[0104] c)通過(guò)比較在步驟b獲得的拉曼光譜值與允許在第I或II類之間進(jìn)行區(qū)分的參 考光譜值，或通過(guò)多變量分析比較在步驟b獲得的拉曼光譜值與第I類和第II類參考拉曼 光譜值，將血液樣品分類至下列類別中的一種：
[0105]I.包含與阿爾茨海默氏癥的非認(rèn)知惡化相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的血液樣品；
[0106] II.包含與阿爾茨海默氏癥的認(rèn)知惡化相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的血液樣品。
[0107] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，表述"拉曼光譜"指代這樣的拉曼光譜：包括390和1700CHT1 之間包括的光譜區(qū)域，能夠具有包括前述光譜區(qū)域的較寬光譜區(qū)域。事實(shí)上，本發(fā)明的作 者已經(jīng)發(fā)現(xiàn)300和3600CHT1之間包括的光譜區(qū)域中存在5個(gè)光譜區(qū)域與AD存在或不存在 相關(guān)，包括R. 1至R. 4限定的區(qū)域，以及R. 5區(qū)域--相應(yīng)于3100和2800CHT1之間包括的 C-H伸縮區(qū)域。在這種情況下，為在分析中包括所述R. 5區(qū)域，所述拉曼光譜適合包括390 和3100CHT1之間的光譜區(qū)域。為利用本發(fā)明描述的方法獲得較好結(jié)果，適合去除光譜中由 血液樣品中包含的生物學(xué)物質(zhì)生成的、至少部分地遮蓋在議樣品的拉曼光譜的熒光信號(hào)。 雖然可通過(guò)優(yōu)化所用顯微光譜儀最小化可視光譜中利用激光線拉曼激發(fā)生成的拉曼光譜 的熒光，但熒光抑制無(wú)法是100%。因此，適合通過(guò)利用近紅外激發(fā)的激光線如例如l〇64nm 釹-YAG激光線來(lái)獲得光譜。此外，近IR激光的使用消除了有色少數(shù)組分的不利拉曼共振， 其也可遮蓋蛋白質(zhì)和脂質(zhì)光譜。
[0108] 在包括記錄拉曼光譜的本發(fā)明方法的【具體實(shí)施方式】中，利用近紅外激發(fā)線記錄所 述拉曼光譜。
[0109] 在另一【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明的第一方法包括確定兩個(gè)或更多個(gè)區(qū)域的光譜值 的組合。
[0110] 術(shù)語(yǔ)"光譜值"，如本文所用，指代可獲自光譜和可用于比較若干光譜的任何可測(cè) 量參數(shù)。根據(jù)本發(fā)明可用的適當(dāng)?shù)墓庾V值非限制地包括強(qiáng)度比、頻率值和峰面積。
[0111] 術(shù)語(yǔ)"面積"，如本文所用，指代光譜峰限定的面積，其可通過(guò)繪制跨越峰的基線和 測(cè)量峰內(nèi)封閉的面積來(lái)計(jì)算?；€一般基于光譜上峰前和峰后的點(diǎn)繪制。
[0112] 術(shù)語(yǔ)"強(qiáng)度比"指代給定波長(zhǎng)下的峰強(qiáng)度除以第二波長(zhǎng)下的峰強(qiáng)度。
[0113] 術(shù)語(yǔ)"頻率值"，如本文中涉及帶時(shí)所用，指代帶內(nèi)的峰頻率。
[0114] 在【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明的第一方法包括確定選自下列的兩個(gè)拉曼光譜區(qū)域的 任何一種組合的光譜值：1600和1700CHT1之間包括的區(qū)域和910和980CHT1之間包括的區(qū) 域；1600和1700CHT1之間包括的區(qū)域和730和760CHT1之間包括的區(qū)域；1600和1700CHT1 之間包括的區(qū)域和390和450CHT1之間包括的區(qū)域；910和980CHT1之間包括的區(qū)域和730 和760CHT1之間包括的區(qū)域；910和980CHT1之間包括的區(qū)域和390和450CHT1之間包括的區(qū) 域；730和760CHT1之間包括的區(qū)域和390和450CHT1之間包括的區(qū)域。