本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，具體涉及skr3蛋白或其特異性抗體在制備神經(jīng)梅毒篩查、分型檢測或評估神經(jīng)受損程度的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、神經(jīng)梅毒的臨床表現(xiàn)亦是復雜多變，癥狀無特異性，幾乎包括神經(jīng)病學中的所有各種癥狀與體征，可出現(xiàn)神經(jīng)科、眼科、皮膚科、精神科等科相似的臨床表現(xiàn)，對神經(jīng)梅毒的誤診率高，因此對神經(jīng)梅毒的正確診斷、篩查和及時治療是非常重要的。

2、神經(jīng)梅毒是由梅毒螺旋體侵犯神經(jīng)系統(tǒng)出現(xiàn)腦膜、大腦、血管或脊髓等損害的一組臨床綜合征，可發(fā)生于梅毒病程的各個階段，并非僅發(fā)生在三期梅毒。神經(jīng)梅毒臨床上通常分為5型：無癥狀型，腦脊膜梅毒，腦膜血管梅毒，脊髓癆和麻痹性癡呆(腦實質(zhì)梅毒)。隱性梅毒雖然沒有臨床癥狀,但其危害性應(yīng)該引起足夠重視，可成為復發(fā)性梅毒，并可能向內(nèi)臟、神經(jīng)梅毒進展。無癥狀神經(jīng)梅毒患者無明顯癥狀或體征，但存在腦脊液異常改變，且腦脊液異常持續(xù)5年以上者其發(fā)展為有癥狀神經(jīng)梅毒的概率高達87％。在一期梅毒和二期梅毒的研究中發(fā)現(xiàn)20％的患者存在腦脊液異常，即神經(jīng)梅毒可以發(fā)生在梅毒早期。早期神經(jīng)梅毒包括梅毒性腦膜炎和血管型梅毒，晚期神經(jīng)梅毒包括麻痹性癡呆、脊髓癆等。麻痹性癡呆潛伏期為10-15年，麻痹性癡呆主要表現(xiàn)為精神智能減退，如記憶力下降、行為異常、性格改變，嚴重的患者出現(xiàn)癲癇，卒中樣發(fā)病，繼發(fā)偏癱和失語。

3、目前診斷神經(jīng)梅毒依賴實驗室對腦脊液的三種檢測，對于神經(jīng)梅毒病情嚴重程度的評價更是以臨床醫(yī)生的經(jīng)驗評估為主，沒有統(tǒng)一有效的客觀指標。神經(jīng)梅毒檢測依賴腦脊液中性病研究實驗室實驗(vdrl)、蛋白質(zhì)和白細胞含量升高。神經(jīng)梅毒的早期診斷非常重要，尋找敏感的生物標志物有助于神經(jīng)梅毒的診斷，對于預(yù)防嚴重且不可逆轉(zhuǎn)的后遺癥具有重要意義。神經(jīng)梅毒患者腦脊液中蛋白質(zhì)含量升高與病情嚴重程度呈正相關(guān)，與遠期預(yù)后呈負相關(guān)。腦脊液中白細胞增多、蛋白含量升高提示血-腦屏障破壞，顱內(nèi)存在炎性反應(yīng)，對神經(jīng)梅毒的確診有輔助作用。但是，診斷過程中發(fā)現(xiàn)csf-rpp的敏感性僅為30％-70％，敏感性較低，并且對早期無癥狀神經(jīng)梅毒的診斷不敏感。目前在臨床診療過程中主要對出現(xiàn)神經(jīng)梅毒癥狀的患者進行神經(jīng)梅毒診斷和治療，缺乏靈敏可信、有效區(qū)分神經(jīng)梅毒的腦脊液和血清生物學標志物，更加缺乏的是有效區(qū)分無癥狀神經(jīng)梅毒的生物學標志物。

4、skr3是由人類acvrl1基因編碼的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶受體r3，既往研究在絲氨酸/蘇氨酸磷酸化、信號轉(zhuǎn)導和血管形成中發(fā)揮作用，但其在與神經(jīng)梅毒的神經(jīng)損傷相關(guān)中的作用尚未被報道過。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、(一)要解決的技術(shù)問題

