預(yù)測女性對象患癌癥風(fēng)險或診斷其癌癥的方法
【專利說明】預(yù)測女性對象患癌癥風(fēng)險或診斷其癌癥的方法
[0001] 本發(fā)明的主題為用于預(yù)測未患癌癥的女性對象患癌癥的風(fēng)險或診斷女性對象癌 癥的方法，包括：
[0002] ?測定獲自所述女性對象的體液中的腦啡肽原（PENK)或其具有至少5個氨基酸的 片段（包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽）的水平；以及
[0003] ?將所述腦啡肽原或其片段的水平與患癌癥風(fēng)險相關(guān)聯(lián)，其中降低的水平預(yù)測增 加的患癌癥風(fēng)險，或者診斷癌癥，其中降低的水平與癌癥的診斷相關(guān)。
[0004] Met-腦啡肽是一種衍生自腦啡肽前體（前腦啡肽原）的具有5個氨基酸的肽， 也稱為"阿片生長因子"（0GF)，其與腦啡肽原片段一起釋放。成熟肽結(jié)合不同的阿片受體 (Koneru et al，2009)。已發(fā)現(xiàn)腦啡肽（0GF)具有多種生理功能。在CNS中，其下調(diào)P物質(zhì) 相關(guān)的疼痛信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，作為細(xì)胞因子起作用（Plotnikoff et al，1997)。腦啡肽原相關(guān)的肽 展現(xiàn)抗菌作用（Goumon et al, 1998)。腦啡肽原和腦啡肽展現(xiàn)抗腫瘤作用，并作為促細(xì)胞凋 亡劑起作用（Tavish et al, 2007, Donahue et a. ,2011，Zagon et al, 2009)。
[0005] 用于預(yù)測男性的癌癥風(fēng)險的血管活性肽的使用已被Belting et al, Cancer, Ep idemiology，Biomarkes & Prevention報導(dǎo)。測量了來自在1991-1994年的基線檢查前 無癌癥的"馬爾摩飲食與癌癥研宄"參與者（1768名男性和2293名女性）空腹血漿中的 MR-pro-ANP、MR-pro-ADM和肽素。作者敘述到在女性中，生物標(biāo)記和癌癥發(fā)生之間沒有關(guān) 系。
[0006] 本發(fā)明的主題是研宄PENK用于預(yù)測癌癥發(fā)生和預(yù)測癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險的預(yù)后和診斷 力。為了解決這個問題，在所述瑞典前瞻性群組研宄（馬爾摩飲食與癌癥研宄）中測量了 空腹血衆(zhòng)中穩(wěn)定的腦啡肽原片段（Ernst et al, 2006)以及該生物標(biāo)記的基線水平與15年 的隨訪期間的乳腺癌發(fā)生率的相關(guān)性。
[0007] 令人吃驚地，顯示腦啡肽原為針對女性的用于預(yù)測未患癌癥的女性對象患癌癥的 風(fēng)險或診斷女性對象的癌癥的有力和高度顯著的生物標(biāo)記。
[0008] 因此，本發(fā)明的主題為用于預(yù)測未患癌癥的女性對象患癌癥的風(fēng)險或診斷女性對 象的癌癥的方法，包括：
[0009] ?測定獲自所述女性對象的體液中的腦啡肽原或具有其至少5個氨基酸的片段的 水平；以及
[0010] ?將所述腦啡肽原或其片段的水平與患癌癥的風(fēng)險相關(guān)聯(lián)，其中降低的水平預(yù)測 增加的患癌癥風(fēng)險，或者診斷癌癥，其中降低的水平與癌癥的診斷相關(guān)。
[0011] 癌癥的實例可選自：乳腺癌、肺癌、胰腺癌和結(jié)腸癌。
[0012] 在整個說明書中，應(yīng)理解術(shù)語腦啡肽原的片段還包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽。
[0013] 在本發(fā)明的具體實施方案中，所述癌癥為乳腺癌。在本發(fā)明的另一具體實施方案 中，所述癌癥為肺癌。
[0014] 因此，本發(fā)明的主題為測定女性患上癌癥如乳腺癌、肺癌等的易感性。
[0015] 本研宄中獲得的數(shù)據(jù)還揭示了男性對象患癌癥的風(fēng)險與獲自所述男性對象體液 中的腦啡肽原或其具有至少5個氨基酸的片段的水平之間的關(guān)聯(lián)性；然而，盡管在男性中， 在同樣降低的PENK水平下具有明顯的增加的癌癥風(fēng)險趨勢，該關(guān)聯(lián)性對于當(dāng)前數(shù)據(jù)集來 說在統(tǒng)計上并非顯著性的。因此，本發(fā)明的方法同樣對于男性對象具有價值，但在本研宄 中，對于男性所觀察到的效應(yīng)不如女性強(qiáng)烈。這可能主要是由于男性群體中的較少數(shù)目的 癌癥發(fā)生。
[0016] 此外，本研宄中獲得的數(shù)據(jù)還揭示出女性對象的患癌癥風(fēng)險與獲自所述女性對象 體液中的腦啡肽原或其具有至少5個氨基酸的片段的水平之間的關(guān)聯(lián)性，其中所述癌癥不 為肺癌或乳腺癌。然而，由于該特定群體中較少數(shù)目的發(fā)生，對于當(dāng)前數(shù)據(jù)集來說，該關(guān)聯(lián) 性在統(tǒng)計上并不顯著。盡管其不顯著，仍然存在明顯的趨勢。此外，可信的是，由于已知腦啡 肽（PENK的片段）的促細(xì)胞凋亡效應(yīng)，當(dāng)前數(shù)據(jù)表明主要的關(guān)聯(lián)也存在于其他癌癥中。從 現(xiàn)有技術(shù)來看，令人吃驚的是腦啡肽原或其片段可以預(yù)測癌癥。從當(dāng)前的在統(tǒng)計上與乳腺 癌和肺癌高度相關(guān)的數(shù)據(jù)來看，可以預(yù)期并且可信的是，其同樣可以預(yù)測其他類型的癌癥。 [0017] 如本文所用的術(shù)語"對象"是指活的人或非人生物。優(yōu)選地，在本文中所述對象為 人對象。