在另一【具體實(shí)施方式】 中，本發(fā)明的第一方法包括確定選自下列的三個(gè)拉曼光譜區(qū)域的任何組合的光譜值：1600 和1700CHT1之間包括的區(qū)域，910和980CHT1之間包括的區(qū)域和730和760CHT1之間包括的 區(qū)域；1600和1700CHT1之間包括的區(qū)域，910和980CHT1之間包括的區(qū)域和390和450CHT1之 間包括的區(qū)域；1600和1700CHT1之間包括的區(qū)域，730和760CHT1之間包括的區(qū)域和390和 450CHT1之間包括的區(qū)域；910和980CHT1之間包括的區(qū)域，730和760CHT1之間包括的區(qū)域和 390和450CHT1之間包括的區(qū)域。在另一【具體實(shí)施方式】中，本發(fā)明的第一方法包括獲得四個(gè) 拉曼光譜區(qū)域的拉曼光譜值--具體地，1600和1700CHT1之間包括的區(qū)域、910和980CHT1 之間包括的區(qū)域、730和760CHT1之間包括的區(qū)域和390和450CHT1之間包括的區(qū)域。
[0115] 根據(jù)本發(fā)明，相同血液樣品一一優(yōu)選相同血漿樣品一一的補(bǔ)充IR光譜法研宄可提 供另外的信息以通過(guò)分析其IR光譜的酰胺I區(qū)域來(lái)確定與阿爾茨海默氏癥的全面認(rèn)知惡 化相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的存在。此外，所述IR光譜還在1150-lOOOcnT1之間的區(qū)域和1140和 1190CHT1之間包括的區(qū)域中提供另外的額外標(biāo)記。所述標(biāo)記顯示與這種疾病的全面衰退量 表（GDS)的一定相關(guān)性，并且與AD相關(guān)的氧化應(yīng)激有關(guān)，其應(yīng)用適合分類所述樣品一一根 據(jù)其中與阿爾茨海默氏癥相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的含量。
[0116] 另一方面，本發(fā)明涉及確定血液樣品中與阿爾茨海默氏癥的全面認(rèn)知惡化相關(guān)的 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的振動(dòng)光譜法（本發(fā)明的第二方法），包括下列步驟：
[0117]a)記錄事先獲得的人血液樣品的紅外光譜；
[0118]b)獲得下列紅外光譜區(qū)域中至少一個(gè)的紅外光譜值：
[0119]IR. 1. 1600和1700CHT1之間包括的區(qū)域；
[0120]IR. 2. 1000和1150CHT1之間包括的區(qū)域；
[0121]IR. 3. 1140和1190CHT1之間包括的區(qū)域；
[0122] 其中所述紅外光譜值選自所述光譜區(qū)域面積值、所述光譜區(qū)域強(qiáng)度比和/或所述 光譜區(qū)域帶間面積百分比值；
[0123]c)通過(guò)比較在步驟b獲得的紅外光譜值與允許在第I或II類之間進(jìn)行區(qū)分的參 考紅外值，或通過(guò)多變量分析比較在步驟b獲得的紅外值與第I或II類參考紅外光譜值， 將血液樣品分類至下列類別中的一種：
[0124]I.包含與阿爾茨海默氏癥的非認(rèn)知惡化相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的血液樣品；
[0125]II.包含與阿爾茨海默氏癥的認(rèn)知惡化相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的血液樣品。
[0126] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，表述"紅外（IR)光譜"指代這樣的IR光譜：包括1000和 1150CHT1之間、1600 - 1700CHT1之間和1140和1190CHT1之間的光譜區(qū)域，所述光譜能夠由包 括前述光譜區(qū)域一一的較寬光譜區(qū)域組成，那些至少包括910和1700CHT1之間的光譜區(qū)域 的光譜是優(yōu)選的。