2、鑒于現(xiàn)有csf-rpr診斷方法敏感性較低、對早期無癥狀神經(jīng)梅毒的診斷不敏感等技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種用于神經(jīng)梅毒早期診斷篩查、分型檢測和神經(jīng)損傷評估的標志物，利用該標志物可實現(xiàn)神經(jīng)梅毒早期診斷、篩查、分型檢測和神經(jīng)損傷評估，相較于現(xiàn)有技術(shù)，其不僅敏感性更高，而且可有效區(qū)分無癥狀神經(jīng)梅毒和隱性梅毒，以便盡早對無癥狀神經(jīng)梅毒患者制定的治療方案。

3、(二)技術(shù)方案

4、為了達到上述目的，本發(fā)明采用的主要技術(shù)方案包括：

5、第一方面，本發(fā)明涉及skr3作為神經(jīng)梅毒患者早期診斷、篩查和分型檢測的血清標志物和腦脊液標志物。

6、第二方面，本發(fā)明提供skr3蛋白或其特異性抗體在制備神經(jīng)梅毒篩查、分型檢測或評估神經(jīng)受損程度的診斷產(chǎn)品或輔助診斷產(chǎn)品中的應(yīng)用；所述診斷產(chǎn)品或輔助診斷產(chǎn)品為是以skr3蛋白或其特異性抗體為靶分子的檢測試劑盒、抗體芯片、抗體探針或檢測儀。

7、根據(jù)本發(fā)明的較佳實施例，所述試劑盒是以skr3蛋白或其特異性抗體作為靶分子，檢測skr3蛋白或其特異性抗體在腦脊液或血清中的表達水平。

8、根據(jù)本發(fā)明的較佳實施例，所述試劑盒為酶聯(lián)免疫檢測試劑盒或免疫組化試劑盒。

9、根據(jù)本發(fā)明的較佳實施例，所述試劑盒包括：可特異性識別skr3的一抗、多肽染料、磁珠和生物素標記的二抗。優(yōu)選地，所述試劑盒包括枸櫞酸鹽緩沖液、pbs洗滌液、過氧化物酶阻斷劑、山羊血清、鏈霉素抗生素-過氧化物酶、dab溶液和蘇木素液。

10、根據(jù)本發(fā)明的較佳實施例，所述試劑盒還包括從所述患者獲得血清或腦脊液的試劑或材料，和/或用于分離血清的試劑。

11、需要說明的是，在檢測腦脊液和血清中skr3蛋白表達水平時，也可采用ol?ink超高靈敏度蛋白檢測平臺以定量skr3的表達水平。

12、第三方面，本發(fā)明還涉及用于神經(jīng)梅毒患者早期診斷、篩查、分型檢測或評估神經(jīng)受損程度的產(chǎn)品；所述產(chǎn)品或裝置能夠定量檢測患者的離體血清和腦脊液中skr3的濃度；所述產(chǎn)品為檢測試劑盒、抗體芯片、抗體探針或檢測儀。

13、優(yōu)選地，所述產(chǎn)品包含特異性結(jié)合skr3的抗體及其他試劑可定量檢測skr3蛋白在血清和腦脊液中的濃度。本技術(shù)實施例中用到的實驗方法是ol?ink?neurology?panel(95801)，其可用于檢測92種與神經(jīng)功能相關(guān)的蛋白質(zhì)生物標志物，其中也包括skr3蛋白。

14、梅毒分型包括有癥狀神經(jīng)梅毒、無癥狀神經(jīng)梅毒或非神經(jīng)梅毒等。

15、第四方面，本發(fā)明涉及用于神經(jīng)梅毒患者神經(jīng)損傷風險的評估系統(tǒng)，包括檢測模塊和判斷模塊，其中，所述檢測模塊用于獲取腦脊液skr3的濃度值；所述判斷模塊包括存儲有判斷規(guī)則的可讀載體；

16、所述判斷規(guī)則為：當檢測模塊獲得的腦脊液skr3濃度值≥3.731npx值時，判斷為高度神經(jīng)損傷風險；

17、當檢測模塊獲得3.731npx值＞腦脊液skr3濃度值≥3.404npx值時，判斷為中度神經(jīng)損傷風險；反之，3.256npx值＜腦脊液skr3濃度值＜3.404npx值時，則判斷為低神經(jīng)損傷風險；

