶中，按照步驟（4)衍生方法反應(yīng)結(jié)束后，分別取0. 5mL置lOmL容量瓶中，甲醇定 容，0.45ym濾膜過濾。按照步驟（5)色譜條件進(jìn)行分析，記錄峰面積。采用外標(biāo)法繪制叔 丁基肼鹽酸鹽濃度-叔丁基肼鹽酸鹽衍生物峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。
[0014] 另取叔丁基肼鹽酸鹽樣品溶液適量，按照步驟（4)衍生方法反應(yīng)結(jié)束后，分別取 0. 5mL置10mL容量瓶中，甲醇定容，0. 45ym濾膜過濾。按照步驟（5)色譜條件進(jìn)行分析， 記錄峰面積。根據(jù)步驟（6)中回歸方程計(jì)算叔丁基肼鹽酸鹽濃度，進(jìn)而根據(jù)叔丁基肼鹽酸 鹽樣溶液配制方法計(jì)算得出叔丁基肼鹽酸鹽的含量。
[0015] 所述衍生試劑為苯甲醛。
[0016] 所述叔丁基肼鹽酸鹽與衍生試劑用量為1:3-1:5;優(yōu)選1:4。
[0017] 所述衍生反應(yīng)溫度為30 °C。
[0018] 所述衍生反應(yīng)時(shí)間為90min。
[0019] 所述衍生反應(yīng)條件為PH=5. 0。
[0020]所述色譜柱溫度為25-35°C，此溫度范圍內(nèi)，其他色譜條件不變的情況下，叔丁基 肼鹽酸鹽衍生物均能與其他雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)完全分離。
[0021] 所述色譜柱溫度優(yōu)選25 °C。
[0022] 所述流動(dòng)相為甲醇、水。在其他色譜條件不變的情況下，甲醇和水的比例在 100:0-70:30范圍內(nèi)，叔丁基肼鹽酸鹽均能與其他雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)完全分離，且系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 滿足含量測定的要求。
[0023] 所述流動(dòng)相為甲醇。
[0024] 所述流動(dòng)相流速在0. 8mL/min-1. 2mL/min范圍內(nèi)，叔丁基肼鹽酸鹽衍生物均能 與其他雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)完全分離。
[0025] 所述流動(dòng)相流速為1. 0mL/min。
[0026] 所述檢測波長為298nm。
[0027] 所述檢測方法中每次測量進(jìn)樣量為20yL。
[0028] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，利用柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽 的方法的建立，能完全消除樣品中主要雜質(zhì)鹽酸肼的干擾，保證了測量結(jié)果的準(zhǔn)確性；該方 法衍生反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)進(jìn)行完全；具有較高的精密度；重現(xiàn)性和重復(fù)性良好；實(shí)驗(yàn)儀器 設(shè)備普及率高且操作方法簡便易行，方便可靠。
【附圖說明】
[0029] 圖1衍生試劑高效液相色譜圖。
[0030] 圖2鹽酸肼衍生物高效液相色譜圖。
[0031] 圖3叔丁基肼鹽酸鹽對照品高效液相色譜圖。
[0032] 圖4叔丁基肼鹽酸鹽樣品高效液相色譜圖。
[0033] 圖5實(shí)施實(shí)例一叔丁基肼鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0034] 圖6實(shí)施實(shí)例二叔丁基肼鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0035] 圖7實(shí)施實(shí)例三叔丁基肼鹽酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0036] 圖8衍生時(shí)間與衍生物峰面積關(guān)系圖。
【具體實(shí)施方式】
[0037] 實(shí)施實(shí)例一。
[0038] 對照品溶液的配制：精密稱取叔丁基肼鹽酸鹽對照品0. 1000g(精確至 0.OOOlg)，置10ml容量瓶中，用超純水溶解并定容至刻度。配制成10mg/mL的對照品溶液。
[0039] 樣品溶液的配制：精密稱取叔丁基肼鹽酸鹽樣品0. 1100g(精確至0. 0001g)，置 l〇ml容量瓶中，用超純水溶解并定容至刻度。配制成含叔丁基肼鹽酸鹽約10mg/mL的樣品 溶液。
[0040] 衍生試劑的配制：稱取苯甲醛0. 40g(精確至0. 01g)，置10ml容量瓶中，用無水乙 醇溶解并定容至刻度。配制成含苯甲醛40mg/mL的衍生試劑。
[0041] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：分別準(zhǔn)確量取對照品溶液0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7mL置25mL容量 瓶中，加入等量的衍生試劑和PH=5. 0的磷酸鹽緩沖溶液lmL，置恒溫水浴振蕩器中，30°C振 搖90min。放冷，甲醇定容至刻度。取衍生溶液lmL置10mL容量瓶中，甲醇定容。0.45ym 濾膜過濾后，按照步驟（5)中色譜條件測定3次并記錄峰面積。結(jié)果如表1所示。