[0127] 另一方面，本發(fā)明涉及適用于來(lái)自相同對(duì)象的樣品、根據(jù)本發(fā)明的第一方法而且 還包括本發(fā)明的第二方法的步驟的方法（本發(fā)明的第三方法）。在本發(fā)明第三方法的具體 實(shí)施方式中，樣品通過(guò)步驟b獲得的光譜值與第I類和第II類參考拉曼值和與第I類和第 II類參考紅外光譜值的多變量分析比較來(lái)分類。
[0128] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，"多變量分析比較"指代通過(guò)如下這三種可選方法中的一種進(jìn) 行的比較：判別式分析，聚類分析和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析。，判別式分析比較優(yōu)選是由基于預(yù)測(cè)變 量的線性組合的判別函數(shù)構(gòu)成（在本發(fā)明中用于兩組）的模型，提供組與組之間可能的最 佳判別，因?yàn)樗雠袆e式分析提供的樣品分類結(jié)果優(yōu)于通過(guò)其他可選的比較方法獲得的那 些結(jié)果。
[0129] 本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，根據(jù)本發(fā)明方法，在根據(jù)本發(fā)明方法記錄拉曼光譜后或 在根據(jù)本發(fā)明方法記錄紅外光譜后，在優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明考慮校正光譜基線和根據(jù) 酰胺I帶面積標(biāo)準(zhǔn)化所述光譜。
[0130] 如本發(fā)明所用，"酰胺I帶"指代主要由多肽骨架羰基伸縮振動(dòng)組成的肽和蛋白質(zhì) 帶。其是多肽骨架的二級(jí)結(jié)構(gòu)的敏感標(biāo)記，這是因?yàn)槊總€(gè)C= 0鍵的振動(dòng)頻率取決于氫鍵 并且取決于酰胺基團(tuán)間的相互作用，從而兩者受二級(jí)結(jié)構(gòu)影響。
[0131] 如在本發(fā)明中理解，分析的血液樣品是已獲得的人血液樣品（即，先前提取自對(duì) 象），優(yōu)選人外周血樣品，因?yàn)槠涓菀撰@得。人血液由非細(xì)胞部分（血漿）和多種細(xì)胞部 分（如例如，血紅細(xì)胞、白細(xì)胞）和血小板元素構(gòu)成，其可在本發(fā)明的范圍內(nèi)用作待分析血 液樣品，血漿部分樣品優(yōu)選用于實(shí)施上述分析方法。
[0132] 如在本發(fā)明中理解，"血漿"指代血液的液體元素，代表血液體積總量的60%并且 沒(méi)有血紅細(xì)胞和白細(xì)胞。血漿部分比血小板部分優(yōu)選，因?yàn)槠涓菀撰@得，而且事實(shí)上眾所 周知由于血小板聚集或破裂現(xiàn)象導(dǎo)致獲得血小板困難。
[0133] 本發(fā)明可基于基本上不含血小板的血漿實(shí)施?？蛇x地，另一方面優(yōu)選富含血小板 的血漿樣品。如本發(fā)明所用，"富含血小板的血漿"指代已經(jīng)富集血小板并且大體上包含多 于300-350, 000血小板/yL的血漿?？衫矛F(xiàn)有技術(shù)狀態(tài)已知的各種方法獲得富含血小 板的血衆(zhòng)，包括下列描述的方法：Anitua和And：[a，PuestaalDiaPublicaciones，2000: 13-55;DeObarrio等，IntJPeriodonticsRestDent2000 ;20 :487_497 和Camargo和 Leckovics，JClinPeriodontolRes2002;37:300-306 ;0kuda等，JPeriodontol2003; 74 :849-857yKawase等，JPeriodontol2003;74:858-864)。各種方法由如下組成：在 具有抗凝劑的管中獲得血液和根據(jù)不同的方案使其處于不同的離心狀態(tài)，使得血液根據(jù)密 度分離成其基本組分，選擇相應(yīng)于富含血小板的血漿的部分?？蛇x地可用商品試劑盒，如 RegenPRP-試劑盒（RegenLab)。
