III為抗D抗體，加樣孔IV為陽性對照孔，如圖3所示。
[0038]3樣品檢測
[0039]在檢測試劑盒的加樣孔處滴加150 μ L的全血(或50 μ I的3%的紅細(xì)胞懸液)樣品。滴加待檢測樣品后，等待30s至lmin，然后向每個樣品孔緩慢加入500 μ L的沖洗液。待沖洗液被吸水紙吸收后，觀察加樣孔的顏色。
[0040]在加樣孔上有顯著的紅色物質(zhì)殘留為陽性反應(yīng)，加樣墊上沒有紅色物質(zhì)殘留為陰性反應(yīng)。結(jié)合ABO及Rh(D)血型抗體和紅細(xì)胞反應(yīng)的關(guān)系，可以很容易得知待檢測樣品的血型?；蛘?，也可以利用光信號或者電信號采集系統(tǒng)采集加樣墊上殘留的紅色殘留物質(zhì)，然后可以對結(jié)果自動化判斷，從而實現(xiàn)對批量血液樣品的ABO及Rh (D)血型正定檢測。
[0041]實施例4
[0042]抗人球蛋白檢測試劑盒，選取玻璃纖維膜為濾膜；
[0043]I在玻璃纖維膜上固定抗人球蛋白抗體
[0044]血型抗體固定:取高效價的抗人球蛋白抗體，加入抗體保護(hù)劑稀釋?？贵w保護(hù)劑可以是含5%牛血清白蛋白、5%蔗糖、5% PVP、5%的小牛血清的5mM磷酸鹽緩沖液(pH7.4)。抗體保護(hù)液能夠輔助抗體固定在玻璃纖維膜上，并且增強抗體的有效期。用抗體保護(hù)液的作為稀釋液，稀釋抗體。將150 μ L的稀釋后的抗體滴加到1.5cmX 1.5cm玻璃纖維膜的中心，讓抗體呈圓形的在玻璃纖維膜上鋪展，然后37°C烘干處理并密封保存。
[0045]2快速檢測試劑條的組裝:
[0046]在一帶有一個孔(孔徑為0.5cm)的長方形的塑料板背部貼上帶有抗人球蛋白抗體的1.5cmXl.5cm玻璃纖維膜，使塑料版上的孔與玻璃纖維膜上的抗體中心對映。然后將2.5cm寬的吸水紙貼在玻璃纖維膜的兩側(cè)，如圖4所示。玻璃纖維膜和吸水紙都是使用防水膠黏貼在聚酯版上，防止加樣和沖洗過程玻璃纖維膜和吸水紙脫落或串位置，最后扣上后蓋。組裝后抗人球蛋白檢測試劑盒如圖4所示。
[0047]3樣品檢測
[0048]在檢測試劑盒的加樣孔處滴加15 μ L的全血(或50的3%的紅細(xì)胞)樣品或者經(jīng)過體外和血清孵育的紅細(xì)胞。滴加待檢測樣品后，等待30s至lmin，然后向每個樣品孔緩慢加入500 μ L的沖洗液。待沖洗液被吸水紙吸收后，觀察加樣孔的顏色。
[0049]在加樣孔處有顯著的紅色物質(zhì)殘留為陽性反應(yīng)，加樣墊上沒有紅色物質(zhì)殘留為陰性反應(yīng)。結(jié)合抗人球蛋白實驗原理，可以很容易得知待檢測樣品的血細(xì)胞是否被致敏?；蛘?，也可以利用光信號或者電信號采集系統(tǒng)采集加樣墊上殘留的紅色殘留物質(zhì)，然后可以對結(jié)果自動化判斷，從而實現(xiàn)對批量血液樣品的直接抗人球蛋白檢測。
[0050]實施例5
[0051]MN系統(tǒng)血型檢測試劑盒，選取玻璃纖維膜為濾膜；
[0052]I在玻璃纖維膜上固定MN系統(tǒng)的血型抗體
[0053]血型抗體固定:取高效價的血型單克隆抗體(抗Μ、抗N、抗S、抗s等)，以加入抗體保護(hù)劑?？贵w保護(hù)劑可以是含5%牛血清白蛋白、5%蔗糖、5% PVP、5%的小牛血清的5mM磷酸鹽緩沖液(pH7.4)?？贵w保護(hù)液能夠輔助抗體固定在玻璃纖維膜上，并且增強抗體的有效期。用抗體保護(hù)液的作為稀釋液，稀釋抗體。將150 μ L的稀釋后的抗體滴加到
1.5cmXl.5cm玻璃纖維膜的中心，讓抗體呈圓形在玻璃纖維膜上鋪展，然后37°C烘干處理并密封保存。
[0054]2快速檢測試劑條的組裝:
[0055]在一帶有多孔個個孔(孔徑為0.5cm)的長方形的塑料板背部貼上帶有4片抗體的1.5cmX 1.5cm玻璃纖維膜，使塑料版上的孔與玻璃纖維膜上的抗體中心對映。然后將