18、當檢測模塊獲得的腦脊液skr3濃度值≥3.256npx值時，判斷為有腦脊液感染梅毒風險；反之，則判斷為無或低腦脊液感染梅毒風險。

19、所述參考值為從梅毒患者群中獲得skr3的cut-off值；優(yōu)選地，神經(jīng)梅毒(包括無癥狀神經(jīng)梅毒和有癥狀神經(jīng)梅毒)診斷的腦脊液cut-off值為3.404npx值(skr3腦脊液濃度在該值以上的判為神經(jīng)梅毒或中度神經(jīng)損傷風險)；有癥狀神經(jīng)梅毒診斷的腦脊液cut-off值為3.731npx值(skr3腦脊液濃度在該值以上的判為有癥狀神經(jīng)梅毒或高度神經(jīng)損傷風險)；無癥狀神經(jīng)梅毒診斷的腦脊液cut-off值為3.256npx(skr3腦脊液濃度在該值以上的判為存在腦脊液感染梅毒風險)。上述cut-off值是從88名梅毒患者獲得的skr3統(tǒng)計學分析臨界值。

20、第五方面，本發(fā)明還提供一種梅毒檢測試劑盒，其包括：用于檢測腦脊液skr3蛋白水平的第一檢測試劑組合物；和用于檢測腦脊液白細胞和/或腦脊液蛋白的第二檢測試劑組合物。或者，本發(fā)明提供一種神經(jīng)梅毒診斷系統(tǒng)，其包括第一指標分析單元和第二分析單元；所述第一分析單元為用于檢測血清或腦脊液skr3蛋白水平的抗體芯片或抗體探針；第二分析單元為用于檢測腦脊液中白細胞水平或總蛋白水平的檢測試劑組合物或分析儀。

21、在上述方案中，在對神經(jīng)梅毒進行診斷(包括早期診斷、分型分期和神經(jīng)損傷評估)時，可將腦脊液skr3蛋白水平與神經(jīng)梅毒患者神經(jīng)損傷相關(guān)的腦脊液白細胞和/或腦脊液蛋白指標結(jié)合地用于對神經(jīng)梅毒進行早期診斷、分型分期和神經(jīng)損傷評估。

22、其中，血清或腦脊液中skr3水平是通過ol?ink精密蛋白質(zhì)組學即抗體的免疫分析與定量實時pcr結(jié)合方式檢測確定。腦脊液白細胞數(shù)和腦脊液蛋白量通過已知方法檢測即可。

23、(三)有益效果

24、本發(fā)明提供了一種新的用于神經(jīng)梅毒早期診斷篩查、分型檢測和神經(jīng)損傷評估的腦脊液標志物skr3，通過檢測患者腦脊液中skr3的表達水平，實現(xiàn)對神經(jīng)梅毒患者神經(jīng)損傷程度的量化評估；或者通過檢測患者腦脊液或血清中skr3的表達水平，實現(xiàn)對神經(jīng)梅毒進行診斷，包括早期診斷和分型檢測。利用該標志物可實現(xiàn)神經(jīng)梅毒早期診斷、篩查、分型檢測和神經(jīng)損傷評估，相較于現(xiàn)有技術(shù)，其不僅敏感性更高，且在以血清skr3濃度為指標時可實現(xiàn)對無癥狀神經(jīng)梅毒和有癥狀神經(jīng)梅毒進行無創(chuàng)的血清檢測。

25、優(yōu)選地，腦脊液標志物skr3也適于診斷篩查有癥狀神經(jīng)梅毒和無癥狀神經(jīng)梅毒，因為在有癥狀神經(jīng)梅毒、無癥狀神經(jīng)梅毒或非神經(jīng)梅毒中，腦脊液中skr3的表達水平存在顯著差異。同時，skr3表達水平對神經(jīng)梅毒、有癥狀神經(jīng)梅毒和無癥狀神經(jīng)梅毒的評估敏感性均較高，因此利用該標志物可對有癥狀神經(jīng)梅毒和無癥狀梅毒可實現(xiàn)篩查。