[0134] 根據(jù)本發(fā)明，待分析血漿部分可先前獲自已經(jīng)通過(guò)任何標(biāo)準(zhǔn)血液分級(jí)方法如例如 離心-過(guò)濾分級(jí)獲得的人血液樣品（優(yōu)選人外周血）。然而，即使不一定需要在前的分級(jí)步 驟來(lái)獲得拉曼和/或紅外光譜，在要記錄其拉曼光譜時(shí)血漿部分樣品的制備可能也必須不 同于在要記錄其IR光譜時(shí)。
[0135] 在實(shí)施方式的記錄條件下，按照下列方法制備血漿部分樣品以記錄其拉曼光譜， 包括：
[0136]a)充分蒸發(fā)一定體積的血漿部分至干燥，以獲得所述部分的至少1和3mg之間的 干燥固體殘留物，其中所述部分體積的蒸發(fā)在2和25°C之間，優(yōu)選15和25°C之間，包括的 溫度下進(jìn)行，因?yàn)檎舭l(fā)比起在較低溫度下更快速地實(shí)現(xiàn)。
[0137]b)收集之前的干燥部分并通過(guò)用于FT-拉曼光譜法的常規(guī)微型研缽將其轉(zhuǎn)移至 具有直徑2mm的半球形空洞的圓柱形鋁盤。
[0138] 另一方面，在實(shí)施方式的記錄條件下，按照下列方法制備血漿部分樣品以記錄其 紅外光譜，包括在ZnSe晶體上延展體積在3和7yL之間的血漿部分，并將其留置以在2和 25°C之間，優(yōu)選15和25°C之間，包括的溫度下充分蒸發(fā)至干燥。
[0139] 在制備血漿部分樣品以記錄其拉曼或紅外光譜時(shí)，所述部分的體積蒸發(fā)至干燥可 在2和25°C之間包括的溫度下進(jìn)行，而觀察不到用于本發(fā)明目的的樣品的任何變化。以樣 品更快蒸發(fā)為目的，蒸發(fā)優(yōu)選在15和25°C之間進(jìn)行，兩限值均被包括。
[0140] 通常和以非限制性方式，在最初使用未分級(jí)的人血液樣品時(shí)，可根據(jù)下列方法在 獲得光譜數(shù)據(jù)前制備適于本發(fā)明的拉曼光譜法分析的血液部分樣品（優(yōu)選血漿樣品），包 括步驟：
[0141]a.通過(guò)任何已知的常用離心-過(guò)濾血液分級(jí)方法，從事先獲得的人外周血樣品獲 得所述血液部分（優(yōu)選血漿部分）；
[0142] b.充分蒸發(fā)約40 yL體積的前述部分至干燥，獲得所述部分的至少1和3mg之間 的干燥固體殘留物，其中所述部分體積的蒸發(fā)在相對(duì)低溫下進(jìn)行，具體地在2和25°C之間 包括的溫度范圍內(nèi)，更優(yōu)選15和25°C之間，所述限值被包括在內(nèi)；
[0143]c.收集前述干燥部分并通過(guò)用于FT-拉曼光譜法的常規(guī)微型研缽將其轉(zhuǎn)移至具 有直徑2mm的半球形空洞的圓柱形錯(cuò)盤。
[0144] 在本發(fā)明的方法除血液樣品的拉曼光譜法分析外還包括血液樣品一一優(yōu)選相同 血漿樣品一一的紅外光譜法分析時(shí)，血液或血漿樣品還必須在適于記錄其IR光譜的條件下 制備，然后獲得光譜數(shù)據(jù)。作為非限制性實(shí)例，在最初使用未分級(jí)的人血液樣品時(shí)，先前根 據(jù)下列方法制備適于紅外光譜法分析的血漿部分樣品，包括步驟：
[0145]a)通過(guò)任何已知的常用離心-過(guò)濾血液分級(jí)方法，從事先獲得的人外周血樣品獲 得所述血液部分（優(yōu)選血漿部分）；
[0146]b)將一定體積的在步驟a獲得的部分在ZnSe晶體上延展，獲得可靠的光譜，在血 漿情況下該體積優(yōu)選在3和7 y L之間，并將其留置以在2和25°C之間，優(yōu)選15和25°C之 間包括的溫度下充分蒸發(fā)至干燥。
[0147] 根據(jù)本發(fā)明，"拉曼光譜值"指代獲自R. 1至R. 4限定的區(qū)域中的一個(gè)的拉曼光譜 譜線的值。優(yōu)選的拉曼光譜值非限制地包括所述區(qū)域中具有較大強(qiáng)度的兩個(gè)帶之間的拉曼 強(qiáng)度比、所述光譜區(qū)域的兩個(gè)最小值之間包括的面積值、所述區(qū)域的帶其中一個(gè)的頻率值、 或在通過(guò)酰胺I帶標(biāo)準(zhǔn)化光譜后獲得的兩個(gè)不同峰的一階導(dǎo)數(shù)的平均值。本發(fā)明的作者已 經(jīng)發(fā)現(xiàn)，帶強(qiáng)度與全面衰退量表（GDS)之間差異最大的帶是"接近下列的帶"或"處于下列 左右的帶" ：1671、1658、960、938、758、743、423、409〇11'因此，一個(gè)和相同光譜區(qū)域中的這 些帶中兩個(gè)之間包括的光譜譜線下方封閉的這些帶的強(qiáng)度或其面積可能是適當(dāng)?shù)墓庾V值。