[0018] 術(shù)語"降低的水平"是指低于某個閾值水平的水平。
[0019] 體液可選自：血液、血清、血漿、尿液、腦脊液（csf)和唾液。
[0020] 在本發(fā)明的一個實施方案中，在從所述女性對象采集體液樣品時所述女性對象從 未患有診斷的癌癥。
[0021] 在另一個實施方案中，所述女性對象在之前已被診斷為患有癌癥且在從所述女性 對象采集體液樣品時已得到治愈，并且確定了患癌癥的復(fù)發(fā)風(fēng)險或者預(yù)測了癌癥的復(fù)發(fā)。
[0022] 腦啡肽原具有如下序列：
[0023] SEQ ID NO. 1 (腦啡肽原（1-243)
[0024] ECSQDCATCSYRLVRPADINFLACVMECEGKLPSLKIWETCKELLQLSKPELPQDGTSTLRENSKPEES HLLAKRYGGFMKRYGGFMKKMDELYPMEPEEEANGSEILAKRYGGFMKKDAEEDDSLANSSELLKELLETCDNRERS HHQDGSDNEEEVSKRYGGFMRGLKRSPQLEDEALELQKRYGGFMRRVGRPEWWMDYQKRYGGFLKRFAEALPSDEEG ESYSKEVPEMEKRYGGF MRF
[0025] 可在體液中測定的腦啡肽原的片段可以，例如選自如下片段：
[0026] SEQ ID N0. 2 (合成腦啡肽，腦啡肽原1-73)
[0027] ECSQDCATCSYRLVRPADINFLACVMECEGKLPSLKIWETCKELLQLSKPELPQDGTSTLRENSKPEES HLLA
[0028] SEQ ID N0. 3 (Met-腦啡肽）
[0029] YGGFM
[0030] SEQ ID NO. 4 (Leu-腦啡肽）
[0031] YGGFL
[0032] SEQ ID NO. 5 (腦啡肽原 90-109)
[0033] MDELYPMEPEEEANGSEILA
[0034] SEQ ID NO. 6 (腦啡肽原119-159,中間區(qū)腦啡肽原-片段，MRPENK)
[0035] DAEEDDSLANSSDLLKELLETCDNRERSHHQDGSDNEEEVS
[0036] SEQ ID NO. 7 (Met-腦啡肽-Arg-Gly-Leu)
[0037] YGGFMRGL
[0038] SEQIDNO. 8 (腦啡肽原 172-183)
[0039] SPQLEDEAKELQ
[0040] SEQIDNO. 9 (腦啡肽原 193-203)
[0041] VGRPEWWMDYQ
[0042] SEQIDNO. 10 (腦啡肽原 213-234)
[0043] FAEALPSDEEGESYSKEVPEME
[0044] SEQIDNO. 11 (腦啡肽原 213-241)
[0045] FAEALPSKEEGESYSKEVPEMEKRYGGFM
[0046] 5￡〇10勵.12(]^卜腦啡肽-六找-?116)
[0047] YGGFMRF
[0048] 測定腦啡肽原或其片段（包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽）的水平可能指測定針 對腦啡肽原或其片段（包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽）的免疫反應(yīng)性。根據(jù)結(jié)合區(qū)，用 于測定腦啡肽原或其片段（包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽）的結(jié)合劑可結(jié)合以上所示分 子中的多于一種。這對本領(lǐng)域技術(shù)人員是清楚的。
[0049] 因此，根據(jù)本發(fā)明，通過使用至少一種與以上肽和肽片段（即，根據(jù)序列1-12中的 任一個所示的腦啡肽原（PENK)和片段）中任一個的氨基酸序列中的區(qū)域結(jié)合的結(jié)合劑，測 定了獲自所述對象體液中的免疫反應(yīng)性分析物的水平；并與臨床相關(guān)的特定實施方案相關(guān) 聯(lián)。
[0050] 在根據(jù)本發(fā)明的方法的更具體的實施方案中，測定了MRPENK(SEQIDN0. 6:腦啡 肽原119-159,中間區(qū)腦啡肽原-片段，MRPENK)的水平。在更具體的實施方案中，通過使 用與MR-PENK結(jié)合的至少一種結(jié)合劑，測定了免疫反應(yīng)性分析物的水平，并與根據(jù)本發(fā)明 的臨床相關(guān)的具體實施方案相關(guān)聯(lián)。
[0051] 測定腦啡肽原或其片段（包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽或其片段）的水平，可 能是指測定針對腦啡肽原或其片段（包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽）的免疫反應(yīng)性。根 據(jù)結(jié)合區(qū)，用于測定腦啡肽原或其片段（包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽）的結(jié)合劑可結(jié) 合以上所示分子中的多于一種。這對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是清楚的。在本發(fā)明的另一實 施方案中，所述片段不為Leu-腦啡肽或Met-腦啡肽。在本發(fā)明的另一實施方案中，測定了 針對腦啡肽原或其片段（不包括Leu-腦啡肽和Met-腦啡肽）的免疫反應(yīng)性。
[0052] 在根據(jù)本發(fā)明的方