[0042] 表1標(biāo)準(zhǔn)曲線測定實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方法，其特征在于：采用 柱前衍生化、高效液相色譜法進(jìn)行測定、外標(biāo)法定量分析，具體步驟包括： (1) 分別配制叔丁基肼鹽酸鹽對照品、樣品及衍生試劑溶液，分別量取一定量對照品 溶液，加入等體積的衍生試劑溶液、PH5.O緩沖溶液；30°C振搖90min;放冷，甲醇定容至刻 度； (2) 分別量取一定量衍生試液，采用高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽衍生物并記 錄峰面積，外標(biāo)法繪制叔丁基肼鹽酸鹽濃度-叔丁基肼鹽酸鹽衍生物峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，得 出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程； (3) 量取一定量叔丁基肼鹽酸鹽樣品溶液，按照步驟（1)的衍生方法衍生結(jié)束后，采用 高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽衍生物，并記錄峰面積，根據(jù)步驟（2)中回歸方程計(jì)算 并得出叔丁基肼鹽酸鹽含量； 所述色譜條件為：高效液相色譜儀為依利特1201高效液相色譜儀，紫外可變檢測器；HypersilBDSC18 (5ym，4.6X250mm)色譜柱；柱溫 25-35°C;流動(dòng)相為 70% -100% (v/v) 甲醇水溶液；流速為〇. 8 -I. 2mL/min;檢測波長為298nm;進(jìn)樣量20yL。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方 法，其特征在于：所述的衍生試劑為苯甲醛。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的 方法，其特征在于：所述的叔丁基肼鹽酸鹽與衍生試劑用量為1:3-1:5 (w/w)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方 法，其特征在于：所述的衍生反應(yīng)溫度為30°C。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方 法，其特征在于：所述的衍生反應(yīng)時(shí)間為90min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方 法，其特征在于：所述的衍生反應(yīng)條件為PH=5. 0。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方 法，其特征在于：所述色譜柱溫度為25- 35°C。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方 法，其特征在于：所述流動(dòng)相為甲醇：水=100:0- 70:30。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方 法，其特征在于：所述流動(dòng)相流速為0. 8mL/min-I. 2mL/min。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的 方法，其特征在于：所述檢測波長為298nm。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種柱前衍生化-高效液相色譜法測定叔丁基肼鹽酸鹽的方法。以苯甲醛為衍生試劑，PH=5.0、30℃反應(yīng)90min。采用依利特1201高效液相色譜儀，紫外可變檢測器；Hypersil BDS C18（5μm,4.6×250mm）色譜柱；柱溫25—35℃；流動(dòng)相為70%—100%（v/v）甲醇水溶液；流速為0.8—1.2mL/min；檢測波長為298nm；進(jìn)樣量20μL進(jìn)行測定，并記錄峰面積。采用外標(biāo)法繪制叔丁基肼鹽酸鹽濃度-叔丁基肼鹽酸鹽衍生物峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。進(jìn)而計(jì)算得出叔丁基肼鹽酸鹽含量。本發(fā)明能夠排除含量測定過程中鹽酸肼的干擾，對叔丁基肼鹽酸鹽進(jìn)行準(zhǔn)確定量。該方法衍生反應(yīng)進(jìn)行完全，操作簡便易行，方便可靠，且易于普及推廣，具有較高的準(zhǔn)確度和精密度。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號(hào)】CN104820056
【申請?zhí)枴緾N201510242105
【發(fā)明人】劉立業(yè), 丁元生, 史晉宜, 劉巧玉
【申請人】吉林化工學(xué)院
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月14日