[0148] 所述光譜值或參數(shù)的生物化學(xué)-結(jié)構(gòu)分析已通過(guò)存在于血液中的不同類型的 生物分子的特征光譜進(jìn)行 <X*eGelder等，J.RamanSpectrosc. 38,1133-1147 (2007); Socrates，InfraredandRamanCharacteristicGroupFrequencies(3rded.)〇John Wiley和Sons，Chichester，2001)。由于基團(tuán)頻率的考慮因素，并且通過(guò)與在本發(fā)明中已在 與血液樣品相同的光譜記錄條件下測(cè)量的A0 -40和A0 -42淀粉狀肽的拉曼光譜比較，AD 患者在1671和409CHT1 (圖2-3)的最高拉曼強(qiáng)度（優(yōu)選以在1671和1658CHT1的強(qiáng)度之間 的比和以在409和423CHT1的強(qiáng)度之間的比來(lái)確定）可歸因于|3折疊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的形成。 疾病進(jìn)程中980和910CHT1之間的面積減少（圖4)可在a-螺旋蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)減少的方面進(jìn) 行解釋，并且最終760和740CHT1之間光譜譜線的變化（圖5)(以所述范圍內(nèi)的帶頻率確 定）可歸因于該色氨酸光譜范圍中清楚顯示的某些蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)的改變。
[0149] 因此，在優(yōu)選實(shí)施方式中：
[0150]-當(dāng)光譜值是1671和1658CHT1處的強(qiáng)度之間的比時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示 增加的光譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者，
[0151]-當(dāng)光譜值是409和423CHT1處的強(qiáng)度之間的比時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示增 加的光譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者。
[0152]-當(dāng)光譜值是980和910CHT1之間的區(qū)域的面積時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示減 少的值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者，
[0153] 當(dāng)光譜值是760和740CHT1之間的間隔中的帶頻率時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示 增加的光譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者。
[0154]-當(dāng)光譜值是758CHT1和743CHT1左右的帶的強(qiáng)度比時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯 示增加的光譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者，
[0155]-當(dāng)光譜值是在通過(guò)1720和1625CHT1之間的酰胺I帶的面積標(biāo)準(zhǔn)化原始光譜后 獲得的在1660和1662cm-l的一階導(dǎo)數(shù)的平均值時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示增加的光 譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者。
[0156]-當(dāng)光譜值是在通過(guò)1720和1625CHT1之間的酰胺I帶的面積標(biāo)準(zhǔn)化原始光譜后 獲得的在430CHT1的一階導(dǎo)數(shù)值時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示增加的光譜值，則樣品被認(rèn) 為屬于AD患者。
[0157] 類似地和根據(jù)本發(fā)明，"紅外光譜值"指代獲自IR. 1、IR. 2和IR. 3中限定的區(qū)域其 中一個(gè)的紅外光譜譜線的值，如例如，所述區(qū)域的光譜譜線的組分帶的面積百分比，或所述 區(qū)域的光譜譜線的標(biāo)準(zhǔn)化面積，等等。如前所述，在確定與阿爾茨海默氏癥的全面認(rèn)知惡化 相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)時(shí)，1600 - 1700CHT1之間包括的光譜區(qū)域提供關(guān)于待分析血液樣品的全 部0 _肽結(jié)構(gòu)的含量的信息，和更具體地1623和1640CHT1之間包括的光譜區(qū)域面積。然而， 1000 - 1150CHT1之間包括的光譜區(qū)域?qū)⑴cAD相關(guān)的氧化應(yīng)激的標(biāo)記相關(guān)，這在確定與阿爾 茨海默氏癥的全面認(rèn)知惡化相關(guān)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)時(shí)有助于實(shí)現(xiàn)待分析血液樣品的較好判別。
[0158] 因此，在優(yōu)選實(shí)施方式中：
[0159]-當(dāng)光譜值是1640-1623CHT1的區(qū)域相對(duì)于1670和1623CHT1區(qū)域之間的酰胺I 區(qū)域的面積百分比時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示增加的光譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患 者，
[0160]-當(dāng)光譜值是1150-lOOOcnT1的區(qū)域面積相對(duì)于3010和2800CHT1區(qū)域之間的區(qū)域 面積的百分比時(shí)，如果其相對(duì)于參考樣品顯示增加的光譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者，
[0161]-當(dāng)光譜值是1156CHT1左右的帶強(qiáng)度和1171CHT1左右的帶強(qiáng)度之間的比時(shí)，如果 其相對(duì)于參考樣品顯示增加的光譜值，則樣品被認(rèn)為屬于AD患者。
[0162]-當(dāng)光譜值是相對(duì)于1170CHT1的光譜譜線的值（I116。+11162+11165)/1 1177時(shí)--其中 1116。、11162和11165分別是1160、1162和1165〇11_ 1的光譜的一階導(dǎo)數(shù)的絕對(duì)值并且11177是處 于1177CHT1的最小值的一階導(dǎo)數(shù)的絕對(duì)值，如果其相對(duì)于參考樣品顯示增加的值，則樣品 被認(rèn)為屬于AD患者。
[0163] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，表述"Ri區(qū)域的參考光譜值，能夠在第I或II類之間區(qū)分"指 代通過(guò)R0C曲線獲得的用于所述區(qū)域Ri的光譜變量的截止值（cut-offvalue)(與最高靈 敏度和特異性相關(guān)）。當(dāng)步驟c的分類通過(guò)多變量分析、考慮那些先前限定（R. 1至R. 4拉 曼區(qū)域和/或IR. 1、IR. 2和IR. 3紅外區(qū)域）中的兩個(gè)或更多個(gè)光譜區(qū)域進(jìn)行時(shí)，參考光譜 值指代相應(yīng)的判別式截止點(diǎn)（C)，即，兩個(gè)組I和II的矩心（D#PDn)的平均值；各矩心是 各組判別式變量中每一個(gè)的平均值的判別式評(píng)分（判別函數(shù)值）。換句話說(shuō)，一個(gè)組的矩 心是這樣的點(diǎn)：其坐標(biāo)是每個(gè)判別式變量的組的平均值。如果樣品i的判別式評(píng)分Di使得 Di-h的差的絕對(duì)值小于C-Dt的差的絕對(duì)值，所述樣品被認(rèn)為屬于第I組，否則其屬于第II 組。