2.5cm寬的吸水紙貼在玻璃纖維膜的周邊，如圖5所示。玻璃纖維膜和吸水紙都是使用防水膠黏貼在聚酯版上，防止加樣和沖洗過程玻璃纖維膜和吸水紙脫落或串位置，最后扣上后蓋。組裝后抗人球蛋白檢測試劑盒如圖5所示。
[0056]3樣品檢測
[0057]在檢測試劑盒的加樣孔處滴加15 μ L的全血(或50 μ I的3%的紅細(xì)胞懸液)樣品。滴加待檢測樣品后，等待30s至lmin，然后向每個樣品孔緩慢加入500 μ L的沖洗液。待沖洗液被吸水紙吸收后，觀察加樣孔的顏色。
[0058]在加樣孔上有顯著的紅色物質(zhì)殘留為陽性反應(yīng)，加樣墊上沒有紅色物質(zhì)殘留為陰性反應(yīng)。結(jié)合MN血型抗體和紅細(xì)胞反應(yīng)的關(guān)系，可以很容易得知待檢測樣品的MN血型。或者，也可以利用光信號或者電信號采集系統(tǒng)采集加樣墊上殘留的紅色殘留物質(zhì)，然后可以對結(jié)果自動化判斷，從而實現(xiàn)對批量血液樣品的MN血型檢測。
[0059]實施例6
[0060]ABO血型的反定檢測試劑盒，選取玻璃纖維膜為濾膜；
[0061]I在玻璃纖維膜上固定抗原(Α抗原、B抗原)
[0062]血型抗原固定:使用低滲壓溶液破碎A型(或B型)紅細(xì)胞，離心去上清，再使用相同的低滲壓溶液洗滌沉淀，直至上清無色透明，收集沉淀即為紅細(xì)胞膜，作為血型A(或B)抗原提取物。使用加入抗體保護(hù)劑稀釋抗原提取物。將稀釋后的抗原提取物滴加到1.5cmX 1.5cm玻璃纖維膜的中心，然后37°C烘干處理并密封保存。
[0063]2快速檢測試劑條的組裝:
[0064]在一帶有兩個孔(孔徑為0.5cm)的長方形的塑料板背部貼上帶有抗原的
1.5cmX 1.5cm玻璃纖維膜，使聚酯版上的孔與玻璃纖維膜上的抗原中心對映。然后將
2.5cm寬的吸水紙貼在玻璃纖維膜的兩側(cè)。玻璃纖維膜和吸水紙都是使用防水膠黏貼在聚酯版上，防止加樣和沖洗過程玻璃纖維膜和吸水紙脫落或串位置，最后扣上后蓋。組裝后抗人球蛋白檢測試劑盒，如圖6所示。
[0065]3樣品檢測
[0066]在兩個反定檢測加樣孔處滴分別加50 μ L血清或血漿樣品，再在兩個加樣孔處分別滴加50 μ L3%的A型細(xì)胞懸液和B型細(xì)胞懸液，等待30s至Imin后，緩慢加入500 μ L的反應(yīng)沖洗液。待沖洗液被吸水紙吸收后，觀察加樣孔的顏色。
[0067]在加樣孔上有顯著的紅色物質(zhì)殘留為陽性反應(yīng)，加樣墊上沒有紅色物質(zhì)殘留為陰性反應(yīng)。ABO血型抗原與血清或血漿中的AB抗體結(jié)合，進(jìn)而與通過的細(xì)胞懸液反應(yīng)，從而可以確定血清中含有的抗體類型，間接測定樣品的血型?；蛘撸部梢岳霉庑盘柣蛘唠娦盘柌杉到y(tǒng)采集加樣墊上殘留的紅色殘留物質(zhì)，然后可以對結(jié)果自動化判斷，從而實現(xiàn)對批量血液樣品的ABO血型反定檢測。
[0068]上述技術(shù)方案僅體現(xiàn)了本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)選技術(shù)方案，本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員對其中某些部分所可能做出的一些變動均體現(xiàn)了本發(fā)明的原理，屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1.