[0164] 根據(jù)本發(fā)明，適當(dāng)?shù)睦庾V值可以是下列：
[0165]-在1671CHT1左右和1658CHT1左右獲得的拉曼強(qiáng)度的比；
[0166]-相對(duì)于1720和1625CHT1之間的酰胺I帶面積的1660-1662〇114處的一階導(dǎo)數(shù)的 平均值；
[0167]-在409CHT1左右和在423CHT1左右獲得的拉曼強(qiáng)度的比；
[0168] _相對(duì)于1720和1625CHT1之間的酰胺I帶的面積的430CHT1處的一階導(dǎo)數(shù)；
[0169] -910和980CHT1之間包括的拉曼光譜譜線的面積；
[0170]-在758cm-1左右和在743cm-1左右獲得的拉曼強(qiáng)度的比或740和750cm-1之間的 拉曼光譜區(qū)域包括的帶頻率。
[0171] 適用于本發(fā)明的紅外光譜值是下列，等等：
[0172]-優(yōu)選在酰胺I紅外區(qū)域中測(cè)量的0折疊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的面積的百分比；
[0173]-與氧化應(yīng)激有關(guān)的1150和lOOOcnT1之間的紅外光譜譜線的面積；
[0174]-在1156CHT1左右和在處于1171CHT1區(qū)域的帶的最大值處獲得的強(qiáng)度的比；
[0175]_相對(duì)于1170CHT1處的光譜譜線的相應(yīng)于（I116。+11162+11165)/1 1177的絕對(duì)值，其中 1116〇、11162和11165分別是1160、1162和1165〇11- 1處的光譜的一階導(dǎo)數(shù)的絕對(duì)值，并且11177是 處于1177CHT1的最小值的一階導(dǎo)數(shù)的絕對(duì)值。
[0176] 還可以組合之前的光譜值中的兩個(gè)或更多個(gè)，獲得更好結(jié)果。
[0177] 在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方式中，當(dāng)所述方法包括本發(fā)明第一方法的步驟a_c 時(shí)，以及當(dāng)其除本發(fā)明第一方法的步驟a-c外還包括本發(fā)明第二方法的步驟a-c時(shí)，R. 1限 定的拉曼光譜區(qū)域的光譜值包括在1671CHT1左右和在1658cm4左右獲得的拉曼強(qiáng)度的比， 或包括相對(duì)于1720和1625CHT1之間的酰胺I帶的面積的1660-1662CHT1處的一階導(dǎo)數(shù)的平 均值。
[0178] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，表述"在以cnT1表示的頻率值Vi左右的帶"指代利用Vi±X cnT1確定的頻率范圍中的最大強(qiáng)度獲得的其（拉曼或IR)振動(dòng)光譜帶，其中X是至少1、至 少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10或更大的變量頻率值。在 優(yōu)選實(shí)施方式中，X的值為2。因此，在1658CHT1的頻率值左右的帶，例如，指代在以頻率值 表示的1656至1660CHT1范圍內(nèi)獲得的最大帶。在本說(shuō)明書(shū)中，所述術(shù)語(yǔ)也可被稱為"接近 以cnT1表示的頻率值的帶"。帶頻率中顯示±XcnT1的增量，以限定可在頻率測(cè)量準(zhǔn)確度不 同的不同光譜儀中測(cè)出的一個(gè)帶和相同帶的頻率范圍幅度。因此，必須理解，出現(xiàn)在本說(shuō)明 書(shū)中的頻率值Vi可根據(jù)所用光譜儀相對(duì)于所述頻率值變化±XcnT1。
[0179] 因此，術(shù)語(yǔ)"在以cnT1表示的頻率值v 右獲得的拉曼強(qiáng)度"被理解為指代在出現(xiàn) 在\±乂cnT1確定的頻率范圍內(nèi)的帶的最大值處獲得的拉曼光譜的強(qiáng)度