一種基于膜結(jié)構(gòu)的血型檢測方法，該方法選用能夠允許單個紅細(xì)胞通過的濾膜作為核心材料，將血型抗體結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時將一定濃度的紅細(xì)胞滴加在濾膜表面，再用沖洗液沖洗，未發(fā)生抗原抗體結(jié)合的紅細(xì)胞將會隨沖洗液液體滲出，而發(fā)生抗原抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團(tuán)塊，操作人員可依據(jù)紅細(xì)胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團(tuán)塊來判斷結(jié)果，確定紅細(xì)胞的血型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血型檢測方法，其特征在于，所述該方法選用能夠允許單個紅細(xì)胞通過的濾膜作為核心材料，而濾膜材質(zhì)可以是玻璃纖維膜或硝酸纖維膜或硅酸鹽顆粒等能夠形成特定連續(xù)液流通道的固體，且濾膜的內(nèi)徑在2 — 20微米之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血型檢測方法，其特征在于，所述濾膜的周邊包圍有吸水材料，濾膜的形狀為方形或者圓形，吸水材料包圍濾膜的方式為全部包圍或者部分包圍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血型檢測方法，其特征在于，所述血型抗體結(jié)合到濾膜上，血型抗體結(jié)合到濾膜上的方法為物理吸附法或者化學(xué)交聯(lián)法。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血型檢測方法，其特征在于，所述檢測時將一定濃度的紅細(xì)胞滴加在濾膜表面，其中一定濃度的紅細(xì)胞為全血或者不同濃度的紅細(xì)胞懸液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于膜結(jié)構(gòu)的血型檢測方法，其特征在于，該方法還包括檢測試劑盒，檢測試劑盒內(nèi)設(shè)有能夠允許單個紅細(xì)胞通過的濾膜，將血型抗體結(jié)合到濾膜上，濾膜下面墊有吸水墊，吸水墊的面積要大于濾膜，且濾膜和吸水墊都通過檢測試劑盒內(nèi)的塑料固體結(jié)構(gòu)來做固定和支撐； 檢測時將一定濃度的紅細(xì)胞滴加到檢測試劑盒內(nèi)結(jié)合了血型抗體的濾膜表面，隨后將沖洗液滴加到同一濾膜表面上，沖洗液將未發(fā)生抗原抗體結(jié)合的紅細(xì)胞從反應(yīng)區(qū)沖洗掉。而發(fā)生抗原抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則截留在濾膜表面形成肉眼可見的紅色團(tuán)塊。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種基于膜結(jié)構(gòu)的血型檢測方法，該方法選用能夠允許單個紅細(xì)胞通過的濾膜作為核心材料，將血型抗體結(jié)合到濾膜上，濾膜的周邊包圍有吸水材料，檢測時將一定濃度的紅細(xì)胞滴加在濾膜表面，再用沖洗液沖洗，未發(fā)生抗原抗體結(jié)合的紅細(xì)胞將會隨沖洗液液體滲出，而發(fā)生抗原抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則會留在膜表面形成肉眼可見的紅色團(tuán)塊，操作人員可依據(jù)紅細(xì)胞是否在濾膜形成肉眼可見的紅色團(tuán)塊來判斷結(jié)果，確定紅細(xì)胞的血型。本發(fā)明的有益效果是，檢測時間短，結(jié)果客觀。
【IPC分類】G01N33-543, G01N33-80
【公開號】CN104714034
【申請?zhí)枴緾N201310689909
【發(fā)明人】黃志剛
【申請人】天津德祥生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年6月17日
【申請日】2013